药物相互作用实验方案

艾迪注射液（中药）与培美曲塞（西药）相互作用实验方案1、实验目的与任务

1.1实验目的

本实验的目的是探究艾迪注射液与培美曲塞联合用药时在动物体内的药动学参数，来进一步探究两者的相互作用。

1.2实验任务

本次实验任务如下：

（1）完成艾迪注射液与培美曲塞生物样品检测条件摸索，并进行方法学验证。

（2）在大鼠体内进行艾迪注射液与培美曲塞的药物代谢动力学研究（3）数据的统计和处理，药动学参数的计算，得出结论。

2、实验材料和仪器

2.1实验材料

艾迪注射液市售品；人参皂苷Re对照品；黄芪对照品；斑鳌对照品；培美曲塞市售品；培美曲塞对照品；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；磷酸钠缓冲液（分析纯）；纯净水等

约SD大鼠130只（雌雄各半，体重200±20g）

2.2实验仪器

LC-15C高效液相色谱仪；AB-135型分析天平；低速离心机；涡旋混合仪等

3、实验方法

3.1标准品色谱条件摸索

3.1.1艾迪注射液高效液相色谱方法建立

艾迪注射液是由斑蝥、人参、黄芪和刺五加组成的纯中药制剂，根据查阅相关文献，本实验选择斑蝥、人参、黄芪三个有效成分用于艾迪注射液的方法建立。供试品和对照品分别注入高效液相色谱仪，并确定最低检测限及内标液的选择。

参考色谱条件：色谱柱：Cosmosil-C18（250mm×4.6mm，5um），流动相A：纯水，B：乙腈；梯度洗脱程序：0min 6%B；0-15min 6%-11%B；15-80min 11%-33%B；流速：1.0mL/min；检测波长：203nm；柱温：40℃；进样量20uL。

3.1.2培美曲塞高效液相色谱方法建立

将供试品和对照品分别注入高效液相色谱仪，并确定最低检测限及内标液的选择。

参考色谱条件：色谱柱：Cosmosil-C18（250mm×4.6mm，5um）；流动相：50mmol/L；磷酸钠缓冲液（用磷酸调节pH=3.35）：乙腈=84:16（V/V）；流速=1mL/min；检测波长250nm；柱温30℃。

3.2生物样品处理方法的确定

取空白大鼠血浆100uL置于离心管中，按体积1：3加入300uL 甲醇作为沉淀剂，涡旋震荡3min后，4000r/min离心15min，沉淀蛋白，精密吸取上清液200uL，分别加入经稀释过的艾迪注射液标准品和培美曲塞标准品溶液，过0.22um有机滤膜，20uL进样，用HPLC 进行分析。根据分析结果来优化处理方法。

3.3预实验

预实验按照下述的动物试验方法，但是SD大鼠每组仅选用2只，且只选做单剂量动物实验，并取3min；7min；10min；15min；20min；30min；40min；50min；1h；1.5h；2h；4h；6h；8h；12h；15h；18h；21h；24h（具体按实际操作进行），确定最佳取血点，且进HPLC中，确定取血点的设计和取血时间以及标准曲线的范围，进一步优化实验。

3.4方法学验证

3.4.1艾迪注射液高效液相色谱法方法学验证

需要检测的项有：专属性；标注曲线和定量下限；精密度（日内，日间）；回收率；稳定性。（具体实验方法以实际操作为准）

3.4.2培美曲塞高效液相色谱法方法学验证

与艾迪注射液检测的项相同。

3.5动物实验

3.5.1单剂量给药实验

3.5.1.1艾迪注射液对培美曲塞的作用

取健康SD大鼠30只，体重约200±20g，雌雄各半。随机分成空白组（生理盐水）、对照组和联合用药组（艾迪注射液分为高、中、低三个剂量），每组6只，大鼠禁食但可以自由饮水12h后，空白组尾静脉给予生理盐水，对照组尾静脉给予培美曲塞，联合用药组尾静脉先分别给予高、中、低三个剂量的艾迪注射液，5min后再给予培美曲塞，分别于注射后按照预实验得出的取血点从大鼠眼底静脉丛取血。处理血样，进HPLC分析。

3.5.1.2培美曲塞对艾迪注射液的作用

取健康SD大鼠12只，体重约200±20g，雌雄各半。随机分成对照组和联合用药组，每组6只，大鼠禁食但可以自由饮水12h后，对照组尾静脉给予艾迪注射液，联合用药组尾静脉先给予培美曲塞，5min后再给予艾迪注射液，分别于注射后按照预实验得出的取血点从大鼠眼底静脉丛取血。处理血样，进HPLC分析。

3.5.2多剂量给药实验

3.5.2.1艾迪注射液对培美曲塞的作用

取健康SD大鼠30只，体重约200±20g，雌雄各半。随机分成空白组（生理盐水）、对照组和联合用药组（艾迪注射液分为高、中、低三个剂量），每组6只，前7天分别每天早上给予联合用药组尾静脉注射艾迪注射液，其他组别不进行任何处理。第8天大鼠禁食但可以自由饮水12h后，空白组尾静脉注射生理盐水，对照组尾静脉注射培美曲塞溶液，联合用药组尾静脉先分别注射高、中、低三个剂量的艾迪注射液，5min后再给予培美曲塞，分别于注射后按照预实验得出的取血点从大鼠眼底静脉丛取血。处理血样，进HPLC分析。

（备注：培美曲塞每21天为一个周期，所以不用进行多剂量试验) 3.6数据处理

采用DAS2.1版本软件计算艾迪注射液和培美曲塞的药动学参数，确定房室模型，采用SPSS软件进行统计学检验，确定有无显著性差异。

4、实验安排（按照实验室实际情况）

（1）2015.1—2015.2：完成色谱条件摸索及预实验；（2）2015.3—2015.4：完成动物实验部分；

（3）2015.5：结题。