牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速测定方法_郭铁筝
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第４ １卷 第４期 ２ ０ １ ２年７月
内蒙古师范大学学报 （ 自然科学汉文版 ） ） Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍ ｏ ｎ ｏ ｌ ｉ ａ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｇ ｙ（
第４期
郭铁筝 等 ：牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速测定方法
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１． ２ 仪器与设备 配有紫外 — 二极管阵列 测 定 器 ， 美 国 安 捷 伦 公 司； Ａ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ０ ０ｐ ｌ ｕ ｓ型高效液相色谱仪 ， ３ Ｋ １ ６型离心 － ｇ 机， 德国西格玛公司 ；Ｎ 上海爱朗仪器有限公司 ． １ ０ ０ ０ Ｄ 型旋转蒸发器 ， － １． ３ 分析方法 １． ３． １ 色 谱 条 件 色 谱 柱 ：Ａ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ Ｃ － ｇ １ ８ 柱 （ ） ， ；柱 温 ： ２ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ（ ｉ ． ｄ ５μ ｍ） ２ ５℃ ； 进样量 ： ５ ０ Ｌ；测定波长 ： ２ ４ ０ ｎ ｍ；流动相 ：缓 μ ， ／ ；流速 ：１ ／ ； 冲液 ∶ 乙腈 （ ９ ０ ∶ １ ０ Ｖ Ｖ） ． ０ｍ Ｌ ｍ ｉ ｎ 等度洗脱 ． ／ 采用上述色 谱 条 件 ， 测 定 浓 度 为 ２． ０ｍ Ｌ ｇ 的三聚氰胺标准品溶液 ， 其色谱图如图 １ 所示 ． 准确称取牛 １）样 品 提 取 ． １． ３． ２ 测定步 骤 （ ） 精确到 ０． 于５ 奶样品 ５ ０ １ ０ｍＬ 离心管中 ， ｇ（ ｇ ／ 加 入乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ （Ｖ Ｖ） 混 合 溶 振荡溶解１ 液２ ０． ０ｍＬ， ０ｍ ｉ ｎ后超声提取５ ， ／ 取全部上 ｍ ｉ ｎ １ ０ ０ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ 下 高 速 离 心 ５ｍ ｉ ｎ． 清液 ， 于４ 用水 ０℃ 以下旋转蒸发去除有机溶剂 ， ／ 定容至 １ 上 ０． ０ｍＬ， １ ０ ０ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ 下离 心 ５ｍ ｉ ｎ，
／ 图 １ ２． ０ｍ Ｌ 三聚氰胺标准溶液液相色谱图 ｇ ／ Ｆ ｉ ． １ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ２． ０ｍ Ｌ ｍ ｅ ｌ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｇ ｇ ｇ
清液过 ０． 如果样品中被测物含量较高 ， 可适当增加定容体积或者进行稀释 ． ４ ５ ｍ 滤膜待测 ． μ （ ） 准确称取奶粉样品 ５ 精确到 ０． 于５ 加入 ５ｍＬ 水 ， 涡旋混匀 ， 然后按照牛奶中 “ 加 ０ １ ０ｍＬ 离心管中 ， ｇ ｇ （ ／ 入乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ 混合溶液 ２ 后的步骤进行操作 ． Ｖ Ｖ） ０． ０ｍＬ” （ ）色谱测定 ． 根据试样中被测物含量 ， 选取响应值适当的标准工作液与待测样液穿插进样进行色谱分 ２ 标准工作液应有 ５ 个浓度水平 ， 包括零点 ． 标准工作液和待测样液中三聚氰胺 的 响 应 值 均 应 在 仪 器 线 性 析． 范围内 ．
１ 材料与方法
１． １ 试剂与材料 ／ ， 除非另有说明 ， 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯， 水为 Ｇ 甲醇（ 美国 Ｆ Ｂ Ｔ ６ ６ ８ ２ 规 定 的 一 级 水． ＨＰ Ｌ Ｃ 级） ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ， 美国 Ｆ 美国 Ｆ ＨＰ Ｌ Ｃ 级） ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ 公 司 ；柠 檬 酸 ；庚 烷 磺 酸 钠 ， ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ公司 ；乙腈 （ ／ ／ ） 公司 ；流动相缓冲液 ： ０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 柠檬酸 －０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 庚烷磺酸钠 （ Ｈ＝３． ０ ． ｐ ， ／ ） ：称取适量三聚 三聚氰胺标准品 （ 纯度 ９ 美国 Ａ ９． ９％ ） Ｃ ＲＯ Ｓ 公司 ；三聚氰胺标准贮备液 （ １． ０ｍ ｍ ｌ ｇ ／ 氰胺标准品 ， 用甲醇 ∶ 水 （ 溶解并定容于 １ 于 ４℃ 条 件 下 保 存 ；标 准 工 作 溶 液 ： ７∶３， Ｖ Ｖ） ０ ０ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 根据需要用水逐级稀释配制 ；滤膜 ： ０． ４ ５ ｍ 水相 ． μ
［ ］ ［ ］ ［ ０ ］ ／ 、 文献报道的三聚 氰 胺 的 测 定 方 法 有 ＨＰ 毛细管电泳 Ｌ Ｃ 法 １－２ 、 Ｇ Ｃ－ＭＳ 法 ３－４ 、 ＨＰ Ｌ Ｃ－ＭＳ ＭＳ 法 ５－１ ［ ］ ［ ［ １ １ １ ２ １ ３］ １ ４］ － 、 离子色谱法 、 酶联免疫吸附法 （ 上述方法都需要对样品进行 Ｓ 消 法 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 等 ． Ｐ Ｅ 固相萃取净化 ，
２ 结果与分析
２． １ 色谱条件的选择 采用常用的反相色谱柱 Ｃ 发现三聚氰胺在 Ｃ １ ８ 色谱柱和 Ｃ ８ 色谱柱进行三 聚 氰 胺 测 定 时 ， ８ 色谱柱上与 杂质分离效果不佳 ， 色谱峰形不理想 ． 所以实验选用 Ｃ 三聚氰胺与杂质分离效果良好 ， 能 １ ８ 色谱柱进行分离 ， 够达到色谱基线分离 ， 且基线平稳 ， 色谱峰形对称 ． 在选择流动相时 ， 进行了离子浓度 、 三聚氰胺对流动相中柠檬 Ｈ 及乙腈比例对色谱分离影响的 实 验． ｐ 酸 － 庚烷磺酸钠缓冲溶液浓度及比例变化比较敏感 ． 缓冲溶液浓度高 ， 三聚氰胺 的 出 峰 时 间 推 迟 ， 但对色谱 柱的影响较大 ． 流动相的 ｐ Ｈ 对三聚氰胺的出峰时间和分离效果影响明显 ， Ｈ＝３． ０ 时色谱保留时间和分离 ｐ ／ ／ ） ， 度均较为理想 ． 因此 ， 选用 ０． 缓冲溶液 ∶ Ｈ＝３． ０ ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 柠檬酸 －０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 庚烷磺酸钠为缓冲溶液 （ ｐ ／ 乙腈 （ 为流动相 ． ９ ０∶１ ０， Ｖ Ｖ） ２． ２ 提取溶剂的选择 通过对比乙腈 、 甲醇 、 三氯乙酸水溶液 、 乙酸铅水溶液等提取溶剂沉淀牛奶中蛋白质的效果发现 ， 三氯乙 酸水溶液 、 乙酸铅水溶液均需在浓度较大的条件下才能有效的沉淀牛奶中的蛋 白 质 ， 但 三 氯 乙 酸、 乙酸铅的 浓度过大会影响色谱柱的使用寿命 ， 甚至会造成色谱系统的堵塞 ；乙腈沉淀蛋白质的效果良好 ， 但是提取奶 （ ／ 难以进行均质提取 ；采用乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ 混合溶液提取时 ， 蛋白质沉淀效果 粉时蛋白质容易凝结 ， Ｖ Ｖ） ／ 良好 ， 蛋白质沉淀分散 ， 易于提取 ． 因此 ， 选用乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１（ 混合溶液作为提取 溶 剂 ． 由于采用乙 Ｖ Ｖ） 腈溶剂提取液直接进样 ， 三聚氰胺在液相色谱上的响应值明显降低 ， 所以采取蒸发出大部分乙腈 、 甲醇 ， 用水 定容 ， 获得了较好的色谱响应值及较好的分离效果 ．
收稿日期 ： ２ ０ １ ２ ０ １ １ ０ － － ） 基金项目 ：国家质量监督检验检疫总局科研项目 （ ２ ０ ０ ９ Ｉ Ｋ １ ７ ８ ， ： 作者简介 ：郭铁筝 （ 女， 辽宁省鞍山市人 ， 内蒙古出入境检验检疫局工程师 ， 主要从事食品安 全 分 析 研 究 ， １ ９ ６ ９－ ） Ｅ－ｍ ｉ ａ ｌ ｕ ｏ ｔ ｉ ｅ ｚ ｈ ｅ ｎ ｎ ｍ ｇ ｇ ｇ ６ ３． ｃ ｏ ｍ． ＠１
／ ０ｍ ｋ 图 ２ 不含三聚氰胺的牛奶样品液相色谱图 图 ３ 添加 ２． ｇ ｇ 三聚氰胺的牛奶样品液相色谱图 ／ ｉ ． ２Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ｂ ｌ ａ ｎ ｋ ｍ ｉ ｌ ｋ ｓ ａ ｍ ｌ ｅ ｉ ． ３Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ｓ ｉ ｋ ｅ ｄ ｍ ｉ ｌ ｋ ｓ ａ ｍ ｌ ｅ ａ ｔ ２． ０ｍ ｋ Ｆ Ｆ ｇ ｇ ｐ ｇ ｇ ｐ ｐ ｇ ｇ
Ｖ ｏ ｌ ． ４ １Ｎ ｏ ． ４ Ｊ ｕ ｌ ２ ０ １ ２ ｙ
牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速测定方法
郭铁筝 ，潘国卿 ，赵治国 ，白国涛 ，张春艳 ，纪 元
（ ） 内蒙古出入境检验检疫局 ， 内蒙古 呼和浩特 ０ １ ０ ０ ２ ０ 摘 要 ：介绍了一种用高效液相色谱法测定牛奶和奶 粉 中 三 聚 氰 胺 的 快 速 方 法 ． 牛奶和奶粉试样中的三聚 提取液经离心 、 浓缩后 ， 用高 效 液 相 色 谱 仪 － 二 级 管 阵 列 测 定 器 测 定 ， 外 标 法 定 量． 氰胺用乙腈 ∶ 甲醇溶液提取 ， ／ ／ ， ／ ， 该方法的线性范围为 ０． 定 量 检 出 限 为 １． 添 加 浓 度 范 围 为 １． 回收率为 ５ ０～１ ０ ０ｍ Ｌ， ０ｍ ｋ ０～５． ０ｍ ｋ ｇ ｇ ｇ ｇ ｇ 相对标准偏差 （ 为 １． 测定方法操作简便、 快速， 回收率高， 适用于牛奶和奶 ８ ３． ８％ ～９ ６． ５％ ， Ｒ Ｓ Ｄ） ２ ７％ ～８． ６ ２％． 粉中三聚氰胺的快速测定 ． 关键词 ：三聚氰胺 ；牛奶 ；奶粉 ；快速测定 ；液相色谱法 （ ） 中图分类号 ：Ｏ ６ ５ ７． ７＋２ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ ８ ７ ３ ５ ２ ０ １ ２ ０ ４ ０ ４ ０ ６ ０ ４ －－ －－ －－
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内蒙古师范大学学报 （ 自然科学汉文版 ）
第４ １卷
百度文库
线性相关系数及定量检出限 ２． ３ 方法的线性范围 、 ／ 配制浓度为 ０． 按照选定的 ５ ０， １． ０， ２． ０， ５． ０， １ ０． ０， ２ ０． ０， ５ ０． ０， １ ０ ０． ０ｍ Ｌ 的 三 聚 氰 胺 系 列 标 准 溶 液， ｇ 色谱条件进行测定 ， 用色谱峰面积对三聚氰胺进样浓度进行线性回归 ， 其线性范围为 ０． 线性 ５ ０－１ ０ ０ｍ ． Ｌ， ｇ 方程为 ｙ＝１ 线性相关系数为 ０． ９ ２． ４ ５ ｘ＋２ ８． ０ ７， ９ ９ ９ ７． ／ ） 按照实验步骤 ， 将三聚氰胺标准溶液稀释进样 ， 以信噪比为 １ 计算 ， 三聚氰胺的 最 低 定 量 检 ０（ Ｓ Ｎ＝１ ０ ／ ／ 出浓度为 ０． 则牛奶和奶粉中三聚氰胺的最低定量检出限为 １． 不含三聚氰胺的牛奶样 品 ５ｍ Ｌ， ０ｍ ｋ ． ｇ ｇ ｇ ／ 添加 ２． 的液相色谱图见图 ２， ０ｍ Ｌ 三聚氰胺标准品的牛奶样品的液相色谱图见图 ３． ｇ
处理过程时间较长 ， 其中 Ｇ 目前 ， 液相色谱配合紫外检测器或二 耗的试剂较大 ， Ｃ－ＭＳ 方法还需要进行衍生 ． 极管阵列是最常用的检测方法 ， 但其不足在于前处理时间长 、 步骤复杂 ， 降低了检测效率 ． 本文对前处理方法 进行了改进 ， 采用有机溶剂提取牛奶和奶粉样品中的三聚氰胺 ， 不进行 Ｓ 直接进样进行测 Ｐ Ｅ 固相萃取净化 ， 定， 提高了方法的检测速度 ， 建立了一种高效液相色谱法测定牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速方法 ．
） 三聚氰胺 （ 简称三胺 ， 学名三氨三嗪 ， 别名蜜胺 、 氰尿酰胺 、 三聚酰胺 ， 分子式为 Ｃ 是一 ｍ ｅ ｌ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ３Ｎ ６Ｈ ６， 种重要的氮杂环有机化工原料 ， 具有一定的肾毒性 ． 三聚氰胺分子中含有大量氮 元 素 ， 而用全氮法测定蛋白 ， 伪蛋白氮 ” 所以一些不法厂家在产品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量 ． 三聚氰 质含量时不能区分这种 “ 胺显弱碱性 ， 能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐 ， 在强酸或强碱液中 ， 三聚氰胺发生水解 ， 胺基逐步被羟基取 代， 生成三聚氰酸二酰胺 、 三聚氰酸 － 酰胺和三聚氰酸 ． 乳及乳制品是大众消 费 食 品 ， 公 众 日 常 消 费 量 很 大， 发生在我国的乳制品三聚氰胺污染事件 ， 已经对我国乳品行业造成了极大的负面影 响 ． 因 此， 测定“ 伪 蛋 白” 三聚氰胺 ， 对保证乳制品的质量安全 、 维护人们的身体健康和促进对外贸易具有重要意义 ． ２ ０ １ １ 年 ４ 月我国 卫生部等 ５ 部门联合发布第 １ 公布了我国三聚氰胺在食品中的限量值 ， 即婴幼儿配方乳粉中三聚 ０ 号公告 ， ／ ， ／ ， 其他食品中三聚氰胺的限量值为 ２． 高于上述限量的食品一律不得销售 ． 氰胺的限量值为 １ｍ ｋ ５ｍ ｋ ｇ ｇ ｇ ｇ
内蒙古师范大学学报 （ 自然科学汉文版 ） ） Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍ ｏ ｎ ｏ ｌ ｉ ａ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｇ ｙ（
第４期
郭铁筝 等 ：牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速测定方法
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１． ２ 仪器与设备 配有紫外 — 二极管阵列 测 定 器 ， 美 国 安 捷 伦 公 司； Ａ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ０ ０ｐ ｌ ｕ ｓ型高效液相色谱仪 ， ３ Ｋ １ ６型离心 － ｇ 机， 德国西格玛公司 ；Ｎ 上海爱朗仪器有限公司 ． １ ０ ０ ０ Ｄ 型旋转蒸发器 ， － １． ３ 分析方法 １． ３． １ 色 谱 条 件 色 谱 柱 ：Ａ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ Ｃ － ｇ １ ８ 柱 （ ） ， ；柱 温 ： ２ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ（ ｉ ． ｄ ５μ ｍ） ２ ５℃ ； 进样量 ： ５ ０ Ｌ；测定波长 ： ２ ４ ０ ｎ ｍ；流动相 ：缓 μ ， ／ ；流速 ：１ ／ ； 冲液 ∶ 乙腈 （ ９ ０ ∶ １ ０ Ｖ Ｖ） ． ０ｍ Ｌ ｍ ｉ ｎ 等度洗脱 ． ／ 采用上述色 谱 条 件 ， 测 定 浓 度 为 ２． ０ｍ Ｌ ｇ 的三聚氰胺标准品溶液 ， 其色谱图如图 １ 所示 ． 准确称取牛 １）样 品 提 取 ． １． ３． ２ 测定步 骤 （ ） 精确到 ０． 于５ 奶样品 ５ ０ １ ０ｍＬ 离心管中 ， ｇ（ ｇ ／ 加 入乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ （Ｖ Ｖ） 混 合 溶 振荡溶解１ 液２ ０． ０ｍＬ， ０ｍ ｉ ｎ后超声提取５ ， ／ 取全部上 ｍ ｉ ｎ １ ０ ０ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ 下 高 速 离 心 ５ｍ ｉ ｎ． 清液 ， 于４ 用水 ０℃ 以下旋转蒸发去除有机溶剂 ， ／ 定容至 １ 上 ０． ０ｍＬ， １ ０ ０ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ 下离 心 ５ｍ ｉ ｎ，
／ 图 １ ２． ０ｍ Ｌ 三聚氰胺标准溶液液相色谱图 ｇ ／ Ｆ ｉ ． １ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ２． ０ｍ Ｌ ｍ ｅ ｌ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｇ ｇ ｇ
清液过 ０． 如果样品中被测物含量较高 ， 可适当增加定容体积或者进行稀释 ． ４ ５ ｍ 滤膜待测 ． μ （ ） 准确称取奶粉样品 ５ 精确到 ０． 于５ 加入 ５ｍＬ 水 ， 涡旋混匀 ， 然后按照牛奶中 “ 加 ０ １ ０ｍＬ 离心管中 ， ｇ ｇ （ ／ 入乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ 混合溶液 ２ 后的步骤进行操作 ． Ｖ Ｖ） ０． ０ｍＬ” （ ）色谱测定 ． 根据试样中被测物含量 ， 选取响应值适当的标准工作液与待测样液穿插进样进行色谱分 ２ 标准工作液应有 ５ 个浓度水平 ， 包括零点 ． 标准工作液和待测样液中三聚氰胺 的 响 应 值 均 应 在 仪 器 线 性 析． 范围内 ．
１ 材料与方法
１． １ 试剂与材料 ／ ， 除非另有说明 ， 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯， 水为 Ｇ 甲醇（ 美国 Ｆ Ｂ Ｔ ６ ６ ８ ２ 规 定 的 一 级 水． ＨＰ Ｌ Ｃ 级） ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ， 美国 Ｆ 美国 Ｆ ＨＰ Ｌ Ｃ 级） ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ 公 司 ；柠 檬 酸 ；庚 烷 磺 酸 钠 ， ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ公司 ；乙腈 （ ／ ／ ） 公司 ；流动相缓冲液 ： ０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 柠檬酸 －０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 庚烷磺酸钠 （ Ｈ＝３． ０ ． ｐ ， ／ ） ：称取适量三聚 三聚氰胺标准品 （ 纯度 ９ 美国 Ａ ９． ９％ ） Ｃ ＲＯ Ｓ 公司 ；三聚氰胺标准贮备液 （ １． ０ｍ ｍ ｌ ｇ ／ 氰胺标准品 ， 用甲醇 ∶ 水 （ 溶解并定容于 １ 于 ４℃ 条 件 下 保 存 ；标 准 工 作 溶 液 ： ７∶３， Ｖ Ｖ） ０ ０ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 根据需要用水逐级稀释配制 ；滤膜 ： ０． ４ ５ ｍ 水相 ． μ
［ ］ ［ ］ ［ ０ ］ ／ 、 文献报道的三聚 氰 胺 的 测 定 方 法 有 ＨＰ 毛细管电泳 Ｌ Ｃ 法 １－２ 、 Ｇ Ｃ－ＭＳ 法 ３－４ 、 ＨＰ Ｌ Ｃ－ＭＳ ＭＳ 法 ５－１ ［ ］ ［ ［ １ １ １ ２ １ ３］ １ ４］ － 、 离子色谱法 、 酶联免疫吸附法 （ 上述方法都需要对样品进行 Ｓ 消 法 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 等 ． Ｐ Ｅ 固相萃取净化 ，
２ 结果与分析
２． １ 色谱条件的选择 采用常用的反相色谱柱 Ｃ 发现三聚氰胺在 Ｃ １ ８ 色谱柱和 Ｃ ８ 色谱柱进行三 聚 氰 胺 测 定 时 ， ８ 色谱柱上与 杂质分离效果不佳 ， 色谱峰形不理想 ． 所以实验选用 Ｃ 三聚氰胺与杂质分离效果良好 ， 能 １ ８ 色谱柱进行分离 ， 够达到色谱基线分离 ， 且基线平稳 ， 色谱峰形对称 ． 在选择流动相时 ， 进行了离子浓度 、 三聚氰胺对流动相中柠檬 Ｈ 及乙腈比例对色谱分离影响的 实 验． ｐ 酸 － 庚烷磺酸钠缓冲溶液浓度及比例变化比较敏感 ． 缓冲溶液浓度高 ， 三聚氰胺 的 出 峰 时 间 推 迟 ， 但对色谱 柱的影响较大 ． 流动相的 ｐ Ｈ 对三聚氰胺的出峰时间和分离效果影响明显 ， Ｈ＝３． ０ 时色谱保留时间和分离 ｐ ／ ／ ） ， 度均较为理想 ． 因此 ， 选用 ０． 缓冲溶液 ∶ Ｈ＝３． ０ ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 柠檬酸 －０． ０ １ｍ ｏ ｌ Ｌ 庚烷磺酸钠为缓冲溶液 （ ｐ ／ 乙腈 （ 为流动相 ． ９ ０∶１ ０， Ｖ Ｖ） ２． ２ 提取溶剂的选择 通过对比乙腈 、 甲醇 、 三氯乙酸水溶液 、 乙酸铅水溶液等提取溶剂沉淀牛奶中蛋白质的效果发现 ， 三氯乙 酸水溶液 、 乙酸铅水溶液均需在浓度较大的条件下才能有效的沉淀牛奶中的蛋 白 质 ， 但 三 氯 乙 酸、 乙酸铅的 浓度过大会影响色谱柱的使用寿命 ， 甚至会造成色谱系统的堵塞 ；乙腈沉淀蛋白质的效果良好 ， 但是提取奶 （ ／ 难以进行均质提取 ；采用乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１ 混合溶液提取时 ， 蛋白质沉淀效果 粉时蛋白质容易凝结 ， Ｖ Ｖ） ／ 良好 ， 蛋白质沉淀分散 ， 易于提取 ． 因此 ， 选用乙腈 ∶ 甲醇 ＝１∶１（ 混合溶液作为提取 溶 剂 ． 由于采用乙 Ｖ Ｖ） 腈溶剂提取液直接进样 ， 三聚氰胺在液相色谱上的响应值明显降低 ， 所以采取蒸发出大部分乙腈 、 甲醇 ， 用水 定容 ， 获得了较好的色谱响应值及较好的分离效果 ．
收稿日期 ： ２ ０ １ ２ ０ １ １ ０ － － ） 基金项目 ：国家质量监督检验检疫总局科研项目 （ ２ ０ ０ ９ Ｉ Ｋ １ ７ ８ ， ： 作者简介 ：郭铁筝 （ 女， 辽宁省鞍山市人 ， 内蒙古出入境检验检疫局工程师 ， 主要从事食品安 全 分 析 研 究 ， １ ９ ６ ９－ ） Ｅ－ｍ ｉ ａ ｌ ｕ ｏ ｔ ｉ ｅ ｚ ｈ ｅ ｎ ｎ ｍ ｇ ｇ ｇ ６ ３． ｃ ｏ ｍ． ＠１
／ ０ｍ ｋ 图 ２ 不含三聚氰胺的牛奶样品液相色谱图 图 ３ 添加 ２． ｇ ｇ 三聚氰胺的牛奶样品液相色谱图 ／ ｉ ． ２Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ｂ ｌ ａ ｎ ｋ ｍ ｉ ｌ ｋ ｓ ａ ｍ ｌ ｅ ｉ ． ３Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｍ ｏ ｆ ｓ ｉ ｋ ｅ ｄ ｍ ｉ ｌ ｋ ｓ ａ ｍ ｌ ｅ ａ ｔ ２． ０ｍ ｋ Ｆ Ｆ ｇ ｇ ｐ ｇ ｇ ｐ ｐ ｇ ｇ
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牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速测定方法
郭铁筝 ，潘国卿 ，赵治国 ，白国涛 ，张春艳 ，纪 元
（ ） 内蒙古出入境检验检疫局 ， 内蒙古 呼和浩特 ０ １ ０ ０ ２ ０ 摘 要 ：介绍了一种用高效液相色谱法测定牛奶和奶 粉 中 三 聚 氰 胺 的 快 速 方 法 ． 牛奶和奶粉试样中的三聚 提取液经离心 、 浓缩后 ， 用高 效 液 相 色 谱 仪 － 二 级 管 阵 列 测 定 器 测 定 ， 外 标 法 定 量． 氰胺用乙腈 ∶ 甲醇溶液提取 ， ／ ／ ， ／ ， 该方法的线性范围为 ０． 定 量 检 出 限 为 １． 添 加 浓 度 范 围 为 １． 回收率为 ５ ０～１ ０ ０ｍ Ｌ， ０ｍ ｋ ０～５． ０ｍ ｋ ｇ ｇ ｇ ｇ ｇ 相对标准偏差 （ 为 １． 测定方法操作简便、 快速， 回收率高， 适用于牛奶和奶 ８ ３． ８％ ～９ ６． ５％ ， Ｒ Ｓ Ｄ） ２ ７％ ～８． ６ ２％． 粉中三聚氰胺的快速测定 ． 关键词 ：三聚氰胺 ；牛奶 ；奶粉 ；快速测定 ；液相色谱法 （ ） 中图分类号 ：Ｏ ６ ５ ７． ７＋２ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ ８ ７ ３ ５ ２ ０ １ ２ ０ ４ ０ ４ ０ ６ ０ ４ －－ －－ －－
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内蒙古师范大学学报 （ 自然科学汉文版 ）
第４ １卷
百度文库
线性相关系数及定量检出限 ２． ３ 方法的线性范围 、 ／ 配制浓度为 ０． 按照选定的 ５ ０， １． ０， ２． ０， ５． ０， １ ０． ０， ２ ０． ０， ５ ０． ０， １ ０ ０． ０ｍ Ｌ 的 三 聚 氰 胺 系 列 标 准 溶 液， ｇ 色谱条件进行测定 ， 用色谱峰面积对三聚氰胺进样浓度进行线性回归 ， 其线性范围为 ０． 线性 ５ ０－１ ０ ０ｍ ． Ｌ， ｇ 方程为 ｙ＝１ 线性相关系数为 ０． ９ ２． ４ ５ ｘ＋２ ８． ０ ７， ９ ９ ９ ７． ／ ） 按照实验步骤 ， 将三聚氰胺标准溶液稀释进样 ， 以信噪比为 １ 计算 ， 三聚氰胺的 最 低 定 量 检 ０（ Ｓ Ｎ＝１ ０ ／ ／ 出浓度为 ０． 则牛奶和奶粉中三聚氰胺的最低定量检出限为 １． 不含三聚氰胺的牛奶样 品 ５ｍ Ｌ， ０ｍ ｋ ． ｇ ｇ ｇ ／ 添加 ２． 的液相色谱图见图 ２， ０ｍ Ｌ 三聚氰胺标准品的牛奶样品的液相色谱图见图 ３． ｇ
处理过程时间较长 ， 其中 Ｇ 目前 ， 液相色谱配合紫外检测器或二 耗的试剂较大 ， Ｃ－ＭＳ 方法还需要进行衍生 ． 极管阵列是最常用的检测方法 ， 但其不足在于前处理时间长 、 步骤复杂 ， 降低了检测效率 ． 本文对前处理方法 进行了改进 ， 采用有机溶剂提取牛奶和奶粉样品中的三聚氰胺 ， 不进行 Ｓ 直接进样进行测 Ｐ Ｅ 固相萃取净化 ， 定， 提高了方法的检测速度 ， 建立了一种高效液相色谱法测定牛奶和奶粉中三聚氰胺的快速方法 ．
） 三聚氰胺 （ 简称三胺 ， 学名三氨三嗪 ， 别名蜜胺 、 氰尿酰胺 、 三聚酰胺 ， 分子式为 Ｃ 是一 ｍ ｅ ｌ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ３Ｎ ６Ｈ ６， 种重要的氮杂环有机化工原料 ， 具有一定的肾毒性 ． 三聚氰胺分子中含有大量氮 元 素 ， 而用全氮法测定蛋白 ， 伪蛋白氮 ” 所以一些不法厂家在产品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量 ． 三聚氰 质含量时不能区分这种 “ 胺显弱碱性 ， 能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐 ， 在强酸或强碱液中 ， 三聚氰胺发生水解 ， 胺基逐步被羟基取 代， 生成三聚氰酸二酰胺 、 三聚氰酸 － 酰胺和三聚氰酸 ． 乳及乳制品是大众消 费 食 品 ， 公 众 日 常 消 费 量 很 大， 发生在我国的乳制品三聚氰胺污染事件 ， 已经对我国乳品行业造成了极大的负面影 响 ． 因 此， 测定“ 伪 蛋 白” 三聚氰胺 ， 对保证乳制品的质量安全 、 维护人们的身体健康和促进对外贸易具有重要意义 ． ２ ０ １ １ 年 ４ 月我国 卫生部等 ５ 部门联合发布第 １ 公布了我国三聚氰胺在食品中的限量值 ， 即婴幼儿配方乳粉中三聚 ０ 号公告 ， ／ ， ／ ， 其他食品中三聚氰胺的限量值为 ２． 高于上述限量的食品一律不得销售 ． 氰胺的限量值为 １ｍ ｋ ５ｍ ｋ ｇ ｇ ｇ ｇ