α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

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α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求百奥泰康

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求百奥泰康

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:该试剂盒用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1 产品规格试剂1:60mL×5,试剂2:12mL×5;试剂1:60mL×5,试剂2:60mL×1;试剂1:60mL×2,试剂2:12mL×2;试剂1:60mL×2,试剂2:24mL×1;试剂1:80mL×4,试剂2:16mL×4;试剂1:80mL×4,试剂2:64mL×1;试剂1:80mL×2,试剂2:16mL×2;试剂1:80mL×2,试剂2:32mL×1;试剂1:50mL×3,试剂2:10mL×3;试剂1:50mL×3,试剂2:30mL×1;试剂1:40mL×3,试剂2:24mL×1;试剂1:50mL×4,试剂2:20mL×2;试剂1:50mL×4,试剂2:40mL×1;试剂1:60mL×1,试剂2:12mL×1;试剂1:50mL×1,试剂2:10mL×1;试剂1:40mL×1,试剂2:8mL×1;试剂1:500mL×1,试剂2:100mL×1;试剂1:5000mL×1,试剂2:1000mL×1;1.2 组成成分该试剂盒由试剂1(R1)和试剂2(R2)组成。

1.2.1试剂组成试剂1: Tris缓冲溶液≥20.0mmol/Lα-酮丁酸≥3.0mmol/L试剂2:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)≥1.0mmol/L2.1 外观a) R1应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

b) R2应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.2 净含量液体组分不少于标示值。

α—羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α—酮丁酸底物法)产品技术要求derui

α—羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α—酮丁酸底物法)产品技术要求derui

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒
(α-酮丁酸底物法)
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。

表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以生理盐水为空白时,在温度37℃、波长340nm,光径1.0 cm 条件下,吸光度≥ 1.1。

2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以生理盐水为空白时,在温度37℃、波长340nm,光径1.0 cm 条件下,吸光度变化率≤0.002。

2.3分析灵敏度
试剂盒测试浓度为100U/L被测物时,吸光度变化率≥0.003。

2.4线性范围
2.4.1试剂盒在25 ~750U/L区间(范围)内,其回归系数r≥0.990。

2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表3 要求。

表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒重复性CV 值应≤5.0%。

1
2.5.2试剂盒批间相对极差(R)应≤10.0%。

2.6准确度
采用比对试验,相关系数r2≥0.95,相对偏差应在±10%范围内。

2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。

2。

α-HBDH,α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-HBDH)检测标准操作规程

α-HBDH,α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒(α-HBDH)检测标准操作规程

1、方法依据:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)测定试剂盒(DGKC法)测定方法2、适用范围:适用于人血清或血浆α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)的测定。

3、试剂仪器:3.1 试剂:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃~8℃有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存,在2℃~8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器:迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理在α-HBDH催化作用下,α-酮丁酸被还原为α-羟丁酸,同时NADH被氧化为NAD+。

NAD+的生成引起340 nm处吸光度下降,下降速率与样品中α-HBDH的活性成正比。

α-HBDHα-酮丁酸 + NADH + H+ α-羟丁酸 + NAD+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆,采集后及时测定,应避免溶血和污染。

样本于2℃~8℃保存可稳定3天。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准:4.3.2.1 标准液的准备:校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品,按说明书要求稀释后分装,-20℃冷冻保存,用前提前15分钟从冰箱中取出,复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序:首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准:1)换试剂批号或出现质控漂移时;2)当仪器做完保养后;3)仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准,校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控:在标本开始之前做质控,质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围72~182 U/L(注:各实验室应有自己的参考范围。

)4.5 方法评价线性范围:10~1000U/L。

当样本测定值超过上限时,应将样本用生理盐水稀释,重新测定,结果乘以稀释倍数。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求kemei

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求kemei

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)的活性。

1.1包装规格试剂1:2×60ml 试剂2:2×15ml试剂1:5×60ml 试剂2:5×15ml1.2主要组成成分试剂1主要组分:α-酮丁酸钠 4.5mmol/L试剂2主要组分:NADH 1.45 mmol/L2.1外观2.1.1试剂1应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无色溶液,无混浊,无未溶解物。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度:α-HBDH试剂盒在波长340nm处测定试剂的吸光度值,应不小于1.1000。

2.3.2试剂空白吸光度变化率:α-HBDH试剂盒在波长340nm处测定试剂的空白吸光度变化率,每分钟的变化值应不大于0.002。

2.4分析灵敏度测试120U/L α-羟丁酸脱氢酶时,吸光度变化率应不小于0.01。

2.5准确度用本公司α-HBDH试剂盒和已上市公司α-HBDH试剂盒同时测定40个临床样本,用线性回归方法计算两组结果的线性相关系数(r2)应不小于0.95,在[25,1000]U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试(180±18)U/L的样本,所得结果的变异系数CV应不大于5%;2.6.2批间差测试(180±18)U/L的样本,所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围α-HBDH试剂盒在[25,1000]U/L范围内,线性相关系数(r)应不小于0.990;a)在[25,100]U/L区间内,线性绝对偏差应不超过±10U/L;b)在(100,1000]U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装的试剂盒在2℃~8℃避光保存,有效期为12个月。

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求百奥泰康

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求百奥泰康

谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:该产品用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的活性。

1.1 产品规格试剂1:60mL×2,试剂2:20mL×2 ;试剂1:60mL×1,试剂2:20mL×1;试剂1:45mL×2,试剂2:15mL×2;试剂1:45mL×1,试剂2:15mL×1;试剂1:30mL×1,试剂2:10mL×3;试剂1:30mL×2,试剂2:10mL×6;试剂1:300mL×1,试剂2:100mL×1;试剂1:15mL×1,试剂2:5mL×1;试剂1:3000mL×1,试剂2:1000mL×1;192人份(试剂1:51mL,试剂2:17mL);1.2组成成分2.1 外观试剂R1为无色澄清液体;试剂R2为无色或淡黄色澄清液体.2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度空白吸光度应≥0.8000。

2.3.2 空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应≤0.02。

2.4 分析灵敏度浓度为30 U/L时,其吸光度变化率应≥0.00502.5线性在[1,120] U/L范围内,线性相关系数r≥0.990,在[1,40] U/L范围内绝对偏差应不超过4 U/L,在(40,120] U/L范围内相对偏差应不超过±10%。

2.6精密度变异系数(CV%)应≤8%。

2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。

2.8准确度回收试验:回收率90%-110%。

2.9稳定性原包装试剂,在2℃~8℃下有效期为12个月,取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性、精密度、准确度应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求baiding

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求baiding

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的含量。

1.1 规格1.2 组成:2.1 外观2.1.1试剂1:无色液体,无浑浊,无不溶物。

2.1.2试剂2:无色至淡黄色液体。

2.1.3包装外观应整洁,标签字迹清晰,不易脱落。

2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂空白吸光度≥0.8。

2.3.2试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率(ΔA/分)≤0.02。

2.4 分析灵敏度样本浓度为30U/L时,吸光度变化率(ΔA/分)≥0.0030。

2.5 线性在[4,120] U/L的范围内,线性相关系数r≥0.990。

测试浓度在[4,40] U/L时,绝对偏差应不超过±4 U/L;测试浓度在(40,120] U/L时,相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1重复性用高、低2个浓度的样本测试试剂盒,各重复测试10次,其变异系数(CV)应不大于10%。

2.6.2批间差用样本分别测试3个不同批次的试剂盒,每个批次测试3次,其相对极差(R)应不大于10%。

2.7 准确度与已上市产品进行对比试验,在[4,120] U/L的范围内,线性相关系数r≥0.975。

测试浓度在[4,40] U/L时,绝对偏差应不超过±4 U/L;测试浓度在(40,120] U/L时,相对偏差应不超过±10%。

2.8 效期稳定性原包装试剂盒在2℃~8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。

有效期满后3个月内测试,应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

转氢酶-2活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

转氢酶-2活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

转氢酶-2活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC3260规格:50T/24S产品内容:提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前加入6mL试剂三备用,可分装后-20℃保存,但避免反复冻融。

试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂三备用。

试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存;产品说明:转氢酶位于线粒体的内膜上,又称为线粒体复合体六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化,调节线粒体NAD(H)和NADP(H)平衡。

把逆向反应称为TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。

用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+还原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,测定375nm光吸收的增加速率,来计算TH-2活性。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:一、转氢酶-2的提取(1)称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0mL提取液,用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

(2)4℃600g离心10min。

(3)将上清液移至另一离心管中,4℃11000g离心15min。

(4)上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的转氢酶-2(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。

(5)在沉淀中加入800μL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于转氢酶-2酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至375nm,蒸馏水调零。

2、样品测定:在1mL石英比色皿中分别加入试剂名称测定管对照管试剂一400-试剂二400400样品100100试剂三100500将上述试剂分别加入1mL石英比色皿后充分混匀,于375nm处测定初始吸光值A1,迅速将比色皿连同反应液放入37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴锅中水浴3min,然后迅速拿出擦干测定3min后的吸光度A2,计算△A测定=A2测定-A1测定,△A对照=A2对照-A1对照,△A=△A测定-△A对照。

人酮戊二酸脱氢酶(-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒

人酮戊二酸脱氢酶(-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒

人α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人尿液或其它相关生物液体中α-KGDHC含量。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗α-KGDHC抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗α-KGDHC抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的α-KGDHC呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ug/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成100ug/ml,50ug/ml,25ug/ml,12.5ug/ml,6.25ug/ml,3.12 ug/ml,1.56ug/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0ug/ml,临用前15分钟内配制。

如配制50 ug/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)100ug/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1×20ml。

4.检测稀释液A:1×10ml。

5.检测稀释液B:1×10ml。

6.检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求huayu

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求huayu

谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的活性。

1.1 产品型号/规格试剂1:1×30 ml,试剂2:1×10 ml;试剂1:2×30 ml,试剂2:2×10 ml;试剂1:4×30 ml,试剂2:4×10 ml;试剂1:8×30 ml,试剂2:8×10 ml;试剂1:1×45 ml,试剂2:1×15 ml;试剂1:2×45 ml,试剂2:2×15 ml;试剂1:3×50 ml,试剂2:2×25 ml;试剂1:1×60 ml,试剂2:1×20 ml;试剂1:2×60 ml,试剂2:2×20 ml;试剂1:2×90 ml,试剂2:2×30 ml;试剂1:2×90 ml,试剂2:3×20 ml;试剂1:4×90 ml,试剂2:4×30 ml;试剂1:2×15 ml,试剂2:2×5 ml ;试剂1:4×15 ml,试剂2:4×5 ml ;试剂1:8×15 ml,试剂2:8×5 ml ;试剂1:16×15 ml,试剂2:16×5 ml。

校准品:1 ml/瓶×1瓶(选配)1.2 主要组成成分试剂1:三乙醇胺缓冲液50 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA) 3.0 mmol/L醋酸铵120 mol/L二磷酸腺苷(ADP)≥1.35 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)0.25 mmol/L乳酸脱氢酶(LDH)≥2 U/L试剂2:三乙醇胺缓冲液8.0 mmol/Lα-酮戊二酸 40 mmol/L校准品(选配):Tris缓冲液100 mmol/L Proclin-300 0.5‰谷氨酸脱氢酶目标浓度100.00U/L注:校准品浓度具有批差异性,具体浓度见校准品瓶签。

葡萄糖脱氢酶(GCDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

葡萄糖脱氢酶(GCDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

葡萄糖脱氢酶(GCDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC2690规格:50T/48S产品简介:GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。

GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶,同时也是临床血糖测定的诊断用酶,可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH在340nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。

临用前加入15mL试剂一溶解,用不完的试剂4℃保存。

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃避光保存。

临用前每瓶加入5mL试剂一溶解,用不完的试剂建议分装后-20℃避光保存,避免反复冻融。

操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

细胞或细菌:先收集细胞或细菌到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个)︰提取液体积(mL)为500~1000︰1的比例(建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞或细菌(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,总时间5min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血浆(清):直接检测。

二、测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:按照试剂一︰试剂二︰试剂三为4︰3︰2的体积比例充分混匀,备用,用前37℃预热10min。

分光光度法测定谷氨酸脱氢酶所用的试剂

分光光度法测定谷氨酸脱氢酶所用的试剂

分光光度法测定谷氨酸脱氢酶所用的试剂分光光度法是一种常用的化学分析方法,它通过测定溶液或物质对特定波长的光的吸收或透过能力来分析样品的成分。

在生化实验中,分光光度法被广泛应用于测定各种酶的活性,其中包括谷氨酸脱氢酶。

谷氨酸脱氢酶是一种重要的生物催化剂,参与谷氨酸代谢途径中的关键步骤。

它主要负责将谷氨酸氧化为α-酮戊二酸和氨气,产生能量和氨基酸转化。

测定谷氨酸脱氢酶的活性对于研究细胞代谢和酶功能非常重要。

在进行分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时,一个关键的方面是选择合适的试剂。

试剂的选择必须考虑到其对酶活性的敏感性,并且能够提供特定的检测信号。

常见的用于测定谷氨酸脱氢酶活性的试剂包括谷氨酸和辅酶NAD+。

谷氨酸是由谷氨酸酶合成的,它是一种白色晶体粉末。

当谷氨酸与谷氨酸脱氢酶反应时,产生的α-酮戊二酸会与辅酶NAD+反应生成NADH。

NADH可以吸收特定波长的光,它的浓度与谷氨酸脱氢酶的活性成正比。

通过测定NADH的吸光度,我们可以间接测定谷氨酸脱氢酶的活性。

当进行分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时,需要注意一些实验细节。

试剂的配制要准确,并且需要在合适的温度下进行反应。

吸收光的波长应该选择在NADH的吸收峰位,一般在340 nm左右。

空白对照也是必需的,以排除其他物质对吸光度的影响。

在分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时,我们可以通过测量样品的吸光度变化来得到谷氨酸脱氢酶的活性值。

这不仅可以帮助我们了解酶的功能和代谢途径,还可以用来评估细胞的生理状态和健康状况。

总结起来,分光光度法是一种常用的化学分析方法,可以用于测定谷氨酸脱氢酶的活性。

在测定过程中,选择合适的试剂对于获得准确的结果非常重要。

通过测量样品的吸光度变化,我们可以得到谷氨酸脱氢酶的活性值,从而了解酶的功能和细胞的代谢途径。

个人观点和理解方面,我认为分光光度法是一种非常有用的分析方法,可以帮助我们深入研究生物体内的各种酶和代谢途径。

谷氨酸脱氢酶作为一种重要的酶,在细胞代谢和健康状况中扮演着重要角色。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求lideman

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求lideman

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的含量。

1.1 规格试剂1(R1):4×80mL,试剂2(R2):4×16mL;试剂1(R1):2×400mL,试剂2(R2):2×80mL;试剂1(R1):5×60mL,试剂2(R2):5×12mL;试剂1(R1):2×72mL,试剂2(R2):1×36mL;试剂1(R1):3×40mL,试剂2(R2):3×8mL;试剂1(R1):2×80mL,试剂2(R2):2×16mL;试剂1(R1):1×20mL,试剂2(R2):1×6mL;试剂1(R1):2×60mL,试剂2(R2):2×12mL;试剂1(R1):4×60mL,试剂2(R2):4×12mL;试剂1(R1):1×1000mL,试剂2(R2):1×200mL;试剂1(R1):1×5000mL,试剂2(R2):1×1000mL;试剂1(R1):2×12mL,试剂2(R2):2×2.4mL;试剂1(R1):5×12mL,试剂2(R2):5×2.4mL;试剂1(R1):10×12mL,试剂2(R2):10×2.4mL;试剂1(R1):20×12mL,试剂2(R2):20×2.4mL;试剂1(R1):2×15mL,试剂2(R2):2×3mL;试剂1(R1):5×15mL,试剂2(R2):5×3mL;试剂1(R1):10×15mL,试剂2(R2):10×3mL;试剂1(R1):20×15mL,试剂2(R2):20×3mL;320T:试剂1(R1):83mL,试剂2(R2):16.6mL;校准品(选配):1×5mL;5×5mL;20×5mL。

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求sainuopu

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)产品技术要求sainuopu

α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)测定试剂盒(α-酮丁酸底物法)适用范围:用于体外定量测定人体血清中α-羟丁酸脱氢酶的活性。

1.1试剂盒包装规格试剂1:1×25ml,试剂2:1×5ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×12ml;试剂1:3×40ml,试剂2:3×8ml;试剂1:4×60ml,试剂2:4×12ml;试剂1:2×400ml,试剂2:1×160ml;试剂1:1×10L,试剂2:1×2L;试剂1:2×40ml,试剂2:2×8ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×15ml;试剂1:2×40ml,试剂2:2×10ml。

校准品(选配,冻干品):1×1ml,1×3ml,1×5ml。

1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观液体双试剂:试剂1无色澄清液体;试剂2无色至浅黄色澄清液体。

校准品:冻干品,溶解后为淡黄色液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不小于1.1。

2.3.2试剂空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下,用生理盐水作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.002。

2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L的样本时,吸光度变化率(ΔA/min)应不小于0.010。

2.5 线性范围测试血清样本,试剂线性在[25,750]U/L(37℃)区间内:a)线性相关系数|r|应≥0.990;b)[25,100]U/L区间内,线性绝对偏差不超过±10U/L;(100,750)U/L区间内,线性相对偏差应不超过±10%。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本,所得结果的重复性(变异系数,CV%)应不大于5%。

a-酮戊二酸标准

a-酮戊二酸标准

a-酮戊二酸标准
α-酮戊二酸(α-Ketoglutaric acid)是一种化学物质,其标准包括以下几个方面:
1.化学式与分子量:α-酮戊二酸的化学式为C5H6O5,分子量为146.11 g·mol⁻¹。

2.外观与纯度:α-酮戊二酸通常呈现为白色至类白色粉末,纯度通常要求达到
HPLC≥98%。

3.物理性质:α-酮戊二酸在特定条件下的熔点为113.5°C,并且具有一定的溶解性,
例如在四氢呋喃、乙醇和甲醇中的溶解度分别为2.33 M、1.94 M和3.75 M。

4.稳定性与保存:α-酮戊二酸在2-8℃的条件下可以保持稳定,并且其有效期通常为
2年。

此外,α-酮戊二酸还有一个CAS编号,即328-50-7,这是化学物质的唯一标识符,可用于查找和追踪该物质的相关信息。

请注意,这些标准可能因不同的生产商、应用领域或质量控制要求而有所差异。

因此,在具体使用时,建议参考相关的产品说明书、技术规格或行业标准,以确保正确使用和符合相关要求。

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α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC0710
规格:50T/48S
产品内容:
试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体0.6mL×1支,-20℃保存;
试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1支,4℃保存;
试剂五:粉剂×1支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。

临用前加入2mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。

工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。

产品说明:
α-KGDH(EC1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:
一、α-KGDH的提取
称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4℃11000g离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零
2.空白管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL 蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。

3.测定管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。

三、α-KGDH活性计算
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T
=1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH(U/g鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T
=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
3.按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T
=2.977×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总:反应体系总体积,1.1×10-3L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;
d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.06mL;
V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,2min;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;
500:细菌或细胞总数,500万。

注意事项:
1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性和失活。

2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。

在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、最好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。

4、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。

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