实验四 果蝇唾腺染色体的观察

实验四果蝇唾腺染色体的观察

温度：21-24 摄氏度大气压：80.1-82.42Kpa 日期：2016.4.28

姓名：郑元跃学号：20140322225 班级：14级生物二班

一目的

1、观察果蝇唾腺染色体的形态特征；

2、掌握剥离果蝇幼虫唾液腺的技术以及制作唾腺染色体玻片标本的方法；

3、观察果蝇唾液腺染色体的结构特征及了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的

意义；

二原理

双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，容易在唾腺染色体上观察出来。观察多线染色体的特征：巨大；体细胞中同源染色体配对，所以细胞中染色体只可以观测出半数(n)；各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chromocenter)；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。

果蝇的染色体组成

由于在唾腺细胞中8条染色体之间以着丝粒相互连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称为明带和暗带的横纹，这些横纹的位置、宽窄、数目都具有物种的特异性，不同物种，不同染色体的不同部位形态和位置是固定的，因此根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹的特征能准确识别各条染色体。在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA ，因此不着色，是基因活动的区域。在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。

黒腹果蝇（Drosophila melanogaster）染色体的组成；

有4对染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒

染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。

黒腹果蝇（Drosophila melanogaster）唾腺染色体特点：(1)巨大； (2)体联会现象决定了染色体只有半数； (3)各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；(4)横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列，具有种的特异性。 (5)多线染色体（与中期高度螺旋的染色体相区别）若有缺失、易位、倒位、重复等现象，很容易在唾腺染色体上识别出来。

果蝇唾腺染色体核型图果蝇唾腺染色体模式图

果蝇唾腺染色体图

三材料与方法

材料：黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）三龄幼虫

用具：显微镜、放大镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片

试剂：1%醋酸洋红、HCl、生理盐水

方法：

1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。

2.解离：在唾腺组织上滴一滴1滴HCl，解离1-2min ，以松软组织，利于染色体的分散。

3.染色：吸去 HCl，用水冲洗2-3次后滴加醋酸洋红染液染色10min。

4.压片：染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次。（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。当腺体被染成红色后，用滤纸擦去染液周围一圈的黑色沉淀物，再用蒸馏水冲洗2—3次，然后加上盖玻片，在盖玻片上方再植盖一层滤纸，用镊子在盖玻片，轻轻敲击几下。再用拇指按住盖玻片用力下压，把腺体细胞压破，把染色体压散开．压片时放载玻片的桌面要干，不要使盖片滑动。制好的玻片标本用蜡封住盖玻片四周以防干燥。经低温冷冻处理的材料经解离，染色．加盖片后不必敲击．镜检即可看到分散良好的唾腺染色体

5.镜检：再用高倍镜观察。

流程：解剖唾腺→转到载玻片上→加1滴 Hcl解离1min →吸去HCl→水洗→醋酸洋红染色10min →盖片、压片→镜检

注意事项；

1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。

2.将脂肪组织清除干净。

3.水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。

4.染色时间不可过长，否则背景也着色。

5.压片时要揉。

6.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。

四结果与分析

X 2L

3L 3R 4

2R

40×显微镜下看到的结果

五讨论与结论

所做出的唾腺染色体能观察到有8条，而且制作的材料都是果蝇的三龄幼虫，制作的步骤为剥离，解离，漂洗，染色，压片。和前人的做法大致相同，在制作过程中我们没有考虑外界因素的影响，不同条件下染色体的膨松区的结构也会发生变化；每个人和一个所选的三龄幼虫大小不一样，而导致实验结果有差异。

在实验的过程中，通过用不同大小的三龄幼虫所拉出的唾腺染色体进行压片观察，通过对比观察结果，发现越大的三龄幼虫所观察到的染色体越明显，更好的数出染色体条数。能更快的做出实验结果。