瑞氏染液使用说明

瑞氏染液

新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 定。缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）：配方 1 ：配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制：姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。染色步骤（1）先用甲醇固定 2～3 分钟。（2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。（3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。染液鉴定瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。混合染色瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。

瑞氏-姬姆萨染液使用说明书

4、显微观察：将干燥后的载片被染成红色。
注意事项
1. 染色时间与室温及细胞多少有关。室温低、细胞多则染色时间要长；反之，可减少染色
时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清
楚，核质是否分明。应该在具体实践中摸索合适的时间，特别是在更换染液时。每批染色液，
100mL
/
说明书
1份
1
均需试染，以便掌握染色时间。
2. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗，否则会使染料沉着在载片上。
3. 冲洗完的载片应立放于支架上，防止剩余水分浸泡而导致脱色。
温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单
货号
品名
包装
HCY115
瑞氏-姬姆萨染液
2）将瑞氏-吉姆萨染液倒入染缸内，使染液覆盖载片上的细胞。具体染色时间视细胞而定，
一般 3~30min，染色时最好在镜下观察；
3）染色后水洗，先用 PBS 溶液漂洗载片，再用小股水流冲洗，防止将大量的细胞从载片上
冲落下来而影响后续观察。冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
3、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。
对胞质和中性颗粒则着色较差。
为兼顾二者之长，选用复合染色法。即瑞氏-吉姆萨染液。
染色步骤
1、涂片并固定：将细胞均匀的涂布于洁净的载玻片上，待其干燥后进行固定。
固定液的选择视具体情况而定，多数细胞可用甲醇固定。甲醇固定：涂片干燥后浸入甲醇内，
固定时间 15-30min。
2、染色：
1）固定后，室温下通风晾干。将载片置于染缸内准备染色；
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料，血红蛋白，嗜酸性颗粒

瑞氏染色操作流程

瑞氏染色操作流程一、瑞氏染色实验前准备1.1准备染色液和显影液针对瑞氏染色实验，首先要准备染色液和显影液，染色液由25mL的瑞氏染料，90mL的盐酸溶液（浓度为5％），以及1mL的激发剂混合而成。

而显影液则是在10mL的9N的硫酸、10mL的5％的NaOH溶液、10mL的1％的苯甲醇和10mL的1％的芳香族醇基乙醇混合而成。

1.2准备染色木质菌梗在预先准备瑞氏染色液和显影液后，接下来要准备染色用的木质菌梗才能开始瑞氏染色实验。

首先，用洗碗笠将要染色的木质菌梗洗淨，然后用医用刀在木质菌梗中切出厚约2mm的薄片，最后用蒸汽–水泼淋法将木质菌梗片浸湿，方可准备瑞氏染色实验。

二、瑞氏染色实验操作2.1放置染色片在准备好染色液和显影液，以及木质菌梗薄片后，此时要把准备的的木质菌梗薄片放置在染色槽内，以留出表面空间，方便染色液充分浸渍。

2.2加入染色液之后将准备的瑞氏染色液加入染色槽，在实验室内控制温度为37℃，放置20分钟后，可以观察菌梗表面是否呈染色，一般都可以看到浅色到深色之间的蓝色或紫色染色，这说明瑞氏染色已经取得成功。

2.3加入显影液如果瑞氏染色实验成功，那么接下来可以准备将木质菌梗片洗净后加入显影液了，而此时温度需要将控制在22℃，放置5-10分钟后，可以发现菌梗片变淡，并且半透明，证明显影液已经取得成功。

2.4用x网影像再接着，用X网影像观测染色后的木质菌梗，当观测到菌梗表面开始出现斑斑点点发亮时，这表明染色实验结束，在此基础上对木质菌梗进行另一个体系的判断，也就是对菌梗的形态和染色的准确性进行分类、认定和鉴定。

三、瑞氏染色实验结束完成上述瑞氏染色实验操作后，就可以对经过染色后的木质菌梗进行分析、鉴定，完成木质菌梗的离子吸收率、分子斑点和染色效果等等内容，通过瑞氏染色实验把细菌聚集在一起，以便进行实验分析，这正是瑞氏染色实验取得成功的原因。

瑞氏染液

新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 恒定。缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）：配方 1 ：配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制：姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。染色步骤（1）先用甲醇固定 2～3 分钟。（2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。（3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。染液鉴定瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。混合染色瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。

瑞氏染液配制、使用方法及注意事项

瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。

将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。

染液配好后放于室温下，一周后即可使用。

新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。

久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。

染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。

2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。

配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。

3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。

4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。

显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。

白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。

细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。

瑞氏染色

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本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
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产品号 403001 403002 403003 403004 403005 403097 403098 403099
产品 TRAP 染色试剂盒 Masson 染色试剂盒革兰氏染色试剂盒瑞氏染色试剂盒姬姆萨染色试剂盒亚甲基蓝染色试剂盒碱性磷酸酶染色试剂盒酸性磷酸酶染色试剂盒
产品说明书
产品号 403022 403023 403091 403092 403093 403094 403095 403096
结果分析：细菌染成蓝色；细胞核呈蓝色；血红蛋白、嗜酸性颗粒染成粉红色；淋巴细胞胞浆、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝色；组织细胞的细胞质呈红色；完全成熟的红细胞呈粉红色。
注意事项： 1、推片方法：取全血 3ul 左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再均匀沿载玻片平面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。 2、涂片时不要太厚也不要太薄。 3、用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。 4、染色过深或过浅应调整染色时间。 5、染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用 75%乙醇脱色 3-5 秒。 6、染色液可重复使用。

简述瑞氏染色法的步骤

简述瑞氏染色法的步骤
瑞氏染色法是一种常用的染色技术，可以用于细胞和组织的染色。

它
是由丹麦科学家汉斯·克里斯蒂安·瑞氏于1884年首次提出的。

该方法
通过使用甲苯和乙醇的混合物处理样本，然后用胰蛋白酶去除细胞膜上的
脂肪，最后用甲苯溶液进行染色，以显示细胞的核和胞质细胞器。

具体步
骤如下：
1.处理样本：首先，将待染色的细胞或组织样本置于甲苯中，以去除
样本中的脂肪。

2.脱水：将样本放入一系列乙醇浓度不断增加的溶液中，以脱水样本。

这一步骤有助于防止样本的脂肪重新进入细胞。

3.清洗：用清洁的甲醇或二甲苯清洗样本。

这一步骤有助于去除残留
的脂肪和乙醇。

4.染色：将样本放入瑞氏染色剂中。

瑞氏染色剂是一种由甲苯、酸性
染料（如酸性果胶酸和酸性红G）和邻苯二甲酸二丁酯组成的溶液。

该溶
液可以染色细胞核和胞质细胞器。

5.清洗：将样本从染色剂中取出，用甲醇或二甲苯轻轻洗涤，以去除
多余染料。

6.干燥：用空气吹干样本或者放置在加热器中干燥。

7.盖片：将样本置于玻璃盖片上，加入合适的封片剂（如硬脂酸树脂），然后覆盖另一块盖片。

8.固定：将盖片置于120°C的烘箱中固定，使其更加耐久。

使用瑞氏染色法可以染色细胞核为蓝色或紫色，并使胞质细胞器以深红色或橙色显现。

这种染色方法在生物学、医学和组织学等领域被广泛使用，它可以帮助研究人员观察细胞和组织的结构与功能，提供有关细胞和组织的信息。

瑞士染液操作流程

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在进行瑞士染液操作之前，需要做好充分的准备。

瑞士染色液是什么

瑞氏染色液说明书【产品名称】瑞氏染色液【包装规格】货号：DM0005单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对血细胞进行染色。

【检验原理】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇2、磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。

2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。

3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。

4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。

骨髓涂片瑞氏染色步骤

骨髓涂片瑞氏染色步骤
骨髓涂片瑞氏染色步骤如下:
1. 采集骨髓涂片:通常使用新鲜骨髓或骨髓提取物制备涂片。

在采集过程中,需要使用一次性手套和消毒工具,确保不会对样本造成污染。

2. 处理骨髓涂片:将骨髓涂片放入含有酒精的消毒溶液中浸泡,以去除表面的细胞和血小板。

然后,将涂片放入含有单克隆抗体的溶液中浸泡,以识别不同的细胞类型和生物标记。

3. 标记细胞:使用标记抗体将骨髓涂片上的细胞类型进行分类。

常用的标记包括CD3、CD4、CD8、CD10、CD19、CD30、CD45、CD133、B220等。

在采集骨髓涂片之前,需要使用标记抗体进行预处理,以确保涂片上有足够的细胞类型。

4. 染色:将骨髓涂片与瑞氏染色液混合,并轻轻地涂抹在涂片上。

染色后,涂片会被染成红色或深红色,以显示不同的细胞类型。

常用的瑞氏染色液包括瑞氏试剂盒和瑞氏试剂管。

5. 分析细胞类型:将染色后的骨髓涂片放入显微镜下观察,以确定细胞类型。

可以使用光学显微镜或电子显微镜进行观察和分析。

骨髓涂片是一种常用的细胞学检测方法,可以用于诊断多种血液疾病和其他疾病。

通过使用瑞氏染色步骤,可以识别不同的细胞类型,帮助医生确定病情和制定治疗方案。

瑞氏染色液(Wright Stain)使用说明书

仅供科研使用版本号：170303瑞氏染色液(Wright Stain)【产品组成】Component SBJ-0519S2×100mlSBJ-0519M2×500mlStore at试剂(A):Wright Stain 100ml 500ml 室温,避光试剂(B):磷酸盐缓冲液100ml 500ml 室温【保存条件】室温,24个月【产品概述】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料,对原生质的染色有很好的区别作用。

各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质。

原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

瑞氏染液为蓝色澄明液体，有甲醇特异香味，主要由美蓝、伊红、甲醇等组成，其中甲醇的作用是溶解美蓝和伊红以及固定细胞形态。

Wright Stain以进口瑞氏色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。

该染液的特点：由Wright Stain和磷酸盐缓冲液组成，直接使用，无需任何配制过程，染液中加微量中性甘油，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰。

经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。

细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【使用方法】1、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。

2、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3、滴加适量Wright Stain覆盖涂片，室温染色1～2min。

瑞氏-吉姆萨染液配法

瑞⽒-吉姆萨染液配法英⽂拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离⼦。

使⽤⽅法瑞⽒（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染⾊：1．瑞⽒染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄⾊伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞⽒（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．⽤甲醇作瑞⽒染料溶剂，即成瑞⽒染液。

甲醇是瑞⽒染料良好溶剂，有两种作⽤：（1）甲醇使瑞⽒染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有⾊物质⽽着⾊。

甲醇ME（瑞⽒染料）----→M+ + E-在配制的瑞⽒染液中美蓝如放置过久即可氧化⽽含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红⾊，但不能使胞浆染为蓝⾊，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝⾊，染⾊主要是化学作⽤，是离⼦彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强⼤的脱⽔⼒，可将细胞固定在⼀定形态及增加细胞结构的表⾯积，提⾼细胞对染料吸收作⽤，同时由于甲醇吸附染⾊液中的⽔，使染⾊液升温，加速染⾊反应。

染液配制(1) 瑞⽒染液配制：瑞⽒染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称⼲燥（事先放⼊温箱⼲燥过夜）瑞⽒染料放置乳钵内，⽤乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再⾏研磨⾄听不到研芝⿇声即呈细粉末，加少许⽢油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“⼀⾯镜”光泽，⽽⽆染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈⼀⾯镜光亮，静置⽚刻，将上层液体倒⼊⼀清洁储存瓶内（最好⽤甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，⾄乳钵内染料及甲醇⽤完为⽌，摇匀，密封瓶⼝。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，⼀般储存3个⽉以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作⽤：○染⾊对氢离⼦浓度是⼗分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋⽩质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持⼀定的pH使染⾊稳定，PBS的pH ⼀般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作⽤，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作⽤，使pH恒定。

16瑞氏染色操作规程

瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第1页共2页1 目的：规范瑞氏姬姆萨染色操作规程，保证染色效果。

2 原理：2.1 染色原理：瑞氏姬姆萨染色液是利用Romanowsky Stain技术原理改良而成。

细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。

各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对瑞氏-姬姆萨染色液中的酸性染料（伊红）和碱性染料（亚甲蓝）的亲和力也不一样。

因此，标本涂片经瑞氏-姬姆萨染色液染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。

2.2 试剂组成：瑞氏姬姆萨A液（瑞氏染料、姬姆萨染料）瑞氏姬姆萨B液（磷酸盐）3 操作步骤：3.1 滴加瑞氏姬姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；3.2 再将瑞氏姬姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。

（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）3.3 水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

4 结果解释：4.1 血细胞涂片、骨髓涂片染色：红细胞呈粉红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

4.2 阴道分泌物（妇科白带染色）：4.2.1 滴虫：经过染色后的滴虫跟活的滴虫呈现完全不同形态，一般情况下，看不到鞭毛，经过染色后，滴虫多为梨形、圆形、椭圆形或呈不规则形态，浆被染成灰蓝或天蓝色，核小，枣核状，常偏于一侧，需注意观察，避免与上皮细胞混淆。

4.2.2 念珠菌（霉菌）：染成深蓝色，可见芽生孢子，假菌丝细长而直。

4.2.3 白细胞：形态上与血细胞涂片的白细胞相同，一般白细胞的多少，提示发炎程瑞氏姬姆萨染色操作规程生效日期：20150125 页码：第2页共2页度的高低，对医生的诊断具有一定的指标作用。

瑞氏染色液使用说明-诺博莱德

北京诺博莱德科技有限公司
瑞氏染色液
组成规格（50ml）规格（500ml）瑞氏染色液50ml 500ml
磷酸缓冲液50ml 500ml
产品简介
瑞氏染色液(Wright’s Stain Solution)由碱性染料美蓝(Methylene Blue)和酸性染料伊红(Eosin Y)混合配制而成，也称伊红－美蓝染料。

其中伊红的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故习称伊红为酸性染料。

美蓝通常为氯盐是碱性的，呈色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红相反。

细胞成分因选择性吸附其中的有色物质而着色。

新配制的瑞氏染液染色效果较差，久置,其中的美蓝因被氧化,而含有天青，美蓝天青与伊红能使细胞核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，而多余的美蓝则可以使胞浆染成蓝色。

瑞氏染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

使用说明
1.按常规方法制备血涂片，待血膜干后用蜡笔划好染色范围，以防滴加染液
时外溢。

2.滴加染液，使覆盖全部血膜，30秒至1分钟后滴加等量的磷酸缓冲液
（pH6.8），轻轻摇动载玻片，使蒸馏水和染液混合均匀，此时出现一层灿铜色浮膜(染色)。

3.染色3～5分钟后，用自来水缓慢从玻片一端冲洗(注意勿先倒去染液或直
接对血膜冲洗)，凉干后镜检。

瑞氏染色液

瑞氏染色液【产品名称】瑞氏染色液【包装规格】货号：DM0005单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对血细胞进行染色。

【检验原理】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇2、磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。

2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。

3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。

4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。

瑞氏染色液使用方法

瑞氏染色液说明书【产品名称】瑞氏染色液【包装规格】货号：DM0005单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×20ml/盒、2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对血细胞进行染色。

【检验原理】瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料，各种细胞成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

本染色液经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色，细胞质呈红色，细胞核及细菌呈蓝色，嗜酸性颗粒呈橘红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、瑞氏染液瑞氏染料、甲醇2、磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】1、血细胞涂片染色：要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。

2、阴道分泌物(妇科白带)涂片染色：新鲜标本离开人体涂片后，需尽快以火焰或酒精固定，以避免细胞变形。

3、骨髓涂片染色：涂片制成后，应在空气中快速摇动或扇干，防止细胞皱缩变形或固空气潮湿而溶血，不能用高温或火烤干燥。

4、脱落细胞涂片：取样本并涂片，待检涂片固定可采用自然干燥法或湿片固定法(具体操作可根据不同检体及所采用的固定液所对应的规范操作要求进行）；若采用湿片固定法，标本浸泡时间稍长些，效果会更佳；若采用湿片固定液固定标本，固定液用后需经常过滤，更换，防止细胞交叉污染。

医院实验室外周血涂片(瑞氏染色)操作规程

****医院实验室外周血涂片（瑞氏染色）操作规程一、目的：外周血细胞检查二、试验原理正常人周围血中的血细胞主要是指红细胞、白细胞、血小板。

其中白细胞至少有五种，分属于三个系统。

通常根据其来源，形态和对染色的反应，把它们分为淋巴细胞，大单核细胞和三种粒细胞——即嗜中性,嗜酸性，嗜碱性粒细胞。

三、染色液配置瑞氏染色液配法：美蓝伊红染料1克，加少量甲醇或甘油在研钵中研磨均匀后倒入1000毫升量筒中，用甲醇冲洗研钵，一并倒入量筒中，最后加甲醇至600毫升，混匀后密闭保存备用。

工作量大的单位最好一次大量配制。

保存时间越长，染色效果越好。

缓冲液：现磷酸氢二钠20毫升；1%磷酸二氢钾30毫升，两液混合后加水至1000毫升。

此缓冲液PH为6.4-6.8。

四、操作方法1、取血1小滴，加于玻片一端，再用一端边缘整齐光滑的推片推成一厚度适中的血膜。

血膜的厚度可由血滴大小，推片的速度和推片与玻片之间的角度大小来调节。

血滴小，推进速度慢，推片角度小，涂片薄；反之，则厚。

涂片制成后，用铅笔在血膜一端记上姓名或编号，以免相互搞错。

2、血膜干后，滴加瑞氏染液于血膜上盖满。

约一分钟后，滴加相当于染液1.5倍量的缓冲液，将两液吹匀，染10T5分钟。

用清水洗玻片，待干。

3、用浸油镜检查血膜上分布不均，大细胞多分布于片之两边和尾部；小细胞则多在中间，故采用曲线式移片方法，以减少误差。

4、分类方法：用浸油镜分别计数100个白细胞中各种白细胞所占的百分率。

如发现异常红细胞和白细胞亦应报告。

同时观察血小板的数量、存在状态及大小。

五、参考值细胞成人中性粒细胞：杆状核分叶核嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞单核细胞0.01-0.05(1%-5%)0.50〜0.70(50%〜70%) 0.005-0.05(0.5%〜5%) 0〜0.01(0%〜1%)0.20〜0.40(20%〜40%) 0.03-0.08(3%〜8%)六、临床意义：1、增多(1)中性粒细胞：急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶血、手术后、尿毒症、酸中毒、急性汞中毒、急性铅中毒等。

瑞氏染液使用说明货号：G1040规格：50ml/100ml保存：室温避光保存，有效期至少2年。

产品说明：瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇。

伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。

美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。

后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。

使用方法：本产品可作为多种组织或细胞的染色使用，不同组织、细胞，不同的用途可以有不同的使用方法。

具体方法请根据自己需求参考既有文献，本产品以涂片为例，举例说明，仅供参考。

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。

注意事项：1、涂片厚薄适宜，涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、所加染液不能过少，以免蒸发而使染料沉淀。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

3、染色对pH十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应接近中性，否则可能会导致细胞染色异常，形态难以识别，甚至错误。

4、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

相关试剂：P210010×多聚赖氨酸G1010姬姆萨染色液G1100伊红染色液G1140苏木素染色液(常规染色)G1120H-E染色试剂盒。

瑞氏吉姆萨复合染色液

外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。

2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。

以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。

其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。

3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。

但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。

多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。

4、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。

将载片平放在玻璃板上准备染色。

2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。

等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS溶液。

继续染色2到3分钟。

4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。

冲片结束后将载片放到阴凉处风干。

5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。

染色时间约为10分钟。

时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。

5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。

6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。

在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。

所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。