山羊肺泡巨噬细胞体外分离与原代培养技术研究

安徽大学

本科毕业论文（设计、创

作）

题目：山羊肺泡巨噬细胞体外分离与原代培养技术研

究

学生姓名：孙义学号：D3*******

院（系）：生命科学学院专业：生物工程

入学时间：2012年9月

导师姓名：班谦职称/学位：博士

导师所在单位：安徽大学

完成时间：2016年5月

山羊肺泡巨噬细胞体外分离与原代培

养技术研究

摘要

肺泡巨噬细胞是存在于肺泡中的免疫细胞，它是免疫系统的重要组成部分，肺泡巨噬细胞免疫功能非常活跃。它是肺脏抵御外来微生物侵害的第一道防线。本次实验通过研究山羊巨噬细胞的体外分离和体外培养技术，从而建立一套完整可行的巨噬细胞分离培养技术方法。人体吸入空气中的尘粒、细菌等异物进入肺泡和肺间质，多被巨噬细胞吞噬清除，在今天空气污染日趋严重的情况下，研究肺泡巨噬细胞对于免疫学和人类健康有重要的意义。而研究巨噬细胞分离培养技术将为肺泡巨噬细胞的免疫学研究奠定坚实的基础。本实验从健康无病变的羔羊肺脏灌洗液中分离肺泡巨噬细胞，加入脂多糖进行诱导刺激。实验表明，通过此次实验的方法，获得了高纯度的山羊肺泡巨噬细胞，在CO2培养箱中连续培养30天左右未发现细胞大规模死亡，LPS刺激下发现其仍具有免疫活性。为进一步通过山羊肺泡巨噬细胞进行各种致病菌导致的疾病的治疗和肺泡巨噬细胞的免疫学功能研究奠定实验基础。

关键词：肺泡巨噬细胞；分离培养；LPS；山羊。

Isolation and primary culture of goat alveolar

macrophages in vitro

Abstract

Alveolar macrophages are present in alveolar in immune cells, it is an important part of the immune system, immune function of alveolar macrophages is very active. It is the first line of defense against microbial invasion of the lung. This experiment through study on goat macrophages in vitro isolation and in vitro culture techniques, so as to establish a complete set of feasible macrophage separation cultivation techniques. Inhaled dust particles in the air, bacteria and other foreign matter into the alveolar and interstitial lung, is phagocytosis of macrophages, in today's air pollution increasingly serious situation, study of alveolar macrophages is important for immunology and human health. And the study of macrophage isolation technology will lay a solid foundation for Immunology Study on alveolar macrophages. The separation of alveolar macrophages from healthy lamb lung lavage fluid of lesions in this experiment, With lipopolysaccharide induced stimulation. The experimental results show that through the experimental method, goat alveolar macrophages in high purity and in CO2 culture box in continuous culture about 30 days found no large-scale cell death, under the stimulation of LPS found it still has the immune activity. Study on the immunological function of further by goat alveolar macrophages were all pathogenic bacteria caused the disease treatment and alveolar macrophages lay the experimental foundation.

Keywords: alveolar macrophages ; isolated

culture ;lps;goat

目录：

1引言 (2)

2 材料与方法 (4)

2.1 材料 (4)

2.1.1 仪器设备 (4)

2.1.2 实验试剂 (5)

2.1.3 实验动物 (5)

2.2 试验方法 (5)

2.2.1 山羊肺泡巨噬细胞分离. (5)

2.2.2 原代细胞培养 (5)

2.2.3 LPS刺激山羊肺泡巨噬细胞及其形态学观察 (5)

3. 实验结果 (6)

3.1 山羊肺泡巨噬细胞培养特性 (6)

3.2 使用脂多糖刺激山羊肺泡巨噬细胞观察其形态学变化 (6)

4. 实验分析 (7)

4.1 肺泡巨噬细胞分离培养 (7)

4.2 脂多糖诱导形态学观察 (7)

4.3 山羊巨噬细胞体外分离培养的意义 (7)

5 参考文献 (8)

致谢 (9)