细胞免疫检测技术PPT演示文稿

一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术
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一、中性粒细胞功能的检测
➢ 细胞趋化功能的检测 ➢ 吞噬和杀菌功能的检测
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(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
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(二)吞噬和杀菌功能测定
1．显微镜检查法：
吞噬率 (%)
吞噬细菌的白细胞数 100
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。 体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原 或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴 细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞 毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定
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淋巴细胞 ➢T细胞（负责细胞免疫功能） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK和K细胞（非特异性免疫作用）
(四) 细胞毒作用测定
用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125IUdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤 活性。
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(五) 巨噬细胞促凝血活性测定
激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活 性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经 37℃预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加入经 粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即 时记录血浆凝固时间。
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（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
观察杀伤活力 13
2.方法
➢ 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 ➢ 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞
肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线
意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
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第二十五章 细胞免疫检测技术
第一节 E花环试验 Erythrocyte Rosette Test
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E-花环实验原理
CD2 and CD58
• smilar structure • ligand of CD2---CD58 ligand of CD58---CD2
• CD2 also called SRBC-R(绵羊红细胞受体)
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三、NK细胞活性测定
染色计数
➢形态法 ➢酶释法 ➢荧光法 ➢同位素法 ➢化学发光法
离心取上清
靶 测LDH或AKP
细
胞 溶 解
离心取沉淀 测活细胞荧光
测CPM值
常用靶细胞: K562细胞株
测发光强度
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第三节 吞噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭 作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。
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(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功 能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细 胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细 胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。
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(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法 2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法
特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
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3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入
母细胞化
收集细胞
检测β射线
测定细胞内的3H－TdR 9
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数 10% 0
转化和未转化的胞淋数巴细
方法学评价： ➢优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果， 适于基层实验室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影 响，重复性和准确性较差。
计数的白细胞数
杀菌率 (%) 胞内计含数着的染白菌细体胞数 的数细 1 0胞 0
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2. 溶菌法 杀菌 (% （ 1 率 )作 3、 用 6 0或 0 9m 0菌 in 落 ） 10 数 0
0m菌 in 落数
3．NBT还原试验
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二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒， 脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定 量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反 复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中 炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
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一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
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（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成 母细胞
分化
细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松6
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
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二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
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(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
B细胞增殖
形态学
3H－TdR掺入 法
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(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
豚鼠T细胞表面有8. 将淋巴细胞与RBC按一定比例混合后，在一定条件下
就形成一个T细胞结合多个SRBC的玫瑰花一样的
花环，即E-花环(erythrocyte rosette)，取样
涂片染色、镜检计数可得花环形成率。
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第二节 淋巴细胞的功能检测
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（2）3H-TdR掺入法
试验孔A均值
SI对
照
570nm
孔A均值
570nm
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强， 重复性好。 ➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射 性核素污染问题。
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(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分 泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子 生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或 基因表达水平，以反映T细胞功能。
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(三)
1.原理：
B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
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2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗 体分泌量。 ➢优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检 测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风 类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免 疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检 者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞 的功能。