高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量

高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和

碱性玫瑰精含量

杨 琳1，陈青俊1，梁晶晶1，王 京1，丁献荣2，吴 平3

(1.浙江公正检验中心有限公司，浙江 杭州 310009 ；

2.浙江公正检验中心有限公司浙中分公司，浙江 义乌 322000；

3.杭州娃哈哈集团有限公司，浙江 杭州 310009)摘 要：辣椒制品中的非食用色素工业染料经甲醇-水(7:3，V /V )超声振荡数次提取，高速离心，采用HPLC 系统用20mmol/L 醋酸铵溶液和甲醇梯度洗脱，采用二极管阵列检测器检测，用外标法峰面积定量。结果显示：4种工业染料在0.25～20.0μg/mL 范围内的峰面积与质量浓度的线性关系良好，加标回收率为9

4.4%～101.9%。该方法简便易行，准确可靠。

关键词：辣椒制品；碱性橙；碱性玫瑰精；高效液相色谱；二极管阵列检测器

Determination of Basic Orange and Basic Rhodamine B in Cayenne Pepper by RP-HPLC

YANG Lin 1，CHEN Qing-jun 1，LIANG Jing-jing 1，WANG Jing 1，DING Xian-rong 2，WU Ping 3

(1. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd., Hangzhou 310009, China ；2. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd.,

Zhezhong Filiale, Yiwu 322000, China ；3. Hangzhuo Wahaha Group Co. Ltd., Hangzhou 310009, China) Abstract ：An HPLC method for the determination of inedible basic colorants (basic orange and basic rhodamine) in cayenne pepper was established. Samples were extracted with methanol-water (7:3, V /V ) under ultrasonic assistance and the extract was centrifuged. The supernatant was then analyzed by HPLC-DAD with gradient elution (20 mmol/L ammonium acetate and methanol as mobile phase) and quanti fi ed by external standard method. The concentrations of four industrial dyes (basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine) in the range of 0.25–20.0 μg/mL showed good linearity with peak area. Recovery rates of basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine in a known sample were in the range of 94.4%–101.9%. The HPLC method was simple and accurate.Key words ：cayenne pepper ；basic orange ；basic rhodamine ；HPLC ；diode array detector (DAD)中图分类号：O657.7 文献标识码：A

文章编号：1002-6630(2012)24-0303-04

收稿日期：2011-08-15

碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料，俗名“王金黄”、“块黄”等，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色[1]

；碱性玫瑰精又称罗丹明B 或玫瑰红B ，主要用于纸张和化妆品着色，也用于制色淀和染蚕丝，这两种染料都已经被认定长期食用是可以使人致癌的物质[2]

，都被列为食品禁用物质[3]。但是在辣椒制品中，这两种染料却存在很严重的滥用现象，这就要求检测部门严格监督。我国现行的检测标准很多，有GB/T 23496—2009《食品中禁用物质的检测：碱性橙染料：高效液相色谱法》[4]、DB33/T 703—2008《食品和农产品多种碱性工业染料的测定：液相色谱-串联质谱法》[5]、SN/T 2430—2010《进出口食品中罗丹明B 的检测方法》[6]

、DB34/T 1107—2009《豆制品中碱性橙的测定：高效液相色谱法》[7]

等，这些方法针对的主要是食品，针对辣椒制品在前处理染料的提取中还存在一些问题；食品中罗丹明

B 的检测方法主要采用了荧光检测器[12]，虽然采用荧光法检测灵敏度更低，但是样品从提取到进样，不仅要增加仪器投入，还要花费很多时间。本实验主要通过对样品的前处理研究，确立前处理条件，运用高效液相色谱分离，利用二极管阵列检测器进行检测，建立了一套可以快速准确同时测定辣椒制品中多种工业染料的方法。1 材料与方法1.1

材料与试剂甲醇(色谱纯)

美国Tedia 公司；乙酸铵(分析纯)

上海试四赫维化工有限公司；无水乙醇(分析纯) 杭州

长征化学试剂有限公司；标准品碱性橙2、碱性橙21、

碱性橙22、碱性玫瑰精

美国Sigma 公司；标准储备

液：分别准确称取4种碱性工业染料标准物质0.1000g ，

用甲醇-水(50:50)溶解并定容到100mL ，配成质量浓度为1.00mg/mL 的储备液；测定前将储备液稀释50倍到20mg/L ，此为标准工作液；提取液：甲醇:水＝7:3(V /V )。1.2 仪器与设备

1260高效液相色谱仪(配有二极管阵列检测器) 美国安捷伦公司；Anke TGL-16G 高速台式离心机 上海安亭科学仪器厂；超声波振荡器 上海科导超声仪器有限公司；R-210旋转蒸发器 瑞士Buchi Labortechnik AG 公司。1.3 方法

1.3.1 样品前处理

称取2～5g 均质样品，置于25mL 离心管中，加入10mL 提取液，超声提取20min ，以1000r/min 离心10min 后，上清液转移至鸡心瓶中，再加入10mL 提取液，重复上述操作，合并提取液，过0.45μm 滤膜，待测。如样品的浓度过低，将提取液于45℃真空浓缩后定容至10mL 容量瓶中，样液用高速离心机以12000r/min 离心10min ，取上清液在仪器工作条件下进行测定.。1.3.2 色谱条件

色谱柱：Agilent C 18柱(4.6mm ×150mm ，5μm)；流动相：A ：0.02mol/L 乙酸铵溶液；B ：甲醇，梯度洗脱；流速：1.0mL/min ；参数见表1；柱温：25℃；检测波长：碱性橙2，430nm ；碱性橙21、碱性橙22，480nm ；碱性玫瑰精，550nm 。

表 1

流动相梯度

Gradient composition of mobile phase

Table 1

%

时间/min 0712162528乙酸铵缓冲液

50303005050乙腈

50

70

70

100

50

50

2 结果与分析

2.1

标准图谱和样品图谱

在色谱条件下，碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性玫瑰精的保留时间分别在12.7、10.5、13.5、18.1min ，标样图谱见图1。按照色谱峰的保留时间定性，外标法峰面积定量。样品图谱见图2，由图2可以看出，样品中未检测到碱性橙21、碱性橙22，因此，后续实验中未做样品的关于碱性橙21、碱性橙22含量的讨论。

䯈/min

5

10

15

20

25

m A U

50100150200250300350⺅ ‭2

䯈/min

05

10

152025

m A U

50100150200250300

⺅ ‭21

⺅ ‭22

䯈/min

5

10

152025

m A U

50100150200250300350⺅ ⥿⩄㊒

图 1 三种碱性橙和碱性玫瑰精标准图谱

HPLC chromatograms of four dye standards

Fig.1

䯈/min

5

10

152025

m A U

0100200300400500⺅ ‭2

䯈/min

5

10

152025

m A U

0100200300400500 䯈/min

05

10

15

2025

m A U

0100200300400500

碱性玫瑰精

样品中碱性橙和碱性玫瑰精图谱

图 2

HPLC chromatograms of cayenne pepper extract

Fig.2

2.2

吸收波长的选择

分别取适量的标样用甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解，

配制成质量浓度为10mg/L 的溶液，采用二极管阵列检测器在190～600nm 范围内进行在线光谱扫描，结果碱性橙

2、碱性橙21、碱性橙22、碱性玫瑰精的最大检测波长分别为439、485、485、550nm 。为了可以同时测定其他黄