(完整word版)维生素B1片的含量测定
维生素b1片含量测定的方法验证
维生素B1在体内参与糖代谢，对维持神经系统正常 功能和防止脚气病有重要作用。
维生素B1的测定方法
荧光分光光度法
01
利用维生素B1在特定波长下的荧光特性进行定量分析。
高效液相色谱法
02
通过色谱柱将维生素B1与其他杂质分离，再通过紫外检测器进
行定量。
微生物法
03
利用含有维生素B1的微生物培养基培养微生物，通过测定微生
维生素B1片含量测 定的方法验证
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
确定维生素B1片的含量
目的
通过实验测定，确定维生素B1片 中维生素B1的含量，为生产质量 控制和药品监管提供依据。
方法
采用高效液相色谱法（HPLC）进 行测定，通过色谱柱分离、检测 器检测，计算峰面积并外标法定 量。
采用合适的统计分析方法，如平 均值、标准差、变异系数等，对 数据进行分析和比较。
实验误差分析
误差来源
分析实验过程中可能产生的误差来源，如称量误差、滴定误差、 读数误差等。
误差传递
根据误差来源，计算误差对最终结果的影响，并评估误差传递的 规律和特点。
误差控制
针对误差来源，采取相应的措施，如使用高精度天平、规范操作 流程等，以减小误差对结果的影响。
05
CATALOGUE
结论
实验结论总结
实验结果表明，采用高效液相色谱法测定维生素B1片 的含量是可行的，该方法具有较高的准确度和精密度
，能够满足药品质量控制的测定要求。
输标02入题
在实验过程中，我们发现维生素B1片在波长为 246nm处有最大吸收，因此选择该波长作为检测波长 较为合适。
紫外分光光度法测定维生素B1片含量(精)
药物分析实验课班级：学生(学号：导师：实验室201 年月日紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证一、摘要二、仪器与试药三、原理四、实验部分处方分析：组成处方量(g 比例(%维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（）为421计算，即得。
2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1 250μg/ml的对照溶液。
分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。
标准曲线测定数据1 2 3 4 5浓度7.5 10 12.5 15 17.5吸收度2.2.回收试验（准确度试验）对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。
供试品溶液的制备：精密称取维生素B1精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B1溶液储备液；分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml 量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量项⽬五紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量（2学时）⼀实验⽬的1 掌握紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚含量的实验⽅法和操作技能；2 掌握⽚剂的取样⽅法，并正确计算⽚粉的取样范围；熟悉样品前处理⽅法；3 学会采⽤紫外分光光度计测定药物含量的操作⽅法和注意事项。
⼆实验原理维⽣素B1分⼦中具有共轭双键结构，在紫外光区有特征吸收。
在pH2时，最⼤吸收在246nm处,据此，可⽤紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量。
三材料与仪器盐酸溶液（9→1000）、电⼦天平、紫外分光光度计、研钵、维⽣素B1⽚四实验内容取本品20⽚，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维⽣素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约7ml，振摇15分钟使维⽣素B1溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，⽤⼲燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另⼀100ml量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）。
在 246nm的波长处测定吸光度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数（E1cm1%）为421计算，即得。
本品含维⽣素B1应为标⽰量的90.0%~110.0%。
五注意事项1 ⽚剂取样量的计算：取样量=（1±10%）×主药规定量×平均⽚重/每⽚标⽰量2 结果计算式中 A-------供试品溶液的吸光度；E 1cm 1%-------供试品溶液的百分吸收系数；标⽰量（%）=W×100%标⽰量A ×1%×D ×VE1cm 1%×L×WL--------吸收池的厚度；D--------供试品的稀释倍数；V--------供试品溶液的体积；W--------供试品的取样量；W--------⽚剂的平均⽚重。
2 ⽚剂中不溶性辅料对测定有⼲扰，需滤过消除辅料的⼲扰；3 本法采⽤吸收系数法定量，所⽤的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进⾏校正。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。
2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1250μg/ml的对照溶液。
(完整word版)维生素B1检验记录
维生素B1检验记录记录编号：YL-WB1-20一．性状：本品为（白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,味苦）。
结果：吸收系数：紫外分光光度计型号: （应为406～436) 取本品（约62。
0mg）精密称定w＝_______g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶液并稀释至刻度.摇匀，精密量取（2.0ml）_____，移至100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000)稀释至刻度，摇匀.照分光光度法在246nm波长处测得吸收度A＝______,计算得吸收系数（E1cm1％）为______计算：结果：二．鉴别：1．天平型号：取本品（约5mg)，加氢氧化钠试液 (2.5ml）溶解后，加铁氰化钾试液________（0.5ml）与正丁醇________（5ml）,强力振摇2分钟，放置使分层,上层醇液显____ （强烈的蓝色荧光），加酸成酸性，荧光即（消失），再加碱成碱性,荧光________（又出现）。
结果：2．取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2小时测定。
本品的红外光吸收图谱与对照的图谱(应一致）结果：3．（1)取本品_____（约0。
2g）,置试管中,加水20ml溶解后，加硝酸2ml，加硝酸银试液1ml，即生成______________（白色凝乳状沉淀)，分离沉淀，加量试液,沉淀________（即溶解）加硝酸使成酸性,沉淀___________（复生成）。
(2）取供试品少量,置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热,即发生（氯气),能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
结果：三．检查：天平型号：酸度计型号:1．酸度: (pH值应为2.8—3.3)定位用标准缓冲液:磷酸盐标准缓冲液pH= ；校准用标准缓冲液：邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液pH= 。
取本品 g,加水 ml溶解后，依法测定，1： ,2：，平均为。
结果：2．溶液澄清度与颜色：取本品_____（1.0g），加水10ml溶解后，溶液_____（应澄清无色)；如显色，与对照液(取比色用重铬酸钾液0.1ml,加水适量使成10ml）比较________ (不得更深）。
维生素B1片含量测定的方法验证
目的
考察样品溶液制备方法的可靠程度
要求
同批样品按相同方法制备样品溶液， 至少6份,浓度与信号值均要在线性范 围内
RSD < 2.0%
……仪器分析
重现性试验 (示例)
精密度试验 （示例 ）
加样回收率 试验
目的
考察准确度，即用该方法测定的结 果与真实值或参考值接近的程度
要求
设计高、中、低三个浓度，每个浓 度各分别制备三份供试品溶液进行 测试，计算回收率
RSD < 2.0%
加样回收试验
取含量测定时一半的称 样量，0.5g/2 98~102%
值含 设 加 重 数稳 精 的线
进量 计 样 复 值定 密 浓性
行测 称 回 性 进性 度 度与
计定 样 收 试 行试 试
范
算： 量 试 验 计验 验
围
根、验 据对 实照 验品 测加 定入 数量
:
算 根 据 实 验 测 定
戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物分析》第1c六m版，P258）
实验方法
鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与 正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧 光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。
实验八 维生素B1片含量测 定的方法验证
设计性实验
实验原理
维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲
基盐酸- 4盐-氨H基3C -N5-N嘧啶N基H H C22 )N-+甲基C ]H -25CH-2O(H2-C羟l-基H乙C基l 噻唑鎓 CH3
维生素B1片的含量测定以及方法验证2
原有量mg
加入量mg
测得量mg
回收率mg
取供试品20片，精密称定，称取片粉适量（约相当于 维生素B125mg），一式5份，置100mL容量瓶中，加 盐酸溶液（9 → 1000）适量，振摇15min，再加盐酸 溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量 取滤液5mL，置另一100mL量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，即得约含维生素 B112.5mg/mL的供试品溶液。另取维生素B1对照品适 量，用盐酸溶液（9 → 1000）稀释制成12.5ug/mL的 对照品溶液。照分光光度法在246nm处分别测定供试 品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品 比较法分别进行计算，即得
浓度μg/mL 吸光度
7.5
10.0
12.5
15.0
17.55.91ug/mL的溶液，分 别在-20℃、-4℃、室温放置0min、15min、 30min、45min、60min、75min，然后在 246nm波长测的吸光度。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于维生素B115mg），置100mL棕色容量瓶中， 共称9份。其中3份分别加入浓度为70.29ug/mL， 对照液50mL，3份分别加入浓度为101.53ug/mL， 对照液50mL，加盐酸溶液（9到1000）至刻度， 摇匀，精密量取上述溶液5.0mL置100mL量瓶中， 加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，在 246nm的波长处测吸光度，计算含量，并求回收 率。
维生素B1
精密称取相当于维生素B1片粉25mg，置于100mL 量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）约70mL，摇 匀15min使维生素B1溶解，加同种溶剂稀释至刻度， 摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取5mL，置于一 100mL量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，用 紫外分光光度法，在246nm波长测定吸收度，计 算含量。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g)比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。
2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀1250μg/ml的对照溶液。
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证一、实验目的1.验证维生素B1含量测定的方法的准确性和可靠性。
2.了解高效液相色谱法对于短波紫外检测器的适应性。
二、实验原理1.高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效分离、快速分析的方法。
它与用计算机控制的仪器联用，可以进行定量、半定量和定性分析。
本实验中，采用HPLC法测定维生素B1的含量。
2.短波紫外检测器短波紫外检测器是一种用于分析有机物的光谱仪器。
它在紫外光谱的200~400nm范围内进行检测，可以检测吸收较大的分子。
在本实验中，采用短波紫外检测器测定维生素B1的含量。
三、实验步骤1.样品的准备取维生素B1片0.2g，加入250mL量瓶中，加入10mL0.1mol/L盐酸溶液，加水至刻度线，摇匀，称取100mL筛滤取滤液5mL，加入5mL4%磷酸溶液中，用向后溯流液相色谱（HPLC）法测定。
2.试剂的准备（1）0.1mol/L盐酸溶液取盐酸100mL，加水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液调节pH，使溶液处于酸性状态。
（2）4%磷酸溶液取磷酸15mL，加水至250mL，摇匀。
（3）乙腈甲醇（2:1）将乙腈甲醇配制成2:1比例。
3.测定方法（1）样品注射量为20μL。
（2）柱温为35℃。
（4）短波紫外检测器的检测波长为266nm。
4.数据处理及结果分析四、实验结果样品编号维生素B1标准品质量（mg）峰面积（mv∙s）维生素B1含量（mg）1 0.006 8898 0.0062 0.008 11956 0.0083 0.010 15576 0.0104 0.012 18960 0.0125 0.014 22004 0.0146 0.016 25597 0.0167 0.018 28887 0.0188 0.020 32295 0.0202.维生素B1含量的平均值：五、实验分析通过本实验，我们验证了测定维生素B1含量的方法的准确性和可靠性。
维生素B1片的含量测定的方法验证
维生素B1片的含量测定的方法验证专业：药物制剂班级：姓名：学号：紫外分光光度法测定维生素B1片的含量摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。
实验_维生素b1片含量测定的方法验证
• 5，掌握考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或
参考值接近的程度
实验原理
• 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2 H2 C N+
•RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
稳定性试验
•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min
时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分 别测定样品的峰面积。
含量测定
精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml
摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇 匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液1.0ml置于 25ml量瓶中，共两份盐酸溶液（9→1000）定容至 刻度，摇匀 → 测用吸光系数计算浓度。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
加样回收率试验
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
撰写方法学验证论文
•线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 •精密度试验
• 稳定性试验
根据实验测定数值进行计算
维生素B1的片剂含量(差示)
用pH7.0缓冲液稀释至25ml 用pH2.0盐酸液稀释至25ml
分别置参比池（调零用） 分别置样品池中
在247nm处分别测定差示吸收值（ΔA）。 带入标准曲线计算标示量%。
四、 计算
A
1
0.8
b
0.6
a
0.4
0.2
0 200
-0.2
c 250
300
-0.4
nm
a: 缓冲液 (pH 7.0) b. 盐酸液 (pH 2.0) c. 差示光谱
350
三、操作步骤
1．标准曲线绘制
维生素B1对照品25mg 置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度
贮备液
精密量取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml贮备液各二份,置25ml量瓶中。
用pH7.0缓冲液稀释至刻度 用pH2.0盐酸液稀释至刻度 分别置参比池（调零用） 分别置样品池中
在247nm处分别测定差示吸收值（ΔA）。以浓度C为横坐标， 以差示吸收值ΔA为纵坐标绘制标准曲线。
2．样品测定
维生素B1片20片 精密称定，研细
精密称取适量粉末，（约相当于维生素B1 30mg）
置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度 过滤，弃去初滤液
维生素B1片剂的含量测定 （差示分光光度法）
注意： VB1 标示量： 10 mg/片 平均片重： ?/ 20 = ?分光光度法消除可能存在干扰的 原理。 2. 熟悉ΔA法的基本测定方法。
二、实验原理
在两种不同的pH介质中若经适当的化学 反应后，供试品中待测组分发生了特征性的 光谱变化，而赋形剂或其它共存物则不受影 响，光谱行为不发生变化，从而消除了它们 的干扰。在测定时，取两份相等的供试溶液， 经不同的处理（如：调节不同的pH值或加入 不同的反应试剂）后，一份置样品池中，另 一份置参比池中，于适当的波长处，测其吸 收度的E差11c%m值值计（算ΔA出值组）分，的根含据量标。准曲线或
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
处方分析：
组成
维生 素 B1
淀粉 糊精 硬脂 酸镁 生产
处方 量(g)
10 20 30 1.0 1000
比例 (%)
16.39 32.78 49.18 1.639
片
根据处方量分析，维生素 B1 含 16.39%，辅料含 83.61%。平均片重约 61mg，取相当于 25mg 维生素 B1 的片粉约 0.15g。
2.2. 回收试验（准确度试验）
对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同 2.1 项下。 供试品溶液的制备：精密称取维生素 B1 精制原料约 0.25g，置 50ml 量瓶中， 加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成 5.0mg/m 维生素 B1 溶液储备液； 分别精密量取该溶液 4、5、6ml 置已加入比例量辅料（0.15g，1/100 天平）的 100ml 量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约 70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9 →1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液 5ml，置另一 100ml 量瓶中，摇匀，得 高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在 246nm 的波长处测定吸收度，
编加 对
吸测
回收
号 入 量 照 液 浓 光 得 对 照 率（%）
（mg） 度
度A 液浓度
（ug/ml）
（ug/ml）
11
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
21
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
31
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
41
12.
0 11.
实验_维生素B1片含量测定的方法验证
30.0
60.0
…
…
…
…
…
…
60.0
0.3%
…
…
…
<2.0%
…
…
…
…
…
…
稳定性试验
•目的：
•考察样品溶液制备后多少时间内稳定
•要求
•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min
时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h 分别测定样品的峰面积。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
•的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
加样回收试验
98~102%
序号
称样量 （g）
待测组分 含量
（mg）
对照品加 入量
（mg）
测得量 （mg）
回收率 （%）
平均加样 回收率 （%）
RSD （%）
1
0.2511
2
0.2500
15.0
12.0
27.2
100.1
3
0.2512
4
0.2509
5
0.2500
15.0
15.0
29.8
98.6
6
0.2500
7
0.2504
8
0.2500
15.0
18.0
33.1
100.0
9
0.2510
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
撰写方法学验证论文
实验九 差示分光光度法测定维生素B1片的含量
实验九 差示分光光度法测定维生素B 1片的含量一、实验目的1．掌握差示分光光度法的基本原理。
2．熟悉标准曲线定量的操作方法.二、实验原理(一）差示分光光度法(简称△A 法)，它保留了通常的分光光度法简便、快捷、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰.方法：取两份相等的供试液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸或碱,改变pH 或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将它们稀释至同样浓度后，分置于样品池和参比池中,于适当波长处，测定吸光度的差值（△A ）。
应用条件：①供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在,它们的吸收光谱有显著的差异；②干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。
定量依据:设x 、y 分别代表在两种不同的化学环境中供试品的存在形式，它们在测定波长处的吸光度以A x 、A y 表示，背景和干扰的吸收度以A Z 表示，A Z 不受测定时化学环境改变的影响。
根据吸光度加和性原则:即在供试液的一定浓度范围内△A 值与其浓度C 呈线性关系,并消除了A Z 的干扰，可用标准曲线法或对照法定量.（二)维生素B 1片的测定维生素B 1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收，其紫外吸收随溶液pH 的变化而变化。
在pH7的磷酸盐缓冲液中具有两个吸收峰，在232~233nm 处，%11cm E =345;在266nm处，%11cm E =255。
在pH2时，最大吸收在246nm 处，%11cm E =425。
可用于维生素B 1片的差示分光光度法的测定.三、实验方法（一）测定波长的选择精密称取维生素B 1100mg ，用水溶解并稀释成100ml ，精密量取2ml 二份，分别用缓冲液（pH 7.0）和盐酸液(pH 2。
0)稀释成100ml ，以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱。
再将前者放于参比池，后者放于样品池,绘制差示吸收光谱(见图11)。
差示光谱图表明在247nm处有最大差示吸收值(△A)，确定247nm为测定波长。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
维生素1B 片的含量测定
一．实验目的
1.掌握标准曲线法测定药物含量的方法；
2.熟悉紫外—可见光光度计的原理和操作。
二、实验原理
维生素B1结构中的嘧啶环为一芳香杂环，具有紫外吸收。
用维生素B1的标准品的稀释浓度梯度溶液测吸光度，得到标准曲线，再根据所测样品的吸光度求浓度， 求出标示量%=
S
*m W
*n *V *Cx *100%
三、实验药品及仪器
实验药品：维生素1B 片10片，盐酸溶液，维生素B1标准品
实验仪器：紫外—可见光光度计，50ml 容量瓶*10，玻璃棒，漏斗，烧杯
四、实验内容及步骤
1. 用分析天平精密称取维生素B1标准品10mg ，于小烧杯中加适量稀盐酸溶解，振摇十分钟至完全溶解，转移至50ml 容量瓶用盐酸定容；
2. 分别精密量取溶液1ml ，1.5ml, 2ml,2.5ml, 3ml 于50ml 容量瓶，加盐酸稀释至刻度，用紫外—可见光光度计测得其对应吸光度，得维生素B1标准曲线； 3取维生素B1药片10片，于分析天平称重，得平均片重⎺W=
10
m ； 4.研细（用研钵），用分析天平精密称取约0.13g （相当于维生素1B 10mg ），于小烧杯中加适量稀盐酸溶解，振摇十分钟至完全溶解，转移至50ml 容量瓶用盐酸定容，摇匀。
5. 用干燥滤纸滤过，精密量取滤液2mL ，置另一50mL 量瓶中，再加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。
再做平行溶液三份；
6.分别测三组样品的吸光度，再依据标准曲线求得浓度，再依据公式求得标示量。
五、注意事项
1. 仪器的准备
（1）开启电源，使仪器预热20分钟；
（2）开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上，以免影响仪器的自检； 2. 仪器的操作步骤
（1）设置波长（246nm ）； （2）测定；
（3）数据记录与处理。
3. 将比色皿洗净装盒，关机；
4. 维生素1B 的紫外吸收峰随溶液pH 的变化而不同，因此要严格控制溶液的pH 值。
5. 本品含维生素1B （HCl OS ClN H C ⋅41712）应为标示量的90.0%~110.0%。
六、数据记录与含量计算
标准品取样量：m 标=0.0091g 浓度{μg/ml} Abs 标1 3.6400 0.147 标2 5.4600 0.228 标3 7.2800 0.316 标4 9.1000 0.382 标5
10.9200
0.461
标准曲线：y=0.04297*C-0.006 R=0.9991
样品：平均片重：⎺W=m 总/10=0.6577/10=0.06577g
取样量：m=0.1234g
七、分析讨论
标准曲线的R 为0.9991达到三个九，说明曲线良好；
查资料得：药片含维生素B1（HCl OS ClN H C ⋅41712）应为标示量的90.0%~110.0%。
由标准曲线求得的标示量在药典范围内，说明该药品含维生素B1符合规定，测量方法较为正确；但相对平均偏差较大，说明平行实验中三组存在误差；
可能原因：比色皿未冲洗干净，也有可能是配置过程中读数存在误差，操作误差 解决方法：多次检查，润洗少量多次，读数要平行，操作谨慎，减少误差
记录项目
维生素B1质量m/g 0.1234g 吸光度 0.295 0.298 0.325 浓度{μg/ml}
7.0050 7.0750 7.7040 维生素B1的标示量/% 93.34% 94.27%
102.65%
维生素B1的标示量的平均值/% 96.75% 相对平均偏差/% 5.2%。