试管婴儿胚胎实验室操作流程PPT
第4章-胚胎培养PPT演示课件
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复习思考题：
1、植物胚胎培养分为哪些类型？各有何种特点 和要求？
2、胚胎培养有何意义？
3.花器官培养通常指花的哪些部分培养?常用的 基本培养基是什么?
4.在进行幼胚培养时，由于幼胚过小而分离困 难，可采取什么途径解决?
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温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生
长
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原胚(幼胚)的培养的条件
➢ 无机氮：
包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；
➢ 渗透压：
蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一 样，初期高（WHY）。因为自然条件下，原 胚被一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ高渗液体包围着。
➢ 复杂的天然提取物：
椰乳 CM有促进幼胚生长和分化的作用
4.培养：
加入生长素和CTK，诱 导形成愈伤组织或胚状 体，再分化成植株。
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二、种子培养
优点： 1.植株分化容易，无菌操作方便，
打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
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种子结构
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培养方法：
1.种子消毒：
◇种皮厚或不饱满的用0.1%升汞浸10-20min， 或用10%次氯酸钠浸15-20min。
（2N）
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一.培养类型
1、离体胚培养时期 A.异养期 B.自养期
A.异养期，完全依赖于周围细胞中的代谢，而 且依赖于周围胚乳消耗的养料。B.自养期，胚 能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代 谢作用合成其生长所必需的物质。
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2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养
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2、离体胚培养类型
完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前， 必须借助于原位胚的萌发，使其活化。
试管婴儿-PPT(精)PPT
什么是试管婴儿？试管婴儿真的是在试管中长大的 吗？
• 试管婴儿是体外受精—胚胎移 植技术(IVF-ET)的一种通俗说法 。试管婴儿并不是真的在试管 里长大的婴儿。试管婴儿是从 女方的卵巢内取出卵母细胞， 在实验室里让它们与男方的精 子自然结合，形成胚胎，然后 将胚胎转移到妈妈的子宫内， 使之着床、妊娠的一种人类辅 助生殖技术。
试管婴儿〔Test tube baby〕 〔Test tube baby〕
2021/5/16
1
试管婴儿出现的原因？
• WHO调查显示不孕症患病 率为15%左右，1995年调 查显示全世界有60000万 到80000万不孕患者
2021/5/16
“人生最重要的事情是有一个孩子， 世上有什么比孩子更2 特别的呢？”
•试管婴儿的先天性缺陷比普 通婴儿高
•试管婴儿引发的伦理道德危 机
•高科技并不能解决所有的生 育问题
•试管婴儿的成功率低
2021/5/16
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谢谢！
2021/5/16
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杨培丹，2021021019 董陈娣，2021021028 徐林新，2021021113
2021/5/16
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2021/5/16
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第一代试管婴儿是指将患者的卵子和精子在培养皿内混合让卵子受精， 然后将受精卵在体外培养所产生的胚胎移植到患者子宫内的一种 辅助生殖技术。
•
2021/5/16
致解第 的决一 不的代 孕是试
因管 女婴 性儿 因技 素术 引，
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1992年由比利时Palermo医师及刘家恩博士等首次在人体成功应用卵浆内单精子 注射〔ICSI〕，使试管婴儿技术的成功率得到很大的提高
2021/5/16
试管婴儿PPT资料(正式版)
母体分娩
我国唯一一例第四代试管婴儿
2004年2月24日上午9:30分，伴着一声清脆的啼哭，一名健 康男婴，在湖北省武汉大学人民医院顺利降生。国家有关部门发 文，出于对社会伦理的尊重，禁止实施第四代试管婴儿。由于此 例受孕于通报发布之前，所以这名婴儿的出生并不违法违章。因 而，这名婴儿成为全国仅有的一例、可能也是最后一例第四代试 管婴儿。
女获得自己血 当天晚上9时，一名血友病携带者在中山一院产下一健康女婴。
加精子混合 有人甚至认为“试管婴儿”的母亲日后可能存在卵巢肿瘤隐患。
通过ＩＶＦ或单一精子卵质内显微注射技术改善生育，很可能会导致下一代也没有生育能力”。
亲的后代。 然而供卵者卵细胞浆中线粒体DNA被带入受卵细胞浆者基因的可能也是不可忽视的一个问题,在没有确切了解这项技术对人类遗传的确
《英国医学杂志》上发表报告称，他们对此前公布的25项报告研究后发现，与自然受孕婴儿相比，通过试管受精等生育手段受孕的单 胎婴儿早产几率是前者的两倍； 即使受孕 , 也往往经受不住生命早期的剧烈裂变而流产 试管婴儿部分染色体出现问题的几率以及发生各类并发症、先天畸形及本身日后不育不孕等危险比正常受孕出生的婴儿要大得多。 因而，这名婴儿成为全国仅有的一例、可能也是最后一例第四代试管婴儿。 试管婴儿技术解决的问题 我国首例第三代试管婴儿 早期胚膜上利用镭射或微观针钻一个小孔以利于将试管培育的早期胚胎顺利地植入妇女的子宫中才能导致怀孕。 而人类辅助生殖技术在帮助不育症的同时也可能使原属将被自然界淘汰的变异基因可以继续繁衍下去。 试管婴儿部分染色体出现问题的几率以及发生各类并发症、先天畸形及本身日后不育不孕等危险比正常受孕出生的婴儿要大得多。 女性不孕基础上，解决因少精、弱精甚至无精症等男性因素引致的不育问题，且提高了成功率； 其可以使就可以使高龄不孕妇女获得自己血亲的后代。 澳大利亚就曾对1岁以内的这种“试管婴儿”做过调查，发现近20%的孩子，智力和综合运动评分相对较低。 中国不孕不育现状调研报告 接受“试管婴儿”的妇女 , 均要使用促排卵药 如克罗米酚等 , 它改变了妇女每个月只排一个卵子的状态 , 促使其排出数十个卵子。 通过ＩＶＦ或单一精子卵质内显微注射技术改善生育，很可能会导致下一代也没有生育能力”。 有人甚至认为“试管婴儿”的母亲日后可能存在卵巢肿瘤隐患。 然而供卵者卵细胞浆中线粒体DNA被带入受卵细胞浆者基因的可能也是不可忽视的一个问题,在没有确切了解这项技术对人类遗传的确 切影响之前必需慎重使用。 其可以使就可以使高龄不孕妇女获得自己血亲的后代。
【初中生物】试管婴儿PPT课件
世界首例试管婴儿现状
• • • • • • • • • 24日，路易丝· 布朗怀抱儿子 与母亲和帮助 父母做试管婴 儿手术的罗伯 特· 爱德华医生 （左）合影， 感激他帮助父 母赋予自己生命。
人们对试管受精技术的误区
• 许多妇女认为，有了试管受精技术，她们 可以无限期推迟生育，当准备好的时候付 钱就可以。 • 试管受精的平均怀孕率仅为25.1%，生育率 18.5%；也不知道这些过程很痛苦并常常有 危险 • 试管受精技术只适用于1%～2%的不孕妇女。
试管婴儿技术的受益者: 输卵管有疾患的母亲和精子有问题 的丈夫 试管婴儿技术的伦理尴尬:
赋予基因的母亲和代理受孕的母亲
第三代试管婴儿技术能够实现优生 的原理：
• 可对胚胎进行诊断和选择,选择最符合优生 条件的那一个胚胎植入母体,从而可避免某 些遗传病的发生 • 两对夫妇的不同选择与结局 • 现代技术与封建观念的碰撞
儿 1983．6．8 澳洲 二女一男 首例三胞胎 1984．1．16 澳洲 四男 首例四胞胎
1982．1．20 希腊 女 希腊第一个
1982．2．24 法国 女 法国第一个 •
1985．4．16 中国台湾 男 台湾首例试管婴儿
1988．3．10 中国 女 中国内地第一个试管婴 儿
试管婴儿的数字
• 监督辅助生殖技术国际委员会2006年6月21 日发表报告说，从1978年世界首例试管婴 儿诞生起，全世界共有300多万名婴儿通过 试管受精方式出生。委员会专家雅克.穆宗 说，全世界每年实施大约100万例试管受精 手术，年出生婴儿约为20万。
• 黑龙江省牡丹 江市妇产儿童 医院为一例三 胞胎试管婴儿 孕妇实施剖腹 产手术，一男 二女三个试管 婴儿顺利诞生
试管婴儿技术的做法
胚胎移植课件
知情同意与隐私保护
医生必须确保患者充分了解胚胎移植 的风险、成功率以及可能的后果，同 时保护患者的隐私和个人信息。
04
胚胎移植的未来展望
新技术与研究方向
01
02
03
基因编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因 编辑技术，对胚胎进行遗 传疾病修正，提高后代健 康水平。
胚胎发育机制研究
深入探究胚胎发育过程中 的分子机制，为胚胎移植 技术的优化提供理论支持 。
感谢聆听
1980年代
胚胎移植技术逐渐成熟，广泛应用于不孕不育治疗 。
1990年代至今
胚胎移植技术不断创新，提高了成功率，降低并发 症。
适用情况与限制
适用情况
不孕不育、遗传性疾病、辅助生殖等 。
限制
胚胎移植并非万能的，存在一定的成 功率、并发症和伦理问题。
02
胚胎移植技术流程
准备阶段
患者评估
对接受胚胎移植的女性进行全面评估，包括身体状况、生育能力 、子宫环境等。
感染和出血
胚胎移植过程中可能发生感染 和出血等并发症，需要严格的 无菌操作和细致的护理。
伦理与法律问题
胚胎的来源与使用
性别选择与遗传疾病
胚胎的来源和使用必须符合伦理和法 律规定，禁止进行非法的胚胎买卖和 商业化操作。
பைடு நூலகம்
胚胎移植过程中的性别选择和遗传疾 病筛查必须遵循伦理原则，不得违反 法律规定和社会道德。
03
胚胎移植的成功率与风险
成功率的影响因素
胚胎质量
胚胎的质量是影响成功率的关 键因素，优质的胚胎可以提高 着床率和妊娠成功率。
子宫内膜容受性
子宫内膜的容受性对于胚胎着 床和发育至关重要，如果子宫 内膜状态不佳或存在病变，会 影响成功率。
胚胎培养的操作步骤
胚胎培养的操作步骤一、获取胚胎在胚胎培养过程中，首先需要获取胚胎。
这一步骤通常在试管婴儿程序中进行，通过超排卵和人工受精等方法获取胚胎。
二、胚胎质量检查在获取胚胎后，需要对胚胎进行质量检查。
通过显微镜观察胚胎的形态和发育情况，评估胚胎的等级和发育潜力。
这一步骤有助于选择优质的胚胎进行培养。
三、胚胎培养液准备为了提供胚胎生长所需的营养物质，需要准备适当的胚胎培养液。
根据胚胎的发育阶段和实验需求，可以选择不同的培养液配方。
确保培养液的清洁度和适宜的温度，以维持胚胎的正常生长。
四、胚胎移植将经过质量检查的胚胎转移到准备好的培养液中，进行进一步的体外培养。
在这一步骤中，要确保胚胎在适宜的环境中顺利生长。
五、培养环境控制胚胎培养的环境对胚胎的生长至关重要。
控制培养室的温度、湿度、气体浓度等参数，确保环境条件适宜胚胎发育。
定期监测和记录环境数据，确保胚胎生长环境的稳定性。
六、观察胚胎发育在胚胎培养过程中，需要定期观察胚胎的发育情况。
通过显微镜观察胚胎形态变化，记录胚胎生长数据，评估胚胎的健康状况。
及时发现和处理异常情况，确保胚胎正常生长。
七、胚胎移植回体当胚胎发育到一定阶段时，需要将胚胎移植回母体或代孕母亲体内。
这一步骤需要根据程序指南和伦理要求进行。
确保移植过程中的安全性和有效性，关注移植后的护理和监测工作。
八、后续护理在胚胎移植后，对母体或代孕母亲进行适当的护理和监测。
这包括提供必要的医疗支持和心理辅导，以及定期进行产前检查。
密切关注母体和胎儿的健康状况，确保妊娠过程的顺利发展。
构建试管婴儿和胚胎移植的基本操作流程。
构建试管婴儿和胚胎移植的基本操作流程。
1. 首先呢，就像挑选超级种子一样，得精心挑选精子和卵子。
2. 那精子呀，就像是一群勇往直前的小勇士，朝着卵子冲过去。
3. 卵子则像一个神秘的城堡，等待着精子来攻城。
4. 然后在实验室这个神奇的魔法屋里，把精子和卵子放在一起。
5. 这就好比是一场盛大的相亲大会，看谁能最先配对成功。
6. 一旦受精成功，那受精卵就像一颗刚刚萌芽的魔法种子。
7. 接着要像照顾超级娇贵的小宝贝一样，培育这个受精卵。
8. 它在培养皿里的成长过程，就像是一场微观世界里的奇妙旅程。
9. 这个小胚胎呀，像个袖珍的小外星人，一天一个样儿地发育着。
10. 当胚胎发育到合适的时候，就准备像发射小火箭一样把它移植。
11. 子宫就像一块肥沃的土地，等待着胚胎这个小幼苗来扎根。
12. 医生拿着移植的工具，就像拿着神奇的魔杖。
13. 小心翼翼地把胚胎移植到子宫里，就好像把稀世珍宝放进保险箱。
14. 移植后的胚胎，就像一个初来乍到的小房客，在子宫里慢慢适应。
15. 身体呢，就像一个大宿舍，要为这个小房客提供舒适的环境。
16. 然后就像焦急等待开奖一样，等着看胚胎能不能成功着床。
17. 着床成功的胚胎，就像在土地里牢牢扎根的大树苗。
18. 最后就像期待花开结果一样，盼着小生命慢慢长大。
IVF实验室的基本操作(共37张PPT)
～ 20μl
移植液
气
气
移植液和胚胎
移植液
胚胎冷冻
❖ 意义：提高累计妊娠率，避免多胎，减少卵巢过度刺激风 险
❖ 温度的急剧变化形成冰晶
机械性损伤 溶质性损伤 渗透压损伤 核心：避免冰晶形成
❖ 冷冻方法：慢冻速融法 玻璃化冷冻法
❖ 冷冻保护剂 渗透性保护剂：EG PRON 甘油 非渗透性保护剂：蔗糖 大分子物质
雌雄原核融合
孤雌来源 ICSI多见
异常受精－多PN
❖发生率：IVF 5-8%
ICSI 1% 培养液的准备 取卵前一日下午进行
染色体二倍体率 5％ 卵母细胞浆内单精子显微注射 ICSI 1%
❖ 发生机制： 逃避了自然选择过程
IVF实验室的基本操作 碎片30－50％
2精子进入 垂直传递遗传缺陷
复苏程序： 室温 40s→ 30℃水浴 1min 未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）
卵母细胞的获取
❖ 注射hCG后36-38小时取卵 ❖ 阴道超声探头引导下经阴道
穿刺抽吸卵泡 ❖ 核对姓名 ❖ 解剖显微镜下辨认卵冠丘复
合物OCCC ❖ 37℃, 5－6%CO2 培养 ❖ 操作迅速，避光
精液处理
❖正常精液：同IUI
❖极度少精：增加离心力 ❖死精症：低渗肿胀实验 ❖附睾穿刺精子： ❖睾丸穿刺或活检精子：
胚胎培养
胚胎质量评价
❖ 胚胎评价标准 细胞数 碎片:无碎片 碎片<10% 碎片10－30％ 碎片30－50％ 碎片>50% 卵裂球均匀程度
囊胚的评分体系
4AA
三位评分法
囊胚腔的大小
1:不到整个胚胎的一半 2 :超过了胚胎体积的一半
胚胎实验室操作手册
胚胎实验室操作手册
一、实验室平安与质量控制
1. 实验室平安与感染控制
实验室必须有完善的平安制度和防患措施，以应对可能发生的火、电意外等紧急情况。
同时，应保存各种设备的使用说明文件，以便在需要时参考。
2. 仪器设备的维修保养
仪器设备的维修保养应严格按照规定的程序进展。
有关人员在进展保养、调校和维修工作以前，应首先熟悉仪器的性能、构造、使用方法和保养、调校方法，以及维修程序。
仪器设备一旦出现异常或发生故障，使用人员应立即关机，并立即报告给相关负责人。
二、胚胎实验室每日工作流程
1. 准备工作
在开始工作前，检查实验室环境是否干净、整洁，并确保仪器设备正常运行。
同时，准备好所需的所有工具和试剂。
2. 样本处理
按照规定的程序，处理和操作胚胎样本。
确保样本的平安性和有效性。
3. 实验操作
根据实验需求，进行必要的实验操作。
操作过程中要严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
4. 数据记录与分析
详细记录实验数据，并进展分析。
确保数据的准确性和完整性。
5. 清理与维护
实验完毕后，清理实验区域，并按照规定程序对仪器设备进展保养和维护。
三、其他注意事项
1. 遵守实验室规章制度，保持实验室的整洁和卫生。
2. 注意个人卫生，防止交叉感染。
3. 在实验过程中，要随时关注平安问题，防止意外事故的发生。
胚胎实验室操作手册
附件6-01胚胎实验室操作手册第一节胚胎实验室每日工作流程第二节胚胎实验室安全与质量控制一、实验室安全与感染控制实验室必须有完善的安全制度和防患措施，必须有关于火、电意外引起紧急情况时的应急方案，实验室人员必须了解灾情中的救援措施。
为避免停电影响设备正常运转,应备有双重供电系统，或不间断电源(UPS)，以确保二氧化碳培养箱和显微镜等关键设备在意外停电时满足正常工作。
1.所有体液样本（精液、血液、卵泡液等）必须视同潜在污染源,所有的供体组织和体液应有适当的传染病监测。
2.实验室工作人员应清楚乙肝疫苗的必要性并接受乙肝疫苗接种。
3.特别小心不要被那些受体液污染的仪器或设备意外损伤。
4.避免将体液溅到眼中.5.当接触体液或盛放体液的容器时，应带一次性无粉橡胶或塑料手套。
离开实验室时，将手套脱下丢掉，决不可重复使用。
6.离开实验室时,脱掉实验室衣服，不能穿着出入公开场所或餐厅.7.被体液沾染时，必须马上用消毒液或肥皂清洗.8.接触配子和胚胎的耗材必须使用一次性用品。
9.因体液溢出污染实验室设备时，应在操作完成后用75%酒精消毒。
10.在实验室体液操作中必须使用机械抽吸装置，禁止用口吸.11.所有操作步骤和体液处理应小心，尽量减少浮滴和烟雾生成。
例如离心时必须用带盖的试管。
12.实验室中严禁吃东西、吸烟等。
13.所有丢弃的体液和用后的一次性物品必须按污染物品处理。
二、实验室质量控制(一)培养箱的质量控制专人管理,每日确认以下各项内容并予以记录：1.CO2的控制：6％±0.2％；2.温度的控制：37℃±0。
2℃;3.湿度：大于80％RH，水盘内水的深度始终保持在大约1cm 以上。
培养箱内的水盘使用超纯水,根据不同培养箱要求定期更换,换水当天培养箱不放卵子或胚胎；4.培养箱显示器温度与培养箱内温度计的温度应一致。
不一致时应及时调整校正.5.消毒清洁:每隔3个月消毒培养箱。
消毒时拆卸培养箱内所有钢架，以75％酒精和超纯水分别擦拭消毒,再送高压消毒。
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Day 0：取卵当天 取卵：
在这个过程中所用的冲洗液为预热的G-MOPS 培养液（使用前确保温度在37℃） • 此时卵泡液有的是蛋白，所以用的是不加蛋白的G-MOPS • 卵泡抽取物应该收集到无菌无毒性的一次性组织培养用试管中，并立即由实
B.4孔或者5孔板
a）HYSAETM溶液
b-f）G-MopsTMPlus
3.使用大口径的吸管，将3~5枚卵母细胞放进稀释的HYASE中。轻轻吸打，不要超过30s 4.将部分剥离的卵母细胞转移至第一冲洗液中，轻轻吹打每一个卵母细胞以除去放射冠，其 余液滴中重复此项操作 5.观察卵母细胞中是否有极体（有极体-M2；无极体-M1） • 成熟的M2，如果准备立即注射，置于ICSI液中 • 如果还需要孵育一段时间的，可以将卵母细胞置于已添加蛋白的G-1中直到开始注射
IVM
内容
未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）
定义：“获取窦卵泡中的未成熟的颗粒细胞-卵母细胞复合体（COC），进行体外成熟”
（左）控制性超促排卵后PCOM/PCOS患者卵巢； （右）未行促排卵治疗的PCOM/PCOS患者
IVM技术主要针对卵子成 熟障碍，即所有卵子均不 能成熟，或者卵子成熟率 低（<20%）的患者，如 多囊卵巢综合征的患者、 促性腺激素刺激高反应患 者、卵巢低反应患者、需 要生育力保存的女性肿瘤 患者
第三天： 评估胚胎卵裂
移植或冷冻保存。
继续培养
第四天： 转移胚胎至新鲜的G-2TMPLUS液滴中 37℃，6% CO2过夜培养。
第五天早晨： 评估胚胎卵裂以确定移植或冷 冻保存
ICSI
ICSI操作是把精子注射到卵母细胞中的过程。ICSI技术可以帮助因男方具有严重不育症而无 法生育的夫妇实现成功妊娠
传统IVF流程
Day -1: 培养液准备，传统IVF 准备用于取卵的培养液
• 每例患者清洗准备2个培养皿和试管 • 将添加蛋白的G-IVF™置于培养皿中，在CO2培养箱内过夜平衡 • 加热8–10 mL添加蛋白的G-MOPS™用于卵母细胞清洗 （ 37℃且无CO2的培养箱内过夜平衡） • 在牢固密封好的试管内加热用于冲洗卵泡的G-MOPS™，如果需要，可以添加
制备ICSI皿
1.37℃预热已添加蛋白的G-MOPS以及OVOIL约15分钟 2.取出ICSI液并且平衡到20±5℃ 3.快速制备ICSI皿，在培养皿中央位置添加一滴1-10μL的ICSI液滴， 以及数个6-10μL（已加量（1-2 μL ）准备好的精子悬液。在恒温台上平衡数分钟使得精子 迁移到液滴中悬液的外围 2.将剥离的卵母细胞置于已添加蛋白的G-MOPS液滴中，每液滴一个卵母细胞 3.用显微注射针将精子的尾部压断以制动精子。实际操作过程中不要损伤精子颈部区域，其 含有中心体。中心体在细胞分裂染色体迁移时非常重要。 4.移动培养皿，使卵母细胞液滴处于视野内。使用固定针固定卵母细胞，以供注射（卵母细 胞极体处于7点或1点钟方向）为减少对减数分裂中形成的纺锤体的损伤风险，须在4点钟位 置注入精子。 5.当完成所有卵母细胞的注射后，在数滴已添加蛋白的G-1中冲洗，然后置于准备好的G-1 培养体系中过夜培养 6.注射后的第二天，根据两个PN和两个极体的出现与否来判断卵母细胞的受精情况。退化的 应终止培养。评估完成后，受精卵应用平衡的已添加蛋白的G-1冲洗，再转到已添加蛋白的
ICSI操作前剥卵（去除卵母细胞附近的颗粒细胞）
• HYASE（透明质酸酶）可以促进卵丘颗粒细胞团和放射冠 • 在HYASE中操作处理时间不可超过30秒，否则可能会损伤卵母细胞
步奏： 1. HYSAETM：使用前用G-MopsTM Plus稀释（1:10） 2.制皿（两种方式，见下图）
A. 盖油液滴
2.显微镜下观察记录原核、极体以及可能出现的胚泡（GV）的数目，只有正常受精 的卵母细胞形成的胚胎（2PN）可以考虑用于胚胎培养和移植
3.评估完成后，受精的卵母细胞应在数滴平衡过的已添加的G-1充分冲洗，然后在 平衡过已经添加蛋白的G-1进行培养，最好封盖培养油。
第二天： 评估胚胎卵裂，换液 备G-2TMPLUS
阶段三：受精
当获得成熟卵母细胞之后，随即将精子和卵母细胞在实验室为其提供的 模拟女性生殖道的环境中进行共培养。
阶段四：胞浆内单精子注射
在ICSI程序中，通过使用显微操作设备将单一精子分离出来，随后注射进入卵 母细胞的胞质内部。
阶段五：胚胎移植
胚胎移植是一个无痛手术过程，因此，可以不进行麻醉。 通常会使用导管将3个以下的胚胎同时经阴道和子宫颈移植进入子宫腔。
方法2： 在含有卵母细胞的平衡过的培 养皿中添加平衡过的精子悬浮 液。此时加入约50ul处理后精 子悬液（约5000-10000条精子）
Day 1：受精评估（加入精子后约15-20个小时） 1.将卵母细胞转移至预热的G-MOPS PLUS的培养皿内（在CO2培养箱外部的环境 中将pH值维持在7.2-7.4之间）
• IVF-ET 的操作程序
降调节+刺激卵巢 募集多个卵泡
取卵(监测卵泡至发育成熟)
体外受精(ICSI) 胚胎移植（及妊娠检测）
阶段一：卵巢刺激和监测
卵巢刺激的目的是通过对卵巢进行人为干预以期获得更多的成熟卵泡。 相反，自然情况下，每个月只能得到一个优势卵泡。
阶段二：卵母细胞收集
卵母细胞收集通常是一个通过B超指导，经阴道的手术程序。此过程可以选择麻醉。
体外授精--胚胎移植 (In Vitro Fertilization -Embryo Transfer IVF-ET)
精子卵浆内注射 (Intracytoplasma Sperm Injection ICSI)
体外授精--胚胎移植 ( IVF-ET )
In Vitro Fertilization-Embryo Transfer 就是活生生地把卵子和精子都弄到体外，搞上了之后过个3、5天放回子宫里头去
操作步奏： 1.首先将抽取的血性卵泡液放在体视显微镜下观察拾卵（在60~100倍的体视显 微镜下可以见到卵母细胞的发生泡GV，确定为GV期未成熟卵） 2.用MOPS冲洗后，放进体外成熟培养体系：G-IVF + 10%HSA + 0.075IU/ml 的FSH（放进37℃，5%CO2培养） 3.未成熟卵母细胞体外培养24~48小时后，出现第一极体后进行ICSI授精 4.在20 μL G-1培养液中培养，17~19小时后观察授精情况，继续培养24~48小 时，授精后2~3d进行宫腔内胚胎移植
胚胎培养及ICSI （含IVM）
目录
01
02
03
辅助生殖技术 传统IVF流程
ICSI
介绍
04
IVM
辅助生殖 技术介绍
定义：一对健康夫妇在未采取避孕的前提下，经过一年的有规律的 性生活，未能受孕，称为不孕。
目前常用的助孕技术 促排卵(Ovulation Induction OI)
宫腔内人工授精 (Intrauterine Insemination IUI)
Day 0：取卵当天
卵母细胞培养及受精
体外受精：
方法1： 将卵母细胞转移至预平衡的中 央孔培养皿内（皿内有含合适 浓度精子的G- IVFTM PLUS）， 将中央孔培养皿置于+37℃， 6% CO2 养箱内过夜。
（注意此方法授精皿中精子浓度 为75000-200000个/ml，避免 精子浓度过高影响受精）
验室进行检验
Day 0：取卵当天
卵母细胞的辨别： 把取卵液移到空培养皿中，辨别卵母细胞，立即用预先冲洗过的无菌吸管将 卵母细胞从卵泡液和可能存在的血液污染中取出
• 预先冲洗无菌吸管应使用已添加蛋白的G-MOPS（捡出的卵子要洗个澡，精子才
乐意同床，这会的卵子沐浴液就要用加蛋白的）
• 在已添加蛋白的G-MOPS中冲洗后，然后再在平衡过的已添加蛋白的GIVF冲洗（至少重复两次），然后把卵母细胞移送到装有平衡过的并添加 蛋白的G-IVF培养皿中，然后立即放进培养箱中（37℃，6%CO2）