蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备
坐骨神经-腓肠肌标本制备(医学相关)
坐骨神经-腓肠肌标本制备一、实验目的要求1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。
3、了解电刺激的极性法则。
二、实验原理1、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。
因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
2、细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。
膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。
蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。
三、实验材料和仪器1、实验材料：牛蛙2、实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液四、实验步骤1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证2、双毁髓一只手握住牛蛙，使其背部向上。
用拇指压住牛蛙背部，食指按压其头部前端，另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向下触划，触及凹陷处即为枕骨大孔。
将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。
将针尖向前刺入颅腔内搅动，此时为单毁髓；将毁髓针退回枕骨大孔，针尖转向后方，与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓，完成双毁髓。
3、坐骨神经-腓肠肌标本制备（1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。
轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置，沿脊柱两侧横向切口剪断体壁，去除断口以上肢体和内脏放入污物缸。
剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。
（2）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉，一只用于剥制标本，一只放入任氏液中保存。
（3）分离坐骨神经：将后肢标本脊柱端腹面向上，趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。
实验02 坐骨神经-腓肠肌标本的制备.
实验二 坐骨神经-腓肠肌标本的制备
[实验目的与要求]
1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。 2.学习并掌握蛙类坐骨神经-腓肠肌标本以及腓
肠肌的制备方法。 3.了解电刺激的极性法则。
[实验动物与器材]
蟾蜍，常用的手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、 金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针） ， 解剖盘，蛙板，铜锌弓，培养皿，污物缸步骤]
1.将蟾蜍单毁髓和双毁髓 2.制备坐骨神经-腓肠肌标本 ①先制备后肢标本 ②分离两后肢 ③分离坐骨神经 ④游离腓肠肌 ⑤分离股骨头或胫腓骨头 ⑥检验标本
[实验结果]
你制备的坐骨神经-腓肠肌标本机能正常吗？如 何检验标本的机能？
[分析讨论] 如何保持坐骨神经-腓肠肌标本的正常机能？ [结论]
[实验注意事项]
1.毁随要彻底；毁髓时不要将蟾蜍对着其他同学，
防止刺破的耳后腺毒液射入其他同学眼中。 2.操作过程中不可将剥皮后的标本同皮肤、内脏等
弃物放在一起。 3.制作标本的过程中要经常用任氏液湿润标本。 4.分离神经时，不能过度牵拉或用手术器械夹持神
经。
[思考题]
剥去皮肤的后肢能用自来水冲洗么,为什么？
生理学实验1 蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备
生理学实验1 蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备一、目的和原理蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与温血动物近似，但其离体组织所需的生活条件比较简单，且易于控制，因此在生理学实验中常用其离体组织或器官作为实验标本。
例如：蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本，可用来观察和研究兴奋性、兴奋过程、刺激引起兴奋的条件、兴奋在神经-肌接头处的传递、肌肉收缩的特点等多种生理现象，所以，制备坐骨神经-腓肠肌标本，是生理学实验的一项基本操作技术。
本实验的目的是：学习并掌握制备坐骨神经-腓肠肌标本的方法，为以后的神经肌肉实验打下基础。
二、实验对象蛙或蟾蜍三、器材和用品蛙板、蛙针、蛙钉、剪刀（2把）、镊子（2把）、玻璃针、锌铜弓、培养皿、滴管、棉线、棉球、尸体盘（以上用品合称蛙类解剖器械一套）及任氏液。
四、方法与步骤1．破坏脑脊髓选一活泼健壮的蛙或蟾蜍，用清水冲洗干净。
左手握蛙，用食指下压吻端，拇指按压背部，使头前俯；右手持蛙针由吻端沿正中线向尾端触划，所触到的凹陷处即是枕骨大孔所在部位。
将蛙针由此垂直刺入皮下，再将针尖折向前方，经枕骨大孔进入颅腔，左右搅动捣毁脑组织（图1-1）。
然后将蛙针退出至刺入点皮下，再将针尖向后插入椎管捣毁脊髓。
图1-12．剪除前部躯干及内脏在骶髂关节以上1厘米处用粗剪刀剪断脊柱，并将前部躯干及所有内脏一并剪去，仅保留一段腰骶部脊柱和后肢。
在所留脊柱的腹侧两旁可看到坐骨神经丛。
剪下的部分置于尸体盘内。
3．剥皮左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉后肢的全部皮肤，标本置于盛有任氏液的培养皿中待用，皮肤弃去。
洗净双手和器械，以免蛙或蟾蜍皮肤的分泌物损害神经和肌肉。
4．分离两后肢将下肢标本腹侧向上用蛙钉固定于蛙板上，用玻璃针沿脊柱两侧分离两条坐骨神经；在两条坐骨神经下各穿一线，于靠近脊柱处将其分别结扎，并在扎线与脊柱之间剪断神经；左手用结扎线提起坐骨神经，右手持剪刀或玻璃针向下游离，直至坐骨神经出盆腔处；将游离的两条坐骨神经分别置于两侧大腿的肌肉上。
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备
实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。
离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。
置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。
例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。
在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。
例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。
急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。
但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。
慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。
实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。
例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。
生理学实验 坐骨神神经腓肠肌标本制备
实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术，为以后有关实验打下基础。
【实验原理】两栖类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似， 而其离体组织所需的生活条件 比较简单，易于建立、控制和掌握。
因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观 察兴奋与兴奋性的一些规律以及骨骼肌的收缩特点等。
所以坐骨神经腓肠肌标本的制备是生 理实验的一项基本操作技术。
【实验对象】蟾蜍或蛙。
【实验材料】两栖类手术器械 1套(粗剪刀、组织剪、眼科剪、组织镊、眼科镊、金属探针、玻璃 分针、蛙板)、手术线、蛙尸缸、滴管、平皿、锌铜弓、任氏液。
【实验步骤】1． 破坏脑和脊髓取蟾蜍 1 只，用自来水冲洗干净。
左手握住蟾蜍，用拇指按压背部，食指按压头部 前端使其头部前俯，右手持金属探针在头前缘沿正中线向尾端触划，所触划到的头部后 端的凹陷处，即为枕骨大孔所在部位。
在此处将金属探针垂直刺入皮肤，有突破感后再 将金属探针折向前经枕骨大孔刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将金属探针回抽至 枕骨大孔处，转向后刺入脊椎管，反复提插捣毁脊髓。
此时如蟾蜍的四肢松软，呼吸运 动消失，表示脑和脊髓已完全破坏，否则应按上法再行捣毁。
2． 剪除躯干上部及内脏如图 1－1 所示，在骶髂关节位置用左手将蟾蜍提起，在骶髂关节水平以上 0.5～l 厘米处用粗剪刀剪断脊柱，然后将粗剪刀尖向下深入体腔沿躯干两侧剪开皮肤，使蟾蜍 头、上肢与内脏自然下垂，将其一并剪除弃去，仅留后肢、骶骨、脊柱及紧贴于脊柱两 侧的坐骨神经。
在整个剪除过程中注意勿损伤神经。
3． 剥皮左手用组织镊夹紧或用手直接捏住脊柱断端(注意：不要夹住或接触神经)，右手捏，将标本放在盛有任氏液 住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（见图 1－2）的平皿中。
将手及用过的粗剪刀、组织镊等全部手术器械洗净，再进行下述步骤。
4． 分离两腿用镊子从背位夹住脊柱将标本提起，剪去向上突出的骶骨(注意勿损伤坐骨神经)，然后沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，然后将分离的两条腿浸于盛有任氏液的平皿中备用。
蛙或蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
1. 破坏脑脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使 头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔（图 1-1），左右搅动捣毁脑组织，然 后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管 时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四 肢松软，呼吸消失。
5. 游离坐骨神经和剪断股骨 认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位（图），用剪刀剪断梨状肌 及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细 心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的 周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上三分之一处 剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本（图 1-4）。
图 1-1 破坏蟾蜍脑脊髓
图 1-2 剪除躯干和内脏
图 1-3 剥除后肢皮肤
4. 分离两腿 用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经，并于近脊柱处各扎一细线，然 后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿 上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧骼骨向反方向分离，使 耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条 置于浸有任氏液的玻璃板上。
6. 游离腓肠肌 在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉 交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。最后用粗剪刀在 膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本（图 1-5）。做好的标肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好，然后将标本 放入任氏液中，待其兴奋性稳定后再进行实验。
实验 1 蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
坐骨神经腓肠肌标本制备步骤
坐骨神经腓肠肌标本制备步骤《坐骨神经腓肠肌标本制备步骤坐骨神经腓肠肌标本制备步骤》嘿，朋友！今天咱们来聊聊坐骨神经腓肠肌标本的制备步骤。
这事儿啊，说起来还挺有趣的，您可得听我慢慢道来。
呢，咱们得准备好一些工具和材料。
像是蛙类动物，常用的是蟾蜍，还有一些手术器械，像解剖刀、镊子、剪刀之类的，当然还少不了一些生理盐水，这可是保持标本活性的关键哦。
准备好这些，咱们就可以开始动手啦！把蟾蜍捉来，先得让它安静下来。
这时候可以给它来一下“温柔的抚摸”，让它放松放松。
然后，用大头针把蟾蜍的四肢固定在解剖盘上。
这一步可得小心点，别弄疼了它。
找到脊柱后，在它的两侧找到坐骨神经，这两条神经就像是藏在深处的宝贝，得仔细找才能发现。
找到后，用镊子轻轻把周围的组织清理干净，让坐骨神经完全暴露出来。
然后，顺着坐骨神经往下，就能找到腓肠肌。
这腓肠肌就像是一个小肌肉块，连着坐骨神经。
用剪刀把坐骨神经和腓肠肌周围的其他组织剪掉，但要注意，千万别把神经和肌肉剪断了，这可需要点耐心和细心。
不过，还没完呢！把取下的标本放在盛有生理盐水的培养皿里，让它好好泡个澡，保持湿润和活力。
经过这一系列的操作，咱们的坐骨神经腓肠肌标本就制备好啦！是不是感觉还挺有意思的？这当中每一步都需要咱们小心谨慎，就像对待一件珍贵的宝贝一样。
朋友，您要是自己动手做这个标本，一定要按照这些步骤慢慢来，相信您一定能成功的！。
实验三 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
六、注意事项
1、制备标本过程中，应随时用林格液润湿神经和肌 肉，防止干燥。 2、游离神经时，切勿用玻璃分针逆向剥离，以防损伤 神经干，又要避免金属器械对神经的不必要触碰。
3、避免蟾蜍皮肤分泌物和血液等污染标本，也不能用 水冲洗标本。
4、有时标本兴奋性过高，可放置２０min待其稳定后再 用于以下实验。必要时可接地予以分流。
2、剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱， 将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊 柱的两旁可见坐骨神经丛。
3、去皮：先剪去肛门周围皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏 住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。标本放入盛有林格液的小烧 杯中，将手及用过的器械、蛙板洗净，以免皮肤分泌物污染神经-肌肉 标本。 4、分离标本为两部分：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半， 分别作进一步剥制。 5、游离坐骨神经：用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨 神经。注意分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，勿伤神经干，前 面分离至脊柱坐骨神经丛基部，向下分离至膝关节。保留与坐骨神经相 连的一小块脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上，去除膝关节周 围以上的全部大腿肌肉，用铁剪刀刮净股骨上附着的肌肉，保留下半段 股骨。 6、分离腓肠肌：在跟腱上扎牢一线，提起结线，剪断结扎线外的跟 腱，游离腓肠肌至膝关节处，将膝关节以下小腿其余部分全部剪去。至 此，标本制成。 7、标本的检验：将标本置于蛙板上，用锌铜弓(或电子刺激器)刺激 坐骨神经，若腓肠肌收缩表明标本的兴奋性良好。将标本放入林格液中 待用。
实 验 三
蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
一、实验目的
学习破坏蟾蜍脑和脊髓的方法. 熟悉并掌握蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
二、试验器材
两
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
2.不要挤 压蟾蜍耳 后腺。
3.避免强力
4.标本先放
牵拉神经或 在任氏液中 用金属器械 浸泡一段时 夹捏神经。 间。
彻底。
探索性实验
The exploring experiment 温度对坐骨神经—腓 肠肌收缩的影响
坐骨神经—腓肠肌标 本制作方法的改进
给细胞外Ca2+浓度 对坐骨神经—腓肠肌 收缩的影响
Experimental methods and steps
8.制作坐骨神经-腓肠肌标本
跟腱处穿线、结扎、剪断
分离腓肠肌
膝关节下剪断胫腓骨
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
9.任氏液湿润标本
10.锌铜弓检查兴奋性
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
茶对离体坐的捉拿 枕骨大孔的位置 破坏的标志
（1）枕骨大孔的位置
位置：两线交汇的凹陷处
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
（2）破坏的标志：
呼吸消失 四肢松软
（3）方法二
粗剪将蟾蜍上颌从两耳连线 平面离断
暴露椎管
直接破坏脊髓
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
2.剪除躯干上部和内脏
骶髂关节上1-2cm 剪去的部分 留下的部分
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
2.剪除躯干上部和内脏
手持蟾蜍下肢，腹部向下
仅保留后肢和下段脊柱 脊柱两旁即坐骨神经
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
实验三蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
实验方法和步骤
1. 破坏中枢神经系统：以左手握住蟾蜍，用食指压住其头部，使其略向下弯，将 探针自枕骨大孔插入，先左右横断脊髓，再向前搅毁脑，然后再将探针撤回伸 入脊管破坏脊髓。如果中枢神经系统破坏完全则蟾蜍全身肌肉完全松驰。
2. 剪断脊柱：用粗剪刀自胸部剪断脊柱。 3. 剪除前肢及内脏：沿脊柱的断口至耻骨处，将两侧腹壁的皮肤及肌肉剪开，再
实验三:蟾蜍坐骨神经腓肠肌 标本制备
实验目的 实验原理 实验对象 实验器材 实验方法和步骤 注意事项
实验目的
♦学习急性实验的实验方法。 ♦通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴
奋组织的概念。 ♦掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。
实验原理
♦青蛙和蟾蜍是两栖类动物，其生存环境较简单，离 体组织或器官所要求的条件也较简单。坐骨神经 和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制 的任氏液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。 若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉 上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一 次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一 次。
将直肠剪断，将前肢及内脏全部剪掉，但须注意勿损伤两侧下行的坐骨神经丛. 将肛门周围的皮肤和尾骨剪去，便于剥皮与分离标本。 4. 剥皮：一手用镊子夹紧脊柱骨，另一手捏住复于其上的皮肤边缘，用力剥去皮 肤将去皮的标本放在任氏液浸湿的蛙板上，将手和手术器械洗净。 5. 分离左右下肢：用粗剪刀沿脊柱中线把标本分为左右两半。注意勿损伤神经。 6. 剥离坐骨神经：用玻璃分针将坐骨神经丛分离清楚，再从大腿背面股二头肌和 半膜肌的夹缝中分离出坐骨神经。用粗剪刀将与坐骨神经相连的脊柱下部多余 部分剪去，以镊子夹住与神经相连的脊柱骨，提起神经，然后用眼科剪将坐骨 神经向大腿及其它处发出的神经分支剪断，将坐骨神经分离到膝关节。 7. 分离肌肉：分离腓肠肌的跟腱，用线结紧，自跟腱的附着点剪断。提起跟腱将 腓肠肌剥离出来，并将小腿其余部分剪掉，保留一小段(约1.5cm)股骨，并将 附着于骨上的其它肌肉剪掉，即完成坐骨神经腓肠肌标本的制备。 8. 检查标本：用铜锌弓轻轻地与坐骨神经接触，如果标本良好则肌肉立即收缩。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
坐骨神经-腓肠肌标本的制备XXX,YYY,ZZZ（版权所有，仅限个人）一、实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。
2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
二、实验原理：1.蟾蜍处死：将蟾蜍的脑和脊髓用毁髓针捣毁后，蟾蜍即死亡。
捣毁脑是为了将蟾蜍的感觉和运动中枢破坏，同时也使蟾蜍的意识消失，既避免解剖过程中蟾蜍感到痛苦，也避免蟾蜍有意识的反应；捣毁脊髓是为了破坏蟾蜍的周围神经系统，避免蟾蜍自然的非意识的反应（乱动）。
总之，双毁髓就是为了是蟾蜍在之后的解剖过程中无任何干扰实验的反应。
2.坐骨神经-腓肠肌标本的制备：坐骨神经直接支配着腓肠肌的反应，刺激坐骨神经的神经干，腓肠肌会产生收缩反应。
一次阈上刺激，腓肠肌会产生一个周期的收缩舒张过程，从而可以被信号采集系统采集，并通过计算机和相关软件转化成可视的收缩舒张曲线。
便于研究神经和肌肉的信号、反应关系和规律。
三、实验器材与试剂：（一）实验动物及器材：蟾蜍、常用蛙类手术器械（如：毁髓针、剪刀、解剖刀等）、蛙板、玻璃划针、固定针、培养皿、滴管、棉花、粗棉线等。
（二）实验试剂：任氏液（近似两栖动物内环境液，配制因子很多，不同于生理盐水）四、实验方法与步骤：1、蟾蜍处死，损毁脑和脊髓：a.学会持拿蟾蜍的方法：一般用左手持拿蟾蜍，用小指和无名指夹住蟾蜍两后腿，中指自然搭在蟾蜍腹部，食指和拇指可自由活动。
处死时，一般用拇指按住蟾蜍背部，食指将蟾蜍头鼻下压，以便使下针处清晰易找。
b.处死：按上述方法持拿，用毁髓针沿头部中线从鼻尖轻轻向后滑过，约在双眼连线中点后方某点，可感到有一下陷小窝，用针轻按，蟾蜍一般会有明显反应。
在此处下针。
将毁髓针垂直插入，会感觉到颅骨破碎的声音，立即将毁髓针向后放倒，将针尖从破碎处，并旋转捣毁脑部；然后将毁髓针拔出少许，向前放倒，向后插入同样旋转捣毁脊髓。
蟾蜍即被处死。
2、去除躯干上部及内脏：将蟾蜍腹部朝上放在蛙板上，将四肢用固定针固定。
生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备
坐骨神经腓肠肌标本得制备与神经干动作电位得观察与传导速度得测定一、实验目得:1.学习蛙类动物双毁髓得实验方法、2。
学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本得制备方法。
3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位得基本波形,并了解其产生得原理。
4.学习蛙与蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度得方法与原理、二、实验材料:1.实验对象:蟾蜍2、实验器材:常规手术器械(粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊)蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。
三、实验原理:神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位,标志着神经发生兴奋。
如果在离体神经干得一段施加刺激,从另一端引导传来得神兴奋冲动,可以记录出双相电位,加入在引导得两个电极之间将神经干麻醉或损伤,阻断其兴奋传导能力,这时候记录出得动作电位就成为单相电位、神经细胞得动作电位就是以全或无得方式产生得。
但就是,复合动作电位得幅值在一定刺激强度下就是随刺激强度得增加而增大得。
如果在远离刺激点得不同距离处分别引导离体神经干动作电位,两引导点之间得距离为m,在两引导点分别引导出得动作电位得时相差为ｓ。
即可按照公式ｖ=m/s来计算出兴奋得传导速度、蛙类得坐骨神经干属于混合性神经,其中包含有粗细不等得各种纤维,其直径一般为3-29um,其中直径最粗得有髓纤维为A类纤维,传导速度在正常室温下为35－4０ m/ｓ。
神经每兴奋一次极其在兴奋以后得回复过程中,其兴奋性都要经历一次周期性得变化,其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期与低常期４个时期。
为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生得周期性变化,首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋,然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激,用于检查神经得兴奋阈值与所引起得动作电位得幅度,以判定神经兴奋性得变化。
四、实验方法及步骤:1、坐骨神经干标本制备(1) 破坏脑与脊髓:取蛙一只,用自来水冲洗干净,左手持蛙,用食指下压其吻部,拇指按压在其骶髂关节下方,使其头尽量前俯,右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划,至触及头颈部正中得凹陷处,即为枕骨大孔得位置。
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备
腓肠肌分离
暴露腓肠肌
在暴露的坐骨神经下方，可见腓肠肌 的起始端。用显微镊子轻轻分离腓肠 肌周围的结缔组织。
完整分离腓肠肌
沿腓肠肌的肌腱走向，小心分离并完 整取出腓肠肌，注意保持肌腱的完整 性。
标本制备
洗标本， 去除残留的血液和组织碎 片。
标本固定
将分离好的腓肠肌标本用 生理盐水浸泡在培养皿中， 并用小纸片标记标本的起 始端和终止端。
神经传导速度测量
通过电刺激坐骨神经并记录肌肉的 反应时间，可以计算出神经传导速 度，以评估神经功能是否正常。
数据记录与分析
记录肌肉收缩幅度
使用数据记录仪记录肌肉收缩的 幅度，可以分析肌肉的生理状态 和功能。
神经传导速度计算
根据电刺激和肌肉反应时间，计 算神经传导速度，并分析其与正 常值的差异。
数据统计分析
标本瓶或培养皿
用于放置剥离好的 标本。
实验环境
实验场地
选择安静、无尘、通风良好的实验室， 保持室内清洁。
实验温度
维持室内温度在适宜的范围内，一般 控制在20-25℃。
实验湿度
保持室内湿度适中，避免过度干燥或 潮湿。
实验光照
选择适当的光照条件，避免直射阳光 和强光干扰。
02 实验步骤
标本选取与固定
对实验数据进行统计分析，可以 得出实验组与对照组之间的差异， 以及不同实验条件下的结果变化。
04 结论与展望
实验结论
成功制备了蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本，并观察到了其生理和电生理特性。
实验过程中，我们发现某些处理步骤对标本的活性有影响，如固定剂的选 择和浓度、离体时间等。
通过实验，我们验证了某些理论假设，如神经肌肉接头传递的机制和离子 通道的作用。
蟾蜍离体坐骨神经–腓肠肌标本制备讲义
培养皿、烧杯、滴管、蛙板、蛙钉等。
【步骤】
双毁髓 剥制后肢标本 分离两后肢 分离坐骨神经
分离股骨 游离腓肠肌 检验标本
1、双毁髓
左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端， 拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓 针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺 之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由 凹陷处垂直刺入枕骨大孔（进针深度约2mm，有 脱空感即到达椎管），然后针尖向前刺入颅腔， 在颅腔内搅动，以毁脑组织。再将毁髓针退至枕 骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管， 以捣毁脊髓。脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢 突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物 （pithed toad） 。
4、分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用大头针将 标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针沿脊神 经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方 的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，纵向分离 暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝 胫神经分叉处。剪断盖在坐骨神经上方的梨 状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌 之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐 骨神经发出部位的一小块脊柱骨。将已游离 的坐骨神经搭在腓肠肌上。
2）标本制备过程中应经常滴加任氏液，防 止标本干燥，以保持正常生理活性。
3）避免污染、过度牵拉或用器械夹伤坐骨 神经和腓肠肌。
思考与讨论
（1）用锌铜弓刺激坐骨神经如何引起 腓肠肌收缩？
（2）如何保持离体标本的机能正常？ （3）剥去皮肤的后肢标本能用自来水
冲洗吗？
探索性问题
1．该标本可以进行哪些实验研究？试 设计实验内容。
剥皮：避开神经，左手持镊子夹住脊 柱，右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥 离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大， 可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部 皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液 的培养皿中。然后洗净双手和用过的 全部手术器械，再进行下列步骤。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
坐骨神经-腓肠肌标本的制备【目的要求】1．学习蛙类动物双毁髓的实验方法。
2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
【动物与器材】蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊毁髓针、玻璃解剖针）、蜡盘、蛙板、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。
【方法与步骤】1．双毁髓的方法左手握蟾蜍（一般可用纱布包住蟾蜍躯干部），背部向上（图2-1）。
用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。
将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。
然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。
如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针触及颅骨。
此时的动物为单毁髓动物。
再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软。
此时的动物为双毁髓动物。
如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。
操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则立即用生理盐水冲洗眼睛）。
2．剥制后肢标本方法有两种。
(1)将双毁髓的蟾蜍背面向上放入蜡盘中。
左手持手术镊轻轻提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后缘水平的脊柱。
用金冠剪横向剪断脊柱。
左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用金冠剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。
然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤，同时弃其头部及内脏。
将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。
清洗手及手术器械上的污物。
(2)将双毁髓的蟾蜍腹面向上放入蜡盘中，左手持手术镊轻轻提起腹壁皮肤，右手持手术剪将皮肤剪开，再剪开腹壁肌肉。
然后用手术镊轻轻提起内脏，自基部剪断（勿伤脊神经）。
左手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方剪断脊柱。
人体解剖生理学：实验一 坐骨神经-腓肠肌标本与坐骨神经干标本的制备
实验材料与器械
按实验一制备的坐骨神经标本 神经屏蔽盒 BL-420生物机能系统
BL－420生物机能实验系统
CH1 CH2 CH3 CH4 刺激
神经屏蔽盒
123 456 7
坐骨神经
+-
注意接地，防止干扰
实验步骤
一、观察双向动作电位
1、单击“神经干动作电位” 2、“设置刺激参数”设定刺激强度等参数 细电压，单刺激，刺激强度2V 3、单击“启动刺激”按钮开始记录 4、改变刺激强度，观察不同刺激强度对动作电位
产生兴奋以后，其兴奋性将会发生规律性的变化，依次 经过绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期，然后 再回到正常的兴奋水平。
采用双脉冲刺激，先给予一个中等强度的阈上刺激， 在神经发生兴奋后，按不同时间间隔给予第二个刺激， 通过调节两刺激脉冲间隔，可测得坐骨神经的绝对不应 期和相对不应期。
实验原理
神经不应期 将两刺激脉冲间隔由最小逐渐增大时，开始只有第
方法二： 1、只连接1对传导电极 2、固定两个电极间的距离 3、记录动作电位，记录动作电位峰值间的时间差 4、计算传导速度
实验步骤
四、测定不应期
1、选择“神经干兴奋不应期的测定” 2、固定两个刺激电压强度为2V 3、选择程控方式 4、双刺激，刺激间隔设定为1ms，自动间隔增量
为0.2ms 5、单击“启动刺激”按钮开始记录
实验材料与器械
蟾蜍，蛙板，蛙类手术器械（毁髓针、金冠剪、手术 剪、手术镊、玻璃针、固定针、棉线），培养皿
锌酮弓： 由铜片和锌片两种金属制成。锌酮弓在极性溶液
中形成回路时，锌与铜两极产生约0.5~0.7V的直流电 压，因此可用来刺激神经和肌肉，使神经或肌肉兴奋。
实验步骤及注意事项：
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实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备
一、实验目的
1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）
2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）
3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理
4、掌握离体标本的制备及手术训练
可
集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。
慢性动物实验适用于观察某一器官或组织在正常情况下的功能以及在整体中的作用地位，但不宜用来分析某一器官或组织细胞生理功能的详细机制。
与急性动物实验相比，慢性动物实验的干扰因素较多，实验条件较难控制。
2、锌铜弓的作用及原理
锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。
由铜片和锌片两种金属制成。
锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。
通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。
而在Zn的里面则形成负离子。
Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。
如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。
当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。
这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。
神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。
3、蟾蜍作为生理学实验模式生物的优点
蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观
处各扎一细线，然后在扎线与脊柱之间剪断神经。
提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。
捏着两侧髂骨向反方向分离，使耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条置于浸有任氏液的玻璃板上。
（（2）、（3）两步可变为一手捏住脊柱后端，一手抓着蟾蜍头部向两侧拉开，可直接分离两腿，蟾蜍皮肤仍留在蟾蜍上身部。
若试验中当堂进行坐骨神经-腓肠肌兴奋性实验，则不需浸泡入任氏液）
（4）游离坐骨神经和剪断股骨：认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位，用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。
将游离干净的坐骨神经
放在下腿上，沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上1/3处剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本。
（6）游离腓肠肌：在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。
做好的标本用锌铜弓的两极轻轻接触坐骨神经，腓肠肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好。
6、坐骨神经干标本的制备和缝匠肌神经标本制备
坐骨神经干标本的制备：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。
标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。
坐骨神经标本置任氏液中备用。
缝匠肌神经标本制备：
缝匠肌：位于股部腹内侧面，起于耻骨联合，止于胫骨，为一肌纤维平行排列的长条肌肉（图2-4）。
缝匠肌受坐骨神经的分支支配。
此分支起于梨状肌的尾骨侧下面，沿途又向半膜肌、半腱肌等发出分支。
并由内大收肌和股内直肌之间穿过，到达股部腹面。
在缝匠肌内侧面下1/3处进入肌肉。
由于该神经在走行沿途中一再分支，到达缝匠肌时已很纤细，解剖时需倍加小心以免伤及神经。
制备过程：取一侧下肢，腹位置于蛙板上。
找到梨状肌，将其在尾骨的附着处剪断。
小心分离其下的坐骨神经，认清坐骨神经在此处发出的3个分支。
在分支的中枢端结扎坐骨神经，并在结扎线的中枢端以及3个分支的外周端剪断坐骨神经。
轻轻提起结扎线，细心地对3个分支略加分离，确认从内直肌和半腱肌之间进入大腿腹面的一支，注意：此分支为支配缝匠肌的神经。
再将其它两个分支
自坐骨神经起始处剪断，将保留的一支神经置于由任氏液湿润的棉球下以保护之。
翻转下肢标本，将其背位置于蛙板上，找到缝匠肌。
用尖镊子在其胫骨附着点腱膜下开一小孔，穿线结扎。
提起结扎线，用手术剪将结扎线外侧的腱膜剪断。
轻轻提起结扎线，用眼科剪沿缝匠肌外侧缘仔细剪开肌膜，直至缝匠肌在耻骨联合的附着处。
为保护肌纤维，可在附着处剪下少量耻骨。
用玻璃解剖针将缝匠肌以内侧缘为轴翻转180°，使其内表面向上，即可清楚地看到支配肌肉的神经在其下1/3的内侧缘进入肌肉。
随后将肌肉翻正复原，用眼科剪沿内侧缘由前向后剪开肌膜。
注意：留下约2mm神经进入处的肌膜，以便在下一步操作中保护神经不被牵拉。
用玻璃解剖针分离内大收肌和股内直肌，将在背面已分离的神经由分离处穿
6、掌握动物尸体的处理方法和保护方法
五、结果与分析
1、蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制作如下图：
锌铜弓刺激坐骨神经，则能感到用细线结扎的腓肠肌的肌肉收缩。
2、试验中应注意的事项：
（1）、避免蟾蜍体表毒液和血液污染标本，不可用金属器械触碰神经干。
（2）、操作过程中避免污染、损伤、过度牵拉神经和肌肉。
（3）、在操作过程中，应防止标本表面干燥，用水或任氏液润湿，以免影响标本的兴奋性。
（4）、标本制成后放在任氏液中浸泡数分钟,使标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
（5）、锌铜弓使用前应适当润湿，但锌、铜两极不可直接或间接接触，形成闭合回路。
（6）、如需定量测量神经纤维传导速度，则每次刺激后必须让标本有相同的休息时间。