上海地区高龄孕妇羊水染色体核型分析
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综上所述，高龄孕妇羊水细胞染色体异常率高于非高龄 孕妇，21 － 三体综合征发生风险与唐氏血清筛查高危孕妇相 同，且前者常染色体三体综合征检出率更胜于后者，所以羊 水细胞染色体检查应作为高龄孕妇的常规项目，高龄应作为 行胎儿染色体检查的独立指标。
参考文献
［1］American College of Obstetricians and Gynecologists （ ACOG ） ． 1976. Ante natal diagnosis of genetic disorders［J］． ACOG Technical Bulletin # 39.
表 1 高龄孕妇 23 例染色体异常核型
分类 核型
例数 （ n = 23）
妊娠结局
染色体数目 47，XY（ XX） ，+ 21 异常（ n = 12） 47，XY（ XX） ，+ 18
47，XX，+ 13 47，XXY 45，X /46，XX 染色体结构 46，XX，inv（ 7） 异常（ n = 10） 46，XX（ XY） ，inv（ 9） 45，XY，－ 14，－ 21，+ t（ 14； 21） 46，XX，var（ 9） （ q11） 46，XX，var（ 15） （ q22） 46，XY，var（ 22） 46，XY，var（ Y） 染色体发育 46，XX /46，XY 异常（ n = 1）
通讯作者： 龚波
2结果 2. 1 高龄孕妇染色体异常结果
554 例高龄孕妇羊水细胞标本中检出染色体异常核型 23 例，异常率为 4. 15% 。其中染色体数目异常为 12 例，占 异常总数的 52. 2% ； 包括 21 三体 3 例（ 13. 0% ） 、18 三体 5 例（ 21. 7% ） 、13 三体 1 例 （ 4. 3% ） ； 克氏综合 征 （ Klinefelter syndrome） 2 例（ 8. 7% ） ； 特纳综合征（ Turner' s syndrome） 1 例 （ 4. 3% ） 。染色体结构异常 10 例，占异常总数的 43. 5% ，多 态性变异主要是 7、9、14、15、22 号及 Y 染色体。另有真两性 畸形 1 例，占 4. 3% ，具体结果见表 1。
染色体结构异常中检出较多的为染色体平衡性结构异 常，主要包括平衡易位、罗伯逊易位、倒位等，其中以 9 号染 色体倒位最为常见。染色体平衡性结构异常携带者通常无 遗传物质丢失，故表型与智力一般正常。我们在高龄孕妇羊 水中检出平衡性染色体变异 10 例； 非 高 龄 孕 妇 组 检 出 17 例，两组发生率并无差异（ P ＞ 0. 05） 。一般认为染色体平衡 性结构异常是一种多态现象，但其生殖细胞在减数分裂过程 中，平衡变异染色体可随机形成多种不同染色体组成的生殖 细胞，即使与正常染色体亦可形成不平衡的配子，从而直接 影响妊娠结果［7］。
·42·
中国优生与遗传杂志 2013 年第 21 卷第 2 期
表 2 高龄孕妇与非高龄孕妇染色体异常率比较
高龄组 21 三体 性染色体病 染色体结构异常 其他
非高龄组 21 三体 性染色体病 染色体结构异常 其他
合计
注： * P ＜ 0. 01
正常核型 531
1704
2235
异常核型 23 3 4 10 6 36 * 14 4 17 1 59
合计 554
1740
2294
由表 2 可知，高龄孕妇组染色体异常率为 4. 15% ，非高 龄孕 妇 组 染 色 体 异 常 率 为 2. 07% ，两 者 差 异 显 著 （ χ2 = 7. 274，P ＜ 0. 01） 。高龄孕妇组与非高龄孕妇组中 21 三体 发生率分别为 0. 5% 和 0. 8% ，性染色体病发生率为 0. 7% 和 0. 5% ，染色体结构异常发生率为 1. 8% 和 1. 0% ，均无统计 学差异（ P ＞ 0. 05） 。 3讨论
［2］赵欣荣，谭美玉，俞菁，等． 超声筛查与羊水染色体检查在产前诊 断中的应用［J］． 中国优生与遗传杂志，2006，14 （ 6） ∶ 36 － 37.
［3］Broekmans FJ，Soules MR，Fauser BC． Ovarian aging： mechanisms and clinical consequences［J］． Endocr Rev，2009，30 （ 5 ） ∶ 465 － 93.
21 － 三体综合征（ 21 － trisomy syndrome） ，又称唐氏综合 征（ Down Syndrome） ，多由于卵细胞第一次成熟分裂时染色 体不分离而引起，以先天性智力低下及其他严重缺陷如先天 性耳聋、心脏病、儿童期白血病等为特征，迄今无有效治疗方 法，对家庭和社会都会造成极大的心理和经济负担。本研究 在 554 例高龄孕妇中检出标准型唐氏综合征 3 例，发生率为 0. 54% ，高于 1. 23‰的群体发病率。在 1740 例对照组中，检 出唐氏综合征 14 例，发生率为 0. 80% ，略高于高龄孕妇组， 但无统计学差异（ P ＞ 0. 05） ，由于对照组均为唐氏征血清学 筛查高危孕妇，故提示高龄孕妇与唐氏综合征的发生率有直 接的关系，与 Evelyne 等［5］报道一致。可见孕妇高龄是唐氏 综合征的独立高危因素。
3 妊娠终止
5 妊娠终止
1 妊娠终止
2 妊娠终止
1 妊娠终止
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1 继续妊娠
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1
妊娠终止
2. 2 高龄孕妇与非高龄孕妇染色体异常比较 对照组 1740 例非高龄孕妇羊水细胞标本中检出染色体
异常 核 型 36 例，异 常 率 为 2. 07% 。 其 中 21 三 体 14 例 （ 38. 9% ） ，性染色体数目异常 4 例（ 11. 1% ） ； 染色体结构异 常 17 例（ 47. 2% ） ，多态性变异主要是 1、2、7、9、10、13、14、 15、18、21 号及 Y 染色体； 另有 46，XX，5q － 1 例（ 2. 8% ） 。
DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2013.02.027
中国优生与遗传杂志 2013 年第 21 卷第 2 期
·41·
上海地区高龄孕妇羊水染色体核型分析
俞 菁，章 莉，谭美玉，胡荷宇，侯雅萍，龚 波 （ 上海市长宁区妇幼保健院检验科，200051）
摘 要： 目的 探讨高龄孕妇行羊水染色体分析的必要性。方法 通过羊膜腔穿刺术分析上海地区 554 例高龄孕妇羊
性染色体病是指性染色体 X 或 Y 发生数目或发育异常 所引起的疾病，本研究检出的性染色体病主要有 Turner 综合 征（ 45，X ） 、克 氏 综 合 征 （ 47，XXY ） 、X 三 体 综 合 征 （ 47， XXX） 、真两性畸形（ 46，XX /46，XY） 等，患者一般表现为性 发育不良、生长发育障碍和轻度智力低下。本研究显示高龄 孕妇中 性 染 色 体 病 占 染 色 体 病 30. 8% （ 4 /13 ） ，发 生 率 为 0. 7% （ 4 /554） ； 非高龄孕妇组中性染色体病发生率为 0. 5% （ 4 /1740） ，略低于高龄孕妇组，但差异无显著性（ P ＞ 0. 05） 。
随着社会发展，现 代 女 性 生 育 年 龄 正 趋 向 于 大 龄 化，然 而随着孕产妇生育年龄的增大，其卵巢内处于减数分裂前期 的初级卵母细胞在体内停留时间也会逐渐增长，加上长期受 内外因素影响，出现卵巢功能退化、卵子不同程度老化等，使 其胚胎分裂初期发生染色体异常的机率增加，导致胎儿染色 体异常的发生率也明显上升［3］。本研究发现上海 554 例高 龄孕妇中染色体异常率为 4. 15% （ 23 /554） ，与其他地区报 道相近［4］，而显著高于非高龄孕妇的 2. 07% （ 36 /1740） （ P ＜ 0. 01） ，表明高龄孕妇染色体异常机率高于非高龄孕妇。 本研究 23 例染色体异常患者中染色体疾病共 13 例，占总异 常率的 56. 5% ，按检出率依次为： 18 三体（ 5 例） 、21 三体（ 3 例） 、克氏综合征（ 2 例） 、13 三体、Turner 综合征、真两性畸形 （ 各 1 例） 。
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水细胞染色体核型，以 1740 例唐氏征血清筛查高危的非高龄孕妇作为对照。结果 554 例高龄孕妇羊水细胞标本中检出染
色体异常核型 23 例，异常率为 4. 15% ，显著高于非高龄孕妇染色体异常率。高龄孕妇 21 三体发生风险与唐氏征血清筛查
高危孕妇相同； 常染色体三体综合征检出率更胜于后者。结论 羊水细胞染色体检查应作为高龄孕妇的常规项目，高龄应
18 － 三 体 综 合 征 （ 18 － trisomy syndrome，Edwards syndrome） 和 13 － 三体综合征（ 13 － trisomy syndrome，Patau syndrome） 是次于唐氏综合征的常见染色体三体综合征，群体
发病率约为 0. 3‰和 0. 1‰，患儿可出现严重的智力低下，并 伴有中胚层及其衍化物 （ 如心脏、骨骼、泌尿生殖系统） 的明 显畸形［6］。我们在 554 例高龄孕妇中检出 18 － 三体综合症 5 例（ 0. 9% ） ，13 － 三体综合症 1 例（ 0. 2% ） ，而非高龄孕妇 组中并未检出，结果提示高龄孕妇胎儿常染色体三体综合征 发生风险要高于非高龄孕妇。
作为行胎儿染色体检查的独立指标。
关键词： 高龄； 羊水； 染色体； 核型； 产前诊断
中图分类号： R596. 1
文献标识码： B
文章编号： 1006 － 9534 （ 2013） 02 － 0041 － 02
目前越来越多的女性由于各种原因而成为高龄孕妇（ advanced matemal age，AMA） ，即孕产妇分娩年龄大于或等于 35 周岁［1］。但随着女性年龄增长，卵巢逐渐衰老退变，产生的卵 子自然老化，发生染色体畸形的机会增多，所以孕产妇年龄愈 大，先天愚型和染色体畸形儿的发病率愈高。目前通过羊膜 腔穿刺术进行细胞遗传学检查是产前诊断胎儿染色体异常最 主要的方法［2］，但由于羊膜腔穿刺术是侵入性检查，存在宫内 感染与流产风险，因此很多高龄孕妇对羊水穿刺术是心存芥 蒂。且非高龄孕妇须经唐氏征血清筛查高危者方行羊水细胞 检查，而高龄孕妇无须唐氏征血清筛查，所以很多高龄孕妇对 羊水染色体检查的必要性有所疑问。本文对上海地区高龄孕 妇及唐氏征筛查高危妇女进行羊水细胞染色体检查，分析该 地区高龄孕妇先天愚型及其他染色体畸形的发病情况，探讨 高龄孕妇行产前羊水染色体分析的必要性。 1 资料与方法 1. 1 研究对象 2006 年 1 月至 2011 年 12 月间于我院行羊 膜腔穿刺术 的 高 龄 孕 妇 （ ≥35 周 岁） 共 554 例，平 均 年 龄 （ 36. 8 ± 2. 4） 岁，以同期 1740 例非高龄而唐氏征血清筛查高 危孕产妇作为对照，平均年龄孕妇（ 28. 4 ± 2. 9） 岁，孕妇均签 署产前诊断知情同意书。 1. 2 研究方法 1. 2. 1 羊水收集与处理 羊膜腔穿刺术时间为孕 18 ～ 22w， B 超引导下进行穿刺，严格无菌操作。收集羊水 20mL，分别 置于两个无菌离心管中，800rpm 离心 10min，弃去上清液，保 留 2mL 羊水，轻轻混悬细胞，备用接种。 1. 2. 2 羊水细胞培养 经处理后的羊水细胞悬液分别接种 于 2 种羊水培养基（ Gibco，美国； Biological Industries，以色 列） ，置 37℃ 、5% CO2 培养 8 ～ 10 天，当有大量圆形发亮细胞 出现时，加入秋水仙素 5μg / mL，作用 4 ～ 4. 5h 后收获细胞。 1. 2. 3 染色体核型分析 收获的羊水细胞经低渗、固定、制 片后，用胰酶法 G 显带作分带处理。用染色体分析仪分析 5 个核型，计数至少 20 个细胞，染色体异常至少计数 30 个细 胞，嵌合体计数 50 个细胞以上。 1. 3 统计学分析 统计数据应用 SPSS 19 统计软件进行处 理，率的比较采用 χ2 检验，以 P ＜ 0. 05 表明差异有统计学意义。
参考文献
［1］American College of Obstetricians and Gynecologists （ ACOG ） ． 1976. Ante natal diagnosis of genetic disorders［J］． ACOG Technical Bulletin # 39.
表 1 高龄孕妇 23 例染色体异常核型
分类 核型
例数 （ n = 23）
妊娠结局
染色体数目 47，XY（ XX） ，+ 21 异常（ n = 12） 47，XY（ XX） ，+ 18
47，XX，+ 13 47，XXY 45，X /46，XX 染色体结构 46，XX，inv（ 7） 异常（ n = 10） 46，XX（ XY） ，inv（ 9） 45，XY，－ 14，－ 21，+ t（ 14； 21） 46，XX，var（ 9） （ q11） 46，XX，var（ 15） （ q22） 46，XY，var（ 22） 46，XY，var（ Y） 染色体发育 46，XX /46，XY 异常（ n = 1）
通讯作者： 龚波
2结果 2. 1 高龄孕妇染色体异常结果
554 例高龄孕妇羊水细胞标本中检出染色体异常核型 23 例，异常率为 4. 15% 。其中染色体数目异常为 12 例，占 异常总数的 52. 2% ； 包括 21 三体 3 例（ 13. 0% ） 、18 三体 5 例（ 21. 7% ） 、13 三体 1 例 （ 4. 3% ） ； 克氏综合 征 （ Klinefelter syndrome） 2 例（ 8. 7% ） ； 特纳综合征（ Turner' s syndrome） 1 例 （ 4. 3% ） 。染色体结构异常 10 例，占异常总数的 43. 5% ，多 态性变异主要是 7、9、14、15、22 号及 Y 染色体。另有真两性 畸形 1 例，占 4. 3% ，具体结果见表 1。
染色体结构异常中检出较多的为染色体平衡性结构异 常，主要包括平衡易位、罗伯逊易位、倒位等，其中以 9 号染 色体倒位最为常见。染色体平衡性结构异常携带者通常无 遗传物质丢失，故表型与智力一般正常。我们在高龄孕妇羊 水中检出平衡性染色体变异 10 例； 非 高 龄 孕 妇 组 检 出 17 例，两组发生率并无差异（ P ＞ 0. 05） 。一般认为染色体平衡 性结构异常是一种多态现象，但其生殖细胞在减数分裂过程 中，平衡变异染色体可随机形成多种不同染色体组成的生殖 细胞，即使与正常染色体亦可形成不平衡的配子，从而直接 影响妊娠结果［7］。
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中国优生与遗传杂志 2013 年第 21 卷第 2 期
表 2 高龄孕妇与非高龄孕妇染色体异常率比较
高龄组 21 三体 性染色体病 染色体结构异常 其他
非高龄组 21 三体 性染色体病 染色体结构异常 其他
合计
注： * P ＜ 0. 01
正常核型 531
1704
2235
异常核型 23 3 4 10 6 36 * 14 4 17 1 59
合计 554
1740
2294
由表 2 可知，高龄孕妇组染色体异常率为 4. 15% ，非高 龄孕 妇 组 染 色 体 异 常 率 为 2. 07% ，两 者 差 异 显 著 （ χ2 = 7. 274，P ＜ 0. 01） 。高龄孕妇组与非高龄孕妇组中 21 三体 发生率分别为 0. 5% 和 0. 8% ，性染色体病发生率为 0. 7% 和 0. 5% ，染色体结构异常发生率为 1. 8% 和 1. 0% ，均无统计 学差异（ P ＞ 0. 05） 。 3讨论
［2］赵欣荣，谭美玉，俞菁，等． 超声筛查与羊水染色体检查在产前诊 断中的应用［J］． 中国优生与遗传杂志，2006，14 （ 6） ∶ 36 － 37.
［3］Broekmans FJ，Soules MR，Fauser BC． Ovarian aging： mechanisms and clinical consequences［J］． Endocr Rev，2009，30 （ 5 ） ∶ 465 － 93.
21 － 三体综合征（ 21 － trisomy syndrome） ，又称唐氏综合 征（ Down Syndrome） ，多由于卵细胞第一次成熟分裂时染色 体不分离而引起，以先天性智力低下及其他严重缺陷如先天 性耳聋、心脏病、儿童期白血病等为特征，迄今无有效治疗方 法，对家庭和社会都会造成极大的心理和经济负担。本研究 在 554 例高龄孕妇中检出标准型唐氏综合征 3 例，发生率为 0. 54% ，高于 1. 23‰的群体发病率。在 1740 例对照组中，检 出唐氏综合征 14 例，发生率为 0. 80% ，略高于高龄孕妇组， 但无统计学差异（ P ＞ 0. 05） ，由于对照组均为唐氏征血清学 筛查高危孕妇，故提示高龄孕妇与唐氏综合征的发生率有直 接的关系，与 Evelyne 等［5］报道一致。可见孕妇高龄是唐氏 综合征的独立高危因素。
3 妊娠终止
5 妊娠终止
1 妊娠终止
2 妊娠终止
1 妊娠终止
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1 继续妊娠
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1 继续妊娠
2 继续妊娠
1
妊娠终止
2. 2 高龄孕妇与非高龄孕妇染色体异常比较 对照组 1740 例非高龄孕妇羊水细胞标本中检出染色体
异常 核 型 36 例，异 常 率 为 2. 07% 。 其 中 21 三 体 14 例 （ 38. 9% ） ，性染色体数目异常 4 例（ 11. 1% ） ； 染色体结构异 常 17 例（ 47. 2% ） ，多态性变异主要是 1、2、7、9、10、13、14、 15、18、21 号及 Y 染色体； 另有 46，XX，5q － 1 例（ 2. 8% ） 。
DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2013.02.027
中国优生与遗传杂志 2013 年第 21 卷第 2 期
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上海地区高龄孕妇羊水染色体核型分析
俞 菁，章 莉，谭美玉，胡荷宇，侯雅萍，龚 波 （ 上海市长宁区妇幼保健院检验科，200051）
摘 要： 目的 探讨高龄孕妇行羊水染色体分析的必要性。方法 通过羊膜腔穿刺术分析上海地区 554 例高龄孕妇羊
性染色体病是指性染色体 X 或 Y 发生数目或发育异常 所引起的疾病，本研究检出的性染色体病主要有 Turner 综合 征（ 45，X ） 、克 氏 综 合 征 （ 47，XXY ） 、X 三 体 综 合 征 （ 47， XXX） 、真两性畸形（ 46，XX /46，XY） 等，患者一般表现为性 发育不良、生长发育障碍和轻度智力低下。本研究显示高龄 孕妇中 性 染 色 体 病 占 染 色 体 病 30. 8% （ 4 /13 ） ，发 生 率 为 0. 7% （ 4 /554） ； 非高龄孕妇组中性染色体病发生率为 0. 5% （ 4 /1740） ，略低于高龄孕妇组，但差异无显著性（ P ＞ 0. 05） 。
随着社会发展，现 代 女 性 生 育 年 龄 正 趋 向 于 大 龄 化，然 而随着孕产妇生育年龄的增大，其卵巢内处于减数分裂前期 的初级卵母细胞在体内停留时间也会逐渐增长，加上长期受 内外因素影响，出现卵巢功能退化、卵子不同程度老化等，使 其胚胎分裂初期发生染色体异常的机率增加，导致胎儿染色 体异常的发生率也明显上升［3］。本研究发现上海 554 例高 龄孕妇中染色体异常率为 4. 15% （ 23 /554） ，与其他地区报 道相近［4］，而显著高于非高龄孕妇的 2. 07% （ 36 /1740） （ P ＜ 0. 01） ，表明高龄孕妇染色体异常机率高于非高龄孕妇。 本研究 23 例染色体异常患者中染色体疾病共 13 例，占总异 常率的 56. 5% ，按检出率依次为： 18 三体（ 5 例） 、21 三体（ 3 例） 、克氏综合征（ 2 例） 、13 三体、Turner 综合征、真两性畸形 （ 各 1 例） 。
Байду номын сангаас
水细胞染色体核型，以 1740 例唐氏征血清筛查高危的非高龄孕妇作为对照。结果 554 例高龄孕妇羊水细胞标本中检出染
色体异常核型 23 例，异常率为 4. 15% ，显著高于非高龄孕妇染色体异常率。高龄孕妇 21 三体发生风险与唐氏征血清筛查
高危孕妇相同； 常染色体三体综合征检出率更胜于后者。结论 羊水细胞染色体检查应作为高龄孕妇的常规项目，高龄应
18 － 三 体 综 合 征 （ 18 － trisomy syndrome，Edwards syndrome） 和 13 － 三体综合征（ 13 － trisomy syndrome，Patau syndrome） 是次于唐氏综合征的常见染色体三体综合征，群体
发病率约为 0. 3‰和 0. 1‰，患儿可出现严重的智力低下，并 伴有中胚层及其衍化物 （ 如心脏、骨骼、泌尿生殖系统） 的明 显畸形［6］。我们在 554 例高龄孕妇中检出 18 － 三体综合症 5 例（ 0. 9% ） ，13 － 三体综合症 1 例（ 0. 2% ） ，而非高龄孕妇 组中并未检出，结果提示高龄孕妇胎儿常染色体三体综合征 发生风险要高于非高龄孕妇。
作为行胎儿染色体检查的独立指标。
关键词： 高龄； 羊水； 染色体； 核型； 产前诊断
中图分类号： R596. 1
文献标识码： B
文章编号： 1006 － 9534 （ 2013） 02 － 0041 － 02
目前越来越多的女性由于各种原因而成为高龄孕妇（ advanced matemal age，AMA） ，即孕产妇分娩年龄大于或等于 35 周岁［1］。但随着女性年龄增长，卵巢逐渐衰老退变，产生的卵 子自然老化，发生染色体畸形的机会增多，所以孕产妇年龄愈 大，先天愚型和染色体畸形儿的发病率愈高。目前通过羊膜 腔穿刺术进行细胞遗传学检查是产前诊断胎儿染色体异常最 主要的方法［2］，但由于羊膜腔穿刺术是侵入性检查，存在宫内 感染与流产风险，因此很多高龄孕妇对羊水穿刺术是心存芥 蒂。且非高龄孕妇须经唐氏征血清筛查高危者方行羊水细胞 检查，而高龄孕妇无须唐氏征血清筛查，所以很多高龄孕妇对 羊水染色体检查的必要性有所疑问。本文对上海地区高龄孕 妇及唐氏征筛查高危妇女进行羊水细胞染色体检查，分析该 地区高龄孕妇先天愚型及其他染色体畸形的发病情况，探讨 高龄孕妇行产前羊水染色体分析的必要性。 1 资料与方法 1. 1 研究对象 2006 年 1 月至 2011 年 12 月间于我院行羊 膜腔穿刺术 的 高 龄 孕 妇 （ ≥35 周 岁） 共 554 例，平 均 年 龄 （ 36. 8 ± 2. 4） 岁，以同期 1740 例非高龄而唐氏征血清筛查高 危孕产妇作为对照，平均年龄孕妇（ 28. 4 ± 2. 9） 岁，孕妇均签 署产前诊断知情同意书。 1. 2 研究方法 1. 2. 1 羊水收集与处理 羊膜腔穿刺术时间为孕 18 ～ 22w， B 超引导下进行穿刺，严格无菌操作。收集羊水 20mL，分别 置于两个无菌离心管中，800rpm 离心 10min，弃去上清液，保 留 2mL 羊水，轻轻混悬细胞，备用接种。 1. 2. 2 羊水细胞培养 经处理后的羊水细胞悬液分别接种 于 2 种羊水培养基（ Gibco，美国； Biological Industries，以色 列） ，置 37℃ 、5% CO2 培养 8 ～ 10 天，当有大量圆形发亮细胞 出现时，加入秋水仙素 5μg / mL，作用 4 ～ 4. 5h 后收获细胞。 1. 2. 3 染色体核型分析 收获的羊水细胞经低渗、固定、制 片后，用胰酶法 G 显带作分带处理。用染色体分析仪分析 5 个核型，计数至少 20 个细胞，染色体异常至少计数 30 个细 胞，嵌合体计数 50 个细胞以上。 1. 3 统计学分析 统计数据应用 SPSS 19 统计软件进行处 理，率的比较采用 χ2 检验，以 P ＜ 0. 05 表明差异有统计学意义。