抗补体活性测定法
实验4 补体结合反应、血清总补体活性测定(CH50法)
补体结合反应:结果观察 血清总补体活性测定(CH50法):每人操作
补体参与的反应
补体参与的反应
溶血反应 补体结合反应 血清总补体活性测定(CH50法)
溶血反应
RBC
+
抗RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清
溶血
补体结合试验
（complement fixation test,CFT)
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512
pH7.4 巴比妥缓冲
液(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
血清最后稀释度 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512 1∶1024
CH50法原理
被检血清及各种试剂稀释法
管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
pH7.4 巴比妥缓冲
液(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
病人血清(ml)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃 0.2
血清稀释度
量的变化可为某些变态反应性疾病与补体缺陷 病的诊断与预后提供依据。
实验报告要求
补体结合实验 原理、结果观察、结论
CH50法 原理、材料、方法、结果、讨论
血清总补体活性测定 (CH50法)
掌握50%补体溶血试验的原理、方 法、结果判定及临床意义。熟悉 血清补体含量的计算。
CH50法原理
绵羊红细胞与溶血素，在新鲜血清中补体的 作用下，绵羊红细胞可被溶解，产生溶血现 象。
溶血程度与血清中补体量相关，呈一弧形曲 线，但在50%溶血（CH50）附近时，溶血度 与补体量之间呈线性关系，故以50%溶血作 为终点观察指数最为敏感。
中药抗补体活性研究进展
中药抗补体活性研究进展中药抗补体活性的评价方法有多种，目前常见的方法是C3/C4结合酶免疫吸附分析法和酶促免疫吸附分析法等。
这些方法可以在体外评价中药对补体活性的影响，为后续的体内研究提供重要的参考。
当前，中药抗补体活性的研究主要集中在以下几个方面：1. 中药对补体活化途径的调节补体系统的激活途径有三种，分别是经典途径、替代途径和Mannan结合途径。
中药可以通过调节不同途径的激活来影响补体的功能。
例如，黄芪、人参、丹参等中药可以减弱经典途径的激活，抑制C1激活酶的活性；夏枯草、银屑病等中药可以影响替代途径的激活，抑制C3分裂酶的活性；紫花地丁、连翘等中药可以影响Mannan结合途径的激活，影响Mannan结合蛋白（MBL）的结合能力。
2. 中药对补体所致炎症的调控过度的补体激活会引发多种炎症反应，因此抑制补体活性可以降低炎症反应的强度和程度。
中药可以通过调节多种炎症因子的表达来发挥抗炎作用。
例如，芍药、黄芩等中药可以抑制IL-1、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达，从而减轻补体所致的炎症反应。
3. 中药对补体相关疾病的治疗补体活性的异常与多种疾病的发生和发展相关。
近年来，越来越多的研究关注中药在补体相关疾病的治疗中的作用。
例如，薏苡仁、佛手、山药等中药对于抑制肾炎和肝炎病毒感染有一定的作用；桃仁、红花等中药对于缓解自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等也有一定的疗效。
综上所述，中药对补体活性的调节具有广泛的应用前景。
但目前的研究主要集中在体外实验和动物实验，临床应用还需要进一步验证。
此外，不同中药的抗补体活性也存在一定的差异和局限性，因此，需要进一步探磨发现新的中药活性成分和分子机制，为中药抗补体活性的应用提供更加可靠的理论和技术支持。
抗补体活性测定法
附录ⅨK抗补体活性测定法本法系采用免疫溶血反应作指示系统，根据供试品消耗补体所反映出的溶血率变化，测定供试品的抗补体活性。
试剂（1）镁-钙贮备液取氯化钙1.103g、氯化镁（MgCl2·6H2O）5.083g，加水溶解并稀释至25ml。
（2）巴比妥缓冲液贮备液取氯化钠41.5g、巴比妥钠5.1g，加水800ml溶解。
用1mol/L 盐酸溶液调pH值至7.3，加镁-钙贮备液2.5ml，加水稀释至1000ml，用0.22μm膜滤过，4℃保存备用。
（3）明胶巴比妥缓冲液（GVB）取明胶0.625g，加水30ml煮沸使溶解，加巴比妥缓冲液贮备液100ml，再加水稀释至500ml，新鲜制备，当天使用。
（4）阿氏液（Alsever’s液）取枸橼酸0.5g、枸橼酸钠8.0g、葡萄糖20.5g、氯化钠4.2g，加水溶解并稀释至1000ml（pH6.2左右）。
根据一次采羊血需要量将该溶液分装于采血瓶中，116℃蒸汽灭菌10分钟（灭菌后，尽快释放蒸汽）。
放冷后置4℃冰箱保存备用。
（5）绵羊红细胞由绵羊颈静脉无菌采集全血适量，与等体积的阿氏液混合，无菌分装，4℃保存一周后方可使用。
（6）溶血素兔抗羊红细胞血清。
（7）豚鼠血清（补体）取10只以上豚鼠血清，混合，4℃离心除去血细胞，分装，-70℃保存，也可冻干保存。
豚鼠血清每1ml中的补体总活性应不低于100CH50。
5%羊红细胞悬液制备取绵羊红细胞适量，用明胶巴比妥缓冲液至少洗3次后，悬浮于适量明胶巴比妥缓冲液中。
取0.2ml红细胞悬液，加至2.8ml水中，待红细胞完全溶解后照紫外-可见分光光度法（附录ⅡA）在波长541nm处测定吸光度，根据下列公式，将该溶液的吸光度调节至0.62±0.01（每1ml红细胞悬液含红细胞1×109个）。
V f = V i×A————0.62式中Vi 为稀释前红细胞悬液体积，ml；A为稀释前红细胞溶解液吸光度；V f为稀释后红细胞悬液体积，ml。
中药抗补体活性研究进展
中药抗补体活性研究进展近年来，抗补体活性研究在中医药领域备受关注，越来越多的研究表明中药对抗补体活性具有显著的效果。
补体系统是机体天然免疫系统中重要的组成部分，对于维持机体内稳态和对抗病原微生物起着重要的作用。
当补体系统活性过高或异常时，会导致一系列炎症和自身免疫性疾病的发生，因此研究抗补体活性成为了一项重要的课题。
中药作为我国特有的传统药物资源，其抗补体活性研究在近年来得到了广泛的关注和深入的探讨。
本文将从中药对抗补体活性的研究进展进行综述，旨在为中药抗补体活性的研究提供参考和借鉴。
一、中药对抗补体活性的药理作用机制中药通过多种途径对抗补体活性，其药理作用机制主要包括以下几个方面：1. 抑制补体系统激活：一些中药具有直接或间接抑制补体系统激活的作用，如黄芩中的黄芩素具有明显的抑制C3、C5等补体活性物质的生成，从而抑制了炎症反应的发生。
2. 调节免疫功能：部分中药能够调节细胞因子的平衡，如甘草中的甘草酸具有调节Th1/Th2细胞因子平衡的作用，从而影响了补体系统的激活和免疫功能的调节。
3. 抗氧化应激：氧化应激是导致补体系统活化的重要原因之一，一些中药具有显著的抗氧化应激作用，如红枣中的多酚类成分能够清除自由基，减少氧化应激的损伤，从而抑制了补体系统的异常活化。
1. 黄芩2. 甘草3. 红枣随着对中药抗补体活性的研究不断深入，中药在抗炎和免疫调节方面的临床应用前景日益广阔。
中医药在治疗自身免疫性疾病、炎症性疾病等方面具有独特优势，其与现代药物的联合应用将成为未来的研究热点。
中药对抗补体活性的研究进展为中医药的临床应用提供了新的思路和方法，中医药与现代药物的结合将有望为我国传统药物资源的开发利用带来全新的发展机遇。
希望我们的中药抗补体活性研究能够为中医药的临床应用提供更多的有效药物和治疗方法，为维护人类健康作出更大的贡献。
免疫检验考试辅导：循环免疫复合物补体相关测定法
IgG和IgM类抗体与抗原结合后，重链CH2区的补体结合点暴露，可以固定C1q并激活补体的系列反应，这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。
1.C1q结合试验：将待检血清先行加热56℃30min，以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q，空出补体结合点。
CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测，常用的有以下3种。
（1）液相法：先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用，再加入0.5%（终浓度）的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来，通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。
（2）固相法：先将C1q吸附于固相载体表面，加入待检血清使CIC与C1q结合，再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA，最后检测其放射活性或酶活性。
（3）C1q偏离试验：先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合，再加抗体致敏的绵羊红细胞，温育后离心，检测红细胞上的放射活性。
红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。
2.补体试验本法的原理类似补体结合试验。
将一定量的补体（多为混合豚鼠血清）与灭活的待检血清混合温育，反应后加入致敏绵羊红细胞。
如出现溶血表示血清中没有CIC存在；不溶血说明标本中有CIC存在医`学教育网搜集整理。
将血清标本做不同稀释，并与已知的热聚合IgG作对照，可以计算出CIC的含量。
本方法的灵敏度较高，且易于在一般实验室开展，不足之处是特异性较差。
3.胶固素结合试验胶固素（conglutinin）是牛血清中的一种正常蛋白，能与C3d特异性结合；体内与补体结合的CIC都带有C3d，因此胶固素可与CIC结合。
用一定量的胶固素包被塑料管，往管中加入稀释的血清标本，温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体，最后检测各管的放射活性或酶活性，计算CIC的含量。
补体含量测定实验报告
1. 学习补体活性测定的原理和方法。
2. 掌握补体活性的定量分析方法。
3. 了解补体含量在临床医学中的应用。
二、实验原理补体（Complement）是一组存在于人体血浆中的蛋白质，具有增强免疫应答、清除病原体等作用。
补体活性测定是评估机体免疫功能的重要指标之一。
本实验采用经典途径补体活性测定方法，通过检测溶血素在补体参与下的溶血活性，间接反映补体含量。
三、实验材料1. 试剂：溶血素、补体标准品、生理盐水、蒸馏水、抗人球蛋白抗体、酶标仪、微量移液器、比色皿等。
2. 仪器：离心机、恒温水浴箱、显微镜、离心管等。
四、实验方法1. 标准曲线的制备（1）将补体标准品稀释成不同浓度（如1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等）。
（2）将各浓度补体标准品与等量溶血素混合，置于37℃水浴箱中孵育30分钟。
（3）加入等量抗人球蛋白抗体，混匀，置于37℃水浴箱中孵育30分钟。
（4）加入生理盐水，终止反应。
（5）在酶标仪上检测各孔的吸光度（OD值）。
（6）以OD值为纵坐标，补体浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品检测（1）取一定量待测样品，按上述步骤进行稀释。
（2）重复上述步骤，检测样品的OD值。
（3）根据标准曲线，计算样品中补体的含量。
1. 标准曲线制备：根据实验数据绘制标准曲线，如图1所示。
图1 补体标准曲线2. 样品检测：根据标准曲线计算样品中补体的含量，结果如下表所示。
表1 样品补体含量检测结果样品编号补体含量（U/ml）1 32.52 27.03 24.54 20.05 16.5六、实验讨论1. 本实验采用经典途径补体活性测定方法，通过检测溶血素在补体参与下的溶血活性，间接反映补体含量。
2. 实验结果显示，样品中补体含量在16.5～32.5 U/ml之间，说明样品具有一定的补体活性。
3. 补体含量测定在临床医学中具有重要意义，如评估机体免疫功能、诊断某些疾病等。
七、实验总结1. 本实验成功制备了补体标准曲线，为后续样品检测提供了依据。
降低静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性的试验观察
降低静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性的试验观察常娅莉,张艳荣,赵宜为,李振平,刘 燕,崔红宇兰州生物制品研究所,兰州 730046)摘 要:采用CH50试验法测定静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)抗补体活性(ACA),在中性p H条件下,比较了不同的Na+含量及不同种类的糖对ACA测定结果的影响。
结果表明,NaC1含量由0.2%上升至1.0%时,AC A呈逐渐下降趋势;用5%葡萄糖作稳定剂时ACA最低。
IVIG在37 条件下放置一月后,AC A有明显下降趋势。
在半成品配制过程中,p H及各种成份的加入顺序对ACA也有一定影响。
关键词:静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG);抗补体活性(ACA);稳定剂中图分类号:R392.11 文献标识码:A 文章编号:1005-5673(2003)03-0037-03Study and observation on reducing ACA of human immunoglobulin for intravenous injection C HANG Ya-li,Z HANG Yan-ron g,Z HAO Yi-wei,et al. (Lan z hou Institute o f Biological products,Lanzhou730046,China)Abstract:The ACA of human immunoglobulin for intravenous injection was determined by C H50test.The effect of different Na+ contents and sugars were studied to ACA determination.The resul ts showed that ACA was reduced if the Na+content increased from0.2%to1.0%;the ACA of IVIG i s lowest when the5%glucose is used as stabilizer,and the AC A were reduced when IVIG is stored at37 for one month.During preparation of final bulk,the order of adding stabilizers also effects the result of AC A de-termination.Key words:Hu man im munoglobulin for intravenous injection(IVIG);Anticomplement Acti ve(ACA);Stabilizer静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)是具有多种抗体活性的血液制品,因具有广泛的应用价值而受到临床重视。
抗补体活性测定法
5.方茴说：“那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。
我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。
”6.方茴说：“我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。
”7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。
8.这些孩子都很活泼与好动，即便吃饭时也都不太老实，不少人抱着陶碗从自家出来，凑到了一起。
9.石村周围草木丰茂，猛兽众多，可守着大山，村人的食物相对来说却算不上丰盛，只是一些粗麦饼、野果以及孩子们碗中少量的肉食。
附录ⅨK抗补体活性测定法本法系采用免疫溶血反应作指示系统，根据供试品消耗补体所反映出的溶血率变化，测定供试品的抗补体活性。
试剂（1）镁-钙贮备液取氯化钙1.103g、氯化镁（MgCl2·6H2O）5.083g，加水溶解并稀释至25ml。
（2）巴比妥缓冲液贮备液取氯化钠41.5g、巴比妥钠5.1g，加水800ml溶解。
用1mol/L 盐酸溶液调pH值至7.3，加镁-钙贮备液2.5ml，加水稀释至1000ml，用0.22μm膜滤过，4℃保存备用。
（3）明胶巴比妥缓冲液（GVB）取明胶0.625g，加水30ml煮沸使溶解，加巴比妥缓冲液贮备液100ml，再加水稀释至500ml，新鲜制备，当天使用。
（4）阿氏液（Alsever’s液）取枸橼酸0.5g、枸橼酸钠8.0g、葡萄糖20.5g、氯化钠4.2g，加水溶解并稀释至1000ml（pH6.2左右）。
根据一次采羊血需要量将该溶液分装于采血瓶中，116℃蒸汽灭菌10分钟（灭菌后，尽快释放蒸汽）。
放冷后置4℃冰箱保存备用。
（5）绵羊红细胞由绵羊颈静脉无菌采集全血适量，与等体积的阿氏液混合，无菌分装，4℃保存一周后方可使用。
（6）溶血素兔抗羊红细胞血清。
（7）豚鼠血清（补体）取10只以上豚鼠血清，混合，4℃离心除去血细胞，分装，-70℃保存，也可冻干保存。
人总溶血补体酶联免疫分析
人总溶血补体酶联免疫分析
免疫分析是一种广泛应用于临床实验室的诊断手段，它利用抗原与抗体之间的特异性反应，来定量或定性地检测感兴趣的分子。
在人总溶血补体酶联免疫分析中，通常使用特异性的抗体来检测补体活性。
在免疫分析中，人体补体系统的活性经常通过经典途径和替代途径的活性来评估。
经典途径主要是通过抗体与抗原的结合激活补体系统，而替代途径是独立于抗体的过程。
溶血实验是人总溶血补体酶联免疫分析中常用的方法之一，它通过观察红细胞的溶解情况来评估补体系统的活性。
1.样本的采集：从受测者的静脉血采集适量的血液样本，并转移到适当的收集管中。
2.补体的活化：将适量的激活抗体添加到血液样本中，以激活补体系统。
这样一来，就可以评估出补体系统的活性。
3.补体活性的检测：将已激活的血液样本与适量的目标物结合，形成抗原-抗体-补体复合物。
根据溶血实验的条件，观察复合物是否能够导致红细胞的溶解。
4.数据处理和结果分析：根据实验结果，可以通过比较样品与对照组的差异，来确定补体系统的活性水平。
总溶血补体酶联免疫分析可以用于评估多种疾病和疾病过程中的补体系统活性。
例如，在自身免疫病、感染性疾病和炎症过程中，补体系统的活性通常会发生改变。
通过检测补体系统的活性，可以提供疾病的诊断、疾病的进展预测和治疗效果的评估依据。
总结起来，人总溶血补体酶联免疫分析是一种能够评估人体补体系统活性的免疫测定方法。
它可以通过检测补体系统的活性，提供一系列与疾病相关的信息，为临床诊断和治疗提供重要的参考。
免疫检验考试辅导：补体总活性测定
（一）补体总活性测定实验原理补体最主要的活性是溶细胞作用。
特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血。
补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。
在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线。
如以溶血百分率为纵坐标，相应血清量为横坐标，可见在轻微溶血和接近完全溶血处，对补体量的变化不敏感。
S形曲线在30%～70%之间最陡，几乎呈直线，补体量的少许变动，也会造成溶血程度的较大改变，即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感。
因此，实验常以50%溶血作为终点指标，它比100%溶血更为敏感，这一方法称为补体50%溶血实验即CH50。
考试用书（二）检测试剂绵羊红细胞；溶血素；稀释缓冲液。
（三）方法评价CH50试验是测定经典途径总补体溶血活性，所反映的是补体9种成分的综合水平。
方法简便、快速，但敏感性较低。
补体的溶血活性除与试验中反应体积成反比外，还与反应所用缓冲液的pH、离子强度、钙镁浓度、绵羊红细胞数量和反应温度有一定关系。
缓冲液pH和离子强度增高，补体活性下降，虽可稳定溶血系统，但过量则反而抑制溶血反应，故实验时对反应的各个环节应严加控制，统一步骤。
（四）临床意义CH50法检测是补体经典途径的溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平。
如果测定值过低或者完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测C4、C2、C3和C5等成分的含量；严重肝病时血浆蛋白合成能力受损。
营养不良时蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清补体水平下降。
在患系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。
疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；病情稳定后补体水平又反应性增高。
因此补体检测常可作为自身免疫病诊断或是否有疾病活动的参考指标。
细菌感染特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。
抗补体活性测定法
抗补体活性测定法本法系采用免疫溶血反应作指示系统，根据供试品消耗补体所反映出的溶血率变化，测定供试品的抗补体活性。
试剂（1）镁-钙贮备液取氯化钙1.103g、氯化镁（MgCl2·6H2O）5.083g，加水溶解并稀释至25ml。
（2）巴比妥缓冲液贮备液取氯化钠41.5g、巴比妥钠5.1g，加水800ml溶解。
用1mol/L 盐酸溶液调pH值至7.3，加镁-钙贮备液2.5ml，加水稀释至1000ml，用0.22μm膜滤过，4℃保存备用。
（3）明胶巴比妥缓冲液（GVB）取明胶0.625g，加水30ml煮沸使溶解，加巴比妥缓冲液贮备液100ml，再加水稀释至500ml，新鲜制备，当天使用。
（4）阿氏液（Alsever’s液）取枸橼酸0.5g、枸橼酸钠8.0g、葡萄糖20.5g、氯化钠4.2g，加水溶解并稀释至1000ml（pH6.2左右）。
根据一次采羊血需要量将该溶液分装于采血瓶中，116℃蒸汽灭菌10分钟（灭菌后，尽快释放蒸汽）。
放冷后置4℃冰箱保存备用。
（5）绵羊红细胞由绵羊颈静脉无菌采集全血适量，与等体积的阿氏液混合，无菌分装，4℃保存一周后方可使用。
（6）溶血素兔抗羊红细胞血清。
（7）豚鼠血清（补体）取10只以上豚鼠血清，混合，4℃离心除去血细胞，分装，-70℃保存，也可冻干保存。
豚鼠血清每1ml中的补体总活性应不低于100CH50。
5%羊红细胞悬液制备取绵羊红细胞适量，用明胶巴比妥缓冲液至少洗3次后，悬浮于适量明胶巴比妥缓冲液中。
取0.2ml红细胞悬液，加至2.8ml水中，待红细胞完全溶解后照紫外-可见分光光度法（附录ⅡA）在波长541nm处测定吸光度，根据下列公式，将该溶液的吸光度调节至0.62±0.01（每1ml红细胞悬液含红细胞1×109个）。
V f = V i×A————0.62式中Vi 为稀释前红细胞悬液体积，ml；A为稀释前红细胞溶解液吸光度；V f为稀释后红细胞悬液体积，ml。
中药抗补体活性研究进展
中药抗补体活性研究进展抗补体活性是中药研究的热点之一。
补体系统是人体免疫系统的重要组成部分，主要包括补体激活途径、补体溶解作用和细胞毒作用。
当补体途径受到激活时，补体蛋白会逐渐形成一个复杂多样的分子网络，引发一系列生理和病理反应，如炎症、组织损伤、自身免疫等。
因此，抑制补体系统的激活和功能，已成为治疗多种疾病的策略之一。
本文就中药抗补体活性研究进展进行综述。
1. 中药抗补体的理论依据中药在抗补体方面的研究，在一定程度上是基于它们治疗传统医学所依据的理论和经验。
根据传统中医学的理论，中药内气、外气、营血、津液、气血等与人体诸系统有着密切的联系。
中药的药效作用是通过影响人体的整体环境和调节疾病呈现的整体模式来产生的。
中药抗补体活性的研究依据中医理论，可能是由中药材的本质性能引起的，如寒凉、温补、滋养等。
2.1 杜仲杜仲有助于预防心血管疾病、高血压和糖尿病。
研究表明，杜仲具有显著的抗补体活性和抗炎症作用。
同时，杜仲中的活性成分也已被分离鉴定。
2.2 鹿茸鹿茸的中药成分已有研究表明具有抗补体活性。
鹿茸中的多糖类成分被证明具有较强的抗补体作用，并能减轻补体激活所引起的炎症反应。
2.3 青蒿青蒿也是一种潜在的抗补体剂，它的主要活性成分是青蒿素。
研究表明，青蒿素具有抑制补体系统激活的作用，能通过抑制补体蛋白C3切割酶的活性来发挥抗补体作用。
2.4 地黄地黄是中药材，已被广泛地应用于临床实践中。
地黄提取物在体外实验中显示出了很好的抗补体活性。
2.5 桂枝3. 结论总体来说，中药抗补体活性研究已经取得了一些进展。
然而，中药抗补体活性的研究存在许多限制，比如中药复方具有复杂的组成，难以解析出具有抗补体活性的活性成分。
因此，未来需要进行更深入的研究才能完全探究中药的抗补体活性，并在未来治疗相关疾病的临床应用上得到广泛应用。
补体活性检测、补体参与的溶血试验
补体活性检测、补体参与的溶血试验理解：1.补体的概念和性质2.补体的三条活化途径基本原理掌握：1.血清补体总活性测定的实验原理、实验方法2.补体结合实验的实验原理、实验方法3.各种补体检测方法的临床应用一、补体性质与活化途径（一）二、补体的概念补体（Complement，C）：是一组存在于血液和组织液中，具有级联酶促反应特征、不耐热的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充成分（二）补体系统的组成补体固有成分：如C1(q、r、s)、C2、C3……C9补体调节蛋白：如B因子、D因子、P因子、H因子补体受体：C3R，CR1，CR2等（三）补体的激活途径经典激活途径、旁路活化途径（四）补体的生物学功能1.细胞毒溶菌作用2.调理作用：C3b、iC3b、C4b3.炎症介质作用：C3a、C5a、C567生物学检测：总补体活性检测、单个补体活性检测免疫学检测：单个补体成分检测、补体受体成分检测二、血清补体总活性测定1.补体总活性测定原理反应系统的组成：抗原+Antibody->活化补体↓↓↓绵羊红细胞+溶血素+待检测补体↓溶血反应(1)溶血反应：通过经典途径或旁路途径激活的补体，作用于致敏红细胞，使红细胞表面形成若干孔，水分等进入红细胞，引起红细胞的肿胀破裂而溶血(2)CH50检测原理在溶血反应中，补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系以溶血百分率为纵坐标，相应补体含量为横坐标，溶血程度对补体含量依赖呈特殊的S型曲线以50％溶血作为终点指标，比100％溶血更为敏感，这一方法称为补体50％溶血试验（CH50）(3)CH50（50% complement hemolysis）：补体总活性测定方法，以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，故称补体50％溶血试验（CH50）2.实验材料(1)绵羊红细胞①使用等量或两倍的阿氏保存液混合，便于抗凝和储存②临用前生理盐水洗涤红细胞③使用浓度一般为2~5％(2)配制50％溶血标准管①2％SRBC悬液0.5ml+2.0ml蒸馏水使其溶解②加入2.0ml1.8％NaCl溶液校正为等渗溶液③加入2％SRBC溶液0.5ml，即为50％溶血状态(3)溶血素（抗SRBC Ab）①用SRBC免疫家兔得到兔抗SRBC血清②试验前应预先加热（56℃，30min），灭活补体③滴定溶血素的效价：产生完全溶血的最高稀释度为溶血素的效价(4)缓冲液①磷酸盐缓冲液或巴比妥缓冲液②pH应调至7.2-7.4之间③适量氯化钠保持等渗④并适量加入一些Ca2+和Mg2+(5)补体①作为待检对象：标本必须新鲜②作为主要试剂（单个补体检测）：多采用豚鼠血清，必须新鲜-70℃可保存数月，避免反复冻融存在个体差异, 三只以上血清混合使用3.CH50检测方法判定标准与计算标准：选择溶血程度与50％溶血的标准管相近的两管，以溶血程度最接近标准管的那一管定为终点管计算：CH50(U/ml）＝(1/血清用量）×稀释倍数参考范围：50-100 U/ml4.临床意义CH50主要检测的是经典途径的补体溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平测定值过低或完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测血清中C4、C2、C3、C5等单个成份的含量三、单个补体成分的测定1.单个补体成分的检测对象主要包括：C3、C4、 C1q、B因子等2.测定方法：溶血法（检测单个补体的溶血活性）免疫化学法（测定补体含量）3.试验方法致敏SRBC+反应系统补体（缺待检成分）→不溶血致敏SRBC+反应系统补体（缺待检成分）+待检血清→溶血4.溶血法(1)原理：抗原与其特异性抗体（IgG、IgM型）结合后，可激活补体导致细胞溶解(2)组成：①试剂指示系统（致敏SRBC）②试剂补体系统（待检补体缺失）③待检血清（是否含待检补体？）(3)试剂补体系统选用先天或人为导致的缺乏某单一补体成分的动物或人血清作为试剂，如人缺C2血清、豚鼠缺C4血清、小鼠缺C5血清、兔缺C6血清等(4)应用与评价①诊断补体某单个成分缺失或其含量正常但无溶血活性的先天性补体缺陷②定性方法，检测单个补体成分③无需特殊仪器，快速，但灵敏度低，影响因素多四、补体结合试验（complement fixation test，CFT）1.反应系统的组成：抗原+Antibody->活化补体→溶血反应2.概念补体结合试验（complement fixation test，CFT）：将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法3.原理(1)三个系统（包括5个成分）：①反应系统：已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）②补体系统：C1-9及其缓冲液③指示系统：SRBC与相应溶血素（SRBC抗体）常预先混合形成致敏红细胞(2)补体作用无特异性，既可与反应体系中的抗原抗体复合物结合，也能与SRBCs结合(3)两个阶段：第一步：反应系统与补体系统作用第二步：指示系统（SRBCs）与剩余补体反应4.试验方法结果判定：(1)补体对照管 2U全溶，1U为全溶或略带少许RBC，0.5U应不溶(2)若0.5U补体对照管出现明显溶血，表示补体用量过多；如2U不出现溶血，表示补体用量不够(3)受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性5.试验试剂(1)抗原和抗体的效价方法：方阵法进行滴定选择抗原与抗体二者都呈强阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（1单位）在正式试验中，抗原一般采用2－4单位，抗体为4个单位(2)补体效价的滴定①一般用豚鼠补体②每次试验前均应滴定③温育后，能产生完全溶血的补体最少用量确定为1个单位，正式试验中使用2个单位(3)血清标本的处理①采集血液标本后应及时分离血清，及时检验，或将血清保存在-20℃②血清在试验前应先加热56℃ 30min以破坏补体6.应用和评价(1)优点：①补体活化过程有放大效应，灵敏度较高②可用于定性或半定量检测未知抗原或抗体③试验条件要求低易于普及、结果易判断(2)缺点：①影响因素复杂，操作步骤繁琐②抗体必须为IgM或IgG五、补体测定的临床意义1.检测补体的单个成分及补体的活性测定对于机体免疫系统的功能评价，疾病的诊断与治疗等有重要意义(1)免疫性疾病①C1、C2、C3和Hf等缺陷②Ⅲ型超敏反应中C3aC5a等过敏毒素检测(2)遗传性疾病①C3缺陷导致的感染②C1抑制物缺陷与遗传性血管性水肿③I因子、H因子缺陷与肾小球肾炎等2.补体含量继发性降低的疾病(1)补体消耗增多：SLE、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎、移植排斥反应等(2)细菌性感染，激活补体替代途径导致补体水平降低(3)大面积烧伤、大出血和肾病综合征等导致体液大量丧失(4)补体合成不足：急慢性肝炎、肝硬化、肝癌及营养不良等小结1.CH50试验的原理及方法学评价2.补体结合试验的原理及结果解释复习思考题：1.名词概念：Complement、CH50 test、CFT（Complement Fixation Test）2.思考题：请例举其他有补体参与的免疫学检测技术或方法。
潞党参多糖的抗补体活性分析
潞党参多糖的抗补体活性分析李平;胡建燃;史宝忠【期刊名称】《生命科学研究》【年(卷),期】2018(022)002【摘要】以山西上党地区著名道地药材潞党参为材料,分析其多糖成分的抗补体活性.首先,通过细胞溶血实验,分析潞党参多糖(Lu Codonopsis pilosula polysaccharides,LCPP)对补体经典途径和旁路途径的影响.结果表明,LCPP具有一定抗补体活性,CH50值为2.061± 0.127 mg/mL,AP50值为6.725±0.895mg/mL,并表现为明显的量效关系.随后,利用人HepG2细胞,通过实时定量PCR实验,分析LCPP对补体系统重要成分C3表达的影响,发现LCPP能够显著抑制肿瘤坏死因子α (tumornecrosis factor-α, TNF-α)诱导的人HepG2细胞中C3的表达.以上结果提示,潞党参是一种潜在的补体抑制剂,在治疗补体过度激活所导致的自身免疫性疾病方面具有应用前景.%The anti-complementary activity of polysaccharides from Lu Codonopsis pilosula (LCPP) was inves-tigated in this paper. The hemolysis assay was used to evaluate the effects of LCPP on the classical and alternative pathways of complement activation. It proved that LCPP repressed the activity of complementary system in a dose -dependent manner, and the CH50 and AP50 values were 2.061±0.127 mg/mL and 6.725± 0.895 mg/mL, respectively. Furthermore, real-time PCR was used to assess the effect of LCPP on comple-ment component C3 expression in human HepG2 cells. The results showed that LCPP suppressed C3 expres-sion in TNF-a-mediated HepG2 cellssignificantly. Therefore, Lu Codonopsis pilosula is a potential anti-complementary agent, and may be used in the treatment of autoimmune diseases.【总页数】7页(P136-142)【作者】李平;胡建燃;史宝忠【作者单位】长治学院生物科学与技术系,中国山西长治 046011;长治学院生物科学与技术系,中国山西长治 046011;长治学院生物科学与技术系,中国山西长治046011【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R97【相关文献】1.潞党参多糖的提取及其抗氧化活性分析 [J], 胡建燃;郭阳;李平2.潞党参多糖的提取与精制工艺研究 [J], 马红燕;高宏伟;刘素波3.潞党参多糖的提取及含量测定 [J], 雷孝义;曾雪花4.潞党参多糖对宫颈癌细胞SiHa增殖和迁移的影响 [J], 胡建燃;李平;雷海英;刘贤瑞5.影响静注免疫球蛋白抗补体活性分析 [J], 郭中平;孙丽惠;黄凤琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中药抗补体活性研究进展
中药抗补体活性研究进展
中药药材在抗补体活性方面的针对性研究可以追溯到上世纪80年代，其中典型的代表是黄芩素的研究。
此后，随着中药抗炎和免疫调节作用的研究不断深入，越来越多的中药，如黄连、苦参、地龙等，被发现具有抑制补体活性的能力。
最近，一些高通量筛选方法
（如酵母表面显示技术和化学组合策略）被用来筛选抑制补体活性的中药药物，其中不少
被证明具有良好的活性。
常见中药抗补体活性成分及分子机制
苦参碱是一种在苦参中广泛存在的生物碱类化合物，已被证明具有显著的抑制补体活
性的作用。
苦参碱的抗补体作用主要是通过直接作用于C3酯酶和C5酯酶等补体酶，从而
影响膜攻击复合体的形成。
此外，苦参碱还能够调节NF-κB途径，降低TNF-α等炎症介
质的表达，进一步抑制补体的激活。
三七是一种中药养血生发的药材，近年来也被发现具有抑制补体激活的能力。
三七中
的黄酮类化合物，如齐墩果苷和三七皂苷，被认为是起到这一作用的主要成分之一。
这些
化合物能够抑制补体C3的降解速度，减缓补体激活的过程，并且能够抑制NF-κB途径及MAPK途径的激活，调节炎症反应的发生。
结语
随着中药研究的不断深入，越来越多的中药被证明具有抑制或调节补体活性的能力。
研究认为，这些天然药物基于其较好的生物学活性和低副作用可能对补体相关疾病的治疗
有良好的应用前景。
因此，研究中药抗补体活性成分的分子机制，有助于揭示其作用机制，为其在疾病治疗和预防中应用提供科学依据。
叶下珠抗补体活性研究
叶下珠抗补体活性研究朱芳娟;侯灵莉;孙黔云;杨庆雄【摘要】目的研究叶下珠的抗补体活性及活性成分.方法以活性筛选跟踪为向导,利用溶剂萃取和色谱方法对叶下珠提取物进行分离纯化,采用13C-NMR波谱法结合文献数据鉴定化合物结构,测定其抑制补体的活性及可能的机制.结果筛选出叶下珠醇提取物的乙酸乙酯部位为抗补体活性部位,从中分离得到2个抗补体活性成分,经鉴定为柯里拉京和鞣花酸.乙酸乙酯部位和2个化合物均明显抑制补体经典途径的溶血活性,其IC50分别为53.77、176.54、102.23 mg ·L-1,但对补体旁路途径溶血的抑制作用不明显.进一步研究表明,乙酸乙酯部位和2个化合物干扰了补体经典途径成分C1、C2、C4形成C3转化酶.结论叶下珠的多酚组分是其主要的抗补体活性成分,其机制与这些组分影响经典途径C3转化酶的形成有关.%Aim To explore the anticomplementary ac-tivity and active constituents of Phyllanthus urinaria. Methods Being guided by bioactive screening,the anticomplementary constituents of P.urinaria were iso-lated and purified by solution partition and chromato-graphic techniques,and their structures were identified by 13C-NMR spectrum and the comparison of reported data. The anticomplementary activity and possible mechanism were assayed.Results The EtOAc fraction of the methanol extract of P.urinaria was shown to be the active fraction,and two compounds were purified from the fraction and were identified as corilagin and ellagic acid.The EtOAc and the two compounds signifi-cantly inhibited the hemolysis of the complement classi-cal pathway,with IC50values of 53.77 mg·L-1, 176.54 mg·L-1and 102.23 mg·L-1,respectively. While they just showed slight effecton inhibiting the hemolysis of the complement alternative pathway. All of them affected the formation of C3 convertase of the classical pathway. Conclusions The polyphenols are main anticomplentary constituents of P. urinaria,and its mechanism is related to inhibiting formation of C3 convertase of the classical pathway.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(034)005【总页数】5页(P686-690)【关键词】叶下珠;活性成分;抗补体;经典途径;替代途径;C3转化酶【作者】朱芳娟;侯灵莉;孙黔云;杨庆雄【作者单位】贵州师范大学化学与材料科学学院,贵州贵阳 550001;贵州师范大学化学与材料科学学院,贵州贵阳 550001;贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州贵阳 550014;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室,贵州贵阳 550014;贵州师范大学喀斯特研究院/国家喀斯特石漠化防治工程技术研究中心,贵州贵阳 550001【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R284.1;R392.11;R977.3叶下珠(Phyllanthus urinaria)又名阴阳草、油甘草、珍珠草等，为大戟科(Euphorbiaceae)叶下珠属一年生草本植物，广泛分布于全世界热带及亚热带地区如泰国、菲律宾、非洲等地，在我国主要分布于长江以南地区[1]。
检测补体活性的方法
年
第
期
.
,
,
.
一
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一
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入
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,
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,
,
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,
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, 二 了
.
一
一
检 测 补 体 活 性 的 方 法
摘要
补 体 激 活 在 免 夜 病 理 学和 炎 症 中起 重 要 作 用
经 典 途 径 或 旁路 途 径
种 方 法 不 够 敏感
随 着 半 自动 方 法 的 建 立
也可 以
和 遗传 缺 陷有 关
体 的 消耗
较宽
,
.
另 一方 面
,
,
急 性 期反 应 性
于 自动 化 和 大 批 量 分 析
.
植 物血 凝 素 伴 刀 豆
.
.
补 体 蛋 白合成 增 加
.
可 以掩 盖 炎 症 情 况 下 补
,
球蛋白 对除
作用
离子 强
反
,
火 箭 免 疫 电泳 效果 较 差
然而
,
.
度
,
,
抗体
溶血 素
,
量
,
医学免疫学：血清总补体溶血活性测定
CH50 assay
补体是抗体发挥溶细胞作用的补充条件，参 与维护机体内环境的稳定。
实验原理
绵羊红细胞（ SRBC）于相应抗体（溶血 素）结合形成的致敏红细胞可激活补体， 从而导致SRBC溶解。
当致敏红细胞浓度恒定时，溶血程度与补 体活性成特殊的S形曲线。
溶 血 程 度 （ ％ ）
hemolysis 50％），简称为CH50 。
主要试剂与器材
pH7.4 巴比妥缓冲液（BBS） 2U溶血素 2％SRBC 待测血清、 离心机、试管、移液管（1ml、2ml和
5ml）、恒温水浴箱、分光光度计、比色杯 等
实验步骤
1.稀释待测血清吸取待测血清0.2ml，加 BBS 3.8ml，将血清1：20稀释。（已稀释 好）
补体的量（ ml）
在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的 变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血 对补体量的变化不敏感。
在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡， 即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度 也会发生较大的改变，也就是说对补体量 的变化非常敏感。
故采用50％溶血作为终点指标要比 100％溶血敏感的多，这一方法称为 补体50％溶血（complement
再用分光度计于波长542nm进行比色测定。以缓 冲液为空白对照，校正零点，找出透光率与50% 溶血标准管最接近的一管，根据该管的血清用量， 求出总补体溶血活性。
总补体活性（U/mL）＝
1
血清用量
×稀释倍数
实验结果
写出目测后与50％溶血标准管的溶血程度 最接近的两管的试管的编号。
写出标准管和选出的两管的透光率，判断 哪一管与标准管的透光率接近。
计算总补体活性。
注意事项
待测血清必须新鲜，如放置室温2h以上，可使补体活性下 降。
静脉注射用免疫球蛋白抗补体活性试验条件的比较
静脉注射用免疫球蛋白抗补体活性试验条件的比较
王立兰;卢连玉
【期刊名称】《中国生物制品学杂志》
【年(卷),期】1991(0)1
【摘要】目前,静脉注射用免疫球蛋白（IVIG）抗补体活性（ACA）试验方法较多,有2CH<sub>50</sub>、5CH<sub>50</sub>及100 CH<sub>50</sub>等方法,虽都自称源于Mayer法,但实际应用中已做了较大修改。
目前国内使用的方法及条件也不完全一样。
为此,我们以100 CH<sub>50</sub>法为基础,对一些不同的试验条件进行了比较,供同行们参考。
1.Mayer介绍绵羊红血球（SRBC）用EDTA洗涤的目的主要是为了除去SRBC表面上的C<sub>1</sub>。
而而
C<sub>1</sub>是一种不耐热补体,采集SRBC放置一周后才能使用,在此期内SRBC表面上的C<sub>1</sub>
【总页数】1页(P28-28)
【关键词】SRBC;抗补体活性;免疫球蛋白;试验条件;Mayer;溶血素;致敏;IgG;试验结果;任意选择
【作者】王立兰;卢连玉
【作者单位】中国药品生物制品检定所
【正文语种】中文
【中图分类】R977
【相关文献】
1.静脉注射用免疫球蛋白的抗补体活性及部分免疫学特性测定 [J], 王立兰;卢连玉
2.应用ELISA法检测静脉注射用人血免疫球蛋白抗补体活性 [J], 任跃明;程雅琴;倪道明
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附录ⅨK抗补体活性测定法
本法系采用免疫溶血反应作指示系统，根据供试品消耗补体所反映出的溶血率变化，测定供试品的抗补体活性。
试剂（1）镁-钙贮备液取氯化钙1.103g、氯化镁（MgCl2·6H2O）5.083g，加水溶解并稀释至25ml。
（2）巴比妥缓冲液贮备液取氯化钠41.5g、巴比妥钠5.1g，加水800ml溶解。
用1mol/L 盐酸溶液调pH值至7.3，加镁-钙贮备液2.5ml，加水稀释至1000ml，用0.22μm膜滤过，4℃保存备用。
（3）明胶巴比妥缓冲液（GVB）取明胶0.625g，加水30ml煮沸使溶解，加巴比妥缓冲液贮备液100ml，再加水稀释至500ml，新鲜制备，当天使用。
（4）阿氏液（Alsever’s液）取枸橼酸0.5g、枸橼酸钠8.0g、葡萄糖20.5g、氯化钠4.2g，加水溶解并稀释至1000ml（pH6.2左右）。
根据一次采羊血需要量将该溶液分装于采血瓶中，116℃蒸汽灭菌10分钟（灭菌后，尽快释放蒸汽）。
放冷后置4℃冰箱保存备用。
（5）绵羊红细胞由绵羊颈静脉无菌采集全血适量，与等体积的阿氏液混合，无菌分装，4℃保存一周后方可使用。
（6）溶血素兔抗羊红细胞血清。
（7）豚鼠血清（补体）取10只以上豚鼠血清，混合，4℃离心除去血细胞，分装，-70℃保存，也可冻干保存。
豚鼠血清每1ml中的补体总活性应不低于100CH50。
5%羊红细胞悬液制备取绵羊红细胞适量，用明胶巴比妥缓冲液至少洗3次后，悬浮于适量明胶巴比妥缓冲液中。
取0.2ml红细胞悬液，加至2.8ml水中，待红细胞完全溶解后照紫外-可见分光光度法（附录ⅡA）在波长541nm处测定吸光度，根据下列公式，将该溶液的吸光度调节至0.62±0.01（每1ml红细胞悬液含红细胞1×109个）。
V f = V i×A
————
0.62
式中Vi 为稀释前红细胞悬液体积，ml；
A为稀释前红细胞溶解液吸光度；
V f为稀释后红细胞悬液体积，ml。
溶血素滴定按表1稀释溶血素。
从1∶75稀释的溶血素开始，1.0ml不同稀释度的溶血素分别与5%羊红细胞悬液1.0ml混合，37℃放置30分钟后，取0.2ml，加明胶巴比妥缓冲液1.10ml，稀释的豚鼠补体溶液（如150倍稀释补体）0.2ml，37℃放置60分钟后，以每分钟2000转离心5分钟，吸取上清液，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅱ A）于波长541nm处测定各管吸光度。
每个稀释度做2管。
同时再做3管未溶血对照管（明胶巴比妥缓冲液1.4ml，加5%羊红细胞悬液0.1ml），3管全溶血管(水1.4ml加5%羊红细胞0.1ml)，同法操作。
按下式计算各管溶血率（Y），以Y值为纵坐标，以不同溶血素稀释度为横坐标作图，从而确定敏化羊红细胞所用的溶血素的稀释度。
选择增加溶血素的量也不影响Y值的溶血素的稀释度，为每1ml含1个最小溶血单位（即每1ml含1MHU）。
最大溶血率应在
50%～70%范围，否则试验不成立。
Y =各管吸光度-未溶血对照管吸光度
______________________________ ×100%
全溶血管吸光度-未溶血对照管吸光度
最适敏化的羊红细胞（EA）的制备量取每1ml含2MHU的溶血素（A）适量，缓慢注入等体积的5%羊红细胞（E）悬液中，37℃放置15分钟后，2～8℃保存，6小时内使用。
滴定豚鼠血清中补体活性用明胶巴比妥缓冲液适当稀释豚鼠血清，然后按表2滴定补体。
以补体用量的对数对Y/（1－Y）的对数作直线回归，从而求出直线回归方程的截距（a）、斜率（b）和相关系数（r），补体活性按下式计算
补体活性（CH50/ml）=(1/X)×(补体稀释倍数/5)
式中1/X为a值反对数的倒数。
抗补体活性测定根据测得的豚鼠血清补体活性，用明胶巴比妥缓冲液稀释成每1ml 含100CH50溶液，按表3制备培养混合物。
表3中静注人免疫球蛋白(IVIG)是按每1ml含50mg浓度计算的。
如果IVIG的浓度不是每
1ml含50mg时，则按下式计算IVIG的加量(V)。
然后再根据IVIG的实际取量计算明胶巴比妥缓冲液的加量，但要保持供试品加缓冲液的总量为0.8ml。
将此混合物在37℃放置60分钟后，取0.2ml加9.8ml明胶巴比妥缓冲液(50倍稀释)，测定剩余补体活性。
V(ml)= 10mg
________________________________
供试品每1ml中IgG含量（mg）
表3供试品及补体对照管制备
供试品管/ml 补体对照管/ml
供试品(50mg/ml) 0.2 —
明胶巴比妥缓冲液0.6 0.8
补体(100CH50/ml) 0.2 0.2
按下式计算供试品抗补体活性。
D为每1ml含80 ～120 CH50时，试验成立。
供试品抗补体活性（%）= D-G
_____ ×１００％
D
式中D为补体对照管剩余补体活性，CH50/ml；
G为供试品管剩余补体活性，CH50/ml。
【附注】（1）洗红细胞时，务必将白细胞弃掉。
（2）敏化红细胞时一定要慢慢轻摇。
（3）仅允许使用澄清明胶溶液。