溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌
氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%
过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。
3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混
2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，
36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典
型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、 圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 3 鉴定 3.1 分纯培养
挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接 种TSB增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
3.5 杆菌肽敏感试验
取可疑菌纯培养物，在0.5 mL灭菌生理盐水 中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于 哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹取 杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h，如出现抑菌圈即为敏感，同 时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血 性链球菌为杆菌肽敏感。
3.6 可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定 卡对可疑菌落进行鉴定。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
Байду номын сангаас报告
溶血性链球菌的检验
预防措施
采取积极的预防措施，如 加强个人卫生、避免接触 可能的感染源等，以降低 感染风险。
病情监测
对患者进行密切监测，及 时发现并处理可能出现的 并发症和异常情况，确保 患者安全。
05
注意事项与建议
实验室安全与防护措施
实验室防护
进行溶血性链球菌检验时，实验 操作区域应保持通风，工作人员 需佩戴一次性手套、实验服、口
溶血性链球菌的检验
2023-11-10
contents
目录
• 简介 • 检验方法 • 检验流程 • 结果分析 • 注意事项与建议
01
简介
溶血性链球菌的定义
• 溶血性链球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，其特点是在培养过 程中能产生溶血现象。它是人体常见的病原菌之一，可引起多 种感染疾病，包括扁桃体炎、咽炎、丹毒、猩红热等。
03
检验流程
样品采集与处理
采集咽拭子、血液、尿液等样 品，确保采集方法和操作规范 。
将采集的咽拭子放入适量运输 培养基中，血液和尿液可直接 接种培养基。
在运输培养基中保存样品，尽 快送至实验室进行检测。
细菌分离与培养
将咽拭子接种至5%羊血平板和 巧克力平板上，血液和尿液接种
至巧克力平板上。
在35℃、5%CO2的环境中培养 24-48小时，观察细菌生长情况
04
结果分析
数据分析与解读
实验室数据评估
对实验数据进行分析，包括细 胞形态、生化反应、药敏试验 等，以确定溶血性链球菌的特
性。
数据对比与参照
将实验数据与已知的正常值或参考 范围进行对比，以确定是否存在异 常。
综合分析
结合患者的病史、临床症状和实验 室数据，进行综合分析，以确定病 情的严重程度和可能的治疗方案。
链球菌属的特性及其检验
链球菌属的特性及其检验作者：陆德胜来源：《中国当代医药》2010年第31期[摘要] 目的：总结链球菌属的特性及其检验技术，结合临床经验，进一步提高细菌分离及鉴定水平。
方法：采用显微镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。
结果：根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌；按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D等20个群。
结论：链球菌是临床常见的致病菌，正确掌握检验方法，科学地分离和鉴定，有助于临床做出合理的诊治决策。
[关键词] 链球菌属；特性；分离培养；生化反应；血清学试验[中图分类号] R446.5[文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2010）11（a）-080-02链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部，大多数不致病。
其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌，可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病[1]。
另外草绿色链球菌为条件致病菌。
因此，本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一，临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。
现将本属的特性及其检验总结如下：1 资料与方法1.1一般资料本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1 319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例，合计4 247例。
其中门诊患者样本239例，住院患者样本4 008例。
细菌培养阳性结果1 475例，阳性率为34.73%。
其中链球菌属阳性83例，占5.63%。
1.2 检验方法根据不同疾病采集不同标本。
1.2.1 显微镜检查咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初步报告，及时供临床参考。
1.2.2 分离培养血液标本需要先增菌培养，脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。
溶血性链球菌
多数菌株在血清肉汤中培养24h易形成透明质酸的荚膜，继 续培养后消失。该菌不形成芽 胞，无鞭毛，易被普通的碱性 染料着色，革兰氏阳性，老龄 培养或被中性粒细胞吞噬后， 转为革兰氏阴性。
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2、培养特征
需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培 养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大 多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。 最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适 pH为7.4-7.6。
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溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的 化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发 性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、 猩红热、肾小球肾炎。
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、链球菌溶血素：溶血素有O和S两种， O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分 子多肽，分子量较小，故无抗原性。 2、致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热 毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起 局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、 周身不适。
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8
流行病学
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、 粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接 触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食 品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感 染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一 般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性 炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽 局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
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血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明， 表面光滑，有乳光，直径约0.5— 0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型 溶血性链球菌周围有2—4mm界限分明、 无色透明的溶血圈。
溶血性链球菌检验
【GB/T 4789.11—1994】食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3.1 温箱：36±1℃。
3.2 水浴：36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂4.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序（图略）6 操作步骤6.1 样品处理称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36±1℃培养24h，接种血平板，置36±1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌的检验
细菌培养与鉴定
1
将样本接种于选择性培养基上进行培养，如血 平板、巧克力平板等。
2
根据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验等指标 对细菌进行初步鉴定。
3
采用生化试验、血清学试验等方法对细菌进行 进一步鉴定。
血清学试验与结果分析
采用抗链球菌激酶(ASO)等血清学试验检测患者血清中的 抗体水平。
根据抗体滴度及临床诊断标准，对溶血性链球菌感染进行 诊断和分型。
评估疾病风险
通过对溶血性链球菌的检验，可评估疾病的风险程度， 从而为预防和控制疾病提供依据。
指导公共卫生措施
通过对溶血性链球菌的检验，可指导公共卫生措施的实 施，如开展宣传教育、加强消毒隔离等，以预防和控制 疾病的传播。
05
溶血性链球菌检验的未来发展趋势
检测技术的改进与创新
分子生物学技术
随着分子生物学技术的不断发展，基于PCR、基因测序等技术的检测方法将更加灵敏、特 异，有助于更准确地诊断溶血性链球菌感染。
2023
溶血性链球菌的检验
目录
• 溶血性链球菌简介 • 溶血性链球菌的检验方法 • 溶血性链球菌的检验流程 • 溶血性链球菌检验的临床意义 • 溶血性链球菌检验的未来发展趋势
01
溶血性链球菌简介
溶血性链球菌的特性
1 2
革兰氏阳性
溶血性链球菌是一种革兰氏阳性的细菌，这意 味着它具有细胞壁，并且可以被某些抗生素所 杀死。
制定统一的检测方法标准和操作流程，提高不同实验室之间的可比性和结果的准 确性。
规范化
规范实验室操作流程，确保检测结果的可靠性。建立规范的质控体系，对实验室 的检测结果进行严格的质量控制。
检测结果的多参数综合分析与应用
多参数综合分析
溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、 尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，按其在血平板 上溶血能力分类，可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血 性链球菌、丙型溶血性链球菌和亚甲型溶血性链球菌。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清 型90%属于A族链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化 脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流 行性咽炎的爆发性流行。因此，检查食品是否有溶血性 链球菌具有现实意义。
4.链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生激酶素（即溶纤维蛋白酶），此酶能激 活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋 白。
吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加入18h24h，36度培养的链球菌培养物0.5ml及0.25%氯化钙0.25ml，振荡摇 匀，置于36度水浴中10min，血浆混合物自行凝固，然后观察凝固块重 新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h不溶解即为阴性。
食品学院
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明 质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维 蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散 作用，该酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、脂磷壁酸（LTA）：与细菌粘附于宿主细胞表面有关， 大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展 至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞 等细胞膜上均有LAT的结合位点。
食品学院
5.杆菌肽敏感试验 挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子 夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上， 于36度培养18-24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用 已知阳性菌株作为对照。
链球菌属及其检验「微生物检验」
链球菌属及其检验「微生物检验」链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属细菌的知识，欢迎阅读。
⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
溶血性链球菌的检验
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
（三）生化特性
1、均分解葡萄糖产酸。
2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。
3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖 （肺炎球菌分解葡萄糖）。 4、 A群菌对杆菌肽敏感。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
一、生物学特性
（一）形态与染色
1、呈球形或卵圆形，直径 0.5um-1um 链状排列（长短不 一）。 2、 革兰氏染色阳性，衰老培养 物常成阴性。 3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹 膜。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
（二）培养特性
1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加 血清液、腹水等）。 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生 长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链 菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有 乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小， 菌落周围出现溶血环。
链球菌感染的血清学检验
抗链球菌溶血素“O"试验参考范围：免疫比浊法：0～200 u/ml临床评价：1．链球菌溶血素“O”（ASO）是A群链球菌的代谢产物之一，它是一种具有酶活性的蛋白质，能溶解红细胞，也能破坏白细胞和血小板。
溶血素“O”具有很强的抗原性，机体受A群链球菌感染后可产生溶血素“O”抗体，这种抗体可以抑制溶血素“O”的溶血作用。
通过测定血清中ASO水平，有利于A群链球菌感染的诊断。
2．当ASO试验呈阳性反应，且抗体滴度有逐步增高趋势时，即具有诊断参考价值。
主要见于A群链球菌感染后引起的变态反应性疾病，如风湿热、急性肾小球肾炎等，还可见于A群链球菌感染所致的上呼吸道炎症(咽炎或扁桃体炎)。
85％～90％的患者感染后2周左右到病愈后数月至年余血清中均可测到ASO。
应用ELISA可检测患者血清中的IgM型和IgG 型ASO特异性抗体，IgM-ASO多见于感染的急性期，IgG-ASO见于恢复期。
抗体效价逐步下降时为疾病缓解期，抗体恒定在高效价水平多为非活动期。
3．咽拭培养直接分离病原菌是诊断A群链球菌感染的可靠方法，急性风湿热发作时阳性率可高达70％～90％。
进行多项链球菌抗体试验，可提高对A群链球菌感染诊断的准确率。
这些试验包括抗链球菌激酶(ASK)，抗脱氧核糖核酸酶B(ADNase B)，抗链球菌二磷酸吡啶核苷酸酶(ADPNase)和抗透明质酸酶(AH)等，其中ASK试验是新近链球菌感染的一个非常敏感的指标。
其它实验室检查还有红细胞沉降率，血清C-反应蛋白试验，血清补体C3、C4成分测定等，上述项目联合应用对A群链球菌感染所致疾病有一定辅助诊断意义。
4．影响本试验结果的因素(1)单一次试验结果对诊断意义不大。
(2)链球菌溶血素“O”在Ph6.5环境中活性最强，偏酸或偏碱都可影响其活性。
(3)在溶血抑制法中，血清溶血、黄疸、高胆固醇或血清保存过久污染长菌者，皆可致试验结果偏高，胆固醇有抑制溶血素活性的作用。
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划 线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带 为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报 告：有乙型溶血性链球菌生长。
2）链激酶（streptokinase；SK）
3） 链道酶（streptodornase；SD）
2. 所致疾病
淋巴管炎， 化脓性感染 蜂窝组织炎，
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
（2）外毒素类 1）致热外毒素
• 红疹毒素，猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2） 链球菌溶血素
• SLO：对O2敏感。测定SLO抗体含量，可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS：对O2稳定，β溶血环
（3）侵袭性酶 1） 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染；
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性
溶血性链球菌检验操作规程
溶血性链球菌检验操作规程溶血性链球菌（英文简称：S. pyogenes）是一种常见的革兰氏阳性球菌，通常引起咽峡炎、皮肤感染和淋巴结炎等疾病。
准确的检测和鉴定溶血性链球菌对于诊断和治疗这些疾病至关重要。
下面是关于溶血性链球菌检验的操作规程。
一、检验前准备1. 检验人员需佩戴好防护用具，如实验手套、隔离眼镜和口罩。
2. 准备好所需的检验试剂和材料，包括培养基、琼脂培养基、草莓牛血琼脂、货架刀等。
3. 仔细核对标本的标签和信息，确保和病人信息一致。
二、标本采集和处理1. 从患者口咽部或其他可疑感染部位采集标本，如咽拭子或分泌物样本。
2. 将标本稀释或切碎，使其与培养基充分混合。
3. 使用棉签或货架刀，将混合好的标本涂抹在琼脂培养基上。
三、培养和鉴定1. 将含有标本的琼脂培养基置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
2. 观察培养基上是否有溶血环形形成，表明有溶血性链球菌的存在。
3. 将溶血环形的菌落或单个菌落划取到草莓牛血琼脂上。
4. 再次置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
5. 观察草莓牛血琼脂上生长的菌落形态和特征。
6. 进一步进行革兰染色，观察菌形和细胞特征。
四、药敏试验对已鉴定的溶血性链球菌，可以进行药敏试验以确定对何种抗生素敏感。
1. 用细菌悬浮液调整到0.5～0.6麦克法尔兰（McFarland）标准。
2. 使用含有不同抗生素的纸片置于琼脂平板上。
3. 用择菌钳将纸片粘贴于琼脂平板上。
4. 将准备的溶血性链球菌悬液均匀涂抹在琼脂平板上。
5. 将琼脂平板置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
6. 观察菌落的生长和抗生素纸片周围的抑制圈，根据直径大小判断菌株的抗药性。
五、结果判定和记录根据溶血环形、菌落形态、革兰染色和药敏试验的结果，判定溶血性链球菌的存在和鉴定结果，并将结果准确记录在检验报告中。
操作规程中的注意事项：1. 检验过程中应严格遵守无菌操作，避免交叉感染。
2. 确保检验室设备和培养基的质量，以及培养温度和时间的准确控制。
β型溶血性链球菌的测定
一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃；b)冰箱：2℃~5℃；c)厌氧培养装置；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)显微镜：10×～100×；g)无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶；i)无菌培养皿：直径90mm；j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃；l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙（CaCl2）溶液5.8 3%过氧化氢（H2O2）溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g（ml），加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000 r/min均质；或加入装有225ml mTSB的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃，厌氧培养18h～24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂，36℃±1℃，厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个（如小于5个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃，培养18h～24h。
溶血性链球菌检验
增菌
培养
检样处理
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具 液体样品：25mL（25mL吸量管） 塞广口瓶
+
225mL生理盐水（量筒），混匀。
注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至 7.0。
增菌
取上述混合液5mL（吸量管） 50mL葡萄糖肉浸液肉汤 培养（于36℃±1℃培养24h）
葡萄糖肉浸液 肉汤
培养
1. 取已培养好的增菌液1环 血平板划线 培养（于36℃±1℃培养24h）
葡萄糖 肉浸液 肉汤 （阳性）
血平板
开始处
开始处
平板划线示意图
2. 取有典型菌落的阳性血平板（在放阳性
物品处）
灰白色，半透明 或不透明，表面 光滑，周围有透 明圈
血平板划线（分纯）
于36℃±1℃培 养18~24h
革兰氏 染色
在无菌室中固定， 到微生物实训室染 色
典型菌落 （同一菌落）
血平板涂布 贴杆菌肽试纸 （2~3片）
于36℃±1℃ 培养18~24h
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结
晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒
染—— 乙醇脱色—— 水洗——
吸干—— 番红或沙黄复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检
• 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无
谢谢！
稀释瓶或具取上述混合液5ml吸量管50ml葡萄糖肉浸液肉汤培养于361培养24h葡萄糖肉浸液肉汤培养取已培养好的增菌液1环血平板划线培养于361培养24h葡萄糖肉浸液肉汤阳性血平板开始处开始处取有典型菌落的阳性血平板在放阳性物品处灰白色半透明或不透明表面光滑周围有透血平板涂布贴杆菌肽试纸典型菌落同一菌落于361培养1824h于361培养1824h在无菌室中固定到微生物实训室染染乙醇脱色水洗吸干番红或沙黄复染水洗干燥镜检涂片
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食品安全检验技术（微生物部分） 溶血性链球菌检验
（2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性 链球菌接种血平板，在 划线处贴附杆菌肽纸片， 36℃，18h，出现抑菌带 为阳性，（可推测为乙 型溶血性链球菌）。
四、报告
根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。
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食品安全检验技术（微生物部分） 溶血性链球菌检验
一、生物学特性
（一）形态与染色
1、呈球形或卵圆形，直径 0.5um-1um 链状排列（长短不 一）。 2、 革兰氏染色阳性，衰老培养 物常成阴性。 3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹 膜。
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第四天 鉴定
1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定
（1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
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（三）生化特性
1、均分解葡萄糖产酸。 2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。 3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖 （肺炎球菌分解葡萄糖）。 4、 A群菌对杆菌肽敏感。
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（二）培养特性
1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加 血清液、腹水等）。 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生 长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链 菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有 乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小， 菌落周围出现溶血环。
血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面 光滑，有乳光，直径约0.5mm~0.75mm，为圆形突起 的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm~4mm界 限分明，无色透明的溶血圈。
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第一天前半天 规格名称
预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
2个 7支 1支 3支 12支 28套 1支
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二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
混悬液直接划线于血平板36±1℃培养24h。
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食品安全检验技术（微生物部分） 溶血性链球菌检验
第二天 接种平板进行分离培养 从肉汤中接种血平板， 36±1℃培养24h。
第三天 分纯培养 从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突 起的细小菌落，在血平板上分纯 ， 36±1℃培养24h。
溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、 呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血 症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等 变态反应。
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溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种：
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（一）实验内容
样品处理→增菌培养→分离培养→ 纯化培养→生化鉴定→报告
（二）实验过程
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食品安全检验技术（微生物部分） 溶血性链球菌检验第一天 样品处理和增菌培养
1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素
抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
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三、溶血性链球菌的的检验
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一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓 性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜 禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
第一天后半天 1、样品处理
无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有225mL灭菌生 理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min，制成混悬液 。 2、增菌培养
吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（如 检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36±1℃培养24h。 3、分离培养