初始污染菌实验方法验证(文件模板)
初始污染菌检验方法验证方案
初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号：编制/日期：审核/日期：批准/日期：XXXX有限公司1.验证目的---------------------------------------------------------32.范围-------------------------------------------------------------33.验证小组成员及职责-----------------------------------------------34.参考资料---------------------------------------------------------35.检验仪器及器具---------------------------------------------------36.菌种信息---------------------------------------------------------47.试验环境---------------------------------------------------------48.产品选择---------------------------------------------------------49.方法适用性验证---------------------------------------------------410.修正系数（校正因子）--------------------------------------------611.测试结果--------------------------------------------------------712.再验证周期------------------------------------------------------713.结论------------------------------------------------------------714.附表------------------------------------------------------------81.验证目的证明本公司医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性。
2024初始污染菌实验方法验证
2024初始污染菌实验方法验证
2024年初始污染菌实验的方法验证可以包括以下几个方面的内容：
实验目的、实验设备和材料、实验步骤、实验结果及讨论等。
实验目的：验证2024年初始污染菌实验的方法是否可靠、有效，能
够准确测定菌的数量和种类。
实验设备和材料：实验设备包括培养皿、培养基、试管，实验材料包
括空气样品、表面拭子、蘑菇、硒酸纸等。
实验步骤：以下为可能的实验步骤，但实际步骤可能因具体实验设计
而有所不同。
1.收集空气样品：在实验环境中放置一定数量的培养皿，在一定时间
内吸取一定体积的空气样品。
2.采集表面拭子：使用含有菌落细栏的纹理拭子通过轻轻刷拭的方式
采集表面的微生物。
3.采集其他样品：根据具体实验设计，采集其他可能受污染的样品，
如食品、水源等。
4.制备培养基：按照一定比例配制适当的培养基，可以包括营养琼脂、血琼脂等。
5.接种培养基：将收集到的空气、表面拭子等样品分别接种到培养基中。
6.孵育培养基：将接种好的培养基置于恰当的温度和湿度条件下，进
行孵育。
7.菌落计数：根据特定的方法和标准，对培养基上的菌落进行计数，并记录下来。
8.分离和鉴定菌株：对菌落进行分离，选取单个菌落进行进一步的培养和鉴定，可以通过形态学、生理生化等方法鉴定。
实验结果及讨论：根据实验结果，分析验证的方法在初始污染菌实验中的可靠性和准确性，讨论可能存在的问题和改进方向，提出实验方法的优化建议。
总结：通过以上实验验证方法，可以确保2024年初始污染菌实验结果的准确性和可靠性，为后续的相关研究和实验提供了基础数据和方法参考。
2020初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：5.1实验操作人员确认；5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。
6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
初始染菌验证方案
初始染菌验证1.概述无菌试验是为测定必须经灭菌处理物品带微生物情况的一种试验。
由于多种原因及遵照概率函数，一些微生物总以有限机会得以生存，灭菌结果只能把微生物的存活概率降到最低限度(10－6)，即允许在100万个试验对象中，有1个以下的有菌生长就为无菌；另外无菌试验只能是一种抽样检验，所以其结果的可靠性是有限的，应与灭菌程序监测等结合进行才较安全。
选取样本量的大小：无菌试验抽样的数量取决于：(1)总体(被灭菌物品)的数量；(2)污染率；(3)原始微生物污染数量及要求无菌的概率；(4)不同物品种类及能接受的工作量等。
2.验证目的确定使用方法的正确性3.验证内容和方法3.1 仪器与试剂3.1.1 培养基营养琼脂培养基3.1.2 菌种金黄色葡萄球菌3.1.3 压力蒸汽灭菌器3.1.4 净化工作台3.1.5 电热鼓风干燥箱3.1.6 生化培养箱 (23～28℃)3.1.7 霉菌培养箱(35～37℃)3.2 验证方法3.2.1培养基和洗脱液制备方法：应选用卫生部认可单位生产的营养琼脂培养基和玫瑰红钠培养基等，准确称量、配制、培养基。
经115℃灭菌30分钟备用。
3.2.2对照用菌液：金黄色葡萄球菌菌液，取金黄色葡萄球菌(26003)的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1白金耳至需营养肉汤培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用灭菌的生理盐水稀释成50-100cfu即得。
3.2.3 洗脱液：制备的洗脱液应该是无菌的，并且能促使细菌从被检样品上脱离下来，又不影响悬液的渗透压。
常用的洗脱液含0.1%非离子活性剂(吐温－80)、1%蛋白胨和0.85%氯化钠。
本验证采用的为0.9%无菌氯化钠缓冲液。
3.2.4产品采集与样品处理3.2.4.1 随机抽取10件样品，供试品不能采用破坏性（如管道外部、非管道类）取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积＜100cm2取全部表面，被采表面积≥100cm2取100cm2.加入到10ml灭菌生理盐水中。
初始污染菌验证方案
初始污染菌验证方案、报告文件编号：起草人：质管部：日期：审核人：质管部：日期：批准人：日期：有限公司1 验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性使用延长管产品的初始污染菌进行控制。
2 验证依据GB15980—1995《一次性使用医疗用品卫生标准》3 验证小组：负责验证过程的组织指导工作。
：负责验证现场人员的安排组织工作。
：负责验证过程检测工作。
4 验证方案在有效环境监控下，任意连续三批取产品进行初始污染菌检测5 验证方法使用仪器设备：压力蒸汽灭菌器、超净工作台、天平、HH.B11.360型电热恒温培养箱，202—A0型台式干燥箱（以上设备经上海市计量测试技术研究院检定合格）以及试管、培养皿Φ9cm、刻度吸管、有盖广口瓶、玻璃注射器、营养琼脂（均经无菌处理）。
操作步骤：制备检验液，取产品剪碎后浸泡在有100ml灭菌生理盐水的有盖广口瓶中，充分震荡后制备成1：10的检验液，用灭菌吸管吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml 注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释液。
吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：1000稀释液.将溶化并冷至45℃—50℃的营养琼脂培养基傾注于平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。
随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿，置30℃—35℃培养箱内培养48小时。
6 验证确认：通过3批对产品的初始污染菌检测，确认每批产品初始污染菌在有效的环境监控下是能达到要求的。
7 方案会签表1.验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性延长管5个产品的初始污染菌进行控制。
初始污染菌检验报告模板
初始污染菌检验报告模板
检验单位信息
•检验单位名称：
•联系人：
•联系方式：
•检验日期：
化验样品信息
•样品名称：
•样品编号：
•生产日期：
•检验日期：
•样品数量：
•检验人员：
检验依据和方法
•检验依据：
•检验方法：
•检验标准：
检验结果
菌种CFU/g 结果
菌名1
菌名2
菌名3
菌名4
菌名5
结论和建议
本次检验样品存在菌落总数超标的现象，请及时采取措施解决。
建议对生产环节进行进一步检测，找出问题根源并进行解决。
备注
•检验人员需要进行个人身体健康检查。
•检验过程中需要掌握正确的检验方法和操作流程，确保检验结果真实可靠。
•所有检验结果仅适用于样品本身，不代表其他样品的检验结果。
初始污染菌方法验证
1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。
2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。
3.职责质量检验人员负责执行此规程。
4.依据标准及相关文件2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录ⅪJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌- 微生物学方法 - 第一部分产品中微生物数量的估计》GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》5.试验产品6.注意事项6.1本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度 100级的无菌操作台内进行。
操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。
6.215min 后方可进行实验操作。
6.3膜在过滤前后的完整性。
7.器材与试剂7.1器材35℃恒温培养箱、 23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环7.2稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。
pH 7.0无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液。
7.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。
8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。
若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
8.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus〔 CMCC B26 003 〕大肠埃希菌 Escherichia coli〔 CMCC B 11 102 〕枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis〔CMCC B 63 501 〕白色念珠菌 Candida albicans〔 CMCC F 98 001 〕黑曲霉 Aspergillus niger〔 CMCC F98 003 〕8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30-35 ℃培养 18-24 小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上23-28 ℃培养 24-48小时。
初始污染菌校正因子的测定报告（模板）
初始污染菌校正因子确认报告1.概述公司制定的《初始污染菌检验规程》是用于描述产品中的活微生物群体。
但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。
2.检验依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。
中国药典2015版第四部 1105 非无菌产品微生物限度3.实验过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品，在净化工作台上，用无菌医用钳将每支样品剪碎，称重10g，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。
3．2 营养琼脂培养基的制备：将营养琼脂培养基按说明书要求进行配制，在121℃高压蒸气灭菌锅内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。
3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
同样方法每组洗脱液做10个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。
3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。
3．5 菌落计数：记录各平皿中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积数（ml），即得到洗脱液中的全部菌落数。
重复3.1-3.5步，分别进行第二次、第三次、第四次、第五次洗脱，其中第五次洗脱为直接将四次洗脱后的产品接种于培养基内，将五次洗脱后所得的菌落数分别填入数据表1、表2。
4.校正因子的计算用第一次洗脱液得到的菌落数除以五次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，取三个样品的第一次冲洗去除率的平均值，平均值的倒数即为校正因子。
(019)初始污染菌检验规程
文件编号：XX/TF/PZ/019—2010页码：第1页共5页1、目的通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。
2、范围本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。
3、依据GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典2010版第二部GB 8368 一次性使用输液器GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准4、要求灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。
表1初始污染菌含量产品名称内腔污菌数外表面污染菌数注射器或配药注射器输液器、袋式输液器≤10cfu/件次≤100cfu/件次输液针无菌产品初始包装≤100cfu/件次或重量（g）注射针≤100cfu/件次5 检验方法5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：成份：蛋白胨 20 g牛肉膏药 3 g氯化钠 5 g琼脂 15 g文件编号：XX/TF/PZ/019—2010页码：第2页共5页卵磷脂肪 1 g吐温80 7 g蒸馏水 1000 g制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：实验操作人员确认；实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。
6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养1824小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2025℃培养57天，加人35 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
初始污染菌方法验证
初始污染菌方法验证公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。
2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。
3.职责质量检验人员负责执行此规程。
4.依据标准及相关文件2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生物数量的估计》GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》5.试验产品6.注意事项本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内进行。
操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。
无菌操作台必需定期进行洁净度检测??试验前提前开紫外灯15min 后方可进行实验操作。
过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌??使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。
7.器材与试剂器材35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。
pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液%无菌氯化钠溶液。
培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。
改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。
营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。
8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。
若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
产品初始污染菌数检验方法
文件编号
WI-03-23
版号
A.0
产品初始污染菌数检验方法
页次
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生效日期
2020/01/02
1•目的
制订产品初始污染菌数检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检 验方法及操作。
2•适用范围：
本方法适用于一次性使用无菌医疗器械灭菌前染菌量的检测。
3.职责
质检部对本检验方法实施负责。
4.4.2无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液）的制备：
a.配制：称取9.0g氯化钠加入蒸馏水溶解使成1000ml。
b.分装：分装于试管中，装量不得超过试管容量的2/3,盖上硅胶塞，包好。
c.灭菌：121C20分钟高压灭菌。
4.4.3器具灭菌：
与供试液接触的所有器具（手术剪刀，培养皿、刻度吸管、试管（带硅胶塞）等）应
按下述方法灭菌：置手提式压力蒸汽消毒器内121C20分钟高压灭菌，或置于电
热恒温鼓风干燥箱内160C2小时干热灭菌。
4.4.4样品的抽取
4.4.4.1样品数量及要求
被检样品同一产品同一批次分别随机抽取10套（件）灭菌前产品作为检验样品，
样品小包装不得破损，检验前不得开启；被检样品当天抽样当天检测，特殊情况 不能当天完成检测的，应在检测当日重新取样，之前抽取样品作废。
4.程序
4.1仪器
分析天平、干燥箱、净化工 培养箱
4.2器具
烧杯、量筒、三角瓶（带硅胶塞）、试管（带硅胶塞）、酒精灯、手术剪刀、培养皿、 刻度吸管
4.3培养基、试剂：
营养琼脂培养基、无菌生理盐水
4.4试验前的准备
4.4.1营养琼脂培养基的制备：按产品说明书进行配制、灭菌，供细菌培养记数用。
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案
初始污染菌和微粒污染控制验证方案1。
目的通过设计试验确认XX半成品的储存环境和存放有效期.其可能存在的环节如下：(1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控）;（2）等待灭菌的产品,密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化.2。
适用范围本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。
3.发放范围管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。
4。
规范性引用文件《中华人民共和国药典》2015版附录微生物限度检查法5. 组织和职责根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关部门及人员任组员。
验证小组职责：负责验证方案的起草、批准；负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施；负责验证数据结果的审核;负责验证报告的审批；负责发放验证证书;负责确定该项验证的再验证周期。
5.1 主责部门本方案的主责部门为公司管理者代表,其职责为：负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书. 5。
2 相关部门本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认,及时报告确认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督.6.步骤和方法6.1计划及进度本验证由质量部提出完整的验证计划,经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分为两个阶段完成：运行确认（OQ）从年月日到年月日性能确认（PQ）从年月日到年月日6.2 初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准6.2。
1抽样方法和抽样规律以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品1片（长宽约5cm×2cm）记为1单位，在洁净条件下精确称重,并标记。
需要临时或长期存放时间预计不超过30天（1个月），综合细菌的生长规律及可能存在的存放天数,其抽样检测的时间设计为存入后:第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第15天、第30天.6.2.2 供试液制备1）取0。
9%的生理盐水溶液10ml，盛于已灭菌的试管内；2) 将取样依次投入试管，充分摇匀。
初始污染菌方法验证
常州贺利氏医疗器械有限公司初始污染菌方法检查验证方案编制: 日期：审核：日期：批准：日期：初始污染菌检查验证方案目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证小组及职责5. 合格标准6. 试验材料：7. 菌液制备8. 菌液计数9. 培养基的制备10.细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证11.菌回收率计算公式12.结果及结论1. 验证目的：建立本公司医疗器械产品表面微生物限度检查方法，本公司产品初始污染菌系采用平皿法现对该方法进行验证，以确认该方法适合于产品表面初始污染菌的检查。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：本公司医疗器械产品表面微生物限度检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。
4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。
4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。
初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证背景在生命科学领域，微生物污染在实验中是一个非常普遍的问题。
不仅会影响实验结果的准确性和可靠性，还会影响重要的生产过程。
因此，为了保证实验的成功，必须开发出一种可靠的方法来验证实验室中的物品是否存在微生物污染。
本文将介绍一种简单的方法来验证初始污染菌。
必备材料•无菌纯水•Tryptic Soy Broth（TSB）•青霉素和链霉素组合液•离心管•移液器•微量移液器步骤步骤一：制备TSB培养基取适量的TSB培养基，按照说明书的指示加入适量的无菌纯水，在无菌条件下进行混合并调整pH值至7.2-7.4。
步骤二：检查无菌水和青霉素和链霉素组合液的无菌性取适量的无菌纯水和青霉素和链霉素组合液，并在15ml的离心管中进行热处理。
在121℃下进行30分钟烘烤。
热处理之后，检查管子是否依然无菌。
步骤三：制备初始污染菌样品选取一种已知的细菌菌株，并放入无菌纯水的250ml Erlenmeyer三角瓶中，密封好瓶口，并在温育箱中以37℃的恒温培养24小时，制备出初始污染菌样品。
步骤四：制备验证菌液取一定量的TSB培养基，加入青霉素和链霉素组合液（最终浓度为10ug/ml），并进行热处理，待培养基冷却后，取一定量的初始污染菌样品用微量移液器加入到青霉素和链霉素培养基中，制备出验证菌液。
步骤五：分配验证菌液将验证菌液分别加入到无菌纯水的离心管中，接种量为1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml、0.0001ml等不同容量，序列号编好，每种容量配制三个重复。
这些离心管可在30℃下进行24小时的培养，检查有无微生物的生长。
步骤六：观察结果观察离心管培养基中有无微生物的生长。
如果所有序列号中均无微生物的生长，即可认为实验室物品无微生物污染，反之则有微生物污染。
初始污染菌实验方法验证可以有效地检查实验室物品中的微生物污染情况。
它易于操作，实验过程简单明了，并且针对不同容量的接种进行了细致的设计，以检查有无微生物生长。
初始污染菌实验记录
初始污染菌实验记录实验目的：研究不同初始污染菌数量对环境中细菌生长的影响，并探究污染菌的生长规律。
实验材料和方法：1.实验材料：-不含任何微生物的琼脂平板-紫外灯-细菌培养物-显微镜和高倍镜-实验室用具：针头、培养皿、移液管等2.实验方法：1. 准备不同初始污染菌液：分别取10 ml、20 ml、30 ml、40 ml和50 ml的细菌培养物，加入含有无菌蒸馏水的试管中，并标注不同的初始菌液。
2.每个试管放置在紫外灯下辐照15分钟，以杀灭试管内的细菌。
3.分别将不同初始污染菌液均匀涂布在琼脂平板上，并用铂丝或玻璃杆扩散均匀。
4.将琼脂平板放入恒温箱中，控制温度为30°C，培养时间为24小时。
5.取出培养好的琼脂平板，观察和记录菌落的形态、颜色、大小等特征，并用显微镜观察细菌的形态和结构。
实验记录：1.实验准备：- 依次取10 ml、20 ml、30 ml、40 ml和50 ml的细菌培养物，加入含有无菌蒸馏水的试管中，并标注不同的初始菌液。
-将各试管放置在紫外灯下辐照15分钟，杀灭细菌。
-准备好不含细菌的琼脂平板。
2.实验操作：-将不同初始菌液均匀涂布在琼脂平板上，用铂丝或玻璃杆扩散均匀。
-将琼脂平板放入恒温箱中，控制温度为30°C，培养时间为24小时。
3.实验结果：实验组1（10 ml菌液）：-菌落的形态：圆形，表面平整。
-菌落的颜色：淡黄色。
- 菌落的大小：直径约为1-2 mm。
-细菌的形态和结构：短小的杆菌。
实验组2（20 ml菌液）：-菌落的形态：圆形，表面稍微凹陷。
-菌落的颜色：淡黄色。
- 菌落的大小：直径约为2-3 mm。
-细菌的形态和结构：较长的杆菌。
实验组3（30 ml菌液）：-菌落的形态：不规则形状，表面凹凸不平。
-菌落的颜色：深黄色。
- 菌落的大小：直径约为3-4 mm。
-细菌的形态和结构：较长的杆菌，呈链状排列。
实验组4（40 ml菌液）：-菌落的形态：不规则形状，表面凹凸不平。
初始污染菌方法适用性试验记录
附表1
初始污染菌方法适用性试验记录
产品名称生产批号
生产日期检验日期
检验依据中国药典四部2020版
标准要求0.5≤试验组菌落数-供试品对照组菌落数/菌落对照组菌落数≤2.0
细菌菌落计数
培养温度：培养时间：
菌株金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌
试验组
菌液对照组
供试品对照组
阴性对照
计算结果
霉菌、酵母菌菌落计数
TSA培养温度：培养时间：
SDA培养温度：培养时间：
菌株白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉
培养基胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基
试验组
菌液对照组
供试品对照组
阴性对照
计算结果
结论：采用平皿法试验，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值结果均在0.5～2范围内，符合中国药典四部2020版1105要求。
检验人/日期
复核人/日期。
初始污染菌回收率方法验证
类别：编号：部门：页码：初始污染菌回收验证方案版次：□新订□替代:制定人: 年月日审批会签:**人：***生效日期：年月日1．验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。
初始污染菌回收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。
也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。
2．适用范围适用于我公司一次性使用活检钳的初始污染菌的检测3．检验依据《中国药典》2010版附录微生物限度检查法ISO11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定GB/T19973-1 2005 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4．实验设备与材料4.1 设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、电热恒温培养箱、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、冰箱。
4.2 培养基及稀释液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨溶液。
4.3 其他实验材料微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、剪刀、镊子、吸管、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿。
5．实验程序5.1 抽样。
从每个清洗批次的产品中随机抽样，抽取3件。
5.2 洗脱在阴性实验室里以无菌操作方式将实验样品分别浸入装有已知容量的300ml的0.1%蛋白胨溶液的适当容器中，运用手工振动法洗脱产品上的微生物，用于洗脱产品外表面初始污染菌。
5.3 接种5.3.1 采用薄膜过滤法，将供试液平均倒入两个滤杯中进行抽滤，用100ml(每张滤膜每次冲洗量) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜冲洗三次，将滤膜（菌面朝上）分别置于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂平板上培养。
将冲洗过的供试品以上述方法再冲洗两次，共三次。
再将剩余供试品加入灭菌好融化的50ml营养琼脂培养基中作为琼脂覆盖。
产品初始污染菌检测方法适用性验证方案-wm
产品初始污染菌检测方法适用性验证目录1.概述2.验证目的3.适用范围4.验证依据5.验证小组成员及职责6.试验材料7.样品洗脱方法回收率验证8.技术方法验证9.验证方案的评定和建议10.验证方案的最终审核意见11.产品初始污染菌检测方法适用性验证报告产品初始污染菌检测方法适用性验证1.概述初始污染菌是用于检测产品未灭菌前屏障系统表面或内在的活微生物数量。
初始污染菌回收率用于补偿无法从产品中完全取出的微生物的数值。
是用特定的技术从产品上移除并培养微生物的方法，测定灭菌前产品细菌总数可用来判断产品受细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对产品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，可为下一步灭菌提供参考依据。
确保本企业所生产的成品符合产品标准要求。
2.验证目的确定产品初始污染菌检测方法3.适用范围本公司产品的初始污染菌检测4.验证依据《中国药典》2015版通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法；ISO11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定；GB/T19973-12005 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计；GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准；5.验证小组成员及职责6.试验材料6.1.试验产品：6.2.仪器与设备：DSX-280B手提式压力蒸汽灭菌器，SPX-150型生化培养箱，SW-CJ系列洁净工作台，MJK-150型霉菌培养箱，BSC-1000ⅡA2生物安全柜，ZW型集菌仪，GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱。
6.3.其他试验材料：微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、镊子、吸管、酒精灯、试管、75%乙醇棉签、灭菌刻度吸量管（1ml）、灭菌硼硅酸玻璃培养皿（φ90mm×15mm）、锥形瓶，灭菌手术剪、无菌烧杯等。
6.4.培养基及稀释液：胰酪大豆胨琼脂培养基沙式葡萄糖琼脂培养基PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液0.9%NaCl溶液6.5.菌种：金黄色葡萄球菌白色念珠菌7.样品洗脱方法回收率验证7.1.方法描述验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验时，先将已知菌落数的悬液菌液涂布于样品上，然后对同一样品进行多次洗脱处理，每次洗脱后的供试液通过薄膜过滤法过滤，培养并计数，得出回收率。
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电子天平
已校量
在有效期内
符合要求
电热恒温培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
霉菌培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
确认人/日期：
审核/日期：
3.2 使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄 糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂 对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌 种购买单位均为微生物种质资源库）。
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、 小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温 培养箱、霉菌培养箱。
设备名称
是否校量
是否在有效期内
结论
灭菌锅 百级工作台 生物安全柜
已校量 已校量 已校量
在有效期内 在有效期内 在有效期内
符合要求 符合要求 符合要求
表1
培养基菌落数 cfu
结论
加入菌种 铜绿假单胞菌
培养
胰酪大豆胨琼脂
条件 胰酪大豆胨琼脂培 胰酪大豆胨琼脂对照 培养基/胰酪大豆
养基
培养基
胨琼脂对照培养
基
平均值
金黄色葡萄球菌 平均值
枯草芽孢杆菌 平均值
白色念珠菌
33℃,48 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
平均值 黑曲霉
23℃,72 小时
菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4 培养基适用性检查 3.4.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.3 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 3.4.4 试验结果见表 1
平均值
培养基菌落数 cfu
沙氏葡萄糖琼脂
加入菌种
培养条件
沙氏葡萄糖琼脂培 养基
沙氏葡萄糖琼脂对照 培养基
培养基/沙氏葡萄 糖琼脂对照培养 基
结论
白色念珠菌 平均值 黑曲霉 平均值
23℃,72 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
结论：从以上检测结果可知，上述批号的培养基适用性检查符合要求，可用于日常产品检测中的计数。
般取相当于 1g、1ml 或 10cm2 的供试品, 若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌 情减量），加至适量的稀释液中,混匀,过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。每株试验菌每 种培养基至少制备一张滤膜。
若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定 霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。
6.3.4.4 薄膜过滤法计数方法验证实验结果见表 3
初始污染菌实验方法验证报告
报告编号： 报告时间：
目录
1、目的
初始污染菌实验方法验证报告
2、概述
3、测试方法与试验结果
4、结论 5、重新验证条件
1.目的： 参照《中国药典》2015 版，通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用 性，从而验证现在使用初始污染菌实验方法是否准确合格。 2.概述： 产品型号为 26 型：批号为：20150101 3.测试方法及检验结果： 3.1 实验设备及器材：
按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的 体积应不超过供试液体积的 1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最 低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
（1）试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每 1ml 供试液或 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于 100cfu。
原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性， 从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请： 3.1 质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2 生产技术部负责按验证方案生产相关样品
初始污染菌实验方法验证方案
产品名称：一次性包皮环切缝合器
编制： 审核： 批准：
日期： 日期： 日期：
…………医疗器械股份限有限公司
目录
初始污染菌实验方法验证方案 1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容
初始污染菌实验方法验证方案
1.概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热
（2）供试品对照组 取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。 （3）菌液对照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操 作加入试验菌液并进行微生物回收试验。 若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行 方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生 物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再 加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
3.3 菌液制备： 接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养 基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养 18〜24 小时；接种白色念珠菌的培养物 至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养 2-3 天，上述培 养后的新鲜培养物用 PH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌化钠溶液制成每 lml 菌 数小于 100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基
初始污染菌实验方法验证申请表
验证组
姓名
职务
单位
黄燕
组长
质量管理部经理
龙章宏 苏俊
组员 组员
化验员 化验员
………Байду номын сангаас医疗器械股份有限公司
胡梓鹏
组员
化验员
批
准
经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方
法进行验证。
批准人：
年月日
4.依据： 《中国药典》2015 版 5.验证计划： 5.1 实验操作人员确认； 5.2 实验室实验设备及器材的确认； 5.3 产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1 菌种和菌液制备
6.1.1 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第 0 代）， 并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2 菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养 18〜24 小时；接种白色念珠菌的培养物至 沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养 2-3 天，上述培养 后的新鲜培养物用 PH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌化钠溶液制成每 lml 菌数 小于 100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上， 20〜25℃培养 5〜7 天，加人 3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌化钠-蛋白 胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至 无菌试管内，用 0.05% (ml/ml)聚山梨醋 80 的 pH7.0 无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无 菌氯化钠溶液制成每 lml 孢子数量小于 100cfu 的孢子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2 计数培养基适用性检查 6.2.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3 试验结果见表 1 6.3 计数方法验证 6.3.1 供试液的制备： 洗脱液用 0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在 10000 级环境中进行。 6.3.2 接种和稀释
6.3.3 抗菌活性的去除或灭活 供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落 数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌数值的 50%，可采用下述方法消除供 试品的抑菌活性。 ⑴ 增加稀释液或培养基体积。 ⑵ 加入适宜的中和剂或灭活剂。 6.3.4 微生物的回收 按照 6.2 的计数培养基所用的试验菌逐一进行微生物回收试验，回收试验采用平皿 法和薄膜过滤法。 6.3.4.1 平皿法--倾注法 取 6 个直径 90mm 的无菌平皿。2 个分别注入照上述“试验组”制备的供试液 1ml； 2 个分别注入照上述“供试品对照组”制备的供试液 1ml；2 个分别注入照上述“菌 液对照组”制备的供试液 1ml。每个平皿注入 15～20ml 温度不超过 45℃熔化的胰酪大 豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。计算各试验组的平均菌落 数。 6.3.4.2 平皿法试验结果见表 2 6.3.4.3 薄膜过滤法 薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于 0.45μm,直径一般为 50mm,若采用其他直 径的滤膜,冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微 生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在 过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗 量一般为 100ml。总冲洗量不得超过 1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。 取照上述 “试验组”、“供试品对照组”和“菌液对照组”制备的供试液适量（一