细胞培养常见问题(二)

细胞培养常见问题（二）

1.何谓无血清培养基SFM（Serum Free Medium）？

无血清培养基是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。无血清培养基中需要添加生长因子和/或细胞因子，含有个别蛋白或大量蛋白组分：如：胰岛素，转铁蛋白等。

2.何谓无蛋白培养基 PFM （Protein Free Medium）？

无蛋白培养基中没有添加蛋白，但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（如低分子量肽的各种水解物）。

3.何谓化学限定培养基 CDM （Chemical Define Medium）？

化学限定培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均有已知的化学结构，又称无血清、无蛋白、无肽纯化学合成培养基。

4.无血清培养基有什么优点？

无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。无血清培养基的优点在于避免了血清的批次、质量、成份等对细胞培养造成的污染、毒性作用和不利于产品纯化等不良影响。目前，国际法规严格要求“生物制品的生产要向无动物源原料添加发展”，因此，在生产疫苗、单抗和各种生物活性蛋白等生物制品的应用领域中，无血清培养基可使不同的细胞在最有利于细胞生长和表达目的产物的环境中维持高密度培养。

5.无血清培养基可应用于哪些领域？

目前，无血清培养基已应用的领域有：

（1）研究细胞的分化条件；

（2）用于激素、生长因子和药物等与细胞相互作用的研究；

（3）用于从多种细胞混杂的培养基中选择目的细胞；

（4）肿瘤病理学和病因学的研究；

（5）用于生产疫苗、单克隆抗体和生物活性蛋白等生物制品。

6.如何对哺乳动物细胞进行无血清条件的驯化？

建议通过渐进脱离的方法使哺乳动物细胞从有血清培养的条件适应到无血清培养条件。在驯化过程中，细胞生长速度通常比添加血清的培养基缓慢。而且，细胞培养4-5天时，由于细胞内蛋白质的丢失，可能会出现细胞大量死亡的情况。所以，应注意观察细胞生长时的状态，频繁更换培养液，培养基一旦变黄即更换。为了使细胞进入正常生长周期，传代时细胞密度不得低于1x105cells/ml。可应用下列方法进行无血清培养：

（1）在通常的培养基中(含5-10%FBS)，细胞进行培养并传代两次。

（2）可直接使用100%无血清培养基进行培养。

（3）或者将血清加入到无血清培养基中，使血清浓度递减，直到完全应用无血清培养基培

养。

（4）一旦细胞在100%的无血清培养基中成功地传代3次，就认为适应了无血清培养。

7.什么是杂交瘤细胞？

杂交瘤细胞是在制备单克隆抗体过程中，用骨髓瘤细胞和效应B细胞融合而成的细胞。脾淋巴细胞的主要特征是抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓的永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆，这种杂种细胞叫做杂交瘤细胞。

8.应用无血清无蛋白培养基培养杂交瘤细胞时应有哪些注意事项？

应用无血清无蛋白培养基培养杂交瘤细胞时必须注意：

①建立一个合理的从含血清到无血清到无蛋白培养的适应程序；

②提高培养细胞的接种密度；

③选择合适的抗流体剪切保护剂，在含血清培养时选用的保护剂未必在无血清培养时适用；

④改进生物反应器，使剪切作用更小，控制精度更高；

⑤添加更丰富的氨基酸和维生素；

⑥定期检查杂交瘤细胞的遗传特性，特别是分泌单抗能力的变化，必要时进行重新克隆或用新的种子；

⑦建立液氮冻存细胞的方法和程序；

⑧细胞培养用的容器要更加洁净，水和化学品的纯度要更高；

⑨培养基的储存期要短，储存时应避免反复冷冻或pH的大幅度波动。

9.293细胞有何特性？

293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾细胞。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey于1976年用DNA转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型成上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。293细胞为人亚三倍体细胞系。293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。 293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，可用于治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传疾病；利用腺病毒载体在包装细胞293中表达分泌性蛋白质，也可进行生产重组蛋白。因此完善293细胞的大规模培养技术具有越来越重要的市场意义。

10.CHO细胞有何特性？

CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary， CHO)。它是T. T. Puck 在1957年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的。它属于亚二倍体，多种衍生突变株。贴壁型生长，也可悬浮培养，对剪切力和渗透压有较高的忍受能力。 CHO细胞是用来表达外源蛋白最多、最成功的一类细胞，也是最为普遍和成熟表达糖基化蛋白药物的细胞。

11.Vero细胞有何特性？

Vero细胞来源于非洲绿猴肾细胞，属于上皮细胞，贴壁生长。该细胞是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。

目前，Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究中广泛应用。