组织切片技术ppt课件

切片法是必须依靠切片机将组织切成薄片来进行 观察的方法。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形 态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物 质，使组织变硬以利于切成薄片，根据所用支持剂的 种类不同，主要分为石蜡切片法，火棉胶切法，冰冻 切片法等类型，切成薄片后还需要脱蜡，染色，脱水， 透明等步骤，将其制成永久标本。
组织学切片技术
பைடு நூலகம்
大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微 观察的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不 易透过，另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即 使光线可透过，也难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在 经过固定，脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较 薄的切片，再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形 态及其中某些化学成份含量的变化，组织切片也便于保存。
2.1.3 组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马 上投入固定液中；
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利，刀要足够长。切分组织块时，不
可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压。以免损伤组织； 3.组织块的大小
动物的处死
（1）吸入麻醉法：将浸透乙醚的棉花放入玻璃缸内,将 动物放入玻璃缸内,盖上玻璃盖， 观察动物麻醉情况，放血处死，此法用于小动物。
（2）注射麻醉法：用3%戊巴比妥钠按每公斤体重1～2ml静 脉注射或腹腔注射，麻醉后立即放血处死，此法用于大动物。
（3）直接处死法：用金属器械猛击动物的后脑部或直接断头放血处 死，此法适合于小动物。
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片 和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来 的。现以石蜡切片为例，介绍切片标本的制备 方法。
组织学制片步骤：
取材 脱水
固定 透明
冲洗
浸蜡
包埋
修块
切
片
贴片
烤片
染色
封片
观
察结果
2.1 取材
根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求 新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。
一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用 小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用 拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察 ，如骨骼肌运动终版的制备。
1.4 磨片(Ground section)
用于很坚硬的组织，如骨和牙。
血涂片
骨磨片
疏松结缔组织铺片
上皮组织铺铺片片
2、切片法
所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集 时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当， 即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。
一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，动物组织 取材要稍大，植物组织取材稍小。
2.1.1 人体组织标本的取材
手术切除标本，各种活检穿刺标本和尸体解剖标本。
手术切除标本的取材： 病灶在组织中的分布常存在不均一性，取材要有代表性，取材部位
组织学标本的制作技术是组织学，胚胎学，生物 学、病理学、肿瘤学、法医学及临床诊断学等学科研究观 察细胞、组织的生理、病理形态变化的一种主要手段。
一、概 述
组织学技术包括：
组织学制片技术 组织化学技术 荧光组化及免疫组化技术 各种特殊显微技术 电镜组织学技术 组织培养技术等
二、组织学制片技术的分类
厚为0.2～0.5cm，大小可根据需要而定。柔软组织不易切小, 可先取稍大的组织块固定2 ～ 3h，等组织稍硬后再切成薄的小块 继续固定。
4.取材应注意清洁，组织块上如有血液、污物和粘液沾着，应用 生理盐水洗涤后再入固定液。
5.取材时间：原则上，应尽快取材，但比较大的手术标本如胃、 肺、肠等器官，最好先固定后取材。
组织学制片技术有很多不同的制片方法，一般可分为切 片法与非切片法两大类：
切片法：石蜡切片、火棉胶切片、冰冻切片等。 非切片法：铺片、涂片、压片、磨片、整装片等。
1、非切片法
即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法 ，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方 法操作简单快捷，其中铺片法，封藏法可使原有组织 结构不被破坏，涂片法，压片法弥补了用包埋，切片 法所不可能观察清楚的不足，因此是组织标本制备中 常用的手段。
6.注意确定取材部位和包埋切面的方向，切除不需要的部分。 7.明确编号，登记
2.2 组织标本的固定
新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的 繁殖，可引起组织的自溶和腐败。因此，割取组织块后， 应立即采用一种方法，将组织尽可能保持原有的形态结 构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固 定。化学固定法就是用化学试剂配制成固定液使组织固 定。
1.1 涂片法
主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能 切片的液态颗粒性材料，可在载玻片上涂成单层细胞 ，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。
1.2 铺片法
主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取待 观察组织，用尖镊子迅速将组织平铺在载玻片上。如: 疏松结缔组织铺片标本的制备。
1.3 压片法
要兼顾：主要病灶，病灶与正常组织交界处，远离病灶的正常组织。 组织大小：长1cm×宽1cm×厚0.2～0.3cm。
各种组织的活检取材： 活检取材体积小，取材困难，不易取到主要病灶，因此对标本的处
理应特别慎重，及时固定，包埋时要平整。
2.1.2 动物组织标本的取材
动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新 鲜，10min内即可完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组 织应采用灌注固定后，再进行后固定。
制片所需的材料要求越新鲜越好，尤其是细胞学方面 的研究对材料的新鲜程度要求更严。因此，要从活的动物 体上采取材料，在一般情况下，要对动物施行麻醉，然后 再割取材料加以固定。所用的麻醉药品，必须以不影响细 胞结构为原则。
动物的选择
动物的选择是组织切片取材的第一步,在组织学 中以人的组织为理想，但人的组织不易得到，根据研 究的需要，大都以动物的组织来代替。有些动物的组 织器官比人的组织更为典型，如：猪的肝脏；豚鼠胰 腺、内耳；猫的肋间肌显示运动终板；兔的皮下组织 和肠系膜作活体染色较为理想等。