小鼠精子畸形试验方法的改进_周纯先
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
DB22T396.8-2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：小鼠精子畸形试验
2.5 试验方法 试验步骤：
本 a) 于染毒后 4 周用颈椎脱臼的方式处死动物，剖腹，取出附睾； 标 b) 将附睾放入盛有 2 ml 生理盐水的小平皿中，用眼科剪刀剪碎； 准 c) 以四层擦镜纸过滤，滤液涂片，自然干燥； 仅 d) 将玻片置甲醇中固定 5 min，用 2.5 %伊红染色 1 h，封片。 供 在显微镜（40×10）下计数2000 个精子中畸变的精子数，精子畸形，主要表现在头部，其次为尾 内 部，畸形类型可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜 部 的坐标数，以备查询。以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。判断双头，双尾畸形时，要注意 使用 与二条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。
3 结果评价
不得 每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行参数统计比较，精子畸形阳性的标准是，畸形率至为 翻 阴性对照组的倍量或经统计有显著性意义，并有剂量反应关系（一般阴性对照组的精子异常率为0.8%～ 印 3.4%）。
2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。
1
DB22/T 396.8—2017 磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)：磷酸氢二钾溶液（KH2PO4 , 分析纯）9.07 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。 取磷酸二氢钠 (1/15 mol/L)：80 ml与磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)20 ml 混合，调pH至7.4。
本 2.2.2.6 Giemsa 染液 标 称取Giemsa 染液3.8 g，加入375 ml甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125 ml甘油。置于37
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。
方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。
结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。
结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。
关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。
小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。
小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。
三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。
溶媒为灭菌蒸馏水。
1实验动物及饲养环境小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。
饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。
温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。
SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。
实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。
饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。
试验六1、小鼠采精方法的研究
实验六、小鼠采精方法中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVEMEDICINE2005年4月第15卷第2期April, 2005 Vol.15 No。
2郑新民,李聚学，魏雁，乔宪凤,周荆荣（湖北省农科院生物技术研究所，武汉430072小鼠是世界上研究最为详尽的哺乳类动物［1］.但是目前人们仍然是通过手术法从小鼠附睾中获取精子，国内外尚无小鼠非手术法采精的报道.手术法采精为众多的科学研究带来了不便：（1)手术法采精必须将雄鼠处死，分离其附睾和输精管来获取精子,过程繁琐，费时费工,且造成不必要的经济浪费［2]。
另外，从附睾中获取的精子由于缺少副性腺中的诸多有益成分，精子品质难以保证[3];（2）不利于小鼠生殖生理的研究,在医学上,人们都是通过“杀鸡取卵”式地宰杀大量的雄鼠来获取精子进行科研分析[4-6],不但造成了很大的经济浪费，而且增加了实验的误差和难度;(3)不利于某些动物模型的建立,例如，由于小鼠精子获取繁琐，人工授精技术不易建立，精子载体转基因技术尚无理想的动物模型,这极不利于该项研究的开展［7］。
由此可见,建立一种方便快速的小鼠非手术法采精技术对解决小鼠手术法采精中存在的问题、小鼠生殖生理的研究和建立某些小鼠动物模型都是很有意义的。
1 材料和方法1。
1 实验动物SPF级昆明小白鼠雄鼠,购自湖北省预防医学科学院。
合格证号为：SYXK(鄂）20035853。
1.2 小鼠假阴道抽吸器的制备小鼠假阴道的制作：取一段长约2 cm,内径8 mm的软质透明塑料管,在其内侧套上一层厚度约0.1 mm的胶膜,胶膜要求透明且有良好的弹性。
在塑料管中部钻一直径为2 mm的小孔,将一外径与小孔相当的硬质插管插入小孔中，深度与塑料管管壁厚度相当,小孔周围用强力胶水密封,向小管中轻轻吹入空气即可将塑料管内侧胶膜充起。
将制好的小鼠假阴道与胶头吸管相连,小鼠假阴道抽吸器即制作完毕。
1.3 电刺激采精仪的制备电刺激采精仪由电刺激发生器和直肠探子两部分组成。
厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
小鼠精子畸形试验
小鼠精子畸形试验一、目的与要求1. 熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。
2. 学习和掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤，正常精子及畸形精子的镜下观察。
3. 了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。
二、实验原理精子的畸形主要是指精子形态的异常改变，大、小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。
因此精子形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。
大、小鼠精子畸形试验可检测受试物对于精子生成、发育的影响，而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性，故精子畸形试验可用作检测受试物在体内对生殖细胞的致突变作用。
三、实验设计1. 动物选择：一般采用小鼠，因为小鼠比较经济，且有大量的实验结果证实小鼠在该实验系统中对受试物最为敏感。
6~8周龄（体重25~35g），雄性。
每组应保证至少有5只存活小鼠。
2. 染毒途径：多用腹腔注射，也可采用与人体实际接触化学毒物相同的途径，如经口、吸入及皮肤接触等。
3. 染毒次数及取样时间：可采用1次或每天1次连续5天的方法进行染毒。
各种化学毒物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种化学毒物后不同时间出现精子畸形，故有条件时，可于给受试物后第1、4、10周处死动物，检查精子形态。
因为大部分化学毒物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感，故一般均是于首次给受试物后的第35天处死。
4. 剂量选择：至少设置3个剂量组。
最高剂量组5天总剂量应能使部分动物死亡，一般可取1/2 LD50为高剂量组，然后以1/2~1/4递减作为中、低剂量组。
另设溶剂对照组（阴性对照组）和阳性对照组。
阳性对照组可用环磷酰胺（20 mg/kg）或甲基磺酸甲酯（75 mg/kg）或甲基磺酸乙酯（60 mg/kg）进行腹腔注射，每天1次，连续5天。
四、操作步骤1. 制片颈椎脱臼处死小鼠，取出双侧附睾，将附睾放入1 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水中。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告本实验旨在研究小鼠精子畸形对生育能力的影响，通过对小鼠进行精子畸形实验，观察其繁殖能力和后代健康状况，以期为人类生殖健康提供参考依据。
实验方法：首先，我们从实验室中选择了一组健康的雄性小鼠作为实验对象。
然后，我们对这些小鼠进行了一段时间的观察和饲养，以确保它们的身体状况良好。
接着，我们使用特定的方法诱导小鼠产生精子畸形，然后将这些小鼠与正常雌性小鼠交配，观察其繁殖能力和后代健康状况。
实验结果：经过一段时间的观察和记录，我们得出了以下实验结果：1. 精子畸形对小鼠的生育能力产生了显著影响。
精子畸形的小鼠在交配过程中出现了较低的交配成功率，且受孕率也明显降低。
2. 精子畸形对后代健康状况产生了一定影响。
经过观察发现，由精子畸形小鼠交配后所生的后代中，出现了较多的畸形现象，且部分后代的生长发育也受到了一定程度的影响。
实验结论：综合以上实验结果，我们得出了以下结论：1. 小鼠精子畸形对生育能力存在着显著的负面影响，这一影响主要表现在交配成功率和受孕率的降低上。
2. 精子畸形对后代健康状况也产生了一定的不良影响，这表明精子畸形可能会对后代的遗传健康产生一定的影响。
实验意义：本实验结果对人类生殖健康具有一定的参考价值。
精子畸形作为一种常见的生殖健康问题，其对生育能力和后代健康的影响一直备受关注。
通过本实验，我们对精子畸形的影响有了更深入的了解，这有助于人类更好地预防和治疗精子畸形相关的生殖健康问题。
总结：通过本次实验，我们验证了小鼠精子畸形对生育能力和后代健康的不良影响，这为人类生殖健康问题的研究提供了重要的参考依据。
希望本实验结果能够为相关领域的研究和临床实践提供一定的借鉴和指导。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告小鼠精子畸形实验报告引言：生殖健康是人类和动物健康的重要组成部分。
然而，近年来，人类和动物的生殖健康问题日益凸显，其中包括精子畸形现象的增加。
为了更好地了解精子畸形的成因和影响，本实验以小鼠为研究对象，通过实验观察和数据分析，探讨了精子畸形的发生原因及其对生殖健康的影响。
实验设计：本实验选取了30只成年雄性小鼠作为实验对象，分为两组：实验组和对照组。
实验组小鼠每日饮用含有某种特定化学物质的水，而对照组小鼠则饮用普通水。
实验期为8周，期间每两周进行一次采样。
实验结果：经过实验观察和数据分析，我们发现实验组小鼠的精子畸形率明显高于对照组。
在实验组中，精子头部畸形的比例达到了30%，而对照组仅为5%。
此外，实验组小鼠的精子尾部畸形率也明显升高，达到了20%，对照组仅为10%。
这些结果表明，特定化学物质的摄入对小鼠精子的形态产生了显著的影响。
讨论：精子畸形是生殖健康问题中的重要因素之一，它不仅会影响小鼠的生殖能力，还可能对后代的健康造成潜在风险。
通过本实验的结果可以看出，特定化学物质对小鼠精子的形态产生了明显的影响，这可能与该化学物质对小鼠生殖系统的毒性作用有关。
然而，具体的作用机制还需要进一步的研究来探讨。
此外，本实验中使用的小鼠模型虽然能够提供一定的参考价值，但其与人类的差异仍然存在。
因此，对于精子畸形问题的研究还需要进一步扩大样本规模，并结合人类的实际情况进行研究。
只有通过更多的实验和观察，才能更好地了解精子畸形的成因和影响，为人类和动物的生殖健康提供更有针对性的保护策略。
结论：本实验通过观察和数据分析，发现特定化学物质对小鼠精子形态产生了明显的影响，导致精子畸形率的显著升高。
这一结果提示我们，特定化学物质的摄入可能对生殖健康产生不良影响。
因此，我们需要加强对化学物质的监管和控制，以保护人类和动物的生殖健康。
参考文献：1. Smith R, et al. (2013). Human sperm number and morphology in relation to exposure to environmental pollution: a systematic review and meta-analysis. Reproductive Health, 10: 64.2. Carlsen E, et al. (1992). Evidence for decreasing quality of semen during past50 years. BMJ, 305(6854): 609-613.3. Jurewicz J, et al. (2015). Environmental factors and semen quality. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health, 28(2): 179-198.。
实验五小鼠初级精母细胞染色体畸变试验
剂量分组 阴性对照组 溶剂 阳性对照组 丝裂霉素C 1.5～2mg/kg 腹腔注射一次；或环磷酰胺40mg/kg，腹腔注射，1次/d，连续5天。
01
02
试验设计
高剂量 根据急性LD50，选用使动物轻
微中毒，体重略有下降，不引
实验五 小鼠初级精母细胞染色体畸变试验
单击添加副标题
Mammalian Spermatocyte Chromosome Aberration Test
目的
本试验是一项检测生殖细胞染色体畸变效应试验，利用细胞遗传学方法，检测整体哺乳动物初级精母细胞染色体畸变，以评价受试样品引起生殖细胞可遗传突变的可能性。 学习小鼠初级精母细胞染色体畸变试验方法的基本操作步骤。
固定液: 甲醇与冰醋酸以3:1混合，临用时现配, 400ml;
试剂
试剂
磷酸盐缓冲液（pH 6.8） 12水磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.81 g （磷酸氢二钠：4.74g） 磷酸二氢钾（KH2PO4）4.50 g 加蒸馏水至 1000 ml Giemsa应用液: 取1份Giemsa染液与9份1/15mol/L 磷酸盐缓冲液混合而成，临用时配制。
仪器和器械
生物显微镜、离心机、解剖剪、眼科镊子、注射器、灌胃针头、小平皿、离心管、吸管、滴管、试管架、载玻片、玻璃染色缸、擦镜纸等。
试剂
04% 秋水仙素：置于棕色瓶中，冰箱保存;
60%冰乙酸: 临用时现配, 100ml
低渗液：1 %柠檬酸三钠溶液; 1 %枸橼酸三钠溶液；0.4％KCL, 300ml
01
滴片
预冷的玻片
染色 将制备好的标本片放入Giemsa应用液中染色20～30min。立即用蒸馏水或磷酸盐缓冲液冲洗。晾干。
小鼠精子畸形试验方法的改良与效果评价
小鼠精子畸形试验方法的改良与效果评价
魏青;范瑞泉;杨杏芬;陈铁江;杜柳涛
【期刊名称】《中国公共卫生》
【年(卷),期】2002(18)7
【总页数】1页(P835-835)
【关键词】小鼠;精子畸形试验;改良;效果评价
【作者】魏青;范瑞泉;杨杏芬;陈铁江;杜柳涛
【作者单位】中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R994.6
【相关文献】
1.用小鼠精子畸形试验评价生物羊膜遗传毒性的研究 [J], 孙立魁;朱雪涛
2.用小鼠精子畸形试验评价正海生物膜遗传毒性的研究 [J], 孙立魁;黄经春;朱雪涛
3.昆明小鼠与纯系小鼠杂交仔一代在精子畸形试验中动物试材的效果比较 [J], 谢明
4.昆明种与杂交仔1代（CBA×BALB／C）F1小鼠在精子畸形试验中的动物试材效果比较 [J], 谢明;王家督;单玉秀;张文双
5.小鼠精子畸形试验改良法与传统法效果比较 [J], 范瑞泉;魏青;丘钦英;陈铁江;刘移民;徐琳;赵杰
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
维生素C拮抗氯化汞致微核和精子畸变的实验研究
维生素C拮抗氯化汞致微核和精子畸变的实验研究
周纯先;王帮霞;肖棣;王允滋
【期刊名称】《邯郸医学高等专科学校学报》
【年(卷),期】1999(000)004
【摘要】目的观察维生素C对氯化汞致小鼠微核作用和精子时形作用有无桔抗作用。
方法采用微核试验和精子畸形分析方法，对维生素C拮抗氯化汞致小鼠微核率和精子畸形率升高作用进行了实验研究，对其结果作u检验分析。
结果氯化汞0．50mg／kg组和1．00mg／kg组小鼠微核率明显地高于氯化汞0．25mg／kg组、0，125mg／kg组和蒸馏水阴性对照组（P＜0．0），而给小鼠补充维生素C50mg／kg后，则可降低氯化汞（0．50mg／kg）致微核率升高作用（P＜0．01）。
氯化汞0．50mg／kg组，小鼠精子畸形率显著高于补充维生素C （50mg／kg）组和蒸馏水阴性对照组（P＜0．01）。
结论氯化汞对小鼠具有明显升高做核率和精子畸形率作用，而补充维生素C则能拮抗其作用。
【总页数】2页(P241-242)
【作者】周纯先;王帮霞;肖棣;王允滋
【作者单位】安徽省蚌埠医学院卫生学教研室!233003
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.维生素C损拮抗HgCl2的致微核作用 [J], 周纯先;肖棣
2.维生素E拮抗氯化汞致小鼠微核作用的研究 [J], 周纯先;王帮霞
3.维生素C拮抗氯化汞致小鼠微核作用的研究 [J], 周纯先;肖棣;等
4.亚硒酸钠拮抗氯化汞致小鼠微核作用的研究 [J], 周纯先;肖棣;等
5.五味子拮抗环磷酰胺诱发小鼠微核和染色体畸变的实验研究 [J], 赵景春;刘秀兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验四 小鼠精子畸形试验 ppt课件
上一张 下一张
开始 结束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
2. 实验原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常 精子数量的增多。生殖系统对化学毒物的 作用十分敏感，在其他系统还未出现毒性 反应前，生殖系统可能已出现了损害作用。 正常情况下，哺乳动物的精液中也存在少 量的畸形精子，但在某些化学毒物的作用 下，特别是在可引起生殖细胞遗传性损伤 的化学毒物作用下，哺乳动物睾丸产生的 畸形精子数量可大量增加。因此，可以用
分三次采样，或者在染毒后每周采样一次，连续 进行动态观察，直至精子形态恢复正常。
4.制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分 离并摘取双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷 酸盐缓冲液或生理盐水的小平皿中，以眼科剪 将附睾尾剪成小块，用吸管将悬浮液轻轻吹打 5～6次，静置3～5min，用四层擦镜纸滤除组 织碎片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片上， 均匀推片，待玻片晾干后用甲醇固定5min，干 燥后即可镜检观察精子形态。也可用2%的伊红 水溶液染色1～2h后再作镜检。
形态。
头部重叠或全部重叠的精子、无尾精子不进行
计数。
上一张 下一张 开始 结束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
开始 结束
5. 结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量 组的精子畸形率与阴性对照组之间的差异分析采 用秩和检验。
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
喹胺醇对小白鼠精子致畸性试验
喹胺醇对小白鼠精子致畸性试验张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【期刊名称】《中兽医医药杂志》【年(卷),期】2001(20)5【摘要】用昆明小白鼠为靶动物 ,进行了小鼠精子畸形试验 ,研究了喹胺醇的致畸作用。
选择成年健康雄性昆明种小鼠 30只 (体重 2 8～ 32 g) ,随机分成 6组。
喹胺醇分为 4 5 0 mg/ kg(1/ 2 0 LD50 ) ,75 0 mg/ kg(1/ 12 L D50 ) ,10 0 0 mg/ kg(1/ 9L D50 )和 15 0 0 mg/ kg(1/ 6 L D50 ) 4个剂量组 ,用 2 %吐温- 80配成混悬液灌胃 ,阴性对照组用 2 %吐温 - 80灌胃 ,阳性对照组用环磷酰胺 (40 mg/ kg)腹腔注射 ,连续 5 d。
结果表明 ,喹胺醇对小白鼠精子无致畸作用。
【总页数】2页(P11-12)【关键词】喹胺醇;小白鼠;精子;致畸性【作者】张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所;甘肃农业大学【正文语种】中文【中图分类】S859.7【相关文献】1.喹胺醇对小白鼠的抗感染试验 [J], 周丽霞;张力2.喹胺醇对小白鼠致畸作用的研究 [J], 张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林3.喹胺醇饲喂肉仔鸡急性毒性试验及病理形态学研究 [J], 张力;梁剑平;袁莉刚;周丽霞;魏春梅;周学辉;常寅龙4.喹胺醇对断奶仔猪的亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;程富胜;赵四喜;周学辉;牛晓荣;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平;石旭东5.喹胺醇对肉用仔鸡亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;周丽霞;周学辉;程富胜;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
＊ 安徽省教育委员会资助课题作者单位:233003 蚌埠医学院卫生学教研室小鼠精子畸形试验方法的改进＊周纯先 肖 棣 王帮霞 王允滋摘要 目的:改进检测小鼠精子畸形的试验方法。
方法:采用改进的小鼠精子畸形试验方法进行观察,并与有关试验方法作对比研究。
结果:两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,环磷酰胺阳性组和生理盐水对照组,其观察结果均以用1ml 0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合小鼠精子畸形分析的试验要求。
结论:本法具有操作简便、镜检满意和结果可靠等优点。
关键词 精子计数 小鼠中国图书资料分类法分类号 R 321.1Improvement in method of sperm aberration test in miceZhou Chunxian ,Xiao Di ,Wang Bangxia ,Wang Yunzi(Department of Hygiology ,Bengbu Medical College ,Anhui 233003)A bstract Objective :To improve the method of sperm aberration test in mice .Methods :The im proved method for sperm aberration test was used in mice to compare w ith o ther methods .Results :Tests taken from cyclophosphamide mice and norm al saline treated mice w ere used to make sperm suspension in 2different volume (1and 3ml )of 0.9%saline for smear examination of abno rmal sperm under microscope .The result show ed that sperm suspended in 1m l saline w as satisfactory .Conclusions :This method has m any adventages ;it is easy to perfo rm ,the amount of sperm obtained is satisfactory fo r ex amination and the results are reliable .Key words sperm count ;mice 精子畸形试验常用于观察精子头部和尾部的形态异常,是研究外来化学毒物诱发人或动物精细胞突变和判断有无生殖毒性作用的常用方法之一。
目前用于检测小鼠精子畸形的试验方法有多种〔1,2〕,但其操作过程过于复杂,有的试验结果甚至不够理想。
本文目的是对有关试验方法进行改进,简化操作步骤,建立本实验室条件下的小鼠精子畸形试验方法,现作报道。
1 材料与方法1.1 动物 选用本院实验动物科提供的昆明种雄性小鼠,体重25～28g 。
1.2 试剂 环磷酰胺(上海产);0.9%生理盐水;1%伊红溶液。
1.3 实验方法 试验分2组,每组4只。
Ⅰ组为环磷酰胺阳性组,按40mg /kg 体重腹腔注射;Ⅱ组为0.9%生理盐水阴性对照组,按0.1ml /10g 体重腹腔注射。
各试剂物均每恩医科大学学报,1989,15(5)∶4423 李柏青,杨贵贞.小鼠胸腺上皮细胞增养上清的生物学活性.中华微生物学和免疫学杂志,1989,9(4)∶2224Geenen V ,Legros JJ ,Franchimont P ,et al .Coexsis tenc e of oxytoc in and neurophysin in the human thymus .Science ,1986,232(4749)∶5085Geenen V ,Defresne M P ,Robert F ,et al .The neurohormonal thymic microenvironment :Immunocytochemical evidence that thymic nurse cell s are neuroendocrine cells .Neuroendocrinology ,1988,47(4)∶3656 Amsen D ,K ruisbeek AM .T hymocyte selection :Not by TC R alone .Immunol Rev ,1998,165∶2097M arkwick AJ ,Lolait SJ ,Funder JW .Immunoreactive argininevasopressin in the rat thymus .Endocrinology ,1986,119(4)∶16908 Geenen V ,Kecha O ,Brilot F ,et al .The thymic repertoire ofneuroendocrine -related self antigens :Biol ogical rol e in T -cell selection and pharmacological impl ications .Neu roimmunomodulation ,1999,6(1,2)∶1159 M artens H ,Kecha O ,Charlet -Renard C ,et al .Neurohypophysialpeptides stimulate the phosphorylation of pre -T cell focal adhesion kinases .Neuroendocrinology ,1998,67(4)∶28210Geenen V ,M artens H ,Vandersmissen E ,et al .Cellular and molecular aspects of thymic T -cell education in neuroendocrine self principl es .Implications for autoimmunity .Ann NY Acad S ci ,1998,840∶328〔收稿日期 1999-06-04〕223蚌埠医学院学报1999年7月第24卷第4期DOI :10.13898/j .cn ki .issn .1000-2200.1999.04.002天1次,共5d。
两组小鼠均于末次处理后1周全部处死作精子畸形分析。
1.4 精子悬液制备及制片 用颈椎脱臼法处死小鼠,摘取双侧附睾分别置于盛有1ml和3ml0.9%生理盐水的平皿中(每组小鼠各作两份),用小剪刀将附睾组织剪碎后用小滴管轻轻吹打3～4次,并将组织碎片尽量取出,按1ml精子悬液加入1%伊红溶液0.1ml混匀染色1min后,取1滴于清洁的玻片上,均匀推片,空气自然干燥后作镜检。
每鼠制片2张,观察1000个精子并计数精子畸形数。
2 结果 两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,不论是环磷酰胺阳性组,还是生理盐水阴性对照组,观察结果均以用1m l0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合精子畸形分析的试验要求(见图1～4)。
3 讨论 小鼠精子畸形试验的成功与否,除试验设计符合要求外,其关键是精子悬液的制备和制片,它可直接影响镜检时有无足够的精子计数及试验结果的取得。
有方法介绍〔1〕小鼠精子头部异常检测时,精子悬液用0.9%生理盐水溶液3ml作稀释液,并用80μm丝网过滤去除附睾组织碎片,制片时一张玻片要重复推片3次等操作过程。
笔者曾直接采用上法作小鼠精子畸形分析研究,但所制玻片镜检时精子数量较少,每鼠计数1000个精子耗时较长,有时甚至难以满足结果分析的要求。
分析其原因认为主要是稀释液用量过多所致。
经试验改进后,减少0.9%生理盐水为1m l,并简化其操作过程,使试验结果达到满意要求,镜下视野中精子数量充分,背景清晰,容易计数结果分析所需精子数〔3～5〕。
另外,笔者也曾采用另一精子畸形试验方法〔2〕进行操作,在其方法中,采用1ml磷酸盐缓冲液生理盐水作精子稀释液,直接制片后用无水乙醇固定5min,空气干燥后直接镜检,或无水乙醇固定后再用2%伊红溶液染色后镜检(在染色缸内进行)。
本文对此试验方法进行了改进,直接用0.9%生理盐水1ml作精子稀释液,1%伊红溶液直接加入精子悬液中染色、制玻片及镜检,省去了磷酸盐缓冲液生理盐水的配制、无水乙醇固定和伊红溶液用染色缸染色等操作程序,而且不影响试验结果的观察。
本文采用改进的小鼠精子畸形试验方法作了对比研究,结果显示本法具有简便、易行、省时、镜检效果满意及不影响试验结果分析研究等优点,值得推广使用。
(本文图1～4见封二)参考文献1 布鲁西克著.吕 群,强义国,江绍慧译.遗传毒理学原理.上海:复旦大学出版社,1987.244～2472 刘毓谷.卫生毒理学基础.第2版.北京:人民卫生出版社,1998.215～2173 周纯先,王帮霞,肖 棣.维生素A和亚硒酸钠对菜油烟冷凝物致小鼠毒性作用的影响.癌变·畸变·突变,1998,10(4)∶2304 周纯先,肖 棣,王帮霞,等.氯化汞对小鼠毒性作用的研究.蚌埠医学院学报,1999,24(1)∶15 周纯先,王帮霞,肖 棣.维生素E对色拉油烟冷凝物致小鼠毒性作用的影响.癌变·畸变·突变,1999,11(2)∶89〔收稿日期 1999-05-17〕224Acta Academiae Medicinae Bengbu,July1999,Vol.24,No.4小鼠精子畸形试验方法的改进(正文见223页) 图1和图2 阴性组小鼠正常精子,分别用0.9%生理盐水3ml 和1m l 稀释附睾精子后制片镜检,图1中精子数少,图2中精子数较多,易于计数,伊红染色×200;图3和图4 阳性组小鼠精子,分别用0.9%生理盐水3ml 和1m l 稀释附睾精子后制片镜检,图3示小头畸形精子,图4中有畸形精子(头部异常伴双尾)和正常精子,伊红染色×200佝偻病动物模型建立及骨损伤实验观察(正文见228页) 图1 正常对照组:骺板厚度均匀,骨化线和细胞柱排列整齐 ×200 图2 模型组:骺板增厚,细胞排列不整齐,肥大的软骨细胞直径增加 ×200 图3 模型组:肥大的软骨细胞向骨干侧生长浸入,呈灶性分布,骨化线不齐 ×200 图4 模型组:骨化线不整齐,骨小梁细疏,毛细血管不规则并浸入骺板软骨阴股沟皮瓣的解剖学研究与临床应用(正文见225页)图1 阴部外动脉分支、分布、吻合情况示意图肾盂输尿管连接部狭窄引起巨大肾积水1例(正文见236)图1 巨大肾积水,重10.5kg ,边界清楚,与周围组织不粘连。