沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌(Salmonella)是一类革兰氏阴性的杆状细菌,是引起沙门氏菌属感染的病原菌。
这种细菌可以引发食物中毒和伤寒症,其中食物中毒是最常见的感染途径。
因此,对沙门氏菌的快速、准确的检测非常重要。
目前,沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
以下是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 传统培养分离法传统的沙门氏菌检验方法是利用富含寡糖的培养基,如XLD、SS等,以及一些选择性供氧培养基,如亚硫酸和肉汤琼脂培养基等,将样品进行培养。
通过培养,沙门氏菌会形成典型的红色或蓝绿色菌落。
然后,从菌落中挑取纯培养物,并进行生理生化反应和田纳氏试验以确定是否为沙门氏菌。
2. 免疫学方法免疫学方法是通过检测沙门氏菌特异性抗原或抗体来诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有:- 血清凝集试验:利用特异性沙门氏菌抗原和患者血清,在特定条件下观察血清与抗原的凝集反应,可确定是否感染沙门氏菌。
- 酶联免疫吸附试验(ELISA):利用特异性沙门氏菌抗原或抗体和酶标记的二抗,通过检测光学密度来判断是否存在沙门氏菌。
3. 分子生物学方法分子生物学方法可以通过检测沙门氏菌的基因或DNA来快速、准确地诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有:- PCR(聚合酶链式反应):通过特异性引物扩增沙门氏菌的DNA片段,然后进行凝胶电泳分析。
PCR可以提供快速、高效的沙门氏菌检测结果。
- 实时荧光PCR:使用带有荧光探针的PCR引物,通过检测荧光信号的强度来定量沙门氏菌的存在量。
- 基因芯片技术:基因芯片上固定了沙门氏菌特异性的探针,可以同时检测多个基因或DNA序列,提高检测效率。
除了上述方法,还可以利用质谱仪等仪器进行快速鉴定,甚至利用抗生素敏感试验、细菌溶解酶试验等进行进一步的鉴定和鉴别。
总结起来,沙门氏菌的检验方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
这些方法可以单独或联合使用,以提供准确、快速的沙门氏菌检测结果,对于预防和控制沙门氏菌感染具有重要意义。
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性杆菌,可引起许多动物和人类的肠道感染。
为了检验沙门氏菌的存在,可以采用以下一些常见的方法:1.培养方法:沙门氏菌是一种需氧的微生物,在富含营养成分的寒凝琼脂或低酸性洗涤剂和生物素的培养基上培养。
常用的培养基如VRB (XLD)琼脂、SS琼脂、MS琼脂等。
培养基可以选择均匀地涂布在平板上,也可以用于液体培养。
2.表型特征:沙门氏菌的菌落通常呈现红色或无色,个别品系可能为粉红色。
如在VRB琼脂上,沙门氏菌会变为红色或橙色。
沙门氏菌也可以产生硫化氢,导致MS琼脂呈现黑色。
3.生化特性:沙门氏菌通常可以进行一些常规的生化测试,如产生气泡的气液反应,碳源利用测试和酸碱指示剂变色等。
这些测试可以帮助进一步确认沙门氏菌的存在。
4.血清学方法:采用沉淀试验或血清凝集试验检测血清中的抗生素,以确定是否感染了沙门氏菌。
这些试验通常利用鸡血清,鸡蛋白和羊血清制备的具有特异性的血清反应。
5. 分子生物学方法:沙门氏菌的检验还可以利用PCR技术进行,通过检测沙门氏菌特异性基因如invA基因的存在来确定沙门氏菌的存在。
6.抗生素敏感性试验:通过对沙门氏菌菌株进行抗生素敏感性测试,可以了解菌株对不同抗生素的抗性情况,为临床使用合适的抗生素提供参考。
除了以上提到的方法,还有其他一些检验方法如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光PCR等也常被用于沙门氏菌的检验。
这些方法不仅可以准确快速地检测沙门氏菌的存在,还可以区分不同菌株和进行进一步的流行病学分析。
总之,通过上述的方法,可以对沙门氏菌进行有效的检验,从而帮助人们及时判断感染情况并及时采取措施进行治疗和预防。
沙门氏菌检验
实验六食品中沙门氏菌的检验一、概述:1.沙门氏菌的形态特征:革兰氏阴性,两端钝圆的短杆菌,无芽孢,一般无荚膜,周身鞭毛,运动力强,具菌毛。
2.沙门氏菌需氧或兼性,10-42℃都可生长,最适生长温度为37℃,最适pH 为6.8-7.8。
3.沙门氏菌食物中毒的食品主要为动物性食品,特别是畜肉类及其制品,污染肉类食物的几率很高。
冷冻对沙门氏菌无杀灭作用,即使在-25℃低温仍可存活10个月左右。
意义:沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。
在世界各国各类细菌性的食物中毒中,沙门氏菌常居前列。
因此,沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。
二、操作步骤:1.前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间,样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖,同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生化鉴定——排除大多数非沙门氏菌,提供了沙门氏菌培养物菌属的生理生化鉴定结果。
5.血清学技术——对沙门氏菌属培养物进行血清学分型鉴定,确定菌型。
主要沙门氏菌有2000多个血清型,可先用多价血清鉴定,再用单因子血清鉴定,先有常见菌型的血清鉴定,再用不常见菌型的血清鉴定。
三、实验过程:1.前增菌将样品鸡蛋壳用灭菌棉签查拭蛋壳后,将棉签上部剪掉,下部放入前增菌培养基BPW中,5个棉签放入150mL前增液中,将制备好的预增菌液于37℃培养8-18h。
(样品液变浑浊即可)2.选择性增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取4mL前增菌液转种于40mL TTB选择性增菌液内,于42 ℃±1 ℃培养18h-24h。
如果菌株生长过慢(TTB 培养基需现配现用,每组制备40ml增菌液,需加入816uL的碘液后再加入前增液)。
第三节 沙门氏菌检验
本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气(变黄);产 生硫化氢(变黑)。 只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先 变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化, 加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使 斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被 氧化,所以仍保持黄色。
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3) Vi抗原(包膜抗原) 少数菌沙门氏菌中尚有一种表面包 膜抗原,功能与大肠杆菌的K抗原类同, 因一般认为它与毒力(Virulence)有关, 故称Vi抗原。
经过几次传代、60℃热处理或石炭 酸处理后容易消失。
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三、 生化反应
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1、吲哚试验( indol test)
细菌产生色氨酸酶,可分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛 基质(吲哚),靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用, 生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚(无色)+对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰 吲哚(红色,+ 大肠杆菌)
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沙门氏菌广泛分布于自然界,是引起食物中毒的 重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中, 沙门氏菌常居前列。因此,沙门氏菌的检测是各国检 验机构对多种进出口食品的必检项目之一。 沙门氏菌不产生外毒素,但能产生毒力较强的内 毒素。 沙门氏菌主要通过食物、饮水经口感染。可存在 多种食物中,包括生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和 田鸡腿等。
*H抗原可分为两相 第1相:为特异相,用小写英文字母表示,a~z,Z以后 则从z1、z2……,已编到z83。
第2相:为非特异相以阿拉伯数字表示,共7种。
具有第1相和第2相H抗原的细菌称为双相菌,大多数沙 门氏菌属于此; 仅有一相者称单相菌,如肠炎沙门氏菌。 极少数无鞭毛菌两相抗原都不具有,称为无相菌,如鸡 白痢沙门氏菌。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析一、简介沙门氏菌是一种能引起人类和动物肠道感染的细菌,也可以引起食品中毒。
它主要通过食品、饮用水和接触感染物传播。
对于食品中的沙门氏菌进行检验和分析,对保障食品安全至关重要。
二、检验方法1.纳氏肠杆菌培养基法用纳氏肠杆菌培养基法检验食品中的沙门氏菌,是一种常用的方法。
它利用富含养分的培养基,使得沙门氏菌能够在培养基中迅速生长,并形成典型的菌落。
检验人员可以根据菌落的形态、颜色和大小等特征来识别沙门氏菌的存在。
2.血液平板培养法血液平板培养法是另一种常用的检验方法。
将待测样品涂抹在富含养分的血液平板上,再将平板置于恒温培养箱中培养一段时间,观察是否有典型的沙门氏菌菌落的产生。
3. PCR法PCR法是一种较为快速、敏感的检验方法。
通过PCR技术可以快速对样品中的沙门氏菌进行检测,结果准确可靠。
这种方法对实验条件和检验人员的要求较高,但可以提高检测的速度和准确性。
三、分析结果通过上述方法进行检验后,需要进行有关分析。
针对检验结果,进行有关的分析可以有效地判断食品中是否存在沙门氏菌污染,并确定污染的程度。
1. 菌落计数通过检验方法得到的菌落数可以反映食品中的沙门氏菌污染程度。
一般来说,菌落数越多,说明沙门氏菌污染越严重。
2. 菌株鉴定对分离出的菌株进行鉴定,可以确定其是否为沙门氏菌。
根据鉴定结果,可以进一步分析菌株的来源和特性。
3. 毒素检测有些沙门氏菌会产生毒素,对食品中的毒素进行检测,可以确定食品中是否存在具有毒素产生能力的沙门氏菌。
四、实验注意事项在进行沙门氏菌检验及分析时,有一些实验注意事项需要遵守。
1. 实验室操作检验和分析工作要在严格的实验室条件下进行,保证实验室内的环境洁净,避免交叉污染。
2. 操作规范操作人员要求严格遵守相关操作规程,使用消毒剂对实验仪器、培养基和工作台进行处理。
3. 实验安全在进行检验和分析实验时,要注意个人防护,避免因接触致病菌而导致感染。
五、应用领域沙门氏菌检验及分析在食品安全领域具有广泛的应用。
第五章沙门氏菌的检验ppt课件
血平板:中等大小、灰白色菌落。
生物学特性
生化反应:
不发酵乳糖和蔗糖,不产生吲 哚,不分解尿素,VP试验阴 性,大多产生硫化氢。发酵葡 萄糖、麦芽糖和甘露醇,除伤 寒杆菌产酸不产气外,其他沙 门氏菌均产酸产气。
ONPG -
沙门氏菌血清学试验 沙门氏菌血清学试验 沙门氏菌血清学试验
非沙门氏菌
报告
沙门氏菌在BS平板上
沙门氏菌在HE平板上
沙门氏菌的TSI试验
三糖铁(TSI)琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变黄);产生硫化氢 (变黑)。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸 ,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物, 故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍 保持黄色。
商品化生化鉴定系统
API 20E API 20E 生化鉴定 是根据快速酶促反应 及代谢产物的检测技 术发展的一种细菌编 码鉴定法,广泛应用 于临床、食品中革兰 氏阴性杆菌的快速鉴定。
API 20E
第1位数
O AL N DD P HC G
第2位数 第3位数 第4位数 第5位数
O CI H U T
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
KCN生长试验
右:抑制生长
沙门氏菌在TSI和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的结果
斜面 底层 产气 硫化氢 赖氨酸脱羧酶 初步判断
K A +(- ) +(- )
+
K A +(- ) +(- )
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌,其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。
下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 培养分离沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。
常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。
将待检样品接种于选择性培养基上,并采用适当的温度和培养时间进行培养。
沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落,可以通过形态特征进行初步判断。
2. 生化检测生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。
常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。
气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。
亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。
尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。
3. 血清学检测血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。
常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。
在这些方法中,沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合,形成可见的凝集物或荧光产物,从而判断是否感染沙门氏菌。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应(PCR)、核酸杂交和基因测序等。
PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏菌基因的特定片段,从而进行检测。
核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合,形成杂交信号来进行检测。
基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列,确定其身份。
总结:沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。
这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在,可以提供准确鉴定和检测结果。
在实际应用中,结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病,可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全,确保公众的健康,我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章,详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步:样品准备在进行沙门氏菌检验之前,我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等,可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点,并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染,并确保样品的数量足够进行检验。
第二步:样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来,并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理,常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中,利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长,从而使沙门氏菌生长出来。
第三步:菌落鉴定在样品处理后,我们需要对培养基上的菌落进行鉴定,确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因,通常使用PCR技术进行检测。
第四步:抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验,我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验,然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果,可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步:结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析,并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估,确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌,还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时,需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果,以及相应的建议和措施。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等,能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查:感染沙门氏菌时,多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况,大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象,该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查:感染沙门氏菌以后,部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况,通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查:检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况,有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外,沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等,如果自身的病情比较严重,建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗,以免延误病情。
沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌的检验原理沙门氏菌是一类广泛存在于自然界中的革兰氏阴性杆菌,它是现代医学和食品安全领域中一个备受关注的细菌。
沙门氏菌感染会引起人体的食物中毒和肠道感染等疾病,严重时甚至会危及生命。
因此,沙门氏菌的快速检测和准确诊断显得尤为重要。
沙门氏菌的检验原理主要是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
首先,从样品中分离出可疑的沙门氏菌菌株。
这一步骤通常通过将样品接种在含有沙门氏菌生长所需的富营养培养基上来实现。
沙门氏菌在这种培养基上生长迅速,菌落呈灰白色,有时带有红色或黑色。
接下来,对分离出的沙门氏菌菌株进行鉴定和鉴别。
这一步骤通常使用传统的生化试验和分子生物学技术。
传统的生化试验包括对菌株进行氧化-发酵试验、葡萄糖发酵试验、亚硝酸盐还原试验等。
这些试验通过检测菌株对不同营养物质的利用和代谢产物的生成来确定其是否为沙门氏菌。
分子生物学技术也被广泛应用于沙门氏菌的检验中。
其中最常用的技术是聚合酶链反应(PCR),它可以通过扩增沙门氏菌特异基因片段来识别和检测沙门氏菌。
PCR技术具有高度特异性和敏感性,可以在短时间内检测到沙门氏菌的存在。
除了分离和鉴定菌株外,还可以通过检测沙门氏菌的特异性抗原来进行沙门氏菌的检验。
沙门氏菌的特异性抗原主要包括菌壁脂多糖(LPS)和外膜蛋白等。
通过将样品与特异性抗体结合,然后通过免疫反应来检测是否存在沙门氏菌。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫层析试验(ICA)等。
沙门氏菌的检验原理是基于沙门氏菌的特征和特异性抗原来进行的。
通过分离菌株、鉴定和鉴别以及检测特异性抗原,可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
这对于食品安全和公共卫生至关重要,有助于及时采取措施防止沙门氏菌的传播和感染。
沙门氏菌的检验原理是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
这一检验方法结合了传统的生化试验和分子生物学技术,可以快速准确地诊断沙门氏菌感染,为食品安全和公共卫生提供了重要的支持。
然而,需要注意的是,沙门氏菌的检验方法在实际应用中仍然面临一些挑战,如样品处理和检测灵敏度等方面的问题。
沙门氏菌的检验方法与注意事项
沙门氏菌的检验方法与注意事项在日常微生物检验中,沙门氏菌比较常见,是一种致病性细菌,国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌,所以在检验沙门氏菌时,对试剂与培养基有很高的要求,下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍!一、沙门氏菌检测的原因和意义根据相关统计显示,我们国家因细菌性食物中毒的人中,有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。
人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物,就会造成细菌性感染,以此在毒素的影响下产生食物中毒,造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。
而且沙门氏菌的传播途径较多,肉、蛋和其他食物,从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况,所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验(一)前增菌(无选择性)BPW(缓冲蛋白胨水)属于一种比较常见的增菌培养基,不包括任何抑制物质,有助于修复受损的沙门氏菌。
促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。
(二)选择性增菌TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液)内含有硫代硫酸钠,结合四硫磺酸钠,能够对肠道共生菌进行有效抑制,而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌,可以在这一培养基当中生长繁殖;煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖,而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。
SC(亚硒酸盐胱氨酸增菌液)能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌,其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸,促使亚硒酸与硫的复合物生产,对细菌硫的代谢产生干扰,进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。
(三)分离培养基(选择性)①BS(亚硫酸铋琼脂)内含亚硫酸铋指示剂,可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制,但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响;其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖,还原亚硫酸铋,使其形成硫酸铋,使黑色菌落附近有黑棕色的环,对光可看到金属光泽。
BS的压力和温度不可过高,避免选择性下降,需在使用前配制,放置阴暗处储存,48小时后丧失选择性,储存不合理会造成色浅,表示效果开始减弱,联合TTB、SC使用能够提高检出率。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析沙门氏菌是一类常见的细菌,通常存在于一些动物体内,例如家禽和家畜的肠道内。
它们也有可能通过食物和水传播到人体内,导致沙门氏菌感染。
本文将介绍沙门氏菌检验及分析的相关内容。
1. 沙门氏菌的检验方法(1)血清凝集反应法以沙门氏菌的特异性抗原与沙门氏菌患者血清反应,观察血清凝集是否发生,来判断患者是否感染了沙门氏菌。
这种方法快速简便,但准确度较低。
(2)细菌培养法将患者样本培养在含有沙门氏菌生长所需营养物的培养基上,观察是否出现菌落,来判断是否感染了沙门氏菌。
这种方法耗时较长,但准确度较高。
沙门氏菌的感染对人体健康有很大影响,因此对沙门氏菌的分析也非常重要。
(1)简单的感染症状一般情况下,沙门氏菌感染的症状包括腹泻、呕吐、发热等。
这些症状通常在感染后1-3天内出现,并可持续数日至数周不等。
(2)食品检测沙门氏菌通常通过食物途径传播,因此食品检测是非常重要的。
食品中是否存在沙门氏菌可通过简单的生化方法来鉴定。
(3)抗生素敏感性测试对于沙门氏菌感染的治疗,抗生素是常用的治疗手段之一。
在使用抗生素前,应进行抗生素敏感性测试,以确保所选择的抗生素对沙门氏菌有效。
3. 沙门氏菌感染的预防(1)注意卫生沙门氏菌多数存在于家禽和家畜的肠道内,因此在处理家禽和家畜时应注意卫生,避免沙门氏菌感染。
食品加工时应注意卫生,使用新鲜食材,逐层消毒,避免沙门氏菌感染。
(3)加强个人卫生个人卫生习惯也是预防沙门氏菌感染的重要措施。
包括勤洗手,不用食指挖鼻孔和耳朵等行为,不用手接触眼睛、口鼻、食物等等。
4. 总结以上就是沙门氏菌检验及分析的相关内容。
沙门氏菌属于一类较为常见的细菌,引起的感染对人体健康有很大的危害。
因此,对沙门氏菌进行检验及分析,以及采取预防措施是非常必要的。
沙门氏菌检验步骤
沙门氏菌检验步骤引言:沙门氏菌是一种常见的致病菌,可以通过食物、饮水、接触传播等途径引起人类感染。
为了及时检测和预防沙门氏菌感染,科学家们开发了一系列的检验步骤。
本文将介绍沙门氏菌检验的详细步骤,以帮助读者更好地了解和应对这一疾病。
一、样本采集:沙门氏菌检验的第一步是采集样本。
常见的样本来源包括食物、粪便、尿液、血液等。
通过正确采集样本,可以保证后续检验的准确性。
二、样本处理:采集到的样本需要进行处理,以提取潜在的沙门氏菌。
处理的方法主要包括离心、过滤、稀释等。
这一步的目的是将样本中的沙门氏菌浓缩到一个较小的体积中,方便后续的培养和检测。
三、培养:处理后的样本需要进行培养,以使沙门氏菌得到生长。
常用的培养基包括MacConkey琼脂、XLD琼脂等。
将样本均匀涂布在琼脂培养基上,并在适宜的温度下孵育。
沙门氏菌通常在37摄氏度下生长,因此需要将培养基放置在恒温箱中。
四、形态鉴定:沙门氏菌在琼脂培养基上形成典型的菌落,通过观察菌落的形态特征可以初步判断是否为沙门氏菌。
沙门氏菌的菌落通常呈现灰白色、凹陷的特点。
此外,还可以通过显微镜观察菌体形态,沙门氏菌的形态为革兰氏阴性杆菌。
五、生化试验:形态鉴定只能初步判断是否为沙门氏菌,为了进一步确诊,需要进行生化试验。
常用的生化试验包括气体产物检测、酶反应检测等。
通过观察沙门氏菌在不同培养基中的反应情况,可以准确判断是否为沙门氏菌。
六、分子检测:生化试验可以初步确诊沙门氏菌感染,但为了提高检测的敏感性和准确性,科学家们还开发了分子检测方法。
这些方法主要包括PCR、实时荧光PCR等。
通过检测沙门氏菌特有的基因序列,可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
七、药敏试验:沙门氏菌感染对抗生素的敏感性存在一定的差异,因此药敏试验是非常重要的一步。
通过将沙门氏菌培养在含有不同抗生素的培养基中,观察菌落的生长情况,可以确定沙门氏菌对抗生素的敏感性,从而指导临床治疗。
结论:沙门氏菌感染是一种常见的疾病,及早检测可以帮助医生采取有效的治疗措施。
沙门氏菌检验
引起沙门菌属食物中毒的食品
动物性食品:(肉类、禽类和蛋类,奶类等), 生熟交叉污染常见。
不分解蛋白质,感官改变不明显。
生前感染;宰后感染 发病季节主要发生在夏秋季,但全年可发生。
引起沙门菌属食物中毒的食品
主要是肉类,其次是蛋类、奶类及其他 动物性食品。
肉类主要来自动物生前感染。 蛋类可在卵巢和产蛋过程中被污染。 带有沙门菌的食品,在较高温度下久存, 细菌可在食品上大量繁殖,如果烹调时食品 加热不彻底,或熟食品再次受到污染,食用 前又未加热,即可因食入大量活菌而发生中 毒。
沙门氏杆菌的H抗原有两种,称为第1相和第2相。第 1相特异性高,又称特异相,用a、b、c等表示,第2 相特异性低,为数种沙门氏杆菌所共有,也称非特 异相,用1、2、3等表示。具有第1相和第2相h抗原 的细菌称为双相菌,仅有一相者称单相菌。每一组 沙门氏杆菌根据H抗原不同,可进一步分种或型。H 抗原刺激机体主要产生lgg抗体。
VI抗原
本 质 伤寒杆菌的表面抗原
因 抗原性弱,刺激机体产生短暂低效价抗体 为
伴随活菌一起存在
所 以
测定VI抗体有助于检出带菌者
沙门氏菌的抵抗力
1.对热的抵抗力很弱,在70℃经5~10 分钟即被杀死。
2.耐盐。
3.外环境生存时间较长。
四. 沙门氏菌食物中毒
沙门氏菌能引起人和动物的疾病,主要是通过消 化道传染。由沙门氏菌所引起的感染病统称为沙 门氏菌病。沙门氏菌属的细菌都有致病性。
美国兽医微生物和病理学 家。是美国授予的第一位 兽医学博士。1884年任美 国农业部畜牧局首任局长。 他首次从病猪中分离出猪 霍乱沙门氏菌。在医学微 生物中通用的沙门氏菌一 词,就是为纪念他而以他
的名字命名的。
沙门氏菌检验
沙门氏菌的检验1. 目的规范沙门氏菌检测方法,使产品检验有据可依。
2. 消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染与接种的培养物等必须经灭菌后方能使用。
注:本实验采用湿热灭菌法,吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度与压力灭菌,一般就是121C (1、5MPa下灭菌20min。
3. 原理沙门氏菌的检验分四个连续阶段:4. 操作步骤4、1准备工作配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基(无需灭菌)、HE培养基、三糖铁培养基等,并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
4、2前增菌在无菌环境下,称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中, 然后放到36±「C的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;4、3增菌在无菌环境下,用灭菌好的吸管吸取10ml 前增菌液接种与100ml 亚硒酸盐胱 氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱36± 1C ,培养18-24h; 4、4分离培养将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm 的接种环挑取一环,划线于表面 无凝结水的BS 与SS 琼脂平板各一个,于36± 1C 培养18-24h 。
观察各个平板上 有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。
如无典型或可疑菌落 ,应再继续培养24 ± 2h 。
然后观察培养的平板(黄色的菌落就是大肠杆菌;蓝绿色或蓝色,产硫化氢, 菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌)。
沙门氏菌属各亚属在其她选择性琼脂平板的菌落特征4、5生化实验用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落,接种到三糖铁 培养基上,恒温培养箱36 ± 1C ,培养18-24h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色(碱性),底端显黄色(酸性),有气体产生,形成硫化氢(琼脂变黑) 三糖铁培养基变化表肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果斜面底层产气硫化氢可能的菌属和种/沙门氏葡属.弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形+ + +杆嚙属、缓慢爱徳华氏苗沙门氏菌皿、弗劳地氐拧樣酸杆菌、普通+ + +变形杆菌_ 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌*蜂窝哈夫尼+ +■亚曲、摩根氏曲、普罗菲登斯菌属伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏莆、志贺氏葡属S + - - 大肠埃希氏曲、蜂窝哈夫尼亚菌•摩很氏菌"普罗菲登斯菌属大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌+ +■属.沙雷氏菌属•弟劳地氏拧檬酸杆菌注:+表示阳性;-表示阴件;+/ -表示多数阳性.少数阴性。
沙门氏菌的检验步骤
沙门氏菌的检验步骤沙门氏菌是一种常见的食物中毒细菌,它可以引起沙门氏菌属感染。
所谓的沙门氏菌属包括两个物种:Salmonella enterica和Salmonella bongori。
这两个物种又包含了超过2,500种不同的血清型。
为了检测食物或其他样本中是否存在沙门氏菌,通常需要进行以下步骤:1.样本收集:收集来自可疑食物或其他可能被污染的样品,如肉、蛋、奶制品、水果、蔬菜或动物粪便。
确保采集样品的方法是无菌的,以避免污染。
2.前处理:对样本进行适当的前处理,以提高沙门氏菌的检测效果。
这可能包括样品的预处理、样品的培养基中添加抑菌剂等。
3. 培养:将样品接种于适宜的培养基上,如XLD(Xylose Lysine Deo某ycholate Agar)或SS(Salmonella Shigella Agar)等。
这些培养基可以选择性地识别并培养Salmonella属的细菌。
4.孵育:将培养皿放入恒温培养箱,通常是在37℃左右,孵育时间一般为24至48小时。
5.形态特征观察:观察培养基上菌落的形态特征,如形状、颜色、大小等。
沙门氏菌通常形成呈灰白色、圆形、凹陷的菌落。
6.血清型鉴定:对沙门氏菌进行血清学鉴定以确定其血清型。
这通常涉及到使用抗体和相应的血清反应,以确定菌株的亚型。
7.生化测试:对阳性菌落进行生化测试,如甲烷糖发酵试验和硫化氢产生试验,以进一步确认其鉴定。
8.PCR检测:PCR是目前常用的沙门氏菌检测方法之一、它利用聚合酶链反应(PCR)技术,检测样品中的沙门氏菌DNA。
9.分子的子类型分析:通过分子生物学技术,如基因测序、脉冲场凝胶电泳(PFGE)或肽核酸类似程序分析(AFLP),确定沙门氏菌的亚型。
总之,沙门氏菌的检验步骤包括:样本收集、前处理、培养、孵育、形态特征观察、血清型鉴定、生化测试、PCR检测和分子的子类型分析。
这些步骤的目的是确认样品中是否存在沙门氏菌,并确定其类型和亚型,以便采取相应的预防和控制措施。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析沙门氏菌是一种常见的细菌,它是一种肠道中存在的病原菌,也是一种会引起食物中毒的细菌。
因此,对食品中是否含有沙门氏菌的检测显得尤为重要。
本文将讨论沙门氏菌的检验及分析。
一、沙门氏菌的检测方法1、培养方法:沙门氏菌可以在常规的培养基上培养,最常用的是含有胆汁、钠氯和肉汤的液体培养基。
为了增强提取沙门氏菌的准确性和产出,一些特定的选择性平板可以使用,例如MacConkey平板、SS平板或XLD平板。
2、分子生物学方法:PCR检测法是最常见的分子生物学方法之一,它能够检测出非常小的沙门氏菌种群,而不用传统的培养方法。
PCR检测法在物质的检测、生命科学和分子检测等方面发挥着巨大的作用,因此在沙门氏菌检测中也是一个十分重要的检测方法。
二、沙门氏菌的分析方法1、食物检测法:针对某些食品如肉制品、低酸奶、蛋制品等,一般采用已经证实的正式方法来进行检测。
一些具有特异性和高敏感性的方法包括文化方法、免疫学方法和分子生物学方法等。
2、环境检测法:针对食品制作过程中的环境样品进行检测。
这些样品中可能包括牛奶或鸡蛋残留的菌种和接触制造食品的各种人员的手、口腔及袍子等菌群。
检测方法类似于食物检测法,包括文化方法、免疫学方法和分子生物学方法。
需要注意的是,一些细菌可能不能够在环境样品中明显存在,这会使得结果有所偏差。
三、沙门氏菌的风险控制方法1、仔细洗涤食品:消费者在购买食品时应仔细阅读标签,确保食品是新鲜的。
同时,食品应洗涤干净以去除可能存在的菌群。
2、食品加热:食品加热是消灭沙门氏菌最常用的方法。
保健专家建议将肉品煮至中间部位温度达到160°F(71°C),这可确保煮熟并杀死存在的细菌。
3、储存要注意:沙门氏菌喜欢在潮湿、潮湿的环境中繁殖。
所以,消费者最好将食品储存在干燥的地方,并注意食品的过期日期。
结论:消费者和食品业者在选择食品时,应该提高对食品中是否存在沙门氏菌的警惕性,并采取措施来防止感染。
沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌的检验原理沙门氏菌是一种常见的致病菌,可引起食物中毒和肠道感染等疾病。
为了准确快速地检测沙门氏菌的存在与否,科学家们开发了各种检验方法。
本文将介绍沙门氏菌的检验原理及相关方法。
一、沙门氏菌的检验原理沙门氏菌的检验原理主要是通过寻找沙门氏菌特有的生物学特征来进行检测。
沙门氏菌属于革兰氏阴性菌,具有杆状形态,并具有一根或两根鞭毛,能以鞭毛运动。
沙门氏菌还能产生气泡,使培养基表面形成膜状薄层。
此外,沙门氏菌还具有一定的抗酸性,在酸性环境中能存活,并具有较强的耐热性。
二、沙门氏菌的检验方法1. 培养法:将样品(如食物、水等)接种在含有沙门氏菌生长所需营养物质的培养基上,经过一定的时间后,观察培养基上是否出现沙门氏菌的生长,如有则判断样品中存在沙门氏菌。
2. 蛋白质检测法:沙门氏菌中存在一种特殊的蛋白质,称为抗原,可与特异性抗体结合形成免疫复合物。
通过将待测样品与特异性抗体接触,然后加入试剂,观察是否出现颜色变化或荧光信号,从而判断样品中是否存在沙门氏菌。
3. 分子生物学方法:通过提取样品中的DNA或RNA,利用PCR扩增技术或实时荧光定量PCR技术,检测样品中是否存在沙门氏菌的特定基因序列,从而判断样品中是否存在沙门氏菌。
4. 快速检测法:近年来,科学家们开发了一种名为免疫层析试纸法的快速检测方法。
该方法利用特异性抗体与沙门氏菌的抗原结合,形成可见的颜色条纹,可以在短时间内迅速判断样品中是否存在沙门氏菌。
三、沙门氏菌的检验应用沙门氏菌的检验在食品安全、公共卫生等领域具有重要的应用价值。
通过快速检验沙门氏菌的存在与否,可以及时采取相应的控制措施,防止食品中毒事件的发生。
此外,沙门氏菌的检验还可以用于监测水源、环境卫生等方面,保障公众健康。
总结起来,沙门氏菌的检验原理主要是通过寻找沙门氏菌特有的生物学特征来进行检测。
常用的检验方法包括培养法、蛋白质检测法、分子生物学方法和快速检测法等。
沙门氏菌的检验在食品安全和公共卫生等领域具有重要的应用价值,可以保障公众健康和食品安全。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析沙门氏菌是一种能够引起食物中毒的细菌,它会在食品生产和加工过程中引起污染,导致食品中毒事件的发生。
对食品中的沙门氏菌进行检验及分析是非常重要的,可以保障食品安全,保护消费者的健康。
一、沙门氏菌的检验方法1. 检验样品的选择要进行沙门氏菌的检验,首先需要选择检验样品。
常见的样品包括生鲜肉类、禽类、蛋类、奶制品、水产品、蔬菜和水果等。
2. 检验方法沙门氏菌的检验方法主要有传统培养法和分子生物学方法。
传统培养法:通过在适宜的培养基上培养样品中的沙门氏菌,并进行培养时间、培养温度和培养后的观察来进行检验。
分子生物学方法:包括PCR、实时荧光PCR、蛋白质芯片技术等。
3. 检验过程(1)样品的制备:将样品进行预处理,如样品减容、均质化、稀释等。
(2)沙门氏菌的分离:将样品在培养基上进行分离培养,并进行相应的筛选和鉴定。
(3)菌落的计数:通过计数方法,对沙门氏菌的数量进行测定。
(4)沙门氏菌的鉴定:对分离出的沙门氏菌进行鉴定,确认其种属和毒力类型。
4. 结果分析通过检验分析得到的结果,对样品是否超标、是否存在沙门氏菌污染等进行判断和分析。
二、沙门氏菌的分析意义2. 生产质量对食品中的沙门氏菌进行检验和分析,可以对生产工艺进行控制,确保生产过程的卫生安全,保障产品的质量。
3. 公共卫生及时对食品中的沙门氏菌进行检验和分析,可以帮助卫生监管部门掌握食品安全情况,及时采取措施,有效保护公共卫生。
4. 营养健康保障食品安全,避免食品中毒事件的发生,对促进人们的营养健康具有重要意义。
三、沙门氏菌的预防控制为了有效预防和控制沙门氏菌污染,可以采取以下措施:1. 生产环节控制合理设计食品生产线,加强生产卫生管理,确保生产过程中的卫生安全。
2. 原料筛选选择优质原料,确保原料的卫生安全性。
3. 加工控制加强食品加工的卫生监管,保障食品加工过程中的卫生安全。
4. 检验监控加强对食品中沙门氏菌的检验监控,确保食品质量和食品安全。
沙门氏菌的检验步骤
沙门氏菌的检验步骤
沙门氏菌检验是检测沙门氏菌的一种检验方法,经常运用于疾病诊断
或科学研究。
沙门氏菌是一种引起众多腹泻疾病的细菌。
这些疾病也被称
为沙门菌性腹泻,通常伴有发热、腹痛、腹泻和腹部肿胀等症状。
沙门氏
菌检验的目的是检测沙门氏菌以及其他可能引起腹泻的病原体,以更准确
地诊断病原体的鉴别及抗菌素抗性测定。
沙门氏菌检验的样本可以是水样
或者肠道样本,包括拇指印中的粪便、血清或其他体液样本。
一、样本采集及筛选
样本采集是沙门氏菌检验的第一步。
沙门氏菌检测的样本可以是尿液、粪便和血液。
在采集样本时,应注意样品的温度和容器表面的消毒。
在采
集血样本时,要避免及时进行处理,以免影响检测结果。
粪便样本应采集
大肠,下肢肚皮,以确保收集到完整的沙门氏菌病症。
采集完样本后,应及时运送至实验室,对样本进行及时清洗和处理,
有效防止细菌的落入和繁殖。
样本筛选时,应根据患者的急迫程度和症状,结合所有信息,判断是否有必要对样本进行检测。
二、检测方法
沙门氏菌检测的常用技术有显微镜、光学显微镜、流式细胞仪、荧光
免疫检测和细菌培养等。
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沙门氏菌的检验2.2 恒温培养箱:36 ℃±1 ℃,42 ℃±1 ℃。
2.3 均质器。
2.4 振荡器。
2.5天平:感量0.1 g。
2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL,250 mL。
2.7 无菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。
2.8 无菌培养皿:直径90 mm。
2.9 无菌试管:3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。
2.10 无菌毛细管。
2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3 培养基和试剂3.1 缓冲蛋白胨水(BPW):见附录A 中A.1。
3.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见附录A 中A.2。
3.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见附录A 中A.3。
3.4 亚硫酸铋(BS)琼脂:见附录A 中A.4。
3.5 HE 琼脂:见附录A 中A.5。
3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见附录A 中A.6。
3.8 三糖铁(TSI)琼脂:见附录A 中A.7。
3.9 蛋白胨水、靛基质试剂:见附录A 中A.8。
3.10 尿素琼脂(pH 7.2):见附录A 中A.9。
3.11 氰化钾(KCN)培养基:见附录A 中A.10。
3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基:见附录A 中A.11。
3.13 糖发酵管:见附录A 中A.12。
3.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷(ONPG)培养基:见附录A 中A.13。
3.15 半固体琼脂:见附录A 中A.14。
3.16 丙二酸钠培养基:见附录A 中A.15。
1 前增菌称取25 g(mL)样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中,以8 000 r/min~10 000 r/min 均质1 min~2 min,或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min。
2 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1 mL,转种于10 mL TTB 内,于42 ℃±1 ℃培养18 h~24h。
同时,另取1 mL,转种于10 mL SC 内,于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
3 分离分别用接种环取增菌液1 环,划线接种于一个BS 琼脂平板和一个XLD 琼脂平板(或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。
于36 ℃±1 ℃分别培养18 h~24 h (XLD 琼脂平板、HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40 h~48 h (BS 琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。
表 1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征4 生化试验(1)自选择性琼脂平板上分别挑取2 个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h,必要时可延长至48 h。
在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表2。
试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基,也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。
于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h,必要时可延长至48 h,按表3 判定结果。
反应序号A1:典型反应判定为沙门氏菌属。
如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3 项中有1项异常,按表4 可判定为沙门氏菌。
如有2 项异常为非沙门氏菌。
反应序号A2:补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。
反应序号A3:补做ONPG。
ONPG 阴性为沙门氏菌,同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。
必要时按表5 进行沙门氏菌生化群的鉴别。
A.1 缓冲蛋白胨水(BPW)A.1.1 成分蛋白胨 10.0 g氯化钠 5.0 g磷酸氢二钠(含12 个结晶水) 9.0 g磷酸二氢钾 1.5 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.2±0.2A.1.2 制法将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10 min,煮沸溶解,调节pH,高压灭菌121 ℃,15min。
A.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液A.2.1 基础液蛋白胨 10.0 g牛肉膏 5.0 g氯化钠 3.0 g碳酸钙 45.0 g 蒸馏水 1 000 mLpH 7.0±0.2除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入碳酸钙,调节pH,高压灭菌121 ℃,20 min。
A.2.2 硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(含5 个结晶水) 50.0 g蒸馏水加至100 mL高压灭菌121 ℃,20 min。
A.2.3 碘溶液碘片 20.0 g碘化钾 25.0 g蒸馏水加至100 mL将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中,再投入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解为止,然后加蒸馏水至规定的总量,贮存于棕色瓶内,塞紧瓶盖备用。
A.2.4 0.5%煌绿水溶液煌绿 0.5 g蒸馏水 100 mL溶解后,存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。
A.2.5 牛胆盐溶液牛胆盐 10.0 g蒸馏水 100 mL加热煮沸至完全溶解,高压灭菌121 ℃,20 min。
A.2.6 制法基础液 900 mL硫代硫酸钠溶液 100 mL碘溶液 20.0 mL煌绿水溶液 2.0 mL牛胆盐溶液 50.0 mL临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。
A.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液A.3.1 成分蛋白胨 5.0 g乳糖 4.0 g磷酸氢二钠 10.0 g亚硒酸氢钠 4.0 gL-胱氨酸 0.01 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.0±0.2A.3.2 制法除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,冷至55 ℃以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液溶液10 mL(称取0.1 g L-胱氨酸,加1 mol/L 氢氧化钠溶液15 mL,使溶解,再加无菌蒸馏水至100 mL 即成,如为DL-胱氨酸,用量应加倍)。
摇匀,调节pH。
A.4 亚硫酸铋(BS)琼脂A.4.1 成分蛋白胨 10.0 g牛肉膏 5.0 g葡萄糖 5.0 g 硫酸亚铁 0.3 g磷酸氢二钠 4.0 g煌绿 0.025 g 或5.0g/L 水溶液5.0mL柠檬酸铋铵 2.0 g亚硫酸钠 6.0 g琼脂 18.0 g~20 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.5±0.2A.4.2 制法将前三种成分加入300 mL 蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中,琼脂加入600 mL 蒸馏水中。
然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。
冷至80 ℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。
将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。
调节pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50 ℃~55 ℃。
加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。
注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处,超过48 h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。
A.5 HE 琼脂(Hektoen Enteric Agar)A.5.1 成分蛋白胨 12.0 g牛肉膏 3.0 g乳糖 12.0 g蔗糖 12.0 g水杨素 2 .0 g胆盐 20.0 g氯化钠 5.0 g琼脂 18.0 g~20.0 g蒸馏水 1 000 mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16.0 mL Andrade 指示剂 20.0 mL甲液 20.0 mL乙液 20.0 mLpH 7.5±0.2A.5.2 制法将前面七种成分溶解于400 mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL 蒸馏水内。
然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。
加入甲液和乙液于基础液内,调节pH。
再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50 ℃~55 ℃倾注平皿。
注:①本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性。
②甲液的配制硫代硫酸钠 34.0 g柠檬酸铁铵 4.0 g蒸馏水 100 mL③乙液的配制去氧胆酸钠 10.0 g蒸馏水 100 mL④ Andrade 指示剂酸性复红 0.5 g1mol/L 氢氧化钠溶液 16.0 mL蒸馏水 100 mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。
数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1mL~2 mL。
A.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂A.6.1 成分酵母膏 3.0 gL-赖氨酸 5.0 g木糖 3.75 g乳糖 7.5 g蔗糖 7.5 g去氧胆酸钠 2.5 g柠檬酸铁铵 0.8 g硫代硫酸钠 6.8 g氯化钠 5.0 g琼脂 15.0 g酚红 0.08 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.4±0.2A.6.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分加入400 mL 蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。
另将琼脂加入600 mL蒸馏水中,煮沸溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入指示剂,待冷至50 ℃~55 ℃倾注平皿。
注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处。
本培养基宜于当天制备,第二天使用。
A.7 三糖铁(TSI)琼脂A.7.1 成分蛋白胨 20.0 g牛肉膏 5.0 g乳糖 10.0 g蔗糖 10.0 g葡萄糖 1.0 g硫酸亚铁铵(含6 个结晶水) 0.2 g酚红 025 g 或5.0 g/L 溶液5.0 mL氯化钠 5.0 g硫代硫酸钠 0.2 g琼脂 12.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.4±0.2A.7.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分加入400 mL 蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。
另将琼脂加入600 mL蒸馏水中,煮沸溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入指示剂,混匀,分装试管,每管约2 mL~4 mL,高压灭菌121 ℃ 10 min 或115 ℃ 15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
A.8 蛋白胨水、靛基质试剂A.8.1 蛋白胨水蛋白胨(或胰蛋白胨) 20.0 g氯化钠 5.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.4±0.2将上述成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH,分装小试管,121 ℃高压灭菌15 min。
A.8.2 靛基质试剂A.8.2.1 柯凡克试剂:将5 g 对二甲氨基甲醛溶解于75 mL 戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25 mL。
A.8.2.2 欧-波试剂:将1 g 对二甲氨基苯甲醛溶解于95 mL95%乙醇内。