第二讲 糖分析方法
四、单糖的构型测定
（差向异构化）
D-果糖；D-甘露糖
NNHPh NNHPh NHNH2 HO OH OH CH2OH
成脎
CH2OH OH H2/RaneyNi HO
CHO OH OH OH CH2OH
OH OH CH2OH
COOH OH HO OH OH CH2OH HO OH OH COOH COOH OH O O HO H H OH O O
环六糊精的结构
OH
OH
OH OH
OH OH
HO OH O
HO OH O O
HO OH
O
CH2OH
CH2OH
α-环糊精
性质：环糊精为晶体，具有旋光活性，因分子中无半缩醛羟
基，因此无还原性。α，β，γ-环糊精对I2呈不同颜色。
环糊精 比旋光度 与I2呈色 孔径 深度
α-
β-
γ-
+150.5。 +160。 +177.4。 青色 0.6nm 黄色 0.8nm 0.7~0.8nm 紫褐色 1.0nm
HO HO
(CH3CO)2O ZnCl2
本节内容
21.1.4 单糖的构型测定 21.1.5 重要的单糖及其衍生物
21.2 寡糖
21.3 多糖
6
21.1.4 单糖的构型测定
1、D-戊醛糖构型的测定
测定方法：①硝酸氧化 ②降解，HNO3氧化 ③成脎
D-核糖
COOH HNO3 (无旋光性,说 明C2O H在右侧) COOH
D-异木糖
10
2、D-葡萄糖构型的测定
Fischer首先假定C5羟基在右侧：①、D-阿拉伯糖递升得甘露糖和葡萄 糖的混合物。②、D-阿拉伯糖氧化得具有旋光型的糖二酸。 ③、甘露糖和葡萄糖氧化得到的糖二酸都具有旋光性.
食品中糖的测定方法
食品中糖的测定方法对于糖的测定方法有很多，大致可分为三类1.物理法，（1.旋光法, 2 .折光法, 3.比重法,）2.物理化学法,(1.点位法, 2极普法,3.光度法,4.色谱法)3.化学方法,(1.斐林氏法. 2.高锰酸钾法. 3.碘量法.4.铁氰化钾法.5.蒽铜比色法.6.咔唑比色法)共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。
一. 总糖的测定食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。
还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基（-CHO）或酮基(=C=O)。
测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础的。
这些方法中，以各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。
在这里我们主要给大家介绍铁氰化钾法，蒽铜比色法，斐林氏容量法。
斐林氏容量法由于反应复杂，影响因素较多，所以不如铁氰化钾法准确，但其操作简单迅速，试剂稳定，故被广泛采用。
蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测液澄清，此外，在大多数情况下，测定要求不包括淀粉和糊精，这就要在测定前将淀粉，糊精去掉，这样就使操作复杂化，限制了其广泛应用。
（一）铁氰化钾法1.原理：样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的浓度和检验滴定量可计算出含糖量。
其反应为下：C6H12O6+6K3[Fe(CN)6] + 6KOH →(CHOH)4•(COOH)2 + 6K4［Fe(CN)6］+ 4H2O滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。
2，试剂1）1％的次甲基兰指示剂2)盐酸（水解作用）3）10％和30％的NaOH溶液4）1％铁氰化钾（贮存特色瓶，临用前标定）标定步骤称蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→摇匀→65-70℃水裕15分钟→取出冷却→用30％NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1％铁氰化钾于锥形瓶中→加10％NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰1滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止，记录用量。
糖分含量测定指南经过验证的分析方法和结果
折光率法密度滴定水分分析食品和 饮料中的 糖度测定糖分含量测定指南经过验证的分析方法和结果食品和饮料分析人类接触糖类已有很长的一段历史。
从之前的人造白金到普通商品的过渡是工业化的结果，但糖类一直被认为对我们的健康不利。
现在，糖在许多食品和饮料产品中都是一种重要成分。
其浓度可高可低，这取决于添加糖的目的。
准确的糖分含量是食品成分中的一个重要参数。
以下指南介绍了根据产品和要求测定糖分含量的不同方法。
目录21 简介32 解决方案总览43 高效测定食品和饮料中的糖分含量43.1 仪器测定白利糖度43.2 饮料、果汁、葡萄酒63.3 糖蜜和糖浆63.4 采用 LiquiPhysics 仪器的多参数系统74 滴定还原糖85 糖的水分和糖度95.1 测定糖的湿度95.2 测定粗糖中的水分106 生产过程控制126.1 通过滴定分析监测纯化过程126.2 典型分析126.3 自动滴定系统136.4 优势136.5 提示与诀窍137 总结148 更多信息159 附录151. 简介糖糖是指作为食品用甜味剂的通用术语。
不同的糖源可以提取各种不同类型的糖。
单糖是简单的糖类，包括葡萄糖、果糖和半乳糖。
最常用作食品的调味糖或砂糖是蔗糖，它是一种双糖。
其它双糖包括麦芽糖和乳糖。
调味糖的化学式为 C12H22O11，每克所含能量为 16.8 kJ，比水重，密度为1.6 g/cm3。
“糖”这个词起源于梵文中的“śarkarā”，意思是甜；后来这个词被引入阿拉伯，并从阿拉伯引入欧洲语言。
甘蔗和甜菜中糖分含量充足，可高效提取。
甘蔗是一种大型草本植物，从古至今一直生长在远东的热带气候区。
甜菜是一种块根作物，生长在较为寒冷的气候下。
蔗糖这种物质直接包含在这些植物中，通过榨取、煮沸或者挤压从水溶液中提取出来，并在水分煮沸的过程中结晶。
蔗糖是食品实验室中测试最多的参数。
甘蔗最早发现于公元前8,000 年前的美拉尼西亚和波利尼西亚。
大于公元600 年，人们将热甘蔗汁加入木制或陶制锥形体中 – 这就是蔗糖的制作过程。
《食品中糖的测定方法》
《食品中糖的测定方法》糖是人体所需要的基本营养物质之一，天然食品中或经过加工的食品中均含有糖，因此测定食品中的糖含量是很有必要的。
本文将从常见的食品中糖的测定方法出发，详细介绍其原理及操作流程，包括显色法、高温反应法和比旋法等。
一、显色法显色法是当前最常用的测定糖含量的方法之一，适用于各种类型的糖，如单糖、双糖和多糖等。
该方法的原理是利用糖将某些金属阳离子还原为金属，而金属被还原后会显色，通过比色法来测定糖的含量。
操作流程：1. 食品样品称取适量，加入一定量的水，用搅拌器混合均匀。
2. 取一定量的样品溶液，加入适量的硫酸，然后加入稀酸性硫酸钾。
3. 将试管放入沸水中加热沸腾2~3分钟后冷却到室温，然后加入硼酸溶液，并用氢氧化钠调整pH值。
4. 添加一定量的柠檬酸铵和硫酸亚铁，摇晃5~10秒后，倒入定量瓶中，加入水至刻度并混合均匀。
5. 将比色皿放入波长648nm的分光光度计中，以纯蒸馏水为参比溶液进行调零，然后加入一定量的试液，记录吸光度。
6. 按照比色皿中的样品浓度计算出糖的含量。
二、高温反应法高温反应法通常适用于葡萄糖的测定。
该方法的原理是将葡萄糖在高温下与类似于尿素的化合物反应，生成有色产物，在一定波长下进行比色，从而测定葡萄糖的含量。
2. 将混合均匀的样品溶液倒入试管中，加入苏斯洛溶液和Copper-Tartrate液。
3. 摇晃混合均匀后，将试管放入加热水浴中，保持温度在95℃左右，反应30~40分钟。
4. 试管取出放置降温后，计算产生的颜色深度，并通过与标准溶液比色，计算出糖的含量。
三、比旋法比旋法是一种简单易行的方法，适用于多糖和单糖的测定。
该方法的原理是通过旋光仪测定糖分子的光学旋转，从而得到糖的含量。
2. 过滤处理得到无浮渣的取样液，将取样液置于旋光仪中测定旋光度。
3. 计算得到旋光度后，按照所测定糖的性质和种类进行计算出糖含量。
总之，每种测定方法都有其优势和局限性，选择适用于特定类型的食品的方法最为重要。
第二讲糖分析方法
第二讲糖的分析方法一、中性糖的测定1．还原糖的次亚碘酸盐定量法适用：各种醛糖；适用于测定淀粉酶解时糖苷键水解的百分率，也可测定淀粉酶产物的寡聚糖链长。
基本反应：CH2OH(CHOH)n CHO+I2+3NaOH→CH2OH(CHOH)nCOONa+2NaI+2H2O (氧化)I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+ NaI (滴定) 2．3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法原理：在碱性溶液中，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
注意：该法不是化学计量反应，戊糖、已糖和双糖与DNS反应的生色度A500/μmol糖的值分别是：戊糖（木糖、阿拉伯糖）：0.42；已糖（葡萄糖、半乳糖、甘露糖）：0.46；双糖（麦芽糖、乳糖）：0.65。
有人认为还原糖的醛基被氧化为羧基，但当量不准确，不同的糖类产生不等等量的色度，表明它的化学反应是较复杂的。
3．Somogyi-Nelson法还原糖将铜试剂还原成氧化亚铜，在浓硫酸存在下与砷钼酸生成蓝色溶液，在560nm下的光密度与还原糖浓度呈比例关系。
注意：比方法重复性较好，产物稳定，测定范围10-180μg/mL。
4．苯酚-硫酸法苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的已糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，已糖在490nm处，戊糖及糖醛酸在480nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
注意：（1）该法颜色持久，较稳定；（2）每种糖的显色值不同，故不宜直接用于杂多糖的定量测定；分析杂多糖时，可根据各种单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（3）有颜色的样品，测定值偏高；（4）此法较适于检测凝胶柱部分收集样品中相对糖量的分析。
5．蒽酮-硫酸法糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。
糖类的分析方法
糖分析方法（一）直接滴定法（本法是国家标准分析方法）中华人民共和国行业标准(果汁－总糖的测定－直接滴定法)SB/T 10203-1994 Ⅰ、原理❖一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用标液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝做指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。
Ⅱ、仪器和试剂1．仪器酸式滴定管，可调电炉（带石棉板），250ml容量瓶。
2．试剂1. 盐酸。
2. 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
3. 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
4. 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。
5. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。
6. 葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水稀释至1000L。
此溶液相当于1mg/ml葡萄糖（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）。
7. 果糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。
8. 乳糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。
9. 转化糖标准溶液：准确称取1.0526g纯蔗糖，用100ml水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml盐酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加热15min，放置至室温定容至1000ml，每ml 标准溶液相当于1.0mg转化糖。
食品中糖质含量的检测及分析
食品中糖质含量的检测及分析糖是我们日常饮食中经常摄入的一种营养素，它能提供能量，但摄入过量却会导致肥胖和慢性疾病的风险增加。
因此，了解食品中的糖质含量对于我们合理控制饮食、保持健康至关重要。
第一部分：糖质含量的检测方法糖质的检测方法主要分为物理方法和化学方法两种。
物理方法包括密度测定、旋光法和红外吸收法等。
密度测定法是通过比较溶液中的糖质浓度与标准溶液的密度来确定糖质含量；旋光法则是通过测量糖溶液中的光旋转角度来确定糖质含量；红外吸收法是通过糖分子特有的红外光谱来检测糖质含量。
化学方法则主要包括酶解法、酸水解法和高效液相色谱法等。
酶解法利用特定酶将糖分子水解为简单糖，在化学反应中生成可检测的物质，从而确定糖质含量；酸水解法则是利用酸将糖分子水解为单糖，然后通过滴定或色谱法测定单糖的含量；高效液相色谱法则是利用色谱柱对食品样品进行分离和检测，从而确定其中糖质的含量。
第二部分：食品中的糖质含量分析首先，我们需要明确食品中糖质的来源。
糖通常来自于天然食物和加工食品中。
天然食物中的糖主要来自于水果、蔬菜和奶制品等，而加工食品中的糖则主要是由于添加的糖和淀粉的分解产物。
因此，对于不同类型的食品，我们需要采用不同的方法来进行糖质含量的分析。
其次，我们还需要考虑糖质的不同种类。
糖质分为单糖、双糖和多糖。
单糖包括葡萄糖、果糖和半乳糖等，双糖主要是蔗糖和乳糖，多糖则包括淀粉和纤维素等。
针对不同种类的糖质，我们需要选择不同的分析方法。
最后，我们需要选择合适的食品样品。
食品中的糖质含量是非常复杂的，因为不同的食品中可能同时含有多种糖质。
因此，在分析过程中，我们需要选取代表性的食品样本进行测试，以得出可靠的结果。
第三部分：糖质含量分析的挑战与前景糖质含量的分析在实际应用中存在一些挑战。
首先，食品中的糖质含量会受到许多因素的影响，包括季节、种植地点和处理方法等。
因此，在分析过程中需要考虑这些因素的影响，以得出准确的结果。
糖组成分析方法解析：液糖样品的定性与定量研究技巧
糖组成分析方法解析：液糖样品的定性与定量研究技巧糖类化合物是生物体内最常见的有机分子之一，也是生物药物中不可或缺的成分之一。
因此，对于糖组成的分析和研究显得尤为重要。
本文将介绍液糖样品的定性与定量研究技巧，帮助读者更好地了解糖组成分析方法解析。
一、糖类化合物的基本结构糖类化合物是由碳、氢、氧三种元素组成的有机化合物，其基本结构为多羟基醛或酮。
糖类化合物可以分为单糖、双糖、寡糖和多糖四种类型，其中单糖是最基本的糖类化合物，包括葡萄糖、果糖、半乳糖等。
图1。
二、液糖样品的定性分析技巧液糖样品的定性分析技巧主要包括色谱法、质谱法和核磁共振法等。
其中，色谱法是最常用的液糖样品定性分析技术之一。
色谱法可以分为气相色谱法和液相色谱法两种类型。
液相色谱法是最常用的液糖样品定性分析技术之一，其原理是利用样品中糖类化合物的亲水性和分子大小差异，通过不同的色谱柱和流动相来分离和检测糖类化合物。
三、液糖样品的定量分析技巧液糖样品的定量分析技巧主要包括比色法、荧光法和质谱法等。
其中，比色法是最常用的液糖样品定量分析技术之一。
比色法的原理是利用糖类化合物与某些化学试剂反应后产生的比色反应来定量糖类化合物的含量。
荧光法则是利用糖类化合物与某些化学试剂反应后产生的荧光信号来定量糖类化合物的含量。
质谱法则是利用质谱仪对糖类化合物进行分析和检测，可以实现高灵敏度和高分辨率的定量分析。
四、糖组成分析方法解析的应用糖组成分析方法解析在生物药物研究和开发中具有重要的应用价值。
通过对生物药物中糖组成的分析和研究，可以了解生物药物的结构和性质，为生物药物的研究和开发提供重要的参考依据。
此外，糖组成分析方法解析还可以用于生物药物的质量控制和质量评价，保证生物药物的质量和安全性。
糖组成分析方法解析是生物药物研究和开发中不可或缺的技术之一。
液糖样品的定性与定量研究技巧是糖组成分析方法解析的重要组成部分。
通过液糖样品的定性与定量研究技巧，我们可以准确地分析和测量液糖样品中的糖类化合物的含量和组成。
四种糖的测定方法
四种糖的测定方法糖是一类普遍存在于食品和生物体内的有机化合物，在生物体内扮演着能量供应和结构支持的重要角色。
因此，准确测定糖的含量对于食品工业、医学研究以及农业等领域至关重要。
本文将介绍四种常见的糖类测定方法：离子色谱法、高效液相色谱法、酶法和光学旋光法。
离子色谱法（Ion Chromatography，IC）是一种基于糖与离子交换柱相互作用的分析方法。
该方法的原理是，通过将样品中的糖溶解成离子形式，并通过离子色谱柱对其进行分离和定量测定。
该方法具有高灵敏度、分离效果好和操作简便等特点。
离子色谱法广泛应用于果汁、乳制品、饮料等食品中糖的含量测定，同时也可用于生物体内糖的测定，如血糖测定。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种利用高压将流动相通过色谱柱以及对样品中的目标物进行分离和检测的方法。
在糖的测定中，通常采用葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）进行检测。
首先，将样品中的糖通过酶反应转化为过氧化氢和酮糖，然后过氧化氢再和荧光素酶反应生成荧光素，最后通过荧光检测器进行定量测定。
该方法具有高灵敏度、准确度高和分离效果好的特点，广泛应用于食品和生物体中糖类的测定。
酶法是一种常见的测定糖的方法。
在糖类测定中，常使用葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）进行测定。
该酶与葡萄糖结合形成过氧化氢和酮糖，然后通过反应转换为酸与染料反应产生有色产物，最后根据产生的色度与糖的浓度成正比进行定量测定。
酶法具有操作简便、准确性高和灵敏度高等特点，广泛应用于血糖检测和食品中糖类的测定等领域。
光学旋光法是一种通过测量糖溶液在光的干涉下发生的旋光现象来测定糖含量的方法。
根据糖分子中的手性碳原子的存在，使得糖分子能够旋光，通过测量光经过旋光液体时的偏离程度，并与标准旋光度进行对比，可以确定糖的含量。
光学旋光法具有准确性高、非破坏性测量以及对复杂样品的适用性等特点，广泛应用于食品、医药等领域的糖类测定。
糖的测定方法
糖的测定方法对于糖的测定方法有很多，大致可分为三类1.物理法，（1.旋光法, 2 .折光法, 3.比重法,）2.物理化学法,(1.点位法, 2极普法,3.光度法,4.色谱法)3.化学方法,(1.斐林氏法. 2.高锰酸钾法. 3.碘量法.4.铁法.5.蒽铜比色法.6.咔唑比色法)共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。
一. 总糖的测定食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。
还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基（-CHO）或酮基(=C=O)。
测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础的。
这些方法中，以各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。
在这里我们主要给大家介绍铁法，蒽铜比色法，斐林氏容量法。
斐林氏容量法由于反应复杂，影响因素较多，所以不如铁法准确，但其操作简单迅速，试剂稳定，故被广泛采用。
蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测液澄清，此外，在大多数情况下，测定要求不包括淀粉和糊精，这就要在测定前将淀粉，糊精去掉，这样就使操作复杂化，限制了其广泛应用。
（一）铁法1.原理：样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁还原，根据铁的浓度和检验滴定量可计算出含糖量。
其反应为下：C6H12O6+6K3[Fe(CN)6]+ 6KOH →(CHOH)4·(COOH)2 +6K4［Fe(CN)6］+ 4H2O滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。
2，试剂1）1％的次甲基兰指示剂2)盐酸（水解作用）3）10％和30％的NaOH溶液4）1％铁（贮存特色瓶，临用前标定）标定步骤称蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→摇匀→65-70℃水裕15分钟→取出冷却→用30％NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1％铁于锥形瓶中→加10％NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰1滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止，记录用量。
【最新】糖类的测定
【最新】糖类的测定
糖类的测定是一种常见的化学分析方法，常用于食品、饮料和生物样品的分析。
糖类分析主要包括总糖测定和特定糖的测定。
1. 总糖测定：总糖测定常用的方法有酚硫酸法、安培洛斯法和酶法等。
酚硫酸法是最常用的总糖测定方法，利用硫酸和酚的反应产生橙黄色的复合物，通过比色法或光度法测定其吸光度，从而确定总糖含量。
安培洛斯法是一种利用甲酚和硫酸铁作用生成蓝色化合物的方法，测定总糖含量。
酶法是通过使用特定酶将糖转化为其他可测定物质，并通过测定这些产物来确定总糖浓度。
2. 特定糖的测定：特定糖的测定常用的方法有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法等。
HPLC是一种常
用且可靠的测定特定糖的方法，通过分离和检测样品中的糖类分子来确定特定糖的含量。
GC是一种基于气相色谱原理的方法，通过将样品中的糖类化合物转化为易挥发的衍生化物，然后通过气相色谱分离和检测来确定特定糖的含量。
质谱法是利用质谱仪对样品中的糖分子进行离子化并进行质量分析，从而确定特定糖的含量。
糖类的测定方法多种多样，科学家们可以根据实际需要选择合适的方法进行测定，以获得准确的糖类含量数据。
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第二讲糖的分析方法
一、中性糖的测定
1．还原糖的次亚碘酸盐定量法
适用：各种醛糖；适用于测定淀粉酶解时糖苷键水解的百分率，也可测定淀粉酶产物的寡聚糖链长。
基本反应：
CH2OH(CHOH)n CHO+I2+3NaOH→CH2OH(CHOH)nCOONa+2NaI+2H2O (氧化)
I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+ NaI (滴定)
2．3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法
原理：在碱性溶液中，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
注意：该法不是化学计量反应，戊糖、已糖和双糖与DNS反应的生色度A500/μmol糖的值分别是：戊糖（木糖、阿拉伯糖）：0.42；已糖（葡萄糖、半乳糖、甘露糖）：0.46；双糖（麦芽糖、乳糖）：0.65。
有人认为还原糖的醛基被氧化为羧基，但当量不准确，不同的糖类产生不等等量的色度，表明它的化学反应是较复杂的。
3．Somogyi-Nelson法
还原糖将铜试剂还原成氧化亚铜，在浓硫酸存在下与砷钼酸生成蓝色溶液，在560nm下的光密度与还原糖浓度呈比例关系。
注意：比方法重复性较好，产物稳定，测定范围10-180μg/mL。
4．苯酚-硫酸法
苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的已糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，已糖在490nm处，戊糖及糖醛酸在480nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
注意：
（1）该法颜色持久，较稳定；
（2）每种糖的显色值不同，故不宜直接用于杂多糖的定量测定；分析杂多糖时，可根据各种单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（3）有颜色的样品，测定值偏高；
（4）此法较适于检测凝胶柱部分收集样品中相对糖量的分析。
5．蒽酮-硫酸法
糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。
注意：该法可用于多糖、单糖含量测定。
色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定干扰。
6．地衣酚-硫酸法
糖经浓无机酸处理脱水产生糠醛或糠醛衍生物，生成物能与酚类化合物缩合成有色物质。
注意：
（1）该方法操作较简便，广泛用于测定糖蛋白中总糖含量；
（2）该方法的缺点是氨基糖存在时，可导致颜色降低，大量的色氨酸存在也可导致一些误差，但对中性糖的测定结果是可靠的。
（3）各种单糖的显色值不同，故用于杂多糖的定量测定时要注意。
7．戊糖的测定（地衣酚法）
戊糖与氯化高铁盐酸溶液或硫酸铁铵盐酸溶液一起加热，与地衣酚试剂反应，形成蓝绿色溶液，用比色法定量测定戊糖含量。
注意：此法可用于测定五碳糖，方法简单，但缺点是灵敏度较低，且因蛋白质、杂糖等干扰不易测准确。
8．已糖和6-脱氧已糖的比色测定
糖蛋白和蛋白聚糖（糖胺聚糖）中的已糖和6-去氧已糖可分别采用苯酚-硫酸法和半胱氨酸-硫酸法进行比色定量。
若代之以苯酚-半胱氨酸-硫酸反应，则既可用于含上述两类糖基之一的匀多糖或杂多糖的组成测定量，也可以一次呈色，同时测定糖蛋白样品中两种糖基的含量。
注意：
（1）适用于一种样品的两种已糖的同时测定。
（2）当应用本法于两类糖基的同时测定时，共存糖基间可能发生干扰。
比如，高岩藻糖含量不影响半乳糖的测定，而半乳糖含量高时，会使岩藻糖含量偏高。
9．葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖
原理：
葡萄糖氧化酶
β-D-葡萄糖+H2O+O2D-葡萄糖酸+ H2O2
H2O2+还原性染料（无色）氧化型染料（有色）
注意：
（1）葡萄糖氧化酶试剂最好现用现配，放置冰箱暗处可保存半个月。
（2）由于葡萄糖氧化酶液中同时混杂有麦芽糖酶和其它葡萄糖苷酶，如果达到专一测定糖化酶活力的目的，最好用Tris-甘油缓冲液，因为缓冲液中的两种成分都有抑制麦芽糖酶和其它葡萄糖苷酶的能力。
10．高效液相色谱法
由于糖类在紫外线外光、可见光、荧光下均无特征吸收，故糖类直接采用高效液相色谱测定有一定的困难。
直接检测糖类的检测品为：示差检测器、蒸发光散射检测器。
为提高糖类测定的灵敏度，通常将糖类经荧光标记或紫外标记后，再采用荧光检测器检测。
糖类的高效液相色谱检测目前只能用于单糖和低聚糖。
所采用的色谱柱为糖类检测专用的糖分析柱，包括氨基柱和钙离子柱。
11．纸色谱法和薄层色谱法测定
该法既可用作定性测定，也可作为半定量分析方法。
该法既可分析单糖，又可分析低聚糖。
半定量分析可通过薄层扫描进行。
12．糖的气相色谱分析
糖的气相色谱分析一般只用于单糖的定性和定量测定。
由于糖类无特征吸收，故采用气相色谱法检测进，先要对糖进行衍生化。
常的衍生化方法包括：三甲基硅醚衍生化、糖腈乙酸脂衍生化、糖醇乙酸脂衍生化、三氟乙酸脂衍生化。
13．多糖的电泳分析法
电泳技术是指以电场为驱动力的一类分离分析手段。
它依据样品于一定分离介质中在电场E 作用下所表现出来的速度V及其差异来分离。
用于多糖分析的电泳包括：滤纸电泳、玻璃纤维低电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳、高效毛细管电泳、等电聚焦电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
二、氨基已糖的测定
1．氨基已糖的比色测定
存在于蛋白聚糖（或糖胺聚糖）及糖蛋白中的N-取代（乙酰基或硫酸基）氨基已糖可通过盐酸水解成游离氨基已糖（氨基葡萄糖和氨基半乳糖）释出。
氨基已糖经碱性乙酰化反应后能与对二甲氨基苯甲醛（PDABA）呈色而进行定量。
又由于两种氨基已糖在100和25℃下乙酰化程度不同，可进一步对它们作出鉴别定量。
注意：
（1）当用此法测定糖蛋白样品中的氨基已糖时，最好将样品的水解液先通过强酸型阳离子树脂，经脱酸后，再测定。
（2）糖胺聚糖中，肝素采用本法测定氨基葡萄糖含量偏低。
提高水解温度或延长水解时间均不能改善结果。
2．N-乙酰氨基已糖的比色测定
存在于糖蛋白和蛋白聚糖（糖胺聚糖）中的N-乙酰氨基已糖经各种N-乙酰氨基已糖糖苷本科和糖胺聚糖裂解酶作用出的N-乙酰氨基已糖可利用Morgan-Elson反应进行比色测定。
注意：
（1）本法适用于游离或位于寡糖链还原性端基的N-乙酰氨基已糖的定量分析。
（2）N-乙酰氨基半乳糖在本比色反应条件下的吸收度仅为N-乙酰氨基葡萄糖的35%，因此制备标准曲线所用的标准糖应视所测样品中的N-乙酰氨基已糖品种而定。
三、已糖醛酸的测定
1．已糖醛酸的比色测定
存在于聚糖，包括蛋白聚糖（或糖胺聚糖）中的已糖醛酸经含四硼酸钠的硫酸作用后可进一步与间羟联苯反应，开成有色物质，在520nm处有最大吸收。
吸收值与该糖的浓度呈良好的线
性关系。
注意：
（1）本法对葡萄糖醛酸、艾杜糖醛酸和半乳糖醛酸的呈色率虽有差异，但十分接近，而甘露糖醛酸的呈色率仅及葡萄糖醛酸的一半。
（2）和其它已糖醛酸比色法不同，本法不受共存的中性已糖和戊糖的干扰。
此外，由于本法简便、快速、灵敏，可取代通用的Bitter-Muir改时的咔唑-硫酸法。
2．已糖醛酸的高效液相色谱法测定
与中性糖一样，已糖醛酸在紫外线外光、可见光、荧光下均无特征吸收，故糖类直接采用高效液相色谱测定有一定的困难。
直接检测已糖醛酸的检测品为：示差检测器、蒸发光散射检测器。
为提高测定的灵敏度，通常经荧光标记或紫外标记后，再采用荧光检测器检测。
所采用的色谱柱为糖类检测专用的糖分析柱，包括氨基柱和钙离子柱。
3．已糖醛酸的气相色谱法测定。