分子生物学实验报告
分子生物学试验报告
分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。
（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。
2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。
（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。
（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。
（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。
（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。
如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。
（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。
将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。
不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。
（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。
（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。
（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。
（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。
（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。
⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。
三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。
分子生物学综合实验报告
分子生物学综合试验报告综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的1.学习Southern杂交的原理及操作方法。
2.学习碱裂解法提取质粒的原理。
3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。
4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。
二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。
PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。
每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。
DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。
最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。
对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。
一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。
通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。
实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。
2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。
b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。
c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。
d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。
实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。
2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。
3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。
4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。
结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。
实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。
同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。
参考文献：
无。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实验报告
PCR扩增HBV-S1.实验原理1.1采用PCR扩增出HBV-S基因。
PCR是一种体外由引物介导的特定DNA序列的酶促扩增技术。
其前提是一对人工合成的15-20bp的寡核苷酸引物，其序列与待扩增的DNA两侧的碱基序列互补。
PCR包括下列三个基本步骤：变性、复性、延伸。
经过上述变性、退火、延伸步骤的25-35次循环，导致特异的靶序列的2n指数扩增。
1.2此次扩增的目的基因用于后续的表达，为了保证碱基不发生错配，不采用无矫正功能的Taq酶，而用高保真酶。
1.3为了使目的基因能和载体正确连接，本次实验选择在目的基因末端加尾（A）的方法。
2.实验目的获得HBV-S基因，为后续克隆做准备。
3.实验材料3.1模板3.2 PCR扩增引物3.3二甲基亚砜3.410×PCR 缓冲液（含Tris-HCl 100mmol/L; MgCl2 15mmol/L 、KCl 500mmol/L, pH8.3，0.1%明胶）3.5脱氧核苷三磷酸dNTPs：配成10mM- dATP，dTTP，dGTP，dCTP各10mM，用NaOH溶液调节至pH8.3。
）3.6水：要求不含DNA聚合酶抑制剂，不含离子，一般为去离子二蒸水（ddH2O）, 灭菌以后即可使用。
4.实验仪器4.1PCR仪Thermo Hybaid4.2水平式琼脂糖凝胶电泳槽4.3恒压电泳仪Bio-Rad4.4凝胶成像仪JY04S—3C北京君毅东方4.5垂直流超净工作台上海智域分析仪器制造有限公司4.6微量加样器5.1获得模板5.1.1取100ul血清，加入50ul裂解液，颠倒混匀，100℃金属浴10min；5.1.2 12000rpm的转速下离心5min；取2ul作为模板。
5.2扩增HBV-S基因（PCR）5.2.1PCR体系材料体积5*buffer 2.5mMdNTP Phire模板HBV-S1 HBV-S2 ddH2O总体积4ul 1.6ul 0.4ul 2ul 1 ul 1 ul 10ul 20 ul5.2.2 PCR设置参数1）98℃预变性30s；2）98℃变性5s、60℃复性5s、72℃延伸10s，循环30次；3）72℃终延伸1min.6.琼脂糖凝胶电泳6.1量取100ml5×TBE电泳缓冲液加蒸馏水至1000ml，配置成0.5×TBE电泳缓冲液；6.2称取琼脂糖3g，加入0.5×TBE电泳缓冲液200ml，加热熔化，当凝胶冷却至60℃左右时，加入溴化乙锭溶液5ul，充分混匀；6.3先用透明胶带封固胶托边缘，放好梳子，然后再倒入凝胶（凝胶厚度在5～10mm左右）；6.4在凝胶完全凝固后，小心移去透明胶带，将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，再小心取出梳子；6.5取已制备好的DNA样品10ul，加入染料2ul，充分混匀后用移液器将样取加入点样孔，在另一点样孔中，加入maker10ul；6.6盖上电泳槽，打开电源，电泳40～60分钟；（注意：DNA样品从负极向正极泳动）；6.7将凝胶置于紫外仪下观察；将剩余的10ul保存于4℃扩增的HBV-S基因片段长度为750bp框内所标识的条带为本组实验结果（从左置右，前两管的引物体积为1ul，后两管的引物体积为0.5ul）。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。
实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。
2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。
3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。
4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。
方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。
2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。
实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。
2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。
实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。
这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。
DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。
在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。
PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。
实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。
PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。
在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。
分子生物学实验总结报告
实验总结报告摘要1、通过PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳回收得到外源基因parb,进行BglⅡ和Xba I 双酶切；抽提质粒pIJ86601，进行BamH I和Xba I 双酶切；将两者的酶切产物通过连接转化，培养后抽提质粒进行电泳，测序，检测重组质粒是否构建成功。
测序结果显示未构建成功。
2、用相同的方法构建表达载体PGEX-sco3330，由于时间问题尚未完成。
3、诱导蛋白表达，蛋白纯化，蛋白脱盐，bradford法进行蛋白含量测定以及SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验（Western Blotting）。
实验内容：一、构建质粒pIJ86601-parb(一)获取外源基因parb1.PCR扩增PCR体系：200µl体系中，高保真pfuDNA聚合酶10X buffer，40 µl；10mM Mixed dNTP，5 µl；PrimerA，5 µl；PrimerB，5 µl；高保真pfu酶，2 µl；DMSO，20 µl；双蒸水，120 µl；模板1μl。
PCR程序设定Temp[℃] Time next turns Gradient[℃]1: 98.0 10min2: 98.0 30S3: 60.0 30S 30.04: 72.0 30S 2 3 45: 72.0 10min6:16.0 1h2.琼脂糖凝胶电泳切胶回收目的DNA1)通过电泳将目的片段与其他DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含需回收DNA的琼脂块,放入1.5ml离心管中。
2)按每300µl/100mg的比例加入Binding Buffer,置于50-60℃水浴中10分钟,使胶彻底融化。
加热融胶时，每2分钟混匀一次。
3)将融化的胶溶液转移到套放在2ml收集管内的UNIQ-10柱中，12,000rpm室温离心2 min。
4)取下UNIQ-10柱,倒废液，将柱放回同一收集管, 加入500µl WashSolution,12,000 rpm室温离心30秒。
分子生物学综合大实验实验报告
分子生物学综合大实验实验报告外源基因SOC1的扩增和重组载体的构建与筛选班级姓名学号实验目的通过PCR技术克隆外援基因SOC1的目的片段。
通过质粒提取，酶切和连接技术，把SOC1基因重组进TA克隆载体并完成筛选。
实验用品材料：植物叶片，TA克隆载体试剂：DNA提取液（1L）TE缓冲液；琼脂糖；核酸染料；；DNAmarker；6×上样缓冲液（0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油）、DNA聚合酶、dNTP、上下游引物器材：研钵，恒温水浴，离心机，离心管，PCR仪、生化培养箱、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，去离子水、超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯等。
实验原理通过配制DNA提取液，利用研磨法获得DNA模板，然后采用PCR技术扩增基SOC1基因获得目的片段，然后通过酶切和连接方法把SOC1基因连接到TA载体上。
大肠杆菌感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。
并通过氨苄抗性筛选获得重组子实验方法步骤1、植物基因组DNA的小量提取（1）剪取新鲜幼嫩的植物叶片1~2片于1.5 mL离心管中.（2）先加入少量的DNA提取液100 μL，用研磨棒充分研磨尽量避免提取液溅出。
（3）再加入600 μL的DNA提取液，使DNA提取液的总体积为700 μL，上下颠倒混合均匀。
（4）放入高速离心机4 ℃条件下12 000 rpm离心15 min。
（5）取上层水相，移入标有相应序号的新的离心管中，加入600 μL的异丙醇（与加入DNA 提取液的总体积相同），上下颠倒混匀。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验二从 cDNA 文库中靶片断扩增（ 4h ）一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。
2.掌握移液枪和PCR 仪的基本操作技术。
二、实验原理：PCR 技术，即聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR）。
经典的PCR 过程包括：变性（denaturing step ）、退火（annealing step ）和延伸（extension step ）三个步骤。
变性过程，即在高温94℃ ~98 ℃下，模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之形成两条单链ssDNA 。
随后，模板DNA 与引物的退火（复性）过程中，温度降至55℃左右，特异序列的引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；之后，引物的延伸过程，DNA 模板-引物结合物在耐热的DNA 聚合酶（如：Taq 酶）的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4 分钟，2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR 反应的成分和作用：总体积：一般为25μ l ～100 μl（一）无Mg2+buffer ：由纯水、kcl 、Tris 组成。
Tris 用于调节反应体系pH 值，使Taq 酶在偏碱性环境中反挥活性。
kcl 可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L ，否则会抑制DNA 聚合酶活性。
（二）Mg2+: 终浓度为 1.5 ～ 2.0mmol/L ，其对应dNTP 为200 μ mol/L ，注意Mg2+ 与dNTPs 之间的浓度关系，由于dNTP 与Taq 酶竟争Mg2+ ，当dNTP 浓度达到 1 mmol/L 时会抑制Taq 酶的活性。
Mg2+能影响反应的特异性和产率。
分子生物学实验报告试剂
一、实验背景分子生物学是一门研究生物大分子如核酸、蛋白质等结构与功能的科学。
在分子生物学实验中，试剂的选择和使用对实验结果的准确性至关重要。
本实验报告将详细介绍分子生物学实验中常用的试剂及其作用。
二、实验试剂1. 核酸提取试剂（1）酚/氯仿：用于从细胞中提取DNA和RNA，具有强烈的蛋白变性作用。
（2）异丙醇：用于DNA的沉淀，降低DNA的溶解度。
（3）无水乙醇：用于RNA的沉淀，降低RNA的溶解度。
（4）RNA酶抑制剂：防止RNA降解，保证实验结果的准确性。
2. DNA提取试剂（1）Tris-HCl缓冲液：用于DNA的提取，调节pH值，保持酶的活性。
（2）EDTA：抑制金属离子与DNA结合，防止DNA降解。
（3）SDS（十二烷基硫酸钠）：用于蛋白质的变性，使蛋白质与DNA分离。
（4）蛋白酶K：降解蛋白质，去除蛋白质杂质。
3. DNA纯化试剂（1）琼脂糖凝胶：用于DNA的分离和纯化。
（2）DNA纯化试剂盒：用于DNA的纯化和回收。
4. DNA扩增试剂（1）PCR反应缓冲液：提供反应所需的pH值、盐浓度等。
（2）dNTPs（脱氧核苷三磷酸）：作为PCR反应的原料。
（3）引物：用于PCR反应的特异性扩增。
（4）Taq酶：DNA聚合酶，负责DNA的合成。
5. DNA检测试剂（1）溴化乙锭（EB）：用于DNA的染色，便于在紫外光下观察。
（2）琼脂糖凝胶电泳缓冲液：用于DNA的电泳。
（3）DNA标记物：用于DNA的定量分析。
6. 蛋白质提取试剂（1）裂解缓冲液：用于蛋白质的提取，保证蛋白质的完整性。
（2）蛋白酶抑制剂：防止蛋白质降解。
（3）SDS：使蛋白质变性，便于与核酸分离。
7. 蛋白质纯化试剂（1）柱层析：用于蛋白质的纯化。
（2）凝胶过滤：用于蛋白质的纯化。
8. 蛋白质检测试剂（1）考马斯亮蓝G-250：用于蛋白质的定量分析。
（2）BCA法：用于蛋白质的定量分析。
（3）SDS-PAGE凝胶：用于蛋白质的分离和纯化。
分子生物学检验实习报告
一、实习背景分子生物学检验是现代医学检验的重要分支，通过分子生物学技术对生物大分子进行定性和定量分析，为疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。
为提高自身专业技能，本人于2022年8月至2023年8月在XX医院分子生物学检验科进行了为期一年的实习。
二、实习目的1. 熟悉分子生物学检验的基本原理和操作技术；2. 掌握实验室管理、生物安全等相关知识；3. 培养严谨的工作态度和团队协作精神；4. 提高临床应用能力和综合素质。
三、实习内容1. 实习期间，我主要参与了以下工作：（1）学习分子生物学检验的基本原理，包括DNA、RNA的提取、纯化、扩增、检测等；（2）掌握PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等分子生物学技术；（3）熟悉基因测序、基因芯片等高通量检测技术；（4）参与临床样本的接收、处理、检测和结果分析；（5）协助带教老师进行实验室管理、生物安全管理等工作。
2. 在实习过程中，我重点学习了以下内容：（1）DNA、RNA的提取：掌握了不同来源样本的DNA、RNA提取方法，包括酚-氯仿法、试剂盒法等；（2）PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR：熟悉了PCR原理、操作步骤和结果分析，掌握了实时荧光定量PCR技术；（3）基因测序：了解了基因测序的基本原理、操作流程和数据分析方法；（4）基因芯片：学习了基因芯片的原理、应用和数据分析方法；（5）实验室管理：了解了实验室安全管理、生物安全管理等相关知识。
四、实习收获1. 技术能力：通过实习，我掌握了分子生物学检验的基本原理和操作技术，能够独立进行PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等实验操作，为今后的工作打下了坚实的基础。
2. 理论知识：实习期间，我深入学习了分子生物学、遗传学等相关理论知识，提高了自己的综合素质。
3. 实践能力：通过参与临床样本的检测和结果分析，我提高了自己的临床应用能力，为今后从事相关工作积累了宝贵经验。
4. 团队协作：在实习过程中，我学会了与同事沟通、协作，共同完成工作任务，培养了团队精神。
分子生物学实验报告参考格式
实验质粒DNA的提取（一）实验材料含质粒的大肠杆菌DH5a（二）试剂1.LB液体培养基：胰蛋白月东10g,酵母提取物5g, NaCl 10g,溶解于lOOOmL蒸馅水中，用NaOH调pH至7.0。
高压灭菌20分钟。
2.LB平板培养基：在每lOOOmLLB液体培养基中中加入15g琼脂，高压灭菌20分钟。
3.溶液I ： 50mmol/L 葡萄糖」Ommol/L EDTA,25mmoI/LTris-HCl（pH 8.0）。
4.溶液II： 0.2mol/LNaOH,l%SDSo （必须新鲜配制）5.溶液III： pH4.8的醋酸钾溶液（5mol / L乙酸钾60 ml,冰乙酸11.5 ml,水28.5ml）。
6.TE 缓冲液（pH 8.0）： 10 mmol/LTris-HCl,lmmol/ L EDTAo7.无水乙醇和70%乙醇。
（三）仪器1.Eppendorf管、离心管架2.10, 100, 1000 |11 微量加样器3.台式高速离心机4.摇床、高压灭菌锅四、操作步骤（一）培养细菌将带有质粒的大肠杆菌接种于LB平板培养基上，37°C培养24小时，然后从平板上挑取单菌落，接种于5ml液体培养基中，37°C培养12小时。
（二）提取步骤1.将两种菌液l.4ml移入1.5ml离心管，离心60秒（12000rpm）,倒去上清液，如收集2.8ml菌液，重复一次，倒转于滤纸除净残液。
2.GEP、P38各加入100|J预冷的溶液I （悬浮液体），用涡旋震荡器充分悬浮。
再P38 加入10gg/|il RNAaseo3.加入150四1溶液II,快速颠倒温和混匀，室温放置2-3分钟。
此时溶液应非常粘稠。
4.加入150讯预冷的溶液III,温和混匀（此时应有可见沉淀），在冰浴中5分钟。
5.12000rpm离心3分钟。
转移上清液400|11至另一1.5ml离心管中。
6.加800 |11乙醇到上清液中，混匀，水浴5min, 12000rpm离心5分钟,除去上清（尽可能除去残液）。
分子生物学实习报告
一、实习目的本次分子生物学实习旨在通过实验操作，使学生掌握分子生物学的基本理论、基本技术和基本技能，提高学生的动手能力和实验操作技能，培养学生严谨的科研态度和良好的实验习惯。
二、实习时间2021年6月1日至2021年6月30日三、实习地点某高校分子生物学实验室四、实习内容1. DNA提取（1）实验原理：DNA提取是分子生物学实验的基础，主要目的是从细胞中提取纯净的DNA。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA。
（2）实验步骤：①将细胞裂解，使细胞内容物释放出来；②加入酚-氯仿溶液，振荡混匀，使蛋白质和脂质等杂质溶解于酚相；③加入饱和NaCl溶液，使DNA沉淀；④离心，收集DNA沉淀；⑤用TE缓冲液溶解DNA，进行后续实验。
2. PCR扩增（1）实验原理：聚合酶链反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA片段的方法。
本实验采用PCR技术扩增目的基因。
（2）实验步骤：①设计引物：根据目的基因的序列，设计一对引物；②配制PCR反应体系：包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq聚合酶等；③进行PCR扩增：按照94℃预变性、60℃退火、72℃延伸的循环条件进行扩增；④琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
3. DNA测序（1）实验原理：DNA测序是确定DNA序列的方法。
本实验采用Sanger测序法。
（2）实验步骤：①将PCR产物进行纯化，去除引物和dNTPs；②进行测序反应，包括PCR扩增和终止反应；③进行毛细管电泳分离，检测DNA序列。
五、实习心得1. 通过本次实习，我对分子生物学的基本理论和基本技术有了更深入的了解，提高了自己的实验操作技能。
2. 在实验过程中，我学会了如何设计实验方案、配制试剂、操作仪器等，为今后的科研工作打下了基础。
3. 实验过程中，我体会到严谨的科研态度和良好的实验习惯的重要性。
只有严格按照实验步骤进行操作，才能得到可靠的实验结果。
4. 在实验过程中，我学会了与同学合作，共同解决问题。
这对我今后的科研工作具有重要意义。
内农大分子生物学实验报告
实验一植物基因组DNA的提取及其定性定量分析一、实验目的通过本实验学习利用CTAB法从植物组织中提取DNA并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对DNA进行定性定量分析。
二、实验原理提取原理：CTAB能溶解细胞膜，在高离子强度下，与蛋白和中性多糖形成复合物沉淀出来。
利用液氮对植物组织进行冷冻，研磨、破碎细胞后加入CTAB，将DNA溶解出，用酚、氯仿去除蛋白，经乙醇沉淀得到DNA。
定性原理：琼脂糖凝胶电泳是把DNA样品加入到含电解质的琼脂糖凝胶的样品孔中，置静电场上。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
若是DNA分子，在点样孔对应的正极端可观察到透明条带。
定量原理：DNA或RNA在260 nm波长处有紫外吸收峰，吸收强度与核酸浓度成正比。
紫外分光光度法还可通过测定260 nm和280 nm的紫外线吸收值的比值估计核酸的纯度。
三、实验步骤I．提取步骤1. 将100 mg液氮冷冻条件下的拟南芥嫩叶在1.5 ml EP管内研磨成粉末状。
2. 加0.6 ml 2×CTAB液，混匀，65℃水浴30 min，每10 min颠倒混匀一次。
3. 取出离心管，冷却后加入0.6 ml酚氯仿混合液，混匀。
4. 11,500 rpm室温离心8 min。
取400 μl上清液到一新的1.5 ml离心管中。
5. 加入与上清等体积的氯仿，混匀，11,500 rpm 离心8 min，取350 ul上清。
6. 加入600 μl无水乙醇，上下颠倒混匀，-80℃放置30 min。
7. 4℃，15,800 rpm离心20 min，弃上清。
8. 1 ml 70％乙醇(预冷)洗涤沉淀2次，上下颠倒几次，不能Vertex，7,000 rpm离心3 min，弃上清，风干(超清台操作)。
9. 加入30 μl无菌水(含20 μg/ml RNase A)，37℃下溶解DNA 30 min。
10. 在一PCR管加5 μl DNA样品和1μl 6×loading buffer，混匀，电泳备用。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告姓名：学院：专业班级：学号：一、前期工作及引物设计（一）实验目的：寻找一个合适的基因，并设计出与之相对应的引物，用于后续实验。
（二）实验原理：引物设计的一般原则：①引物长度：15-30bp②GC含量：一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%③退火温度：退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加④避免扩增模板的二级结构区域⑤与靶DNA的错配：当被扩增的靶DNA序列较大的时候，一个引物就有可能与靶DNA的多个地方结合，造成结果中有多个条带出现。
这个时候有必要先使用BLAST 软件进行检测⑥引物末端：引物3’端是延伸开始的地方，因此要防止错配就从这里开始。
3’端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。
⑦引物的二级结构：引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构，这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。
（三）操作方法：1、阅读一些与小麦抗旱基因相关的文章，并最终选出基因TAPK7。
LOCUS AB125308 1583 bp mRNA linear PLN 15-FEB-20082、根据引物设计原则，用相关软件Primer6设计两对引物。
3、在网站NCBI上用BLAST检验所设计的引物，并从中选出较好的一对引物。
（四）实验结果：前引物：5’-CCAACATCATCCGCTTCA-3’（position:396 引物长度：18）后引物：5’-CCTGCTCATCCTCCTCTT -3’（position:1190 引物长度：18）（产物长度795）（五）讨论：虽然我们自己设计出来引物，但是后来做PCR的效果也不好，后来还换了引物。
所以希望老师能在这些我们还未学习到的地方给一些经验指导，或者提供一些资料参考，来保证我们的实验效果。
二、目的基因提取及验证（一）实验目的：根据所设计的引物，用克隆基因组和反转录两种方法，得到目的基因cDNA。
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分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
引言
分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手
段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制
DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：
- DNA模板
- DNA聚合酶
- 引物
- dNTPs
- 缓冲液
方法：
1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：
通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能
够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：
DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录
RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：
- DNA模板
- RNA聚合酶
- 引物
- NTPs
- 缓冲液
方法：
1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：
凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：
RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转
录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译
蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关
键步骤。
本实验旨在研究蛋白质翻译的机制和调控。
材料：
- mRNA
- 核糖体
- tRNA
- 氨基酸
- GTP
方法：
1. 准备反应体系，包括mRNA、核糖体、tRNA、氨基酸和GTP。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察蛋白质合成产物。
结果：
凝胶电泳分析显示出蛋白质合成产物的出现。
这表明核糖体能够根据mRNA上
的密码子序列，选择性地合成特定的氨基酸链。
讨论：
蛋白质翻译是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
核糖体通过与mRNA的互作用，将mRNA上的信息翻译成氨基酸序列，从而合成特定的蛋白质。
这种选择性翻
译是维持细胞内蛋白质组成和功能的基础。
结论
通过本实验，我们深入了解了DNA复制、RNA转录和蛋白质翻译的基本原理和调控机制。
这些实验结果对我们进一步理解生命的分子机理具有重要意义，也为分子生物学的研究提供了基础。