艾滋病实验室检测

滤纸干血斑标本的送检


原则：尽快送往→ 最佳：于标本采集后24小时内送出 规范要求：采集后1周内送达
方法

①挂号信邮寄 ②人工投送 ③专收专投系统（绿色通道 ）是目前最 先进的递送技术
HIV检测实验室生物安全
生物安全贯穿实验室活动的始终



实验室要求 样品的采集、运送、接收、使用、保存、 处理 检测操作中的生物安全 仪器设备 废弃物处置 意外事故的处理 实验室生物安全管理
6. 标本: 及时分离血清(浆)、无变质、无污染、无溶血。 7. 天气炎热、路途较远时应低温用带盖不易破损容器专人运送， 并详细填写筛查样品和方法


样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。 （人类免疫缺陷病毒抗体口腔黏膜渗出液诊断试剂 ） 方法 1.酶联免疫吸附试验（ELISA） 2.化学发光或免疫荧光试验 3.快速检测（RT）及其它检测试验 这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可 在10～30分钟内得出结果。 明胶颗粒凝集试验（PA） 免疫渗滤试验 免疫层析试验
取血



血液顺利流出，等血滴够大时，用载血 滤纸的一面轻触血滴，使血样吸进滤纸 透过背面 一次形成直径约1厘米的血斑 共取3个血斑 压迫止血
等血滴足够大时 用滤纸轻触血滴
取数个直径 1cm血斑
晾干

室温 水平放置 晾干2-3小时 避免热烤、日晒、紫外线照射、福尔马 林或其他有机溶剂熏染、液体污染等
滤纸干血斑标本
（dry blood spot （DBS）on filter paper）



是将采集的新生儿血样滴在筛查专用滤纸上而 制成的圆形均匀斑状血样 一般专用于新生儿疾病筛查实验检测。 滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体，应 用全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑，便于 储存和运输，且有很好的生物稳定性，因此， 特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、 贮存与运输。
HIV快速检测的注意事项



条带的色深程度与标本中抗体的浓度不 存在线性关系 阴性结果不排除有HIV感染的可能 出现阳性及可疑结果，还应用ELISA法及 时复检并确证 判读结果双人核对 判读结果的环境需要光线充足
筛查程序



（1）初筛试验 根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检 测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告； 对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。 （2）复检试验 对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同 原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的 试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂， 则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均 呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应， 或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图1）。 如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为 阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时 进行随访。 艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实 验室可以直接进行确证试验。
酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验简称酶标法，是根据酶免疫测 定原理发展的一种技术，目前已广泛用于各种抗 原和抗体的检测，也是最常用的HIV抗体检测方法。 目前已推出第四代HIV抗体ELISA检测试剂，但其 基本方法分三类：间接法、双抗原夹心法和抗原 竞争法。
快速试剂的应用

偏远地区
样品
筛查试剂
初筛试验
阳性反应
原有试剂 （ 或厂家 不同原理
+ 另一不同原理
） （
阴性反应
试剂或另外两种 ） 或厂家 试剂
复检试验
均阳性反应
一阴一阳
均阴性反应
确证试验 HIV 抗体筛查检测流程
报告阴性
图 1
HIV抗体初筛检测的局限性
如仍为阳性，需确证试剂进一步确证。 2. 阴性结果不能排除HIV感染：HIV感染后血清阳转 前的“窗口期”，HIV抗体检测为阴性，晚期艾滋 病患者某些抗体（如P24等）可能检测不到。 3. 可能出现假阳性或假阴性结果：了解试剂供应商 因其使用抗原和包被方法技术存在一定差异。 4.不能诊断<18月龄新生儿的母婴垂直感染。
初筛检测中值得注意的几个问题(2)


4 、不同厂家及同一厂家生产的不同批次试剂的敏感性 和特异性可能存在一定差异，各实验室最好应用标准质 控血清对新购试剂及在每次检测时进行质量控制和质量 评价，以确保检测工作结果的准确可靠性； 5、针对HIV感染的不同时期选用不同的检测方法： 6、HIV抗体的检测反应强度与HIV感染的概率： 许多HIV抗体检测方法既是一种定性实验，也是一种 半定量实验。ELISA方法可根据OD值的强度确定抗体量 的多少。反应性越强的血清，含有HIV抗体的可能性越 大。
滤纸干血斑标本 （DBS）的采集




采血对象和采血时机(新生儿生后3天 （或48~72小时）进行 ) 材料和器具 采血方法和技巧 DBS血斑质量 标本收集方法 标本保存方法
材料和用具

载血滤纸：S&S903的专用滤纸 采血卡
其他材料

信息卡 穿刺针 采血卡支架 75%酒精和消毒干棉球 热水袋或热敷用毛巾
意外事故处理




1.皮肤针刺伤或切割伤，应立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能 挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。 2 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡， 如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。 3 粘膜污染：用大量流水或生理盐水冲洗污染部位。 4 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。 5 污染物泼溅：小范围污染物泼溅，应立即进行消毒处理和清洗。 发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安 全负责人到达事故现场，查清情况，确定消毒的程序。 6 发生空气污染时，可采用低温蒸汽甲醛气体对空气进行消毒， 但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消 毒。
个人防护




1.手部皮肤有开放性伤口及其他不适于工作的情况，应暂停工作。 2.皮肤的微小伤口、擦伤、皲裂等，应用防水敷料严密覆盖。 3.充足的防护服、一次性乳胶手套、口罩、帽子和覆盖足背的工 作鞋。应将清洁的防护服和其他个人防护用品置于实验室清洁区 内的专用处存放。 4.应急冲洗眼睛装置。（30米） 5.工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病 毒等肝炎病毒标志物检测，应接种乙肝疫苗。应每年对工作人员 采血检测HIV抗体，血清应长期保留。 6 进实验室工作前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破 手套。 7 严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。
HIV快速检测的注意事项


有关部门批准 有效的试剂 从事人员经过培训，上岗证 严格按试剂说明书操作 有效期使用，正确储存 18-25℃实验室环境下操作 严格按照试剂说明书的时间要求进行判读结果，不可 早判或晚判 建立室内（间）质控体系，定期用质控血清对试剂进 行检测，观察是否显色，显色时间，显色程度。
1. 阳性反应样本不能确证，需用本法和其它方法复检，
筛查试验结果的报告


筛查试验（-） 出具“HIV抗体阴性”报告 筛查试验（+） 出具“HIV抗体待复查”，不能出阳性报 告 筛查试验呈阳性反应样品的转送 如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信 息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持 HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接 送确证实验室复检。 两次检测均阳性或一阴一阳报告为 “HIV抗体待确证”； 两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）”。 HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。
采血方法


符合美国临床实验室标准化委员会 （NCCLS）标准 《新生儿筛查计划》中滤纸血片的采集 方法
采血前准备
登记，查对，填卡，洗手，戴口罩 采血部位清洁，保暖，血循环良好（可 用40-42℃热敷）

采血部位 选择
穿刺和挤压


一次性使用穿刺针。进针2~3毫米。拭去 最初少许血滴（含碎片） 待穿刺点的苍白区消褪后，用母、食指 和手掌握持足部，适当施压。
初筛检测中值得注意的几个问题(1)



1 、初筛检测的阳性结果不是最终结论，不能通知受检者及其他 人员，阳性样本需用该试剂和另一种试剂复检，如仍为阳性，应 及时送HIV抗体确证试验室用确证试验检测； 2 、初筛检测的宗旨是要尽可能检出所有的阳性样本，因此应选 用敏感性高的试剂，且必须为 HIV-1/2 混合型，使用不符合规定 的试剂可能导致错误结果和法律纠纷，甚至造成严重后果； 3、各单位可根据不同目的、检测对象、人群流行率、成本-效 益比、实验室设备、和技术水平等选择不同初筛实验方法。
艾滋病实验室检测
平罗县妇幼保健所 徐秀琴

HIV抗体检测 实验室生物安全

二、 HIV抗体检测
《全国艾滋病检测技术规范》
引用文件： 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》
（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）
常规HIV抗体检测的方法


HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和 复检）和确证试验。 筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册 批准、在有效期内的试剂，其中酶联免 疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质 量评估敏感性和特异性高的试剂。
HIV抗体检测要求

1. 实验室:经卫生行政部门考核、审评和批准后 2. 检测场所：符合《全国艾滋病检测工作规范》的要求； 3. 人员: 经国家或省级艾滋病抗体检测学习班培训; 4. 试剂: 批批检合格、进口许可证、生物制品检定所检定、 5. 保密: 初筛检测的阳性结果不是最终结果,必须经确证试验由 HIV抗体确证实验室出具阳性报告才具有法律效应,且须由卫生行 政部门选择适当方式和时间通知其本人及其家属,不得向无关人员 透露有关情况,感染者档案以机密形式专人负责管理;