安徽医科大学研究生细胞培养技术考试重点.doc

2014年细胞培养重点

名词解释：

1组织工程应用工程科学和生命科学的原理，开发用于恢复、维持及提高受损伤组织和器官功能的生物学替代物。从而使组织工程学研究的内容、应用范围和任务更加明确。组织工程的主要n的或内涵是对人体器官和组织修复。

2.接触抑制.指细胞相互接触后失去运动的现象。

3.肿瘤干细胞肿瘤中具有自我更新并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。

4.平衡盐溶液简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。在生理盐水的基础上，分别加入了无机盐、葡萄糖以及少量酚红，具有维持渗透压，调节溶液的PII值，同时能供给细胞生存所需的能量和无机离了成分的作用, 常用的BSS有PBS、Hanks液等。

5.密度抑制由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多，和生存空

间消失所引起细胞增殖抑制的现象。

6.去分化指己成熟的细胞和组织倒退分化，返回原始幼稚的状态，但是分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态，可重新表现出分化的特点。

7.iPS诱导多功能干细胞即诱导多能干细胞，是指体细胞经过基因“重新编排”, 回归到胚胎细胞的状态，从而具有类似胚胎干细胞的分化能力。这种方法可以不需要用人胚胎或卵母细胞，就能制造干细胞。

8.confluent汇合指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。

9.细菌污染培养的细胞被细菌污染均会造成细胞受损和死亡，是细胞培养工作的大敌。

细胞发生污染时，常有培养液变浑浊和PH发生改变等现象，镜下观察细胞变形、生长缓慢或分裂相消失，以及细胞圆缩脱落等现象。常有抗生素预防该污染。

10.灭菌杀灭物体上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、繁殖体和芽胞。

11.单克隆抗体，指由一个B淋巴细胞克隆所产生的，只识别一种抗原决定簇的均质抗体。

问答题；

1 .试述“克隆”的基本概念并举例说明其在细胞培养工作中的实际意义。

克隆(Clone):指由从一个共同的祖先通过无性繁殖而来的、遗传上同一的细胞群或后裔；Clone也可作动词用，用于指细胞形成克隆细胞群的过程，即从群体中把单个细胞分离出来, 通过增殖形成细胞群或后裔的过程;

2.试述原代细胞培养的基本概念、原理、优缺点及实际意义。

基本概念及原理：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。

细胞（组织）培养选材：细胞培养是将确定所选组织用剪碎的小组织块或分离的单个细胞进行培养，这种培养失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增殖，可以特性化, 可以获得遗传背景相同的群体，可以保存。培养选材一般来自胚胎组织；因此比成体组织更易生存和生长。这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞（ESC）,它们具有更高的自我更新和多能分化的能力。

原代培养一般指细胞从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。这种培养物通常是异质性的，生长较缓慢，在很大程度上代表原组织的类型，表达原组织特性，但在培养过程中，会失去许多原组织的细胞。

原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。传代形成的具有各a生物特性或标志的细胞系称之为细胞株。

组织（细胞）培养对医学、生命科学的意义；优缺点

1）培养的组织器官或细胞，能再一定范围和程度上反映生命活动规律和机体功能特点。培养的细胞为生命科学和生物医学各种研究奠定了物质基础。如：药物筛选，疗剂评价，新生物制品研发，研究病毒及其他微生物，发现新的传染因子，组织工程中的支撑技术等。

2）细胞培养与生物工程

细胞培养技术已经成为商品化生物技术产品的核心。如目前可提供的产品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、白介素和集落刺激因子等；多肽生长因了：表皮生长因了和神经生长因了等；蟾类：组织型纤溶酶原激活剂；激素：EPO 和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的务种单克隆抗体；细胞本身（如干细胞）；皮肤重植等。

3）细胞培养技术的商业化

对于生物技术所使用的各种细胞株的价值，现尚难作出评价。

4）组织（细胞）培养的局限性

细胞（组织）培养，包括器官培养终归是高体培养，缺少生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医学生物实验过程及对结果的评估都必须考虑这些。

3.简述体外培养用液的种类及用途。

培养用液：适应细胞在体外生存和生长的各种溶液，即培养用液。主要包括：培养液、缓冲液、平衡盐溶液、消化液、血清、pH调整液和抗生素等其它常用液。培养用液都直接与细胞接触，是培养细胞主要的直接的生长环境。（具体见PPT）

4.简述干细胞研究的意义有哪些？

干细胞在生命科学的各个领域都有着重要而深远的影响，（1）移植治疗

（2）克隆动物及转基因动物的生产

（3）转基因干细胞基因治疗

（4）为发育生物学研究提供理想的体外模型

（5）作为新型药物的发现、筛选及动物和人类疾病的模型

6.简述体外培养肿瘤细胞生物学检测的常规项目。

7.试述目前干细胞研究的主要内容与存在的问题有哪些？（试卷上有）

8.简述细胞系的生长过程及各期细胞的特点

细胞系的生长过程包括原（初）代培养期、传（继）代培养期和衰退期。

原（初）代培养期指取白体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前的时期。其特点是：培养细胞成分混杂，呈现异质性；细胞活跃移动、分裂，但不旺盛，多呈二倍体核型；原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似，适宜进行疫苗制备、药物测试、移植等。

传（继）代培养期指首次传代开始经反复传代抑制到培养细胞开始衰退之前的全部时期。期特点为：细胞增殖吐盛，并维持二倍体核型，一般细胞在10代以内冻存；细胞逐渐进入去分化状态；原本成分混杂的培养物中，某一种增殖能力较强的细胞会逐渐处于优势，比例越来越大，而将其他数量较少比例较小的细胞逐渐淘汰掉。

衰退期指细胞仍然生存,但不增殖或增殖很慢，最后衰退死亡，其特点为：细胞轮廓增强, 色泽变暗，胞质出现颗粒样及空泡状结构。

9.粘附生长型细胞根据形态分为几种类型，试述各型主要特点。

这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。

按照培养细胞的主要形态,可将其分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走型细胞、多型性细胞。

成纤维细胞型：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞一细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。

上皮细胞型：易相连成片，相靠一紧密相连一成薄层一铺路石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。

游走型细胞：培养需要支持物，分散生长，不连接成片，在培养皿中生长位置不定，处于活跃的游走或变形运动，因此外形不规则且不断变化，密度大连接成片呈多角形不易与其他类型的细胞区别。

多型性细胞：无规律的形态，细胞分胞体和胞突。胞突细长形，似丝状伪足，胞体略呈多角形。如神经细胞。