实训五 常用培养基的制备

实训五常用培养基的制备

目的要求熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH。

仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。

方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。

(一)肉膏汤培养基

1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。

2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后，加热溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸汽灭菌器内，121.3℃20min灭菌即成。

3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。

(二)营养琼脂培养基

1．成分肉膏汤1000ml，琼脂粉20～30g。

2．制法将琼脂粉加入肉膏汤内，煮沸使其完全溶解，矫正pH7.4～7.6，过滤分装于试管或三角烧瓶中，以121.3℃灭菌20min。可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。

此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。

(三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。

(四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或细菌运动性观察。

(五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2～3g牛肉渣及肉膏汤5～6ml，液面盖以一薄层石蜡油，经121.3℃20～30min灭菌后保存冰箱备用。此培养基用于厌氧菌的培养，必须注意，此培养基在使用时，将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min，以驱除管内存留的氧气。

(六)pH的测定与矫正

1．精密pH试纸法取精密pH试纸一条，浸入欲测的培养基中，半秒后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。在滴加1mol/L氢氧化钠后，应充分摇匀，再用试纸测定，直至调到pH在所需的范围内。

2．标准比色管法

(1)取与标准比色管大小一致的试管2支，按(实图5-1)每管内加入不同的溶液。①培养基5ml(对照管)；②标准比色管；③培养基5ml加0.02%酚红指示剂0.25ml；④蒸馏水管。

(2)对光观察比较两侧观察孔内颜色是否相同，培养基若为酸性(一般呈酸性)，则向③管中慢慢加0.1mol/L氢氧化钠，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至③④两管

相加的颜色与①②两管相同为止。

1.对照管

2.标准比色管

3.检查管

4.蒸馏水管

(3)记录5ml培养基用去0.1mol/L 氢氧化钠的量，按下列公式计算培养基总量中需加1 mol/L氢氧化钠的用量。所需1mol/L氢氧化钠量＝5ml培养基所

培养基总体积数 1

需0.1mol/L氢氧化钠毫升数×------------------ × ------

5 10

(4)加入1mol/L氢氧化钠于培养基后摇匀，再作一次矫正试验，如pH不在所需范围，应重新测定。

目前，常用的培养基均已商品化，不需要测定及矫正pH，按说明使用即可。