实训五 常用培养基的制备
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法在实验室中，培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础，正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基，并掌握正确的配制方法。
接下来，我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基（LuriaBertani 培养基）LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基，其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基，所需材料如下：胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤：1、称取上述成分，将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水，用玻璃棒搅拌，直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70（通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节）。
5、将培养基分装到锥形瓶中，每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞，用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中，在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基，需要准备以下材料：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下：1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水，搅拌溶解。
3、定容至 1L，搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌，方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）PDA 培养基常用于培养真菌，尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基，材料如下：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程：1、将马铃薯去皮，切成小块，称取 200g，放入锅中，加入约1000ml 去离子水，煮沸 20 30 分钟，直到马铃薯块变软。
实训五培养基的制备与灭菌
棉塞制作
五、实验内容
目前，有条件的实验室已使用.塑料试 管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞， 此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。
五、实验内容
（四）灭菌
1.培养基的高压蒸汽灭菌 ①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的
固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮 纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅 内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍 蒸汽流通，影响灭菌效果。
一、实验目的
1.学会一般培养基的制备原理、方法。 2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。
二、实验原理
培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用 人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、 氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生 物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢 活动。
二、实验原理
不同微生物对营养物质的要求各不相同。 因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。 一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基， 培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用 马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养 基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。
培养基的分装
四、实验方法
①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为 宜。
②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的 1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过 1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。
③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜， 灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。
3.每一小组准备lmL塑料吸嘴5支(湿热蒸汽灭
菌)，培养皿12套(干热灭菌）。
六、实验报告
写出你所制备的培养基的配方，并 分析其中所含物质对微生物生命活动所 起的作用。
⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气 阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲 腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。
下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。
用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。
其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。
其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。
调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。
其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
实训指导-培养基的制备.
实训指导——培养基的制备【实验目的】1．掌握培养基制备的基本过程。
2．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
【实验材料】1．试剂氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝兔血、牛肉膏、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
2．器材锥形瓶、量筒、吸管、精密pH试纸、无菌试管、硅胶塞、天平、高压蒸气锅、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
【实验方法】1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、校正pH、澄清过滤、分装、灭菌、质量检查和保存。
(1) 调配成分：在锥形瓶或大容量烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基处方用量准确称取各种成分，使其充分混合。
(2) 溶解：将调配好的混合物在沸水浴中，使其完全溶解。
(3) 校正pH：一般将培养基的pH调至7.2~7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1~0.2变动。
若用NaOH校正，高压蒸汽灭菌后pH下降0.1~0.2；若用NaCO3校正，高压蒸汽灭菌后pH升高0.1~0.2。
(4) 滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤，固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
(5) 分装：①基础培养基：一般分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高度的1/4~1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端有1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管容量的1/4~1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固；④琼脂平板：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
(6)灭菌：①由耐热物质配制成的培养基(如普通营养琼脂等)常用高压蒸汽灭菌，条件为103.43kPa，15~20min；含糖培养基以68.95kPa，10~15min为宜，以免破坏糖类物质；②不耐高热的物质配制成的培养基，如糖类、明胶和牛乳等常用流通蒸汽灭菌，方法是加温80~100℃30min，每天1次，连续3天；③富含蛋白质的培养基(如含血清或鸡蛋清的培养基)需用血清凝固器灭菌，方法是将配制好的培养基摆放在血清凝固器内(一般做成斜面)，第1天75℃、30min，第2天80℃、30min，第3天85℃、30min，在3次灭菌的间隙将培养基取出，置35℃孵箱中过夜；④对高营养液态的不耐热培养基，如血清、细胞培养液等，则可用滤过除菌。
实验五培养基的制作及灭菌
实验五培养基的制作及灭菌实验目的：1.学习培养基的制作方法。
2.掌握培养基的灭菌技术。
实验步骤：1.准备所需材料和设备，包括琼脂、蒸馏水、酵母粉、葡萄糖、盐以及烧杯、量筒、试管等。
2.称取所需的琼脂，按照所需制作的培养基的浓度要求，将琼脂加入一个烧杯中。
3.加入适量的蒸馏水，并用玻璃转子搅拌均匀，直到琼脂完全溶解。
4.将琼脂溶液转移到一个大容器中，继续搅拌一段时间，以使溶液均匀充分。
5.在此过程中，可以将所需添加的其他成分进行称量，如酵母粉、葡萄糖和盐。
根据配方要求逐一加入琼脂溶液中。
6.继续用玻璃转子搅拌溶液，直到所有成分完全溶解。
7.将培养基溶液倒入装有文化管的试管中，每个试管约装满一半。
8.置于培养基外表面有菌或细菌孢子的地方，将试管口用针灼烧，使培养基杀菌。
9.将装有培养基溶液的试管加入至高温高压灭菌锅中，进行高温高压灭菌。
10.灭菌完成后，将试管从高温高压灭菌锅中取出，放置在室温下冷却。
11.等试管冷却至室温后，将试管翻转，使培养基均匀附着在试管内壁。
实验结果：制作好的培养基溶液应呈均匀透明的状态，无沉淀物和杂质。
实验注意事项：1.在称取琼脂时要小心，避免粉尘飞扬和吸入。
2.加入蒸馏水时要慢慢倒入，避免烧伤。
3.加入其他成分时要保持适当的温度，避免成分无法溶解。
4.灭菌时应注意安全，避免受烫伤。
5.使用高温高压灭菌锅时要严格按照使用说明操作，避免安全事故发生。
实验讨论：在制作培养基的过程中，要严格控制各种成分的比例，以确保培养基的浓度和配比符合要求。
另外，灭菌步骤也是非常重要的，只有有效灭菌才能确保培养基无菌。
培养基的制作与灭菌是微生物学实验中常用的操作，它是为了提供细胞生长所必需的营养物质和环境，并排除外界的其他微生物干扰。
通过制作培养基，可以为后续的微生物培养提供基础设施，为微生物的生物学研究提供必要的条件。
总结：本实验主要介绍了培养基的制作方法和灭菌技术。
通过制作培养基和灭菌步骤，可以为后续的微生物培养提供必要的条件，确保培养基无菌和符合要求。
培养基的制配的实训报告
一、实训目的1. 掌握培养基的基本概念和制备方法。
2. 学习不同类型培养基的特性和应用。
3. 提高实验室操作技能，确保实验的准确性和安全性。
二、实训环境1. 实验室：具备无菌操作条件，配备高压蒸汽灭菌器、电子天平、高压锅、三角瓶、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台等设备。
2. 原料：黄豆饼粉、尿素、K2HPO4、MgSO4.7H2O、NaCl、AEO9、糊精等。
三、实训原理培养基是微生物生长繁殖的必需物质，根据其成分和用途可分为多种类型。
本实训主要制备一种适用于脂肪酶生产的培养基。
四、实训过程1. 称量与溶解- 称取10g糊精、30g黄豆饼粉、10g尿素、0.5g K2HPO4、0.5g MgSO4.7H2O、1g NaCl和0.5g AEO9，置于1000mL的三角瓶中。
- 加入少量去离子水，用玻璃棒搅拌至糊精完全溶解。
- 将溶液转移至高压锅中，补足至1000mL。
2. 灭菌- 将高压锅加热至121℃，维持15分钟，进行高压蒸汽灭菌。
3. 冷却与分装- 将灭菌后的培养基冷却至室温。
- 将培养基分装至无菌试管中，每管10mL。
4. 调pH值- 使用pH计测定培养基的pH值，调节至9.0～10.0。
5. 接种与培养- 将制备好的培养基置于26℃恒温培养箱中培养48小时。
五、实训结果1. 培养基制备成功，无杂菌污染。
2. 脂肪酶产量达到预期水平。
六、实训总结1. 本实训成功制备了适用于脂肪酶生产的培养基，为后续实验提供了基础。
2. 通过实训，掌握了培养基制备的基本步骤和注意事项，提高了实验室操作技能。
3. 认识到培养基制备过程中无菌操作的重要性，确保实验结果的准确性。
七、改进意见1. 在称量过程中，应注意精确称量，避免误差。
2. 在灭菌过程中，应确保高压锅的压力和温度达到要求，以保证培养基的无菌性。
3. 在分装过程中，应注意无菌操作，避免污染。
4. 在培养过程中，应注意观察培养基的形态和颜色变化，及时发现问题并采取措施。
培养基配方
培养基配方1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
培养基制配的实训报告
1. 掌握培养基的基本原理和制配方法。
2. 学会实验室无菌操作技术，提高实验室基本技能。
3. 培养团队合作精神，提高实验操作能力。
二、实训环境1. 实验室环境：温度适宜、通风良好、光线充足。
2. 实验器材：无菌操作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、移液器、培养皿、试管、玻璃棒、酒精灯、镊子等。
3. 实验材料：牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、无菌生理盐水、无菌试剂等。
三、实训原理培养基是微生物生长繁殖所必需的养料，其主要成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。
本实训以牛肉膏和蛋白胨为主要碳氮源，葡萄糖为碳源，琼脂为凝固剂，蒸馏水为溶剂。
四、实训过程1. 称量：按照配方要求，准确称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等固体试剂。
2. 溶解：将称量好的固体试剂放入烧杯中，加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 调节pH：用精密pH计测定溶液pH，根据需要用1mol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至适宜范围。
4. 灭菌：将溶解好的培养基倒入锥形瓶中，用酒精灯进行灭菌处理，防止微生物污染。
5. 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，加入适量的蒸馏水，使培养基浓度适宜。
6. 倒平板：将冷却至50℃左右的培养基倒入培养皿中，用无菌玻璃棒均匀铺平，待凝固后备用。
7. 分装：将制备好的培养基分装至无菌试管中，密封，备用。
1. 培养基制备成功，符合实验要求。
2. 学生掌握了培养基的基本原理和制配方法。
3. 学生提高了实验室无菌操作技能。
六、实训总结1. 通过本次实训，使学生了解了培养基的制备过程，掌握了培养基的基本原理和制配方法。
2. 学生通过无菌操作，提高了实验室基本技能。
3. 实训过程中，学生培养了团队合作精神，提高了实验操作能力。
本次实训取得了良好的效果，达到了预期的目的。
在今后的实验教学中，我们将继续加强实验室基本技能的培养，提高学生的综合素质。
同时，针对实验中出现的问题，及时进行总结和改进，确保实验教学的质量。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
培养基的制备
一、培养基的制备:(一)液体培养基1、称量用电子天平称量配制培养基所需的各种药品:牛肉膏3.0 g 蛋白胨10 g 氯化钠5.0 g2、溶化将称好的药品置于烧杯中,加入少量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,加热溶解3、定容待全部药品溶解后,加水至所需体积1000ml4、调pH 用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围，直至将pH调制7.2-7.45、过滤6、分装将配好的液体培养基分别装入锥形瓶中,并加塞包扎7、灭菌将加塞包扎好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中,在121℃下灭菌20min.8、保存将配置好的培养基放入4℃的冰箱中，保存备用（二）固体培养基1、称量用电子天平称量配制培养基所需的各种药品:牛肉膏3.0 g 蛋白胨10 g 氯化钠5.0 g 琼脂粉15 g2、除无需过滤外，其余步骤同液体培养基二、供试样品处理1.苔藓植物提取液制备将采集来的苔藓样品用自来水冲洗，再用去离子水洗净，放入培养箱于50℃恒温条件下烘干，用电动粉碎机将植物体粉碎。
称取 2.0 g 样品粉末，置于具橡胶塞的三角瓶中，加20 ml无水乙醇, 在摇床上振荡提取20 h, 以1500 r/ min 离心10 min, 收集上清液, 将残渣再用无水乙醇重复提取2次, 方法同上，合并3次的提取液于小烧杯中, 置4℃冰箱保存备用。
2.苔藓植物浸出液的制备分别将植物体洗净,蒸馏水浸泡至吸水饱和,然后用滤纸吸去体表多余水分,但不能过重挤压。
称取8 g藓体,加少许蒸馏水,研磨成浆状,再加水至40ml。
放入50℃恒温水浴锅12 h。
取出并离心去渣,得上清液即为浸出液。
三、菌悬液的制备取供试细菌菌株，用接种环各取菌苔少许接种至牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上，在37℃恒温培养箱中培养20 h 活化，然后将活化后的菌株接一环于 5 mL 液体培养基中，在恒温振荡器中37℃下培养6- 8 h ，即制成菌悬液。
四、滤纸片法测定抑菌作用取直径12 mm 的灭菌滤纸片放入上述苔藓植物提取液中浸泡过夜，将菌悬液各取0．5 mL 与相应的固体培养基制成含菌平板，用无菌镊子取含浸出液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴4 片，每菌做 3 次重复，且用无水乙醇浸泡滤纸片作空白对照，置于37℃恒温培养箱中培养24 h 后，取出测定抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
实验室常用培养基配方
实验室常用培养基配方1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是最为常用的一种培养基，用于微生物的一般培养、分离和鉴定，其配方如下：-水：1000mL-肉浸膏或胨：三到五克-水解酪蛋白：五克-氯化钠：五克-琼脂：十五克2. 培养基ONE（BHI Agar）培养基ONE用于灭菌后的微生物收集、保存和复苏，配方如下：-砂糖：十五克-胨：二十克-水：1000mL-酵母膏：二十克-酵母蛋白胨：十克-溶血素：十克-十％NaCl：五百毫升-甘油：百毫升3. 霍乱弧菌选择性琼脂培养基（TCBS Agar）TCBS Agar用于霍乱弧菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-TCBS粉：一百克4. MacConkey琼脂培养基（MacConkey Agar）MacConkey琼脂培养基是一种选择性琼脂培养基，用于大肠杆菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-肉浸膏：十七克-水解酪蛋白：十五克-氯化钠：五克-紫蘑菇素：六十毫克-琼脂：十五克5. Sabouraud琼脂培养基（Sabouraud Agar）Sabouraud琼脂培养基用于真菌的分离和培养-水：1000mL-葡萄糖：四十克-琼脂：十五克-氯化钠：五克-氯已二维硫酸钾：二十克这些仅仅是一些常见的培养基配方，实验室常根据不同微生物的要求而有所调整。
此外，还有许多特殊的培养基用于特殊微生物的培养和分离，如MRS培养基用于乳酸菌、EC培养基用于大肠杆菌O157:H7等。
在使用培养基时，需要注意权威的文献和生产厂家的指导。
微生物实验培养基配方
微生物学实验常用培养基的配制1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。
121℃灭菌30min。
7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）113℃灭菌30min。
8、半固体肉膏蛋白胨培养基121℃灭菌20min。
9、合成培养基加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。
121℃灭菌20min。
10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。
常用培养基的制备
常用培养基的制备常用培养基是生物科学中必不可少的工具，它们可以提供一系列必要的营养物质和条件，使微生物、植物和动物细胞可以繁殖和生长。
在实验室中，我们通常需要制备一些常用培养基，以满足我们的实验需求。
本文将分步骤介绍如何制备常用培养基。
第一步：准备培养基成分首先，需要准备所需的培养基成分，例如碳源、氮源、维生素、无机盐、生长因子等。
其中，常用的碳源包括葡萄糖、蔗糖等；常用的氮源包括氨、硝酸盐、尿素等；常用的无机盐包括磷酸盐、铁、钙、钾、镁等。
这些成分的用量和配比可以根据需要进行调整。
第二步：加入水将准备好的培养基成分加入适量的水中，待成分溶解后，用玻璃棒或磁力搅拌子充分搅拌，让混合物均匀混合。
注意，加水时要注意水质的纯净度，保证培养基的质量。
第三步：调节pH值根据需要，调节溶液的pH值。
常用的调节剂包括酸和碱，例如盐酸、氢氧化钠等。
将调节剂滴加到溶液中，并用pH计测定溶液的pH值，适当调整pH值，直到达到所需的值。
第四步：灭菌将制备好的培养基装入适当容量的烧瓶或培养皿中，密封好，进行高温高压灭菌。
高温高压灭菌能够有效地杀死培养基中的细菌、真菌等微生物，防止污染，保证培养基的质量。
通常，高温高压灭菌需要在121℃下进行30分钟左右。
第五步：贮存将高温高压灭菌后的培养基放置在恒温箱中，控制在4℃下保存。
也可以将其按瓶、罐装装起来，进行冻存，保存期可达1年以上。
总之，制备常用培养基是生物学研究中的基本技能，熟练掌握制备方法，能够保证实验的结果准确可靠。
当然，不同的实验需要不同的培养基，在制备前需要进行充分的查询和准备，确保使用的培养基能够达到实验的要求。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项制备常用培养基的步骤：1.准备所需材料和试剂：包括原材料、化学试剂、水质等。
2.按照配方准备培养基的成分，称取所需质量的每种成分，并放入容器中备用。
需要注意的是，成分的配比应严格按照配方比例进行。
3.取一定容积的纯化水，进行加热和搅拌。
加热需注意温度控制，以避免高温引起成分变性和水的蒸发。
4.将加热的纯化水慢慢倒入容器中的培养基成分中，同时用搅拌器搅拌，以保证成分均匀溶解。
5.溶液温度降至室温后，通过过滤器或高温高压灭菌器对培养基进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
6.消毒后，将培养基分装到适当的容器中，如试管、琼脂培养皿等，并密封好，以免受到外界的污染。
7.对于固体培养基，添加适量的琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖固化成体，用压力灭菌器灭菌。
8.储存培养基要注意避光、防潮和防火，并在相关容器上标明名称、配方和制备日期。
1.成分准确：制备培养基时，需要准确称取每种成分的质量，确保配方比例准确。
不同的微生物和细胞需要不同的营养成分，所以要了解不同微生物和细胞的需求，选择适当的配方。
2.水质净化：培养基的制备需要使用纯化水，如去离子水、超纯水等，以确保水质的纯净。
水质若不符合要求，会影响培养基的质量。
同时，加热时要控制温度，以避免成分变性和水的蒸发。
3.消毒杀菌：培养基在制备完成后需进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
可以通过过滤器或高温高压灭菌器进行消毒。
消毒过程中要做到严格的操作规范，保证培养基的纯度。
4.容器选择：对于不同的培养基，选择合适的容器也非常重要。
常用的容器包括试管、琼脂培养皿、培养瓶等。
选用容器时要考虑到培养的需求，如气体交换、液体混合等。
5.储存注意：制备完成的培养基需要正确储存，避免光照、潮湿和高温。
同时要在容器上标明名称、配方和制备日期，以便管理和使用。
总结：制备常用培养基需要严格按照配方比例进行，控制水质和温度，并进行消毒处理。
在容器选择和储存过程中也要注意一系列的注意事项，以确保培养基的质量和纯度。
常用培养基的制备
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
（一）肉汤培养基
1．成份 牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水 1000ml。
2．制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热 溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭 菌器内，121.3℃灭菌20min即成。
技能训练 常用培养基旳制备
实训目的
• 熟悉培养基制备旳基本程序 • 会制备常用旳培养基
仪器材料
高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量 筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等
措施环节
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
制备培养基 措施环节
• 计算 • 称量 • 溶化 • 调PH • 分装 • 灭菌 • 无菌检验 • 备用
3．用途 可供一般细菌生长，同步也是制作一般培养基 旳基础原料。供营养要求较高旳细菌分离培养，亦可 供溶血性旳观察和保存菌种。
（二）固体琼脂培养基 1．计算：
1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基 旳需要量拟定营养琼脂粉旳用量。
营养琼脂粉旳量=31.3×15×n/1000 （g） 其中：
（三）半固体培养基
肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成 ，用于菌种旳保存或观察细菌旳运动性。
（四）血液琼脂培养基
将灭菌旳营养琼脂冷至45～50℃，以无菌操 作，加入5%～10%旳无菌血液（或脱纤维血 ），然后倾注平皿或分装试管制成斜面。
课后作业
1.写出实习报告； 2.掌握一般营养琼脂培养基旳制备过程
灭菌时包牛皮纸
5．灭菌：用高压灭菌器灭菌
包扎好，直立放入内筒中， 在121.3℃灭菌20-30min。
实验室常用培养基配方及制备方法
一、孟加拉红培养基（虎红培养基）配方：蛋白胨5g葡萄糖10g磷酸二氢钾1g硫酸镁（MgSO4•7H2O）0.5g 琼脂20g1/3000孟加拉红溶液100ml 蒸馏水1000ml氯霉素0.1g制法：上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。
另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。
用途：分离霉菌及酵母加入红色素对培养基进行染色的原因主要是便于根据红色的浓度和色调的变化，以观察培养基的理化性质是否有所改变。
二、PDA培养基Potato Dextrose Agar （Medium）配方：马铃薯200g 葡萄糖20g 琼脂15~20g 自来水1000ml制法：马铃薯去皮，切成小块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。
121℃灭菌30min。
用途：一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性三、牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15~20g 水1000ml pH 7.0~7.2制法：121℃灭菌20min。
用途：培养细菌牛肉膏中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。
广泛应用于生物制药发酵。
四、LB培养基（Luria-Bertani 培养基）配方：蛋白胨10g 酵母膏5g NaCl 10g 蒸馏水1000ml pH 7.0制法：121℃灭菌20min。
培养基制备的实训报告
一、实训目的1. 理解培养基在微生物培养中的重要性。
2. 掌握培养基制备的基本原理和操作步骤。
3. 学会正确使用实验室常用玻璃器皿和实验器材。
4. 提高实验操作技能和实验室安全意识。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX大学微生物实验室四、实训原理培养基是微生物生长繁殖的营养基础，其制备质量直接影响到微生物的生长和实验结果。
培养基的制备主要包括原料的选择、计算与称量、混合溶解、调整pH值、加指示剂、溶化琼脂等步骤。
五、实训材料1. 原料：葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨、琼脂、牛肉膏、氯化钠等。
2. 仪器：托盘天平、电子天平、烧杯、量筒、漏斗、试管、培养皿、电炉、pH试纸、高压蒸气灭菌器等。
3. 其他：无菌操作台、酒精灯、无菌棉签、无菌操作手套等。
六、实训步骤1. 原料的选择、计算与称量根据培养基配方，计算所需原料的准确数量，选择不同精度的称量工具进行称量。
如葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨等固体原料可用托盘天平称量，琼脂、牛肉膏等需精确称量的原料可用电子天平称量。
2. 混合溶解将称量好的各种原料根据要求放入烧杯或其他容器中，加入少量水，用电炉加热溶解，不断搅拌。
固体培养基需最后加入琼脂，边加边搅拌，待完全溶解后，补足所失水分。
3. 调整pH值用pH试纸或pH计测定培养基的pH值，用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCl溶液调节培养基的pH值至所需范围。
注意等培养基稍降低一些温度后进行调节，避免pH值调节不均匀。
4. 加指示剂对某些培养基，按要求加入一定量的指示剂。
注意培养基温度不宜过高，也可以将指示剂单独灭菌，在用前按需要比例加入溶解后的培养基，摇匀备用。
5. 溶化琼脂固体或半固体培养基需加入一定量琼脂。
将琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全熔化后停止搅拌，并补足水分（水需预热）。
注意控制加热速度，避免琼脂糊化。
6. 分装和灭菌将制备好的培养基分装到无菌试管或培养皿中，用高压蒸气灭菌器进行灭菌。
培养基的制备实习报告
实习报告实习内容：培养基的制备实习时间：2023年2月24日实习地点：实验室一、实习目的通过本次实习，了解培养基制备的基本原理和步骤，掌握培养基制备的操作技能，为后续的微生物实验打下基础。
二、实习原理培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，根据化学成分和用途可分为天然培养基、合成培养基和鉴别培养基等。
培养基制备的关键在于无菌操作，确保培养基不被杂菌污染。
三、实习步骤1. 准备材料：称量适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、葡萄糖等原料。
2. 溶解原料：将称量好的原料加入适量的蒸馏水，加热搅拌使其充分溶解。
3. 调节pH：用盐酸或氢氧化钠溶液调节培养基的pH值至所需范围。
4. 灭菌：将调好pH的培养基倒入锥形瓶，用纱布封口，放入高压蒸汽灭菌锅中，压力设定为1.05kg/cm²，温度为121℃，灭菌15-20分钟。
5. 倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，倒入灭菌后的平板中，注意操作过程中避免污染。
6. 放置凝固：将倒入平板的培养基放置在培养箱中，使其凝固。
四、实习结果与分析通过本次实习，我成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，观察到培养基呈淡黄色，质地均匀，无明显颗粒。
将制备好的培养基放入培养箱中，待其凝固后，可以用于微生物的培养和实验操作。
在实习过程中，我了解到培养基制备的关键是无菌操作，避免杂菌污染。
此外，还需要注意称量、溶解、调节pH等步骤的精确度，以确保培养基的质量。
五、实习收获通过本次实习，我掌握了培养基制备的基本原理和操作技能，为后续的微生物实验奠定了基础。
同时，我也认识到实验操作中的细节问题，如无菌操作、精确称量等，这些技能将在今后的实验中发挥重要作用。
六、实习体会本次实习让我对培养基制备过程有了更深入的了解，也提高了自己的实验操作能力。
在实习过程中，我意识到理论知识与实践操作的密切关系，只有掌握了扎实的理论知识，才能在实际操作中游刃有余。
同时，我也感受到实验工作的严谨性，任何一个环节的失误都可能导致实验失败。
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实训五常用培养基的制备
目的要求熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH。
仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。
方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。
(一)肉膏汤培养基
1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后，加热溶解。
矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。
置高压蒸汽灭菌器内，121.3℃20min灭菌即成。
3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。
(二)营养琼脂培养基
1．成分肉膏汤1000ml，琼脂粉20～30g。
2．制法将琼脂粉加入肉膏汤内，煮沸使其完全溶解，矫正pH7.4～7.6，过滤分装于试管或三角烧瓶中，以121.3℃灭菌20min。
可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。
此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。
(三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。
供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。
(四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或细菌运动性观察。
(五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2～3g牛肉渣及肉膏汤5～6ml，液面盖以一薄层石蜡油，经121.3℃20～30min灭菌后保存冰箱备用。
此培养基用于厌氧菌的培养，必须注意，此培养基在使用时，将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min，以驱除管内存留的氧气。
(六)pH的测定与矫正
1．精密pH试纸法取精密pH试纸一条，浸入欲测的培养基中，半秒后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。
在滴加1mol/L氢氧化钠后，应充分摇匀，再用试纸测定，直至调到pH在所需的范围内。
2．标准比色管法
(1)取与标准比色管大小一致的试管2支，按(实图5-1)每管内加入不同的溶液。
①培养基5ml(对照管)；②标准比色管；③培养基5ml加0.02%酚红指示剂0.25ml；④蒸馏水管。
(2)对光观察比较两侧观察孔内颜色是否相同，培养基若为酸性(一般呈酸性)，则向③管中慢慢加0.1mol/L氢氧化钠，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至③④两管
相加的颜色与①②两管相同为止。
1.对照管
2.标准比色管
3.检查管
4.蒸馏水管
(3)记录5ml培养基用去0.1mol/L 氢氧化钠的量，按下列公式计算培养基总量中需加1 mol/L氢氧化钠的用量。
所需1mol/L氢氧化钠量＝5ml培养基所
培养基总体积数 1
需0.1mol/L氢氧化钠毫升数×------------------ × ------
5 10
(4)加入1mol/L氢氧化钠于培养基后摇匀，再作一次矫正试验，如pH不在所需范围，应重新测定。
目前，常用的培养基均已商品化，不需要测定及矫正pH，按说明使用即可。