中和试验

第十三章 中和试验（neutralization test）

学习要点：

毒价滴定； 终点法中和试验； 空斑减少试验。

病毒或毒素与相应的抗体结合，抗体中和了病毒或毒素，失去了对易感动物的致病力，这种试验称为中和试验。

一、简单定性中和试验——毒价滴定

主要用于鉴定病料中病毒及病毒的类型，亦可用于毒素的鉴定。试验方法：根据病毒的易感性选定试验动物（鸡胚或细胞）及接种途径。将动物分为对照组与实验组。试验组：取待检病料磨碎，加生理盐水稀释，加双抗，在冰箱中作用1h或经过滤器过滤，与已知的抗血清等量混合，置于37℃中作用1h后接种动物。对照组则用正常血清加入稀释病料，作用后，接种另一种动物。对照组动物发病死亡，而试验组动物不死，即证实病料中含有与已知抗血清相应的病毒。

二、终点法中和试验

1、固定血清稀释病毒法

将病毒用2倍递增稀释，分置二列试管：第一列加入正常血清（对照组）；第二列加入待检血清（试验组）。二列试管分别振荡均匀，置370C中作用1h，将各管混合液分别接种试管动物，每管用3-5只动物。接种后观察数目，并记录死亡数。观察结束后，计算起LD50及中和指数。

2、固定病毒稀释血清法

本法用以测定抗病毒的血清中和效价。将待检血清稀释，加等量已知毒价的病毒液，在试管内中和湖接种动物，观察动物发病及死亡情况，计算其只能中和效价。

三、空斑减少试验

在细胞培养时作中和试验可采用空斑减少法。一种能使细胞致病变的病毒，在细胞培养上生长后，因其致病变作用使细胞单层脱落，pH与无病变地方也不一样，该处与周围明显不同的、一个局限性的变性细胞区称为空斑。一个空斑可以当作一个病毒生长的集落，一个单位内空斑数多，病毒就多，故可测出病毒空斑形成单位。这样，加抗血清与不加抗血清的病毒空斑形成单位之差，就称为空斑减少试验。使空斑减少50%的血清西式度，就是该血清的中和价。

复习思考题：

1、滴定毒价的常用单位？

2、什么是中和价和中和指数？