神经元细胞培养

神经元细胞培养

1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中。

2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次。

3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。

4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3 次。

5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。

6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打成单细胞悬液。

7. 细胞计数，调整细胞密度按（700000个）1.5×105/cm2 种入6 孔板内，放入CO2 孵箱中培养。

(1)把细胞悬液用(DMEM＋20%FBS)悬浮，种到培养皿上6－12 h 后，全量换成2% B27

的neurobasal 培养基，继续培养，3 d 半量换液。（+0.5mmol/L谷氨酰胺）

鉴定

1.形态学的观察，在DIC下可以很清楚的看到神经元特有的形态，轴突树突以及胞体非常

明显。

2.免疫学鉴定：正如楼上几位所说，NF（神经丝）或者tubulin 或者MAP2等都是目前

鉴定神经元的Marker,不论你好似免疫荧光还还是免疫组化，阳性表达即可！

3.在进一步你可一做mRNA水平的实验，也就是RT-PCR了。这就更能支持2的阳性表达

了。

4.电生理学的鉴定：测定神经元特有的电生理学也是证据之一啊！

从以上几个方面去做，应该能证明是神经元了！

错误之处还请赐教！

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