烤片对染色体G显带标本质量的影响分析
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现代医药卫生 2009 年第 25 卷第 3 期
393
烤片对染色体G显带标本质量的影响分析
赵小平，余 红，黄 燕，税青林 (泸州医学院医学生物学与遗传学教研室，四川 泸州 646000）
【摘要】目的：探讨制备高质量人类染色体G显 带 标 本 的 最 适 烤 片 温 度 和 时 间 。方 法 ：选 择130名 健 康 学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规
对比各组标本的显带效果。
表1
标本分组情况
烤片温 烤片 标本量 分组 度(℃) 时间 份数 张 数
烤片温 烤片 标本量 分组 度(℃) 时间 份数 张数
1~1 60 30min 10 50 1~2 60 1~2h 10 50 1~3 60 3~4h 10 50 1~4 60 5~6h 10 50 2~1 70 30min 10 50 2~2 70 1~2h 10 50 2~3 70 3~4h 10 50 2~4 70 5~6h 10 50
1 材料与方法
1．1 材料：130名健康学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规 培 养 制 备 的 染
色体标本。
1．2 方法：每份标本滴片5张。按 不 同 的 烤 片 温 度 和 时 间 分 组 ，
每 组10份 ，共50张 标 本 （见 表1）。操 作 按 胰 酶 消 化 法 常 规 进 行 ，
100
30
5min±30
长短会直接影响胰蛋白酶消化标本的时间和质量。 实 验 表 明 ，烤 片 温 度 低 、时 间 短 如 ：60 ℃ 30 min时 染 色 体
显带效果差。这是由于烤片温度低、时间短，一方面使标本上的 固定液未蒸发干净，醇类、酸类试剂会带进胰蛋白酶消化液和 吉 姆 萨 染 液 中 ，影 响pH值 ，使 标 本 不 易 上 色 ，染 色 体 带 纹 模 糊 不清。另一方面，这也使标本老化程度不够，胰酶消化时间不易 掌握，容易使标本消化过度，染色体边缘和带纹发毛，出现空泡 现象，影响带纹的观察。烤片温度高、时间长时如：70 ℃ 3～6 h， 80 ℃ 3～6 h，100 ℃ 30 min染 色 体 显 带 效 果 亦 差 ， 其 原 因 是 在 胰 酶 消 化 时 ，染 色 体 上 与 DAN 结 合 疏 松 的 组 蛋 白 易 被 胰 蛋 酶 分 解 掉 ，染 色 后 这 些 区 段 成 为 浅 带 ，而 那 些 组 蛋 白 和DAN结 合 牢 固 的 区 段 可 被 染 成 深 带 [4]。经 过 高 温 或 长 时 间 烤 片 后 ， 染 色 体 标 本老化过度，组蛋白不容易被胰酶消化干净，显带时浅带仍然 被吉姆萨染液染色，染色体带型不能被显现出来。若延长胰酶 的消化时间，则染色体带型模糊，出现深带不深、浅带不浅的状 况，甚至可使染色体呈现一种“幻影”，什么都看不见。
表3 不同烤片温度和时间标本的胰酶消化时间（x±s）
温 度 (℃)
时间 烤片(min) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
60
30
15s±5
1~2 35s±10
3~4 2min±20
70
30
1min±10 1~2 2min±20 3~4 3min±30
80
30
2min±20 1~2 3min±30 3~4 4min±30
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
60℃
30
差
1~2
好
70℃
30
好
1~2
好
80℃
30
好
1~2
好Biblioteka Baidu
100℃ 30 差
3~4
好
5~6
好
3~4
差
5~6
差
3~4
差
5~6
差
2．2 不同烤片温度和时间 标 本 在 显 带 时 胰 酶 消 化 所 需 的 时 间 不同，见表3。
3 讨论
3．1 烤片是染色体G显带中的重要步骤之一：烤片不仅使标本 老化，还可蒸发残留于标本 上固定剂中醇类和酸类物质[3]，有利 于胰蛋白酶消化液pH值 的 稳 定 性 。 烤 片 温 度 的 高 低 和 时 间 的
3~1 80 30min 10 50 3~2 80 1~2h 10 50 3~3 80 3~4h 10 50 3~4 80 5~6h 10 50 4~1 100 30min 10 50
2 结果
2．1 烤片温度：见表2。 表2 不同烤片温度和时间标本的显带效果
温度
烤片 显带 （min) 效果
烤片 （h)
带标本的质量，掌握好适宜的烤片温度和时间，才能制备高质量的显带标本。
【关 键 词 】染 色 体 ；G显 带 ；烤 片 ；温 度 ；时 间
文 章 编 号 ：1009-5519 （2009 ）03-0393-01
中 图 分 类 号 ：R446
文 献 标 识 码 ：A
染色体G显带技术是细胞遗传学研究和染色体疾病诊断最 常用的技术。而在G显带技术中常用的方法是胰蛋白酶处理法。 该方法简便易行，带型清晰，标本可以长期保存。但在操作过程 中很多因素都会对显带标本的质量造成影响，比如，烤片温度、 时间、胰酶浓度和处理时间等。本文主要通过对人类染色体G显 带中不同的烤片温度和时间进行对比分析，以总结出制片的最 适温度和时间，有利于制备高质量显带标本。
培养、制备染色体标本，按不同的烤片温度和时间分组 ，对比各组标本的显带效果。结果：烤 片 温 度60 ℃ 30 min、70 ℃ 3～6 h、80 ℃
3～6 h和100 ℃时显带效果差；而60 ℃ 1～6 h、70 ℃和80 ℃ 30 min～2 h显带效果好。结论：烤片 温度的高低和时间的长短会影响G显
在我们的实验中，虽然60 ℃ 1～6 h、70 ℃ 30 min～2 h、80 ℃30 min～2 h小时的显带效果都较好， 但随着烤片温度的升 高 和 时 间的延长，胰酶对标本的消化时间也随之增加，这既影响工作 效率，也影响标本的显带质量，使显带达不到最佳效果。我们认 为，在做人类染色体显带时，烤片最适宜选择60 ℃ 1～2 h或70 ℃ 30 min～1 h。使 胰 酶 消 化 的 时 间 段 在30 s～1 min。这 样 ，烤 片 的 温度不高、时间不长，既能充分蒸发固定液，也能使标本老化适 中，胰酶消化时间易于掌握，显带后染色体带纹清晰，深浅带反 差好，能达到最佳显带效果。 参考文献： [1] 李 钰.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：北京大学医学出版
收稿日期：2008-10-27 修回日期：2008-11-17
社 ，2004.7. [2] 王修海，刘 雯.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：科学出版
社 ，2001.6. [3] 李 洁，徐文瑜，杨娇英.外周血淋巴细胞培养及染色体G带标本
制备的实验对策[J].中国优生与遗传杂志，2006，14(1)： 51. [4] 彭惠民，赵 刚.医学遗传学实验[M].武汉：武汉大学出版社，1993.29.
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烤片对染色体G显带标本质量的影响分析
赵小平，余 红，黄 燕，税青林 (泸州医学院医学生物学与遗传学教研室，四川 泸州 646000）
【摘要】目的：探讨制备高质量人类染色体G显 带 标 本 的 最 适 烤 片 温 度 和 时 间 。方 法 ：选 择130名 健 康 学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规
对比各组标本的显带效果。
表1
标本分组情况
烤片温 烤片 标本量 分组 度(℃) 时间 份数 张 数
烤片温 烤片 标本量 分组 度(℃) 时间 份数 张数
1~1 60 30min 10 50 1~2 60 1~2h 10 50 1~3 60 3~4h 10 50 1~4 60 5~6h 10 50 2~1 70 30min 10 50 2~2 70 1~2h 10 50 2~3 70 3~4h 10 50 2~4 70 5~6h 10 50
1 材料与方法
1．1 材料：130名健康学 生 外 周 血 淋 巴 细 胞 常 规 培 养 制 备 的 染
色体标本。
1．2 方法：每份标本滴片5张。按 不 同 的 烤 片 温 度 和 时 间 分 组 ，
每 组10份 ，共50张 标 本 （见 表1）。操 作 按 胰 酶 消 化 法 常 规 进 行 ，
100
30
5min±30
长短会直接影响胰蛋白酶消化标本的时间和质量。 实 验 表 明 ，烤 片 温 度 低 、时 间 短 如 ：60 ℃ 30 min时 染 色 体
显带效果差。这是由于烤片温度低、时间短，一方面使标本上的 固定液未蒸发干净，醇类、酸类试剂会带进胰蛋白酶消化液和 吉 姆 萨 染 液 中 ，影 响pH值 ，使 标 本 不 易 上 色 ，染 色 体 带 纹 模 糊 不清。另一方面，这也使标本老化程度不够，胰酶消化时间不易 掌握，容易使标本消化过度，染色体边缘和带纹发毛，出现空泡 现象，影响带纹的观察。烤片温度高、时间长时如：70 ℃ 3～6 h， 80 ℃ 3～6 h，100 ℃ 30 min染 色 体 显 带 效 果 亦 差 ， 其 原 因 是 在 胰 酶 消 化 时 ，染 色 体 上 与 DAN 结 合 疏 松 的 组 蛋 白 易 被 胰 蛋 酶 分 解 掉 ，染 色 后 这 些 区 段 成 为 浅 带 ，而 那 些 组 蛋 白 和DAN结 合 牢 固 的 区 段 可 被 染 成 深 带 [4]。经 过 高 温 或 长 时 间 烤 片 后 ， 染 色 体 标 本老化过度，组蛋白不容易被胰酶消化干净，显带时浅带仍然 被吉姆萨染液染色，染色体带型不能被显现出来。若延长胰酶 的消化时间，则染色体带型模糊，出现深带不深、浅带不浅的状 况，甚至可使染色体呈现一种“幻影”，什么都看不见。
表3 不同烤片温度和时间标本的胰酶消化时间（x±s）
温 度 (℃)
时间 烤片(min) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
时间 烤片(h) 显带(s)
60
30
15s±5
1~2 35s±10
3~4 2min±20
70
30
1min±10 1~2 2min±20 3~4 3min±30
80
30
2min±20 1~2 3min±30 3~4 4min±30
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
烤片 （h)
显带 效果
60℃
30
差
1~2
好
70℃
30
好
1~2
好
80℃
30
好
1~2
好Biblioteka Baidu
100℃ 30 差
3~4
好
5~6
好
3~4
差
5~6
差
3~4
差
5~6
差
2．2 不同烤片温度和时间 标 本 在 显 带 时 胰 酶 消 化 所 需 的 时 间 不同，见表3。
3 讨论
3．1 烤片是染色体G显带中的重要步骤之一：烤片不仅使标本 老化，还可蒸发残留于标本 上固定剂中醇类和酸类物质[3]，有利 于胰蛋白酶消化液pH值 的 稳 定 性 。 烤 片 温 度 的 高 低 和 时 间 的
3~1 80 30min 10 50 3~2 80 1~2h 10 50 3~3 80 3~4h 10 50 3~4 80 5~6h 10 50 4~1 100 30min 10 50
2 结果
2．1 烤片温度：见表2。 表2 不同烤片温度和时间标本的显带效果
温度
烤片 显带 （min) 效果
烤片 （h)
带标本的质量，掌握好适宜的烤片温度和时间，才能制备高质量的显带标本。
【关 键 词 】染 色 体 ；G显 带 ；烤 片 ；温 度 ；时 间
文 章 编 号 ：1009-5519 （2009 ）03-0393-01
中 图 分 类 号 ：R446
文 献 标 识 码 ：A
染色体G显带技术是细胞遗传学研究和染色体疾病诊断最 常用的技术。而在G显带技术中常用的方法是胰蛋白酶处理法。 该方法简便易行，带型清晰，标本可以长期保存。但在操作过程 中很多因素都会对显带标本的质量造成影响，比如，烤片温度、 时间、胰酶浓度和处理时间等。本文主要通过对人类染色体G显 带中不同的烤片温度和时间进行对比分析，以总结出制片的最 适温度和时间，有利于制备高质量显带标本。
培养、制备染色体标本，按不同的烤片温度和时间分组 ，对比各组标本的显带效果。结果：烤 片 温 度60 ℃ 30 min、70 ℃ 3～6 h、80 ℃
3～6 h和100 ℃时显带效果差；而60 ℃ 1～6 h、70 ℃和80 ℃ 30 min～2 h显带效果好。结论：烤片 温度的高低和时间的长短会影响G显
在我们的实验中，虽然60 ℃ 1～6 h、70 ℃ 30 min～2 h、80 ℃30 min～2 h小时的显带效果都较好， 但随着烤片温度的升 高 和 时 间的延长，胰酶对标本的消化时间也随之增加，这既影响工作 效率，也影响标本的显带质量，使显带达不到最佳效果。我们认 为，在做人类染色体显带时，烤片最适宜选择60 ℃ 1～2 h或70 ℃ 30 min～1 h。使 胰 酶 消 化 的 时 间 段 在30 s～1 min。这 样 ，烤 片 的 温度不高、时间不长，既能充分蒸发固定液，也能使标本老化适 中，胰酶消化时间易于掌握，显带后染色体带纹清晰，深浅带反 差好，能达到最佳显带效果。 参考文献： [1] 李 钰.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：北京大学医学出版
收稿日期：2008-10-27 修回日期：2008-11-17
社 ，2004.7. [2] 王修海，刘 雯.医学遗传学实验指导[M].第一版.北京：科学出版
社 ，2001.6. [3] 李 洁，徐文瑜，杨娇英.外周血淋巴细胞培养及染色体G带标本
制备的实验对策[J].中国优生与遗传杂志，2006，14(1)： 51. [4] 彭惠民，赵 刚.医学遗传学实验[M].武汉：武汉大学出版社，1993.29.