体内药物分析终极复习资料
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1.体内药物分析定义。P1
研究药物及其代谢物在生物体内数量和质量变化规律的方法学科,获得药物在体内吸收、分布、代谢排泄等各种动力参数,药物与大分子的相互作用,代谢产物、代谢途径等信息,对药物评价,为临床合理用药、研发新药等提供科学依据。
2.影响血药浓度的因素(理解)。P3-5
(1)机体因素:包括生理、病理、遗传因素
(2)药物因素:包括剂型因素、药物相互作用
(3)(3)其他因素:大气污染、食品、烟、酒、茶等
药物进入体内后,血液循环为药物体内转运的枢纽。大多数药物只有达到作用部位和受体部位,并达到一定的浓度后,才产生一定的药理作用。多数药物的血药浓度与药理效应呈平行关系,部分药物的血药浓度与药效无明显相关关系。
3.体内药物分析的生物样本及分析对象。P8
生物样本:凡是体液所到之处,如血液、尿液、唾液、毛发、各种器官、组织、呼出气体等都是取样对象,还包括细胞悬液,微粒体孵育液、器官灌流液等体外试验中的各种生物介质。分析对象:母体药物、代谢产物、必要的内源性物质或与之相关的其他药物。
4.体内药物分析的特点
(1)干扰杂质多
(2)被测浓度低
(3)供试样品量少
(4)待测物的易变性
(5)要求较快提供结果
(6)要有一定的仪器设备
(7)工作量大
5.生物样品选择的基本原则。常用的生物样品及其应用特点。P19
选择原则:
(1)必须能反映浓度与药效的关系
(2)易于获得
(3)便于处理
(4)根据不同目的要求选取
常用生物样品及应用特点:
血液优点:较好体现药物浓度与治疗的关系
缺点:(1)损伤性取样,取样量有限制
(2)需要专业人员操作
尿液优点:(1)非损伤性取样
(2)药物浓度高
(3)收集方便
缺点:(1)浓度变化大,与血药浓度相关性差
(2):不易采集,保存
(3):肾功能不全、婴儿不宜用此法
唾液优点:(1)非损伤性取样
(2)含蛋白浓度低,易处理
(3)C S/C P较恒定时,可代替血样进行TDM及药物动力学研究
缺点:(1)适用药少
(2)取样量变化大
毛发优点:(1)取样方便,可重复取样
(2)通过测某特定代谢物区别滥用药、临床药
(3)可获得长期用药信息
缺点:(1)预处理繁杂,干扰多
(2)分析对象含量低,需精密仪器
6.血液样品的采集和制备.P21
采集:
通常用一次性针头插入静脉血管内抽取,取下针头,转移到相应容器,不能用力推压以免血细胞破裂
制备:
(1)血浆:多以肝素作抗凝剂,取适量于离心管,旋转使均匀分布于管壁,倾去多余液体,干燥试管;然后加入血样,离心后取上层黄色液体即可,其量约为全血的50%
(2)血清:等血样中血块凝结,在室温25°下凝结速度较慢,可在37°水浴加快血清析出,离心后取上清液即可,其量约为全血的40%
(3)全血:在血样中加入含有抗凝剂的试管,轻轻混匀即可。
6.生物样品的储存。P23-24
(1)冷冻储存
(2)加稳定剂(酶抑制剂、抗氧剂)
(3)加防腐剂或调节pH
8.去除蛋白的方法及原理,各种常用的蛋白沉淀剂及其效果。P27-28
蛋白质沉淀法:
(1)生成不溶性盐沉淀,低于蛋白质等电点的pH时,酸根与带正电荷的蛋白质形成不溶性盐沉淀;高于蛋白质等电点pH时,金属离子与蛋白质中带负电荷的羧基形成不溶性盐沉淀。
(2)盐析和脱水:
与水混溶的有机溶剂可以与蛋白质争夺水化膜,并使水的介电常数减少,从而影响蛋白质的解离程度及所带电荷数量,增加蛋白质颗粒间的引力使蛋白质沉淀。
组织的酶消化法:
蛋白水解酶可在温和条件下有效水解生物蛋白,将与蛋白质结合的药物释放出来
9.常用的缀合物水解方法有哪些?P28
(1)酸水解
(2)酶水解
(3)溶剂解
10.什么样品需要进行有机破坏处理?P29
微量元素多数以结合的形式存在于有机物中,在分析和测定这些元素时,需将这些元素从有机物中游离出来,或者将有机物破坏后测定,根据被测的性质,选则合适的有机物破坏法,使样品中绝大部分有机物破坏。某些元素在破坏有机物的过程中无丝毫损失,又能在破坏有机物后测定是何物干扰。
11.游离药物与结合药物分析的方法有哪些?其原理是什么?P29-30
平衡透析法、超滤法、超离心法、凝胶过滤法
前两法原理:利用半透膜只允许小分子药物通过,而不允许大分子药物通过的原理使游离性与结合性药物分离
12.液液提取法的原理、影响因素及提取技术。P30-33
原理:药物与干扰成分在互不相容的两相溶剂中的分配系数不同,选择性地提取生物基质中
的药物
影响因素:水相pH。提取溶剂种类、离子强度
提取技术:通常在戴塞的试管中进行,多半进行一次提取,用酸碱回提时也只是一次,不考虑提取尽药物
13.液固提取法的原理,固相萃取的主要步骤,及固相萃取的影响因素。P33-35
原理:将样品液通过合适的固相小柱,利用药物与杂质对固相小柱亲和力的差别,用适当溶剂冲洗、洗脱,使药物得到净化
步骤:(1)固相柱选择(2)固相柱处理(3)样品液上样(4)分离净化(5)待测物洗脱提取率、选择性的影响因素:(1)流速(2)样品装载量(3)固相柱使用要求(4)样品上柱前的处理
14.提取溶剂的蒸发方法。P36
抽真空挥发或直接通入气体使溶剂挥发
15.柱切换技术的原理。见PPT
是一种在线固相分离技术:
选用一个3~5cm长的短柱,用低溶剂强度的预处理流动相使生物样品净化,富集
切换阀后,分析流动相将组分带入分析柱分离测定
测定结束后仪器自动恢复开始状态,准备下次进样
16.微透析技术的定义。P45
(MD)是一种膜分离技术,利用膜透析原理,对细胞液进行流动性连续采样,在不破坏生物体内环境的情况下,直接插到生物活体内采样进行原位测定。
17.基本概念P51-52
生物介质:指一种生物来源的物质,能够以可重复方式采集和处理。
标准物质:用于制备标准样品和QC样品的待测物的参比标准,结构上可以是物质本身、其游离碱、酸、盐、酯。
标准样品:在空白介质中家人已知量待测物标准物质制成的样品,用于建立标准曲线,计算质控样品和未知样品中待测物浓度。
质控样品:在空白生物介质中加入已知量待测物标准物质制成的样品,监测生物分析方法的重复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。
介质效应:样品中存在除待测物以外的其他干扰物质,对待测物响应值造成直接或间接影响分析批:包括待测样品、适当数目的标准样品和QC样品的完整系列。
18.特异性的定义及考察方法。P52
定义:指样品中存在干扰成分的情况下分析方法能准确、专一测定分析物的能力。
考察方法:至少取六个不同个体空白样品,采用拟定的方法进行测定,所得结果接近于定量限浓度的模拟样品和用药后的实际生物样品比较,以证明内源性物质、相应的代谢物、降解产物及其他共服药物不干扰样品测定
19.标准曲线与线性范围,结合实验进行复习。P52-54
20.定量下限的定义、考察方法及要求。
定义:指符合准确度、精密度要求的生物样品中药物的最低定量浓度,其反映了方法的灵敏度。
考察方法:按标准曲线项下方法制备样品,至少制备5个标准样品,按照拟定方法进行测定,考察精密度与准确度。
要求:LLOQ的准确度应在真实浓度的80%~120%范围内;精密度的RSD应小于20%;LLOQ限度要求:至少能满足测定3-5个半衰期后生物样品中的药物浓度(或能检测出Cmax 的1/10~1/20时的药物浓度),信噪比(S/N)一般大于5。