海洋土壤中微生物的分离与纯化
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将供试菌（金黄色葡萄球菌）先接种在培养基表面，再在 培养基上放置圆形滤纸片，并在纸上滴加微生物的发酵液，发 酵液便向周围扩散。如果样液中含有抑制供试菌的物质（小分 子或蛋白质），则供试菌生长受抑制，在滤纸片的周围形成透 明圈即抑菌圈，抑菌活性越高，抑菌圈越大。
.
三、实验仪器及材料
1、仪器设备 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，高压蒸气灭菌锅，pH试纸
（二）制备土壤稀释液 取海洋淤泥土样5 g，放入盛有45 mL 无菌海盐水（3%）并
带有玻璃珠的锥形瓶中，振动约20min，使土样与水充分混合， 将微生物分散（10-1）。用1 mL 移液枪从中吸取1 mL 土壤悬液 加入盛有9 mL 无菌海盐水的三角瓶中充分混匀（10-2） ，然后 用移液枪从此试管中吸取1 mL 加入另一个盛有9 mL 无菌海盐水 的三角瓶中，混合均匀（10-3），类似方法制备10-4土壤悬浮液。
1. 分离细菌的平板28℃培养1~2天，用接种环挑取单菌落，划入
试管斜面培养基；28℃培养1~2天。
2. 分离放线菌的平板28℃培养5~10天，用接种环挑取单菌落，
划入试管斜面培养基；28℃培养5天。
3. 分离真菌的平板28℃培养4~10天后，用接种环挑取单菌落
（由于真菌菌落扩展很快，务必及时挑菌），划入试管斜面培养
.
A. 每组需要试剂、培养基
1. 3%海盐水：9mL 3瓶； 2. 培养基：
名称
平板
试管斜面
LB培养基 6个（120ml） 8支（40ml）
高氏一号培 3个（60ml） 8支（40ml） 养基
查氏培养基 3个（60ml） 8支（40ml）
三角瓶液体 3瓶（30ml/瓶，90ml） 2瓶（30ml/瓶，60ml）
萄球菌）过夜培养物，均匀涂布于培养基表面，吹干。 4.用无菌镊子夹起滤纸片放入样品（微生物发酵液）中浸透，
夹出时在容器边缘停靠片刻，滤掉多余的药液，把滤纸片放 在平板中凝好的培养基上，用镊子稍用力按一下，使之与培 养基充分紧贴；以灭菌水浸湿的滤纸片做空白对照。 5.将平板于28 ℃ 倒置培养24h后观察，用直尺或游标卡尺测 量抑菌圈的大小。
2瓶（30ml/瓶，60ml）
共计 250ml 200ml
200ml
B. 任务分配
1. 第一、二组：配3%海盐水和LB培养基； 2. 第三、四组：配高氏一号培养基； 3. 第五、六组：配查氏培养基。
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五、实验结果与讨论
1.观察描述三种培养基上菌的生长情况； （1）LB培养基 ——细菌； （2）高氏培养基——放线菌； （3）查氏培养基——霉菌。
微生物学实验——2011级
实验十二
海洋环境中微生物的 分离纯化
.
一、实验目的和内容
目的：学习从海洋环境中分离纯化微生物及抑菌活性测定方法。 内容：1. 海洋环境微生物的分离纯化、培养；
2. 微生物培养物抑菌活性测定。
二、实验原理
1. 海洋环境中分离纯化微生物 海洋海泥中混杂着大量的微生物，利用合适的培养基，
2.观察记录不同微生物菌落形态特征；
3.观察记录抑菌圈的产生及大小，附上照片。
4.每位同学上交细菌、放线菌、真菌试管斜面各一 支（标记好班级、姓名）。
.
采用合适的培养条件，从里面可分离微生物。
通过稀释涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线 等技术可使微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落， 挑取单菌落从而获得一种纯培养。
.
2. 抑菌活性测定 对于一株新分离纯化出来的菌，可从各方面的活性来评价
其价值：如分解淀粉、分解蛋白质的活性，抑菌、抗肿瘤、杀 虫等活性。本实验将对分离的微生物进行抑菌活性的测定对分 离出来的菌株进行初步的功能测试。
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（三）涂布平板 取三种培养基平板各3个，分别标记好10-2、10-3、10-4，用移
液枪分别取10-2、10-3、10-4土壤稀释液各0.1 mL ，对号放入相应 稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒器在培养基表面轻轻地涂布均 匀，室温下静置5~10 min，培养基充分吸收菌液，包扎，培养。
（四） 培养分离纯化
（pH1～14），培养皿，玻璃涂棒，吸管，接种环，滤纸片
Байду номын сангаас
2、培养基
名称
成分
用途
LB培养基 蛋白胨 1%, 酵母粉 0.5 %, 海盐 3%, 琼脂 2 %（固体） 分离
（pH=7.5）
细菌
高氏一号培 可溶性淀粉 2%, 硫酸镁 0.05%, 硝酸钾 0.1%, 硫酸亚铁 分离
养基
0.001%, 海盐3%, 磷酸氢二钾 0.05%, 琼脂 2%（固体） 放线
基；28℃培养5天。
.
（五）菌种的抑菌活性测定
1.将分离到的菌株接种到相应的液体培养基中发酵培养：细菌 发酵24h，放线菌发酵7~14 天，霉菌发酵7天，直接取发酵
液（样品）。 2.将普通滤纸用打孔器打成0.5cm直径的圆片，装在试管中密
封灭菌（121 ℃ ，20min）。 3.倒LB平板，吹干后， 取100ul 指示菌（本实验用金黄色葡
（pH 7.2~7.4）
菌
查氏培养基 硝酸钠 0.3%, 磷酸氢二钾 0.1%, 硫酸镁 0.05%, 氯化钾 分离 0.05%, 硫酸亚铁0.001%, 蔗糖 3%, 海盐 3%, 琼脂 2%（ 真菌
固体）（自然pH值）
3、菌种：海洋土壤稀释液，金黄色葡萄球菌
.
四、实验步骤
（一）培养基的配置 1.称量药品——溶解——调节pH值（偏酸，滴加1N NaOH，搅拌 后，用pH试纸测其pH值，直至达到预期pH值；偏碱，用1N HCl进 行调节)——分装（液体培养基直接分装，固体培养基加入2%的 琼脂溶化后分装）——包扎——灭菌。 2.倒置平板（培养基冷却到45~50℃）、搁置斜面（长度不超过 试管总长1/2）。
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三、实验仪器及材料
1、仪器设备 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，高压蒸气灭菌锅，pH试纸
（二）制备土壤稀释液 取海洋淤泥土样5 g，放入盛有45 mL 无菌海盐水（3%）并
带有玻璃珠的锥形瓶中，振动约20min，使土样与水充分混合， 将微生物分散（10-1）。用1 mL 移液枪从中吸取1 mL 土壤悬液 加入盛有9 mL 无菌海盐水的三角瓶中充分混匀（10-2） ，然后 用移液枪从此试管中吸取1 mL 加入另一个盛有9 mL 无菌海盐水 的三角瓶中，混合均匀（10-3），类似方法制备10-4土壤悬浮液。
1. 分离细菌的平板28℃培养1~2天，用接种环挑取单菌落，划入
试管斜面培养基；28℃培养1~2天。
2. 分离放线菌的平板28℃培养5~10天，用接种环挑取单菌落，
划入试管斜面培养基；28℃培养5天。
3. 分离真菌的平板28℃培养4~10天后，用接种环挑取单菌落
（由于真菌菌落扩展很快，务必及时挑菌），划入试管斜面培养
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A. 每组需要试剂、培养基
1. 3%海盐水：9mL 3瓶； 2. 培养基：
名称
平板
试管斜面
LB培养基 6个（120ml） 8支（40ml）
高氏一号培 3个（60ml） 8支（40ml） 养基
查氏培养基 3个（60ml） 8支（40ml）
三角瓶液体 3瓶（30ml/瓶，90ml） 2瓶（30ml/瓶，60ml）
萄球菌）过夜培养物，均匀涂布于培养基表面，吹干。 4.用无菌镊子夹起滤纸片放入样品（微生物发酵液）中浸透，
夹出时在容器边缘停靠片刻，滤掉多余的药液，把滤纸片放 在平板中凝好的培养基上，用镊子稍用力按一下，使之与培 养基充分紧贴；以灭菌水浸湿的滤纸片做空白对照。 5.将平板于28 ℃ 倒置培养24h后观察，用直尺或游标卡尺测 量抑菌圈的大小。
2瓶（30ml/瓶，60ml）
共计 250ml 200ml
200ml
B. 任务分配
1. 第一、二组：配3%海盐水和LB培养基； 2. 第三、四组：配高氏一号培养基； 3. 第五、六组：配查氏培养基。
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五、实验结果与讨论
1.观察描述三种培养基上菌的生长情况； （1）LB培养基 ——细菌； （2）高氏培养基——放线菌； （3）查氏培养基——霉菌。
微生物学实验——2011级
实验十二
海洋环境中微生物的 分离纯化
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一、实验目的和内容
目的：学习从海洋环境中分离纯化微生物及抑菌活性测定方法。 内容：1. 海洋环境微生物的分离纯化、培养；
2. 微生物培养物抑菌活性测定。
二、实验原理
1. 海洋环境中分离纯化微生物 海洋海泥中混杂着大量的微生物，利用合适的培养基，
2.观察记录不同微生物菌落形态特征；
3.观察记录抑菌圈的产生及大小，附上照片。
4.每位同学上交细菌、放线菌、真菌试管斜面各一 支（标记好班级、姓名）。
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采用合适的培养条件，从里面可分离微生物。
通过稀释涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线 等技术可使微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落， 挑取单菌落从而获得一种纯培养。
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2. 抑菌活性测定 对于一株新分离纯化出来的菌，可从各方面的活性来评价
其价值：如分解淀粉、分解蛋白质的活性，抑菌、抗肿瘤、杀 虫等活性。本实验将对分离的微生物进行抑菌活性的测定对分 离出来的菌株进行初步的功能测试。
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（三）涂布平板 取三种培养基平板各3个，分别标记好10-2、10-3、10-4，用移
液枪分别取10-2、10-3、10-4土壤稀释液各0.1 mL ，对号放入相应 稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒器在培养基表面轻轻地涂布均 匀，室温下静置5~10 min，培养基充分吸收菌液，包扎，培养。
（四） 培养分离纯化
（pH1～14），培养皿，玻璃涂棒，吸管，接种环，滤纸片
Байду номын сангаас
2、培养基
名称
成分
用途
LB培养基 蛋白胨 1%, 酵母粉 0.5 %, 海盐 3%, 琼脂 2 %（固体） 分离
（pH=7.5）
细菌
高氏一号培 可溶性淀粉 2%, 硫酸镁 0.05%, 硝酸钾 0.1%, 硫酸亚铁 分离
养基
0.001%, 海盐3%, 磷酸氢二钾 0.05%, 琼脂 2%（固体） 放线
基；28℃培养5天。
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（五）菌种的抑菌活性测定
1.将分离到的菌株接种到相应的液体培养基中发酵培养：细菌 发酵24h，放线菌发酵7~14 天，霉菌发酵7天，直接取发酵
液（样品）。 2.将普通滤纸用打孔器打成0.5cm直径的圆片，装在试管中密
封灭菌（121 ℃ ，20min）。 3.倒LB平板，吹干后， 取100ul 指示菌（本实验用金黄色葡
（pH 7.2~7.4）
菌
查氏培养基 硝酸钠 0.3%, 磷酸氢二钾 0.1%, 硫酸镁 0.05%, 氯化钾 分离 0.05%, 硫酸亚铁0.001%, 蔗糖 3%, 海盐 3%, 琼脂 2%（ 真菌
固体）（自然pH值）
3、菌种：海洋土壤稀释液，金黄色葡萄球菌
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四、实验步骤
（一）培养基的配置 1.称量药品——溶解——调节pH值（偏酸，滴加1N NaOH，搅拌 后，用pH试纸测其pH值，直至达到预期pH值；偏碱，用1N HCl进 行调节)——分装（液体培养基直接分装，固体培养基加入2%的 琼脂溶化后分装）——包扎——灭菌。 2.倒置平板（培养基冷却到45~50℃）、搁置斜面（长度不超过 试管总长1/2）。