【医学课件】 双缩脲法测定血清蛋白
实验一血清蛋白质测定(共51张PPT)
【注意事项】
1.测定的血清以新鲜为宜，但在冰箱保存而不混 浊的标本也可应用，高脂血症混浊血清会干扰比 色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离 心管，各加待测血清，再加蒸馏水和丙酮10ml， 塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试 管倒立于滤纸上吸去残余液体。向沉淀中分别加 入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述 相同的其他操作和计算。
-----------------
-----------------
标准
A 血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度，血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度增高3.
2．10mmol/L BCG贮存液
标准
3．叠氮钠贮存液
4．聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)贮存液
5．BCG试剂
实验一 血清蛋白质测定
但本法的检出限为～，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要，成为临床实验室血清TP首选的最方便，实用的常规方法。 酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响测定结果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论上这些干扰均可用相应的标本空白管来消除。 ３．在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器加BCG试剂，与测定管血清混合后，立即在30±3s内，读取吸光度。 4%，4g/L使吸光度增高7. 2 桌面，边台，水池，窗台，仪器要一尘不染，请值日生用抹布擦干净。 4(显蓝绿色)，受酸、碱影响较大，故所用的器材必须无酸、碱污染，BCG工作液的pH必须精确度监测，务必使其保持在限度内。 手工操作参数：波长540nm，光径1cm； 用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，用溴甲酚绿法测定血清白蛋白浓度, 蛋白质测定方法很多，常用的有： 丽春红蛋白结合法测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳定24小时； 1．黄疸血清，溶血，高糖，酚酞等干扰用样本空白来消除。 由于血红蛋白本身能与双缩脲试剂反应，产生与血清白蛋白和球蛋白相近的显色效价，故应注意高血红蛋白的影响。 取试管4支，标明测定管（U）、标准管（S）、标本空白管（B）、试剂空白管（RB）。 双缩脲法测定血清总蛋白
双缩脲法测定蛋白质PPT演示课件
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
•5
吸量管的使用注意事项
•9
光吸收示意图
I0
I
C
b
•10
吸收光谱和物质的定性分析
➢ 物质的吸收光谱与物质分子结构有关。 ➢ 吸收光谱曲线是物质的特征曲线。用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度
（Absorbance），然后以波长（λ）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图， 可得到该物质的吸收光谱曲线，这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力。 ➢ 在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可 找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质不同，它 们的最大吸收波长也往往不同。
➢ 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶 液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留 液体。(0.5ml以下的都要吹）
➢ 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管 及试剂。
➢ 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲 洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水 冲洗干净，晾干备用。
A＝KCL 或 lgI0/I =KCL A为溶液对光的吸光度，反映了物质对光的吸收程度； C为溶液浓度； L为溶液厚度； I0为照射待测物质的单色光强度，I为透过待测物质光线的光强度，透光度 T= I/I0即溶液透过光的强度与入射光的强度之比； K为吸光系数，是物质在单位浓度和单位厚度的条件下对入射光的吸光度。 实验中溶液厚度不变，则A＝KC
生物化学实验2.双缩脲测定血清蛋白质含量
标准溶液
实验原理
绘制出蛋白质标准溶液的标准曲线：以吸光 度为纵坐标，蛋白质浓度（mg/mL）为横坐 标，绘制标准曲线。
在相同的实验条件下，测定未知蛋白质含量 的血清样品溶液，在540nm处的吸光度，查 标准曲线求得样品的蛋白质浓度（g/L）。
试剂和仪器
(一）试剂 1、双缩脲试剂：取3g硫酸铜，500mL蒸馏水 溶解，加9g酒石酸钾钠、5g碘化钾，加入 100mL6mol/L氢氧化钠，用蒸馏水稀释到 1000mL，贮存于塑料瓶中，避光保存。 2、0.9%（W/V)NacL溶液 3、小牛血清 4、蛋白质标准溶液
(二）仪器 恒温水浴锅、722型可见分光光度计、
刻度吸量管、微量移液器、试管、试管架
3 4 5 6
蛋白质标准液
-
（10g/l）
0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
0.9%Nacl 双缩脲
蛋白质含量
1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 -
实验结果与分析
查标准曲线即可得出蛋白质的含量（g/L）。
蛋白质浓度(g/L)= 蛋白质含量(mg)×10-3 0.1ml×10-3
临床意义
正常值：60 ～ 80g/L 血浆总蛋白上升
常见于脱水导致的血浆浓缩，例如急性失 水、休克、肾上腺皮质功能不全等 血浆总蛋白下降
血浆水分增加，如水钠潴留 长期消耗性疾病，如肺结核、肿瘤等 肝功能损伤、肾功能损伤等
试剂(mL） 血清
0.9%Nacl 双缩脲
测定管 0.1 0.9 4.0
空白管 1.0 4.0
混匀后，37℃水浴中放置20分钟，以空白管调零， 测定其540nm波长处的吸光度。
722G型分 光光度计
比色皿
临床生化检验：3-血清总蛋白测(双缩脲法)
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
【生物化学实验】双缩脲法测定血清蛋白质含量
实验开始！
3.0
标准管 2×2 3×2 4×2
0.4
0.6
0.8
—
—
—
0.6
0.4
0.2
3.0
3.0
3.0
5×2 1.0
— — 3.0
测定管 ×2
—
0.1 1.9 3.0
✓ 混匀各管，室温放置30分钟。以空白管调零，在波 长540 nm比色，读取各管光吸收值，并记录。
在座标纸上以各管蛋白质含量为横座标， 两管平均光吸收值为纵座标，绘制标准曲 线。
➢ 常用方法：
1. 比较吸收光谱曲线：在相同的条件下，吸收光谱曲线 不同，表明物质的化学结构不同。
2. 比较最大吸收波长：不同物质的最大吸收波长不同； 化学结构相似的物质最大吸收波长相同，吸收系数不 同。
3. 比较吸光度的比值：多用于检测物质的纯度（DNA A260/A280=1.8 纯度鉴定)
利用吸收光谱对物质进行定量分析
物理性质：紫外分光光度法。
化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法
染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。
实验目的 掌握双缩脲法测定蛋白质的原理 掌握分光光度计的使用 掌握标准曲线的制作 学习分光光度法测定的原理和方法
实验原理
双缩脲反应（Biuret reaction）
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2NOC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接 的酰胺键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲 反应，生成紫红色络合物。
➢ 原理： Lambert-Beer定律
➢ 常用方法：
1. 标准曲线法
2. 配制一系列已知不同浓度的标准溶液，用选定的显 色剂显色。选用合适波长的入射光。测定时先以空白 溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光 度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条 通过原点的直线，叫做标准曲线（或称A-C曲线）。
双缩脲法测定血清蛋白的原理
双缩脲法测定血清蛋白的原理哎，说到这双缩脲法测定血清蛋白，我可是有话要说。
记得那会儿我还是个初出茅庐的小研究员，对这双缩脲法可是一窍不通，心里那个急啊，就差没把实验室的显微镜都啃一遍了。
那天，领导交给我一个任务，说是要我用双缩脲法测定一下血清蛋白的含量。
我一听，蒙了，双缩脲法是个啥？得，先去查查资料。
网上搜了半天，终于明白了，原来这双缩脲法是一种化学分析法，可以测定蛋白质的含量。
说干就干，我拿着那堆血清样本，开始捣鼓。
首先，把血清样本加到双缩脲试剂里，搅拌均匀，再放到恒温箱里加热。
期间，我那眼睛瞪得跟铜铃似的，生怕错过了任何一个变化。
过了会儿，我打开了恒温箱，心里那个紧张啊。
突然，我眼前一亮，看到溶液的颜色变化了，从原来的淡黄色变成了红棕色。
我心头一阵狂喜，这颜色变化得多明显啊，看来我这次要成功啦！接下来，我按照实验步骤，把溶液稀释，再放到分光光度计上检测。
眼睛紧盯着屏幕，只见那数值一点一点上升，我的心情也跟着起伏。
终于，检测完毕，我长舒了一口气，这次实验成功啦！拿着实验报告，我找到领导，激动地跟他说：“领导，我这次用双缩脲法测定血清蛋白含量成功了！”领导笑了笑，说：“不错，这次实验你做得很好。
”我心里那个美啊，比中了彩票还开心。
说起来，这双缩脲法测定血清蛋白的原理也不复杂。
就是利用蛋白质中的肽键与铜离子结合，形成紫色络合物，再通过比色法测定紫色络合物的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
通过这次实验，我对双缩脲法有了更深入的了解，也体会到了实验的乐趣。
以后，我还要多学习，把实验做到更好！嘿嘿，这双缩脲法，真是个好东西啊！。
(TP+ALB测定)课件
双缩脲法测定血清或血浆总蛋白（TP）
溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白（ALB）
临床生化教研室 刘素兰 雷燕
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（一）双缩脲法测定血清或血浆总蛋白
【目的】
掌握：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的基本原理
及操作
熟悉：血清或血浆总蛋白测定的临床意义
了解：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的特点及注
意事项
【原理】---血清或血浆总蛋白测定
【注意事项】
1.黄疸血清或血浆、严重脂血、溶血；葡萄糖、酚酞及溴
磺酞钠对本法有明显干扰。 2.蛋白质的浓度单位用“g/L”。 3.吸光度的大小与试剂的组分、pH、反应温度有关。 4.双缩脲试剂中各成分的作用： 碱性酒石酸钾钠：与铜离
子(Cu2+) 形成络合物并维持铜离子在碱性溶液中的 稳定
性 ；碘化钾：抗氧化剂（KI--防止碱性酒石酸铜自动还原 并防止Cu20的沉淀)。
2.血清或血浆总蛋白浓度增高
(1)蛋白合成增加 ：如多发性骨髓瘤。
(2)血浆浓缩：凡体内水分的排出大于水分的摄入
时，均可引起血浆浓缩。
（二）溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白
【目的】
掌握：溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白的原理及 操作 熟悉：血清或血浆白蛋白测定的临床意义 了解：溴甲酚绿法测定清白蛋白的特点及注意事项
【临床意义】
1.血清或血浆总蛋白浓度降低
(1)蛋白质合成障碍：主要是肝功疾病。
(2)蛋白质丢失增加：严重烧伤、大出血、肾病综合征。
(3)营养不良或消耗增加：长期食物中蛋白质含量不足或 慢性肠道疾病引起的吸收不良；长期消耗性疾病，严 重结核病、甲亢、恶性肿瘤等。 (4)血浆稀释：各种原因引起的水钠潴留。
实验13 双缩脲法测定血清总蛋白及溴甲酚绿法测清蛋白
临床生物化学教研室
目的： 目的：
1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作。 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作。 掌握 2.掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作。 掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作。 掌握溴甲酚绿法测定血清清蛋白原理和操作 3. 熟悉血清总蛋白和清蛋白测定的临床意义。 熟悉血清总蛋白和清蛋白测定的临床意义。
Calculation： ： 血清白蛋白（ ） 血清白蛋白（g/L）=
Au As
ⅹ清蛋白标准液浓度（g/L） 清蛋白标准液浓度（g/L）
注意事项： 注意事项： (1) 高脂血症 轻度、中度无影响，重度 高脂血症: 轻度、中度无影响， 可使结果偏高，需做标本空白。 可使结果偏高，需做标本空白。 (2) 胆红素及溶血无影响。 胆红素及溶血无影响。
BCG法测定血清白蛋白操作步骤： 法测定血清白蛋白操作步骤 加入物 (ul) 空白管B 标准管S 测定管U 空白管B 标准管S 测定管U 样本 5 5 标准液 5 蒸馏水 1000 1000 1000 白蛋白试剂 混匀， 置室温10min，各管加1ml蒸馏水 混匀， 蒸馏水， 混匀， 置室温10min，各管加1ml蒸馏水，混匀， 用波长628nm处 空白管调零，测定A 用波长628nm处，空白管调零，测定A。
Calculation： ：
血清总蛋白（ ） 血清总蛋白（g/L）=
Au As
ⅹ蛋白标准液浓度（g/L） 蛋白标准液浓度（g/L）
Announcements： ： (2) 黄疸，溶血等血清怎么办 黄疸，溶血等血清怎么办? 做标本空白管。 做标本空白管。 (3) 高脂血症混浊血清怎么办 高脂血症混浊血清怎么办? 血清经丙酮或乙醚萃取后使用。 血清经丙酮或乙醚萃取后使用。
蛋白质的定量测定一-双缩脲法
06
CATALOGUE
双缩脲法的改进和发展方向
改进方法
优化试剂配比
通过调整试剂浓度和比例，提高方法的灵敏度和 准确性，减少误差。
扩大应用范围
针对不同来源和性质的蛋白质样品，优化实验条 件，使其能够适用于更多样品的测定。
ABCD
简化操作步骤
减少实验步骤，降低操作难度，提高实验效率。
提高检测速度
采用快速显色反应或缩短反应时间的方法，缩短 实验周期，提高检测速度。
蛋白质结构研究
通过双缩脲法测定不同蛋白质的含量，有助于研究蛋白质的结构和 功能，进一步了解生物体的生命活动。
蛋白质合成与代谢研究
双缩脲法可以用于研究生物体内蛋白质的合成与代谢过程，探索相 关生理机制。
在医学研究中的应用
临床诊断
双缩脲法可以用于检测尿液、血 液等生物样本中的蛋白质含量， 辅助医生进行临床诊断。
药物研发
在药物研发过程中，双缩脲法可 用于检测药物对蛋白质的影响， 评估药物的疗效和安全性。
病理学研究
通过双缩脲法测定病变组织中蛋 白质的含量，有助于病理学研究 ，深入了解疾病的发生和发展机 制。
在食品工业中的应用
食品品质控制
01
双缩脲法可以用于检测食品中的蛋白质含量，确保食品品质符
合标准。
营养标签
03
CATALOGUE
双缩脲法的结果分析
实验结果记录
实验过程中，需要详细记录每个实验 步骤的操作和结果，包括加入试剂的 种类、浓度、体积，以及反应过程中 的现象和变化等。
实验结果记录应准确、详细，包括实 验数据和观察到的现象，以便后续分 析和处理。
结果计算与处理
根据实验记录的数据，进行相应的计 算和处理，以得出蛋白质的含量。
双缩脲法测定血清总蛋白ppt课件
=
A测 —— A标
×
C标
5
三、实验操作
加入物 （ml） 血清
调零 管
——
标本空 试剂空 标准管 测定管 白管(B) 白管(RB) (S) (U)
0.1
—— —— 0.1
蛋白质标 —— 准液
蒸馏水 5.0
—— ——
—— 0.1
0.1 —— —— ——
双缩脲空 —— 白试剂
双缩脲试 —— 剂
5.0 ——
双缩脲法测定血清总蛋白
临床生化实验室
1
一、实验目的
• 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 • 了解血清总蛋白测定的临床意义。
2
二、实验原理
• 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子 氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中， 能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反 应称为双缩脲反应。
3
二、实验原理
• 因血清取量少，取量尽量准确。 • 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料
瓶装。
15
8
五、方法学评价
• 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下 五种经典方法： 双缩脲法（Biuret法）：1~2mg 定氮法：灵敏度0.2~1.0mg Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 紫外吸收法：5μg 考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg 9
五、方法学评价
双缩脲法优缺点： • 优点
操作简单，使用方便，作为临床测定血清 总蛋白的首选常规方法且重复性好。 • 缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。
10
六、临床意义
• 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告双缩脲法测定血清总蛋白实验报告引言：血清总蛋白是血液中的一种重要指标，它反映了人体内蛋白质的总量和分布情况。
测定血清总蛋白可以帮助医生判断患者的营养状况、肝功能以及某些疾病的发展情况。
本实验采用了双缩脲法，通过与标准物质的比色反应，定量测定了血清总蛋白的含量。
实验方法：1. 实验仪器与试剂准备本实验所需仪器有分光光度计、移液器、比色皿等。
所需试剂有双缩脲试剂、标准物质（如牛血清白蛋白）以及待测血清样品。
2. 样品预处理将待测血清样品离心，取上清液，并用移液器将上清液吸取到比色皿中。
3. 加入双缩脲试剂用移液器向比色皿中加入适量的双缩脲试剂，并轻轻搅拌均匀，使样品与试剂充分反应。
4. 与标准物质比色将标准物质分别加入不同的比色皿中，每个比色皿中加入相同体积的双缩脲试剂，与待测血清样品同时进行比色。
5. 分光光度计测定将比色皿放入分光光度计中，设定波长为标准波长，记录吸光度值。
6. 绘制标准曲线将吸光度值与标准物质的浓度进行对照，绘制标准曲线。
7. 计算待测血清样品的总蛋白含量根据待测血清样品的吸光度值，在标准曲线上找到对应的浓度，即可计算出待测血清样品的总蛋白含量。
结果与讨论：在本次实验中，我们测得待测血清样品的吸光度值为0.6。
根据标准曲线，我们可以得知该吸光度值对应的总蛋白浓度为30 g/L。
通过与标准物质的比色反应，我们成功地测定了待测血清样品的总蛋白含量。
总蛋白是人体内重要的营养物质，对于维持正常的生理功能至关重要。
通过测定血清总蛋白的含量，我们可以了解患者的营养状况。
如果总蛋白含量过低，可能意味着患者存在蛋白质摄入不足或吸收不良的问题。
而过高的总蛋白含量可能与肝功能异常、肾脏疾病等有关。
然而，需要注意的是，双缩脲法只能测定血清总蛋白的含量，并不能提供蛋白质的具体组成信息。
在实际应用中，还需要结合其他指标和临床病史来综合判断患者的健康状况。
结论：通过双缩脲法测定血清总蛋白的含量，我们可以快速、准确地了解患者的营养状况和某些疾病的发展情况。
实验二 血清总蛋白测定(双缩脲法)
实验二血清总蛋白测定(双缩脲法)实验二血清总蛋白测定（双缩脲法）血清总蛋白是血清中所有蛋白质的总称，正常人含量为60-80g/L。
按不同的分离方法可将血清蛋白质分为不同的组分。
从目前临床生化实际应用上，血清总蛋白分为清蛋白和球蛋白两大类，其中球蛋白又分为α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白四种。
正常成人每天所合成的血清蛋白质中，清蛋白及大部分α1、α2、β球蛋白是肝脏合成的，γ球蛋白（大部分是免疫球蛋白）则主要来源与浆细胞。
总蛋白测定，一般利用下列四种蛋白质的结构或性质进行：重复的肽键结构；酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收；与染料的结合能力；沉淀后借浊度或光折射测定。
目前临床应用最广泛的方法是利用蛋白质分子中的多个肽键与双缩脲试剂显色法。
【目的】1. 熟悉血清总蛋白测定的原理及基本操作。
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义。
【原理】蛋白质分子中的肽键（-CONH-）在碱性条件下能与Cu2+ 作用形成紫红色络合物。
此呈色反应与双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+ 作用产生紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。
反应中溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用分光光度法定量检测蛋白质的含量。
凡具有两个以上肽键结构的化合物均有此反应，因此双缩脲反应广泛用于肽及蛋白质定性、定量检测。
【器材】恒温水浴箱、分光光度计、刻度吸管、微量移液管、试管、试管架。
【试剂】1．6mol ／L NaOH溶液称取NaOH （优级纯）240g ，溶解于新鲜蒸馏水中并加至1000ml 。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
2. 双缩脲试剂精确称取结晶硫酸铜(CuSO4·5H20)3.0g，酒石酸钾(NaKC4H4O6·4H2O) 9.0g，碘化钾(KI)5.0g，用500m1新鲜蒸馏水溶解。
在搅拌下，加入6mol ／L 氢氧化钠溶液100ml ，最后加蒸馏水稀释至1000ml 。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
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2. 60g/L蛋白标准液
三、试剂 1. 6mol/LNaOH
2. 双缩脲试剂
3. 双缩脲空白试剂
4. 60－70g/L标准液
四、操作
Bl
0.1
0.1
蛋白标准液
0.1
蒸留水
0.1
空白试剂
5.0
双缩脲试剂
5.0
5.0
5.0
混匀置25℃30分钟或37℃10分钟，蒸留水调零在540nm处 比色，测各管吸光度 五、 计算 血清总蛋白(g/L)
实验三、双缩脲法测定血清蛋白
一、目的
二、原理 血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液 中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物，这 种 紫 红 色 络 合 物 在 540nm 处 有 明 显 的 吸 收 峰 ， 吸 收 峰 在一定范围内与血清中蛋白含量成正比，与同样方法 处理的蛋白标准液比较求得其含量。
=(AU-ARB-AB)/(AU-ARB-AB)*标准液浓度(g/L)
六、参考值 成人 60－80(g/L) 七、注意事项 略
附：溴甲酚绿法测定血清白蛋白
一、目的
二、原理 血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷， 在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的 染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波长 630NM处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白的浓度成正 比。