紫甘薯花色苷组分抑制小鼠肝脂质过氧化的研究

9

紫甘薯花色苷组分抑制小鼠肝脂质过氧化的研究

王霞1,2，王花丽2，孟宇竹2

1.天津科技大学 (天津 300457)；

2.河南质量工程职业学院 (平顶山 467000)

摘要研究紫甘薯花色苷（APSP）中两种主要成分组分Ⅰ和Ⅱ的抗氧化活性，采用TBA荧光法测定其对小鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化的抑制作用及对Fe 2+-H 2O 2诱导的小鼠肝组织匀浆脂质过氧化的抑制作用。实验结果表明，APSP组分Ⅰ和Ⅱ均可抑制小鼠肝自发性脂质过氧化中MDA的生成，此抑制作用呈良好的剂量效应关系；APSP组分Ⅰ和Ⅱ可抑制Fe 2+-H 2O 2诱导的小鼠肝组织匀浆脂质过氧化中MDA的生成，说明可抑制·OH诱导的氧化作用，此抑制作用呈剂量效应关系。并且APSP组分Ⅰ抑制小鼠肝自发性脂质过氧化中MDA的生成和抑制Fe 2+-H 2O 2诱导的小鼠肝组织匀浆脂质过氧化中MDA的生成的抑制率高于组分Ⅱ。

关键词紫甘薯花色苷组分；抑制；脂质过氧化

The Study on APSP Components Inhibitting Lipid Peroxidation of Rat Liver

Wang Xia 1,2，Wang Hua-li 2，Meng Yu-zhu 2

1.Tianjin University of Science & Technology （Tianjin 300457）；

2.Henan Quality Polytechnic （Pingdingshan

467000）

Abstract To study the antioxidant activities of Fra Ⅰand Fra Ⅱ in APSP. Inhibitory effect on lipid peroxidation of liposome spontaneous and induced by Fe 2+-H 2O 2 of rat liver tissue homogenates in vitro were tested by TBA fluorescence method. The Fra I and Fra II from APSP could restrain the spontaneous oxidation of oleic acid; inhibit the generation of MDA in oxidation of liposome which was spontaneous or induced by Fe 2+-H 2O 2 in rat liver tissue homogenates, obviously in a dose-effect relationship. At the same time, the Fra I has the stronger capability of inhibiting the generation of MDA and restraining the spontaneous oxidation of oleic acid than that of Fra II.

Keywords APSP ；inhibit ；lipid peroxidation 紫甘薯花色苷(Anthocynins from Purple Sweet Potato，APSP)是从紫甘薯的块根中浸提出来的一种天然红色素，色泽鲜艳，无毒，无特殊气味，与其它同类色素相比性质较稳定，具有多重营养、药理和保健功能，是一种开发前景广阔的天然食用色素资源。

Kinnosuke(1992年)等鉴定紫色甘薯的两种花色苷化学结构为被咖啡酸和阿魏酸酰化的矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡糖苷和芍药素-3-槐糖苷-5-葡糖苷[1]。

孙晓侠对紫甘薯花色苷进行了分离纯化及结构初步鉴定，同样得出了两种主要成分组分Ⅰ和Ⅱ分别为被一分子咖啡酸和一分子阿魏酸酰化的矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡糖苷和被一分子咖啡酸和一分子对羟基苯甲酸酰化的芍药素-3-槐糖苷-5-葡糖苷，并对紫甘薯花色苷的混合组分进行了体外抗氧化活性的研究[2]。试验采用荧光法分别对组分Ⅰ和Ⅱ进行抗氧化活性研究，并比较它们抗氧化能力的强弱。1 材料与方法1.1 实验材料

通过柱层析和高效液相色谱分析分离纯化得到

紫甘薯花色苷组分Ⅰ和Ⅱ，其纯度分别为86.4%和84.2%；雌性小鼠，体重(20～25) g。1.2 实验方法

1.2.1 组分Ⅰ和Ⅱ抗氧化活性体外实验

1.2.1.1 对小鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化的抑制作用（TBA荧光法）[3]

(1)溶液的配制 10%三氯乙酸(TCA)：称取10 g TCA用蒸馏水溶解后，定溶至100 mL；

0.67%硫代巴比妥酸(TBA)：称取0.67 g TBA，用蒸馏水配制成100 mL（50℃水浴或室温下溶解，静置，用上清液）。

(2)组织匀浆的制备 取正常昆明种小鼠，禁食16 h后，脱臼处死，迅速取出内脏组织(心、肝、脾、肾)，用冷生理盐水(4℃)洗净血液，于冷生理盐水中剪碎，加冷生理盐水冰浴下于DY89-Ⅰ型电动玻璃匀浆机中匀浆，制备10%组织匀浆，稀释制备1%组织匀浆。

(3)样品处理 将紫甘薯花色苷组分Ⅰ和Ⅱ的干燥的粉末分别溶于蒸馏水,稀释成具有浓度梯度的溶液。

基础研究

10

(4)测定步骤

取10%新鲜组织匀浆液1 mL，加入0.1 mL不同浓度的紫甘薯花色苷组分Ⅰ，对照管加0.1 mL生理盐水，置37℃振荡保温1.5 h，取出后加入1 mL 10%三氯乙酸(TCA)终止反应，加0.67%硫代巴比妥酸(TBA) 1 mL，沸水浴15 min，冷却后3 500 r/min离心10 min，取上清液于RF-5301荧光分光光度计上(波长：Ex=515.0 nm，Em=553.0 nm，狭缝：Ex=5.0 nm，Em=3.0 nm)测其荧光强度F，抑制率(%)以[(F 0-F i )/F 0]×100计算，其中F 0为对照，不加组分Ⅰ，Fi为某浓度时的吸光度值。

按同样的方法测定不同浓度的紫甘薯花色苷组分Ⅱ对小鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化的抑制作用。(5) 数据处理 以x ±s表示结果，不同实验间差异用t检验。

1.2.1.2 对Fe 2+-H 2O 2诱导的小鼠肝组织匀浆脂质过氧化的抑制作用[4,5]

(1)液的配制

1%新鲜组织匀浆液：由10%新鲜组织匀浆液稀释而成；

6 mmol/L Fe 2SO 4溶液：0.166 8 g Fe 2SO 4用蒸馏水溶解后，定溶至100 mL；

60 mmol/L的H 2O 2溶液：0.75 mL的 H 2O 2(30%)用蒸馏水定容至100 mL；

15%三氯乙酸(TCA)溶液：称取15gTCA用蒸馏水溶解后，定溶至100 mL；

6.7%硫代巴比妥酸(TBA)溶液：称取6.7gTBA，用蒸馏水配制成100 mL（50℃水浴或室温下溶解，静置，用上清液）。

(2) 测定步骤

取1%新鲜组织悬浮液1 mL，加入0.1 mL不同浓度的紫甘薯花色苷组分Ⅰ，再加入0.1 mL 6 mmol/L Fe 2SO 4，0.1 mL 60 mmol/L的H 2O 2，在37℃下水浴1 h 后，加入1 mL 15%三氯乙酸(TCA)终止反应，再加入1 mL 6.7%硫代巴比妥酸(TBA)，于沸水浴中显色15 min，冷却后离心，取上清液于RF-5301荧光分光光度计上(波长：Ex=515.0 nm，m=553.0 nm，狭缝：Ex=5.0 nm，Em=3.0 nm)测其荧光强度。同时设正常组，即不添加组分Ⅰ和Fe 2+-H 2O 2，抑制率的计算方法同上。

按同样的方法测定不同浓度的紫甘薯花色苷组分Ⅱ对小鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化的抑制作用。(3) 数据处理 以x ±s表示结果，不同实验间差异用t检验。2 结果与论讨

2.1 APSP组分Ⅰ和Ⅱ对小鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化的抑制作用

组织匀浆本身在温育条件下可以发生自氧化反应

产生氧自由基，而这些自由基能通过攻击生物膜中多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应，并因此形成脂质过氧化物。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成脂类分解产物，而且还可通过链式或链式支链反应，放大活性氧作用，因此初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞损伤，甚至死亡。

因此测试MDA的量，不仅反映细胞内脂质过氧化程度，还能间接反映出细胞损伤的程度[6]。MDA是一种短肽的醛，很活跃，常和DNA及蛋白质发生交连反应。另外，MDA也可作为含有次胺类和亚硝酸盐的食物生成N-亚硝胺反应得一种催化剂。

表1 组分Ⅰ对小鼠肝匀浆脂质过氧化产物丙二醛生

成的影响(x ±s，n=5)

浓度 /mg ·mL -1

F 抑制率 /%

0(对照组)151.50±22.53—0.3129.00±13.02 a 14.850.6124.55±11.25 b 17.791.2111.17±7.04 b 26.622.485.86±7.83 b 43.334.854.93±4.25 b 63.749.635.94±0.08 b

76.28

a ：P ＜0.05；

b ：P ＜0.01与对照组相比

表2 组分Ⅱ对小鼠肝匀浆脂质过氧化产物丙二醛生

成的影响(x ±s，n=5)

浓度 /mg ·mL -1

F 抑制率 /%

0(对照组)151.50±22.53—0.3135.80±11.52 a 10.360.6129.17±9.33 b 14.741.2123.05±6.91 b 18.782.4111.19±5.46b 26.614.892.48±3.93 b 38.969.670.69±0.17 b

53.34

a ：P ＜0.05；

b ：P ＜0.01与对照组相比

由表1、表2可知，加入组分Ⅰ、组分Ⅱ后，剂量组MDA生成量显著低于对照组，说明组分Ⅰ、组分Ⅱ均可抑制小鼠肝自发性脂质过氧化中MDA的生成，此抑制作用呈良好的剂量效应关系，并且组分Ⅰ的抑制作用明显高于组分Ⅱ。

2.2 对Fe 2+-H 2O 2诱导的小鼠肝组织匀浆脂质过氧化的抑制作用

表3 组分Ⅰ对Fe 2+-H 2O 2诱导小鼠肝组织脂质过氧化

产物丙二醛生成的影响(x ±s，n=5)

组分Ⅰ /mg ·mL -1

F 抑制率 /%

0（正常组）152.05±21.36—0（模型组）870.21±40.38

—0.3590.44±32.23 b 32.150.6552.84±30.22 b 36.471.2400.64±25.25 b 53.962.4329.11±20.73 b 62.184.8274.2±16.56 b 68.499.6219.38±6.75 b

74.79

a ：P ＜0.05；

b ：P ＜0.01 与模型组相比

亚铁离子和双氧水是很强的自由基诱导剂，在小鼠组织匀浆中添加自由基诱导剂后其自氧化产生的MDA量显著增加。由表3、表4可知，模型组MDA生成量比正常组显著增加，若分别加入组分Ⅰ或组分Ⅱ，MDA生成量显著减少，说明组分Ⅰ或组分Ⅱ可抑

基础研究