细胞计数

3 血细胞计数板
盖片 24×20×0.6mm
计数室
计数室
计数室
区 域 边长（mm）
3 1 0.25 0.2 0.05
面积（mm2）
9 1 0.0625 0.04 0.0025
深度（mm）
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
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体积（mm3）
0.9 0.1 0.00625 0.004 0.00025
细胞计数
1 细胞计数
• 原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时， 通过测定一定体积悬液中的细胞的数目， 即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞 数目。
2 细胞计数
• 细胞计数 是检验工作者最基本、也是最常 用的技术之一。
2 细胞计数方法
2 细胞计数方法
• 显微镜细胞计数法
• 将样本做适当稀释（或浓缩），有时还需特 殊染色，充入细胞计数池，在显微镜下计数 计数板中一定体积内细胞数，经换算得每升 标本的细胞数。 • 缺点：计数误差大，费时、费力
2 细胞计数方法
• 仪器计数 • Countstar 细胞计数仪
2 细胞计数方法
• Scepter—手持式细胞计数器
3 血细胞计数板
• 也叫血球计数板
• 用以对人体内红、白血球进行显微计数之用， 也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生 物的数量，是一种常见的生物学工具。
3 血细胞计数板
• 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻 有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数 用，称为计数区。
如：在同一计数池中，计数100个细胞将可能出现4% 的误差，若计数 1000个细胞时，误差将减少至2.9%。
在计数室内计数面积越大，计数的细胞越多，计数域误差越小。
6.2 固有误差
（2）容器（包括吸管和加样枪）误差和计数室误差
是由容器和计数室精度引起的误差
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操作台不平等。
⑤ 细胞结团。 ⑥ 误认
6.2 固有误差
（1）计数域误差：即使一个技术熟练的人，使用同一器材，同一份稀释 细胞悬液，多次重复计数，结果仍有一定的误差。这是由于充池后细 胞在计数室内分布不可能完全相同所造成的误差，叫固有误差或计数 域误差，此属偶然误差。这种误差可因计数更多的细胞而减少，但不 能完全消除。
5 注意事项
(1) 计数的标本必须新鲜,及时计数。 (2) 稀释液要过滤,试管、枪头、计数板等要清洁，避 免杂质等污染。 (3) 灌板前要充分混匀，适当用力快速震荡30s，但要避 免产生过多的气泡，要一次充满。 。 (4) 加盖片方式：WHO推荐采用“推式”，较“盖式”更 准确。 (5) 注意区别灰尘、杂质。 (6) 镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞 计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞 悬液。
6 质量控制
• 显微镜技术的误差可分为技术误差和固有误差两种 6.1 技术误差 由于操作不正规或使用器材不精确造成的误差。这类误差 通过主观努力可以避免或显著减小，属系统误差。 常见技术误差： ① 使用器材不符合要求： ②稀释倍数不准； ③ 稀释后没有混匀。 ④ 充液不当； 如未混匀、冲液过多、产生气泡、盖片移动、
计数池 大方格 计WBC中方格 计RBC中方格 计RBC小方格
4 细胞计数
• 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 • 2. 制备细胞悬液，混匀。将细胞悬液吸出少许，滴加在盖 片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意 盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 • 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。 然后按公式计算： • 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104