中药材中鞣质含量测定方法的研究

酸计含量为 62126 %) 50ml , 加水 100ml , 按供试品 溶液制备方法制备 , 并按总酚和不被吸附的多酚测 定法分别测定含量 , 计算回收率 。结果见表 5 。
表 5 回收率试验结果
测定 样品中含量 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
次数
(mg)
(mg) (mg) ( %) ( %) ( %)
本法为标准曲线法 , 每次测定均随行测定 , 现 举 3 次测定数据 , 表示线性关系情况 , 见表 3 。
表 3 线性关系的考察
测定 对照品量 吸收值
次数 (mg·ml - 1) (Abs)
1 0102525 010928 0105050 012289 0107575 013394 011010 014536 0112525 015814 2 010516 010780 011032 012862 011548 014230 012064 017445 012580 019611 3 010498 010833 010996 013325 011494 015215 011992 017484 012490 019511
鞣质又称单宁 ( Tannins) ,是一类复杂的具有沉 淀蛋白质性质的水溶性多元酚类化合物 ,广泛存在 于植物药材 ,如五倍子 、贯众 、儿茶等 。近年来 ,对鞣 质生理活性的研究方兴未艾 。研究表明 ,鞣质能清 除生物体内过剩的自由基 ,维护细胞膜的流动和蛋 白质的构象 ,防止辐射诱发的 DNA 断裂 ,从而在抑
参考文献 :
[1 ] 马绪容 ,苏德模 1 药品微生物学检验手册[M]1 北京 :科学出版 社 ,2000 :3
[ 2 ] USP1XXIV [ S]12000 :1809 [3 ] 中国药典 [ S]1 二部 ,2000 :98 (附录)
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中国药事 2004 年第 18 卷第 6 期
通过分子中的酚羟基与蛋白质的酰胺基形成氢键而 结合成不溶于水的沉淀 ,以重量法测定含量 。《中国 药典》一部[1]鞣质含量测定法一直沿用皮粉法 ,适用 范围广 。缺点是耗用样品多 ,测定时间长 ,且没有选 择性 ,测定结果偏高 ,而且皮粉用量很大 。近年来 , 皮粉试剂的供应和质量都很难保证 ,使皮粉法的应 用受到很大限制 。
1 2 3 4 5 6
含量 ( %)
43109 42173 41192 44179 43112 46175
平均值 ( %) 43173
RSD ( %) 0140
313 回收率试验 取同一样品 4 份 , 分别精密称取约 75mg , 置
250ml 量瓶中 , 分别精密加入鞣酸溶液 (以没食子
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制脂质过氧化 、心血管病 、抗癌 、抗突变 、抗衰老 、抗 白内障等方面有独特功效 。
鞣质的经典含量测定方法有很多种 ,如重量法 、 容量法 、比色法等 。最常用的有皮粉法 、高锰酸钾 法 、干酪素法 、络合量法 。皮粉法是国际公认的鞣质 含量测定方法 。皮粉的主要成分是蛋白质 ,鞣质可
复方细胞色素 C 滴眼液对大肠杆菌微生物变 化的百分率 14 天为 010009 %、28 天为 0 ; 对金黄色 葡萄球菌微生物变化的百分率为 14 天为 0 、28 天为 0 ;对铜绿假单胞菌微生物变化的百分率 14 天为 010002 %、28 天为 0 ; 对白色念珠菌 14 天含菌数为 100 个/ ml 、28 天含菌数为 50 个/ ml ,以上所测各菌 浓度均低于初始浓度 ,黑曲霉 14 天含菌数为 116 × 105 个/ ml , 低 于 初 始 浓 度 , 28 天 含 菌 数 为 212 × 105ml ,高于初始浓度 。 4 讨论
1
33126
27109 59137 96138
2
34156
27109 60166 96133 97139 1124
3
33185
27109 60147 98126
4
34170
27109 61141 98160
4 样品测定 411 对照品溶液的制备
Study on Determination of Tannin in Crude Drugs Wang Kun and Lu Jing1 ( Institute for Drug Control of Changchun City , Jilin Province , 130062 ; 1National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products) ABSTRACT Referring to the method in Europe Pharmacopoeia , a modified method for the determination of tannin in crude drugs was established. A tungsten molybdophosphate - casein colorimetric method was used with gallic acid as reference substance. Content of tannin in gallnut and radices sanguisorbae was tested. The average recovery rate was 97139 %. This method is reliable for the determination of tannin in crude drugs. KEY WORDS tannin determination ; colorimetric method
回归方程 Y= - 010232 + 417974X Y= - 011688 + 41311X Y= - 01118 + 4132X
相关系数 019993 019927 019992
312 重复性试验 取样品 6 份 , 按正文方法测定 , 测得含量结果
见表 4 。
表 4 重复性试验结果
测定次数
试验考察了干酪素的用量对测定结果的影响 。 结果见表 2 。
表 2 干酪素用量的影响
干酪素用量 ( %)
0115 0130 0145
测定含量 平均值 ( %)
18126 23124 32172
干酪素用量 ( %)
0160 0175 0190
测定含量 平均值 ( %)
32182 32162 32186
取对照品 、总酚和不被吸附的多酚比色液 ,在 400～1000nm 波长测定 ,结果三种比色液均在 760nm 具最大吸收 。因此 ,确定测定波长为 760nm。 212 供试品溶液制备方法的比较
《英国药典》2000 版鞣质测定法药材供试液提 取方法采用加热提取 ,罗文毓等报道 ,鞣质遇热不稳 定 ,采用室温浸提过夜的方法操作简单 ,提取完全 。 本试验对加热和冷浸提取两种方法进行了比较 ,结 果见表 1 。
常用的药物制剂 ,如糖浆剂 、注射剂等 ,其辅料 中都含有规定量的防腐剂 。目前 ,我国对药品中所 加防腐剂的检测项目开展较少 ,药典至今未收载防
腐剂效力测定法 。本文参照《美国药典》,对复方细 胞色素 C 滴眼液中防腐剂的防腐效力进行了测定 。 实验结果表明 ,对于大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、铜 绿假单胞菌 、白色念珠菌 ,各测定时间含菌数均低于 零时浓度 ,符合《美国药典》24 版[2]的标准 。但对黑 曲霉 28 天抑菌未见明显效果 。说明本品对细菌 、白 色念珠菌具有良好的抑菌作用 。开展药物防腐剂效 力测定 ,有利于更好的控制药品质量 ,保障人民用药 的安全 。
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中药材中鞣质含量测定方法的研究
王 坤 ,鲁 静1 (吉林省长春市药品检验所 ,130062 ; 1 中国药品生物制品检定所)
摘要 : 参照《欧洲药典》,修订《中国药典》鞣质含量测定法的实验方法 。采用磷钼钨酸 - 干酪素比色法 ,以 没食子酸为对照测定五倍子 、地榆药材中鞣质的含量 。平均加样回收率为 97139 %。本法可快速 、准确地用 于中药材中鞣质的含量测定 。 关键词 : 鞣质测定 ;磷钼钨酸 - 干酪素比色法 中图分类号 :R92712 ;R9 - 3 文献标识码 :A 文章编号 :1002 - 7777 (2004) 06 - 0361 - 04
图 1 测定波长选择
11 总酚比色液吸收曲线 ; 21 不被吸附的多酚比色液吸收曲线 ; 31 没食子酸对照品比色液吸收曲线 ;
表 1 提取方法比较
测定次数
1 2 3 4 平均值含量 RSD
加热提取 含量测定 ( %)
24159 25190 24140 24164 24188 2175
室温浸提过夜 含量测定 ( %)
结果表明 , 对于测定样品 , 三倍取样量的干酪 素用量基本可吸附完全 。试验使用干酪素 016 克 。 215 对照品的比较
《英国药典》2000 版鞣质测定法附录采用焦性
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没食子酸为对照品 , 试验表明焦性没食子酸很不稳 定 , 溶液在室温放置很快变色 , 必须新鲜配置使 用 。考虑到没食子酸具有相似的结构和显色行为 , 且已有含量测定用对照品 , 可以作为鞣质含量测定 对照物质 。实验比较了焦性没食子酸和没食子酸分 别作为对照的测定情况 。以鞣酸含量测定为例 , 采 用不同对照物比较测定结果 : 以没食子酸对照 , 测 得含量平均值为 62126 % , 以焦性没食子酸对照 , 测得含量平均值为 45145 %。以没食子酸对照 , 含 量值较高 。 3 方法学验证 311 线性关系考察
《英国药典》2002 版[2] 鞣质测定法附录采用的 是磷钼钨酸 - 皮粉比色法 ,即利用鞣质在碱性溶液 中将磷钼钨酸还原 ,产生深蓝色 ,其吸收度与含量成 正比 ,采用比色法测定 。其中 ,以焦性没食子酸为对 照 ,测定总酚和不被皮粉吸附的酚 ,二者之差计为鞣 质的含量 。
罗文毓等报道了改进的干酪素法[2] ,其关键步 骤是以干酪素代替皮粉 ,采用磷钼钨酸比色法测定 ; 药材样品提取采用浸泡过夜代替加热回流提取等 。
本文参照《英国药典》和干酪素法 ,重点对提取 方法 、显色剂 、干酪素用量等进行了比较 ,提出了鞣 质含量测定方法 ,为药典相关附录方法的修订提供 了实验基础 。 1 仪器与试剂 、试药
岛津 UV - 2100 , 2201 紫外分光光度计 ,Agilent 8453 紫外分光光度计 ;钨酸钠 (分析纯 ,广东汕头西 陇化工厂) 、钼酸钠 (分析纯 ,北京化学试剂公司) 、硫 酸锂 (分析纯 ,天津天河化学试剂厂) 、无水碳酸钠 (分析纯 ,北京化学试剂公司) ;磷酸 (北京化学试剂 公司) 、盐酸 (北京化学试剂公司) 均为分析纯 ;干酪 素 (生化试剂 ,北京双旋微生物培养基制品厂) ;焦性 没食子酸 (分析纯 ,贵州遵义市建强化工厂) ; 鞣酸 (遵义 ,北京化学试剂商店分装) ; 没食子酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 :0831 - 9501) ; 五 倍子 、地榆药材 (均为徐继民药师采自吉林通化 、河 北张家口等地或购自中药材市场 ,并进行鉴定) 。 2 实验方法 211 测定波长的选择
29127 29126 30111 30189 29191 2153
结果表明 , 冷浸过夜提取测定含量高于加热提 取法 , 且操作较简单 。因此 , 附录正文采用室温浸 提过夜的提取方法 。 213 吸附剂的比较
《英国药典》法采用皮粉作为吸附剂测定不被 吸附的多酚类 。参考文献[3]干酪素对鞣质的吸附更 具专属性 , 即可选择性吸附有生理活性鞣质 , 而鞣 酐等非活性鞣质则不被吸附 , 选择性较皮粉法高 。 以鞣酸为例 , 试验分别采用皮粉和干酪素为吸附 剂 , 测定含量 。结果皮粉法测定值为 81118 % , 干 酪素法测定值为 62126 %。 214 干酪素用量的比较