DHE-ROS活性氧检测方法
活性氧（ROS）测定试剂盒说明书
②、波长设置：最佳激发波长 500(50015nm)，最佳发射波长 525 (53020 nm)。也可按照 FITC 荧光检
测条件检测。 ③、结果以荧光度值表示。
四、细胞样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
二、试剂组成及保存： 1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO，20℃保存。 2、1ml 活性氧供氢体，4-8℃保存。
三、组织样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
1、单细胞悬液制备： 方法 1、采用单细胞悬液制备仪制备单细胞悬液。 方法 2、酶消化法： 方法 3、机械法（网搓法）：
本试剂盒仅用于科研实验
1、直接将探针加入培养液中： ①、直接将 DCFH-DA 探针加入无血清培养基中：一般按照 1 ：1000 用无血清培养液稀释 CFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜， 通常对于 6 孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1ml。 ②、取一份不加探针，只加入培养基的细胞设为阴性对照管。阳性对照管：取一份已加入探针的细胞，同 时加入活性氧供氢体诱导细胞，推荐该试剂的工作浓度为 20～100µM。 ③、37℃孵育细胞 30min～几小时，通常为 30～60min 即可，孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度有关。一般阳性对照在刺激细胞 30 分钟左右，即可观察到明显的绿色荧光。 ④、吸去培养液，利用无血清培养液或者 0.01MPBS 反复吹打，肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成 片)转为透明，细胞层几乎全部吹打到 PBS 中。 ⑤、将细胞悬液全部收集到 1.5ml 离心管中。用无血清培养液或者 PBS 洗涤 2 次，以充分去除未进入细 胞内的 DCFH-DA。1000rpm/min，5min，吸净上清后加入 PBS 重新悬浮细胞进行测定。
ROS活性氧检测-DCFHDA法
ROS活性氧检测-DCFHDA法
BB-47053
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧⾃由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞⽣长增殖、发育分化、衰⽼和凋亡以及许多⽣理和病理过程。
贝博活性氧检测试剂盒是⼀种利⽤荧光探针DCFH-DA进⾏活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA本⾝没有荧光，可以⾃由穿过细胞膜，进⼊细胞内后，可以被细胞内的酯酶⽔解⽣成DCFH。
⽽DCFH不能通透细胞膜，从⽽使探针很容易被标记到细胞内。
在活性氧存在的条件下，DCFH被氧化⽣成荧光物质DCF，绿⾊荧光强度与细胞内活性氧⽔平成正⽐，检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的⽔平。
在激发波长502 nm，发射波长530 nm附近，使⽤荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF 荧光，从⽽测定细胞内活性氧⽔平。
本试剂盒可以⽤于各种真核培养细胞的检测。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。
细胞中活性氧的荧光探针检测法研究进展_张鑫
文章编号：1003-8507（2010）22-4316-02中图分类号：R122.1文献标识码：A【实验技术及其应用】细胞中活性氧的荧光探针检测法研究进展张鑫综述，王旗审校摘要：荧光探针法是一种灵敏的、可提供细胞内靶分子时空信息的活性氧（ROS）检测法。
目前常用的荧光探针有HE（检测O2·-）、DCFH和DHR（检测H2O2）等。
ROS的检测结果易受以下因素影响：基于氧化还原反应的荧光探针选择性差，且反应需要催化剂（过氧化物酶、细胞色素C）；细胞内pH值、抗氧化剂影响检测结果；荧光探针在光照条件下可发生自氧化。
近期研究主要集中在如何改进荧光探针的上述局限性。
本文对荧光探针法检测细胞内ROS的研究进展进行简要介绍。
关键词：活性氧；荧光探针；DCFHPROGRESS IN MEASUREMENT OF REACTIVE OXYGEN SPECIES IN CELLS by USING FLU-ORESCENT PROBES ZHANG Xin，WANG Qi.（Department of Toxicology，School of Public Health，Peking University，Beijing100191，China）Abstract：Fluorescent probes are sensitive tools in the measurement of Reactive Oxygen Species in cells，and it can pro-vide temporal and spatial information on target biomolecules in cellular system.Currently，the most frequently used probes in-cludes HE（for O2·-），DCFH and DHR（for H2O2）.However，the following aspects tend to make the detection results more complex：fluorescent probes based on redox reaction lack selectivity and require a catalyst（Peroxidase or Cytochrome C）for reaction；Intracellular PH and antioxidants can potentially influence the detection process；also，probe auto-oxidation Could occur under photo-irritation.Some improvements in detection of ROS have been achieved in recent years.This paper focused on the progress in the ROS detection using fluorescent probes.Key words：Reactive Oxidative Species；Fluorescence probe；DCFH活性氧（Reactive Oxidative Species，ROS）是指生物体内与氧代谢有关的含氧自由基和不以自由基形式存在的具有高活性的中间产物，主要由氧化呼吸链中的酶复合体Ⅰ和Ⅲ漏出的电子产生，包括超氧阴离子（O2·-），羟自由基（HO·），过氧化氢（H2O2），单线态氧（1O2），次氯酸（HOCl）等。
DHE-ROS活性氧的检测
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
荧光显微镜检测： 1、 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取 25-50 μl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。 2、 荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS 阳性细
-2-
咨询邮箱：bestbio@
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式
细胞仪检测； ● 背景低，灵敏度高； ● 线性范围宽，使用方便。
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出 蓝色荧光。
流式细胞仪分析： 1、 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。 用 0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。 2、 采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个 亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。
活性氧的检测方法
展。直到 1969 年 McCord 和 Fridovich[ 1] 发现 了清 除 超氧 化物 自由 基的 超氧 物 岐化 酶 ( SOD) 并研究其生物学作用, 提出了氧毒性 的超氧化物自由基学说后 , 人们才开始逐步 认识到自由 基在生物 体内存在 的危害 , 同 时 , 由于分子生物学的迅猛发展, 研究短寿 命的自由基的方法有所突破, 带动自由基生 物学的发展 , 使自由基生物学这门学科渗透 到医学、 植物生理学、 病理学等许多学科中, 显示出其极大的发展前景。 生物学、 医学最先研究活性氧的方法, 有脉冲射解 、 快速停流 、 顺磁共振和自旋 搜集技术 [
[ 3] .
第2期
陈惠萍等:
活性氧的检测方法
15
SOD 作用的底物 , 故原则上许多检 测 SOD 的方 法, 如化 学 发光、 NBT ( 氮 蓝四 唑 ) 还 原、 细胞色素、 连苯三酚、 肾上腺素都可以用 来检测生物系统的 O2. , 但干扰因素很多, 实 际应 用时困难不 少[ 4~ 6] 。 1976 年 Elest ner 等 提出用羟胺氧化反应来检测生物材料 的 O 2. 。此法灵敏 度高, 专一性好 , 药 剂价 廉。能同时检测大量样品。但叶绿素等色 素含量严重影响比色测定。王爱国等 为 了消除这些干扰 , 对实验步骤进行了改进, 并在分离时以乙醚取代正丁醇 , 检测了四季 豆幼苗叶片 叶绿体在光 暗下衰老 过程 O2 产生速率, 其结果与 McRac 等
1
、 水稻
[ 17]
、 眉豆
[ 18]
等植物上观察到
的现象类似。 4
1
O2 的检测 早在 1930 年 , M ulliken 通过 分子轨道
的计算就已 预言单 线态氧的 存在, 但 直至 1963 年 Khan 和 Kasa 发现 可以 用 NaOCl 和 H 2 O2 反应来产 生单线态氧才 使该领域 研究 得以迅速发展。用于1 O 2 检测的 方法 有化学发光法、 猝灭剂抑制法、 在2 H 2 O 中延 长寿命法、 产物分析法等几种方法 。其 1 中最直接的检 测方法是观察 O2 的化学发 光, 这种方法需要聚集较大量的1 O2 才能检 测出来。使用1 O 2 猝灭剂抑制 1 O2 参与的反 应, 最常使用的是类胡萝卜素, 它以物理方 式或猝灭 1O 2 而自 身并不发生任 何化学反 应。此外还有叔胺、 维生素 E 、 氮化合物、 四 甲基 乙烯、 2, 5
活性氧的检测方法
活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。
而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。
细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。
Rosup是一种混合物（compound mixture），浓度为50mg/ml。
一、注意事项1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。
3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
二、使用说明1、装载探针对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞。
对于细胞刺激时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。
按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH- DA，使终浓度为10微摩尔/升。
去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。
加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。
37℃细胞培养箱内孵育20分钟。
用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。
动物细胞氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂盒说明书
动物细胞氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒说明书一、检测原理动物细胞氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒是血液卵磷脂胆固醇乙酰转移酶(LCAT)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过非界面性的水溶性单体底物，在磷脂酶或乙酰转移酶的水解下，其释放的产物发生吸收峰值的变化，即采用比色法来测定血液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种血液样品(动物、人体等)卵磷脂胆固醇乙酰转移酶的活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
二、样品收集、处理及保存方法血液样品分为耳静脉采血、颈静脉采血、前腔静脉采血、心脏采血、翅静脉采血，应根据工作实际选择合适的采血方式。
全血样品是在样品中加抗凝剂，可用0.1%肝素、阿氏液、3.8%枸橼酸钠。
我们通常做免疫效果抗体检测需要血清，血液在采集后室温静置2小时以上，冬季需要加温，高速离心，或者4度过夜，抽取血清。
注意事项：1每份样品一定按要求采够量，比如禽血清一般要求不少于0.5毫升，猪血清一般要求不少于1毫升。
2血清样品要清亮、无溶血、无变质。
3样品容器上贴详细标签4尽量防止或避免反复冻融。
组织样品：采集的每个组织块要单独放一个已消毒的容器内，贴详细标签，防止组织间相互污染，注意消毒，以防散毒。
做好个人防护。
分泌物和排泄物：常用的就是禽流感咽喉拭子和泄殖腔拭子的采集。
容器中首先放入含有抗菌素的PH值为7.0-7.4的PBS液，原则上咽喉、泄殖腔拭子分别放置。
抗生素的浓度为青霉素2000IU/ml,链霉素2mg/ml,庆大霉素(卡那霉素)50ug/ml,制霉菌素10000IU/ml,粪便和泄殖腔拭子所用的抗生提高5倍。
加入抗生素后应调整PH值至7.0-7.4。
粪便样品：常用的是禽流感野鸟粪便的采集，注意样品一定为新鲜粪便。
皮肤样品三、储存条件14℃或-20℃四、试剂盒内容标准品样本稀释液检测抗体-HRP20×洗涤缓冲液底物A底物B终止液说明书自封袋五、操作方法1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
植物体超氧阴离子自由基不同检测方法的比较
理条件下水溶液中寿命极其短暂的 O2 的定性和定量问题
·－
［9 ］
． EPR 自旋捕捉技术要求的实验条件比较
［10 ］
严格， 而且需要 EPR 这样昂贵的实验仪器， 一般研究者很难具备， 限制了其推广和普及． 王爱国等 研 ·－ － － O2 与羟胺反应生成 NO2 ， NO2 在对究报道， 氨基苯磺酸和 α萘胺作用下生成粉红色的偶氮染料， 该
活性氧自由基（ ROS ） ，顺磁共振波谱仪 （ EPR ） ，羟胺氧化法，二氢乙锭 （ DHE ） 荧光探针，原位
ROS 主要产 协同作用， 形成一个复杂的反应网络． 在叶片等含有叶绿素的组织和细胞中 ， 在光照条件下， ROS 生于叶绿体和过氧化物酶体， 而在根部等不含叶绿素的组织和细胞中以及黑暗条件下的绿色组织 ， 主要来源于线粒体
响应水平． 关键词 显色．
·－ 植物体内的活性氧 （ reactive oxygen species，ROS ） 通常存在超氧阴离子自由基 （ O2 ） 、 过氧化氢 1 （ H2 O2 ） 、 羟基自由基 （ OH· ） 、 单线态氧 （ O2 ） 、 氢过氧基 （ HOO· ） 、 脂质自由基 （ R· ） 、 脂氧自由基 ·－ （ RO·） 和脂质过氧自由基（ ROO·） 等类型． 其中， O2 、 H2 O2 、 OH· 和1 O2 等活性氧可以相互转化， 通过
·－ 1 ［ NO2－ ］ ， · min －· mg － 1 Pr 表示． 再计算出 O2 的含量， 结果以 nmol
1． 5
应用特异 水稻根尖组织 O2 的荧光检测参照 Yamamoto 等方法 进行， 略加改进． 剪取染毒后的水稻根尖
（ 1 cm） ， · L － 1 DHE （ 10 mmol·L － 1 TrisHCl，pH 7． 5 配制 ） ， 37 ℃ 避光染色 30 min． 用 立即浸入 5 μmol －1 10 mmol · L TrisHCl（ pH 7． 5） 避光洗涤 15 min × 2 次， 切取 0． 5 cm 根尖， 排列于载玻片上， 在荧光显微镜 · L － 1 CdCl2 处理组的 下（490 nm 激发光和 520 nm 发射光） 拍摄图片． 为检测该探针的特异性， 取 100 μmol · L － 1 SOD 酶溶液中于室温下孵育 30 min， 根尖， 置于 35 mg 清洗后转移至 DHE 染液， 后续步骤同上． ·－ 1． 6 应用 NBT 原位显色法捕获叶片组织 O2 Puertas 等方法 叶片组织 O2 的原位显色分析参照 Romero即浸入 O
dhe荧光光谱
dhe荧光光谱
Dihydroethidium (DHE) 是一种常用的超氧化物阴离子（O2•−）荧光探针，经常被用于检测细胞内的活性氧（ROS）水平。
DHE 在进入细胞后，可以在细胞内的超氧化物阴离子作用下脱氢，形成乙锭（Ethidium），进一步嵌入到细胞的RNA 或 DNA 中，产生红色荧光。
荧光信号的强度与细胞内的超氧化物阴离子浓度正相关。
荧光光谱是描述荧光物质发射光的波长（颜色）和强度的数据集合。
对于 DHE，其荧光光谱特征如下：
激发波长（Excitation Wavelength）：DHE 的激发波长通常在 518 nm 左右。
这是激发 DHE 产生荧光的光源所需的波长。
发射波长（Emissions Wavelength）：DHE 的发射波长通常在 616 nm 左右。
这是 DHE 被激发后发出的光的主要波长，通常呈现为红色荧光。
Stokes 位移：Stokes 位移是指激发光和发射光之间的波长差。
对于 DHE，Stokes 位移约为 100 nm 左右（即 518 nm - 616 nm = −98 nm），表示发射光的波长比激发光的波长更长。
在实际应用中，研究人员会使用荧光显微镜或荧光光谱仪来观察和分析 DHE 的荧光信号。
通过调整荧光显微镜或光谱仪上的激发和发射滤光片，可以优化对 DHE 的检测。
为了获取准确的荧光光谱数据，必须严格控制实验条件，包括样本的处理、孵育时间、检测时的温度和 pH 值等。
此外，还需要避免自动荧光和其他可能干扰的荧光信号，确保结果的可靠性和精确性。
活性氧的检测方法
甲基 呋喃、 9, 10 二 苯基
2
酮。O2 的寿命在 H 2 O 中比在 H 2 O 中长得 多, 故在 H 2 O 中寿命延长法可以确定某个 反应是否产生1 O 2 或有1 O2 的参与。产物分 析法也可以用于1 O2 的检测。有人认为1 O2 的检测比其它活性氧困难。在微粒体等完 整细 胞器中检测 1 O2 已 获得成功。但 在植 物方面, 尤其是完整叶绿体中 O2 的检测仍 然不完善。蒋 明义等 [ 20] 参照 Chakraborty 和 T ripat hy [ 21] 所采用的方法 , 以 H is( 组氨 酸) 作为1 O2 的分子捕获 剂, 用分 光光度法 检测 NDA( 对亚硝基二甲基苯胺) 的漂白反 应作 为1 O2 产生的指标。检测了水稻 叶绿 体中1 O 2 的产生 , 实验证实, 在- 0. 8MP a 渗 透胁迫及 250 mol. m
用电子自
旋共振检测结果规律相似。这两者各有优 点, 电子自旋共振法虽操作相对简便, 但所 用仪器昂贵, 而羟胺氧化法所需费用则要低 得多。运用羟胺氧化法时还必须严格控制 反应系统 pH< 8. 0, 并尽可能降低反应中的 溶解氧及铁含量 , 这样测出的 O 2. 产生速率 才更接近实际水平。 2 OH 的检测 由于 OH 是生 物 体 内最 活 泼 的活 性 氧, 寿命极短, 故给检测带来了困难。过去 人们主要是根据 SOD 和 CAT 对其产生的 抑制作用以及 OH 清除剂 ( 如乙醇 、 甘露 醇、 叔丁醇、 苯甲酸钠、 生育酚等) 对其产 生的 清除作用 等来估测 OH 水平。此 外, 还可用 DMPO ( 5, 5 二 甲基 1 吡咯 啉 N 氧化物 ) 作为自旋捕获剂进行电子顺 磁共振 ( EPR ) 自旋捕获以及检测蛋氨酸 形成乙烯的速率等估测 OH 的产生[
dhe探针检测ros步骤
dhe探针检测ros步骤
使用DHE（二氢乙啶）探针检测ROS（活性氧）的步骤如下：
1.溶解DHE成为stock溶液。
2.将DHE加到需要检测的样品中，如分离后的线粒体样品。
一般所用DHE浓度为5~20
μM。
将加有DHE的样品在适宜温度（如37°C）下孵育一定时间（如30分钟），让DHE能进入细胞内。
3.用荧光分光光度计检测该样品的荧光强度。
DHE在与ROS发生反应后，能被氧化成为
红色荧光的二氢乙烯八酮(DHEO)。
因此检测荧光强度即可反映ROS的含量。
激发波长一般选择为485nm，发射波长选择580nm。
4.根据标准曲线，计算出样品中的ROS浓度。
制作DHE标准曲线时，需要使用已知浓度
的H2O2或其他ROS作为标准品。
5.在不同时间点重复检测，以观察ROS浓度的变化。
请注意，使用DHE检测ROS的主要限制在于DHE自身也可能产生背景荧光，有部分DHE可能还原成未氧化的形式。
但总的来说，DHE仍是一种敏感、有效的ROS检测方法，它能很好地反映线粒体样品中ROS的变化情况。
活性氧的检测方法
活性氧的检测方法活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS），是指一类高度活泼的氧化剂，包括超氧阴离子自由基（O2·-）,过氧自由基（·O2-）,氢过氧化物（H2O2）和羟基自由基（·OH）等。
活性氧在生物体内产生具有重要的生物学功能，但过量的活性氧会导致细胞氧化应激和氧化损伤，甚至引发多种疾病。
因此，准确、灵敏地检测活性氧的水平对于生物医学研究和临床诊断具有重要意义。
本文旨在介绍一些常用的活性氧检测方法，包括化学发光法、流式细胞术、蛋白质标记法以及分子探针法。
1. 化学发光法化学发光法是一种常用的检测活性氧的方法，其原理是通过检测化学反应所产生的荧光信号来间接测定活性氧的含量。
其中，氧化荧光素（DHE）和二苯基五氮唑（DPI）是两种常用的探针物质。
通过与细胞或组织中的活性氧反应，这些探针物质会发生化学变化，产生荧光信号，从而可以间接测量活性氧的水平。
2. 流式细胞术流式细胞术是一种高通量、高灵敏度的活性氧检测方法。
通过将细胞与特定的探针（如二苯基五氮唑、二氧化碳和二溴苯蓝）共孵育，然后使用流式细胞仪对细胞进行检测和分析。
这种方法可以实时监测细胞中活性氧的动态变化，并且可以定量分析不同细胞群体中活性氧的水平。
3. 蛋白质标记法蛋白质标记法是一种利用免疫学原理检测活性氧的方法。
通过特异性抗体与活性氧产生的蛋白质分子进行结合，然后通过荧光或酶标记的二抗对抗原-抗体复合物进行检测。
这种方法可以定量检测活性氧在细胞或组织中的定位和分布，从而进一步研究活性氧的生物学效应。
4. 分子探针法分子探针法是一种基于分子探针的活性氧检测方法。
探针分子与活性氧存在特定的反应，通过测量探针与活性氧反应后的荧光强度或吸收光谱变化来定量分析活性氧的含量。
比如，二苯基氨基腙（DPA）和二羟基芳香乙酰胺（DMA）等探针物质被广泛应用于活性氧的检测研究中。
以上介绍了常用的活性氧检测方法，包括化学发光法、流式细胞术、蛋白质标记法以及分子探针法。
人活性氧(ROS)ELISA检测试剂盒操作注意事项说明
人活性氧(ROS)ELISA检测试剂盒操作注意事项说明
人活性氧(ROS)ELISA检测试剂盒操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。
3. 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
人活性氧(ROS)ELISA检测试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于
0.9900。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 IU/ml。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月。
DHE-ROS活性氧检测方法
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。本试剂 盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。
产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式
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产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧
化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 贝博 DHE 活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
流式细胞仪分析： 1、 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。 用 0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。 2、 采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个 亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。
活性氧测定的基本原理与方法
评述与进展 活性氧测定的基本原理与方法林金明3 屈 锋 单孝全(中国科学院生态环境研究中心,北京100085)摘 要 综述了过氧化氢(H 2O 2)、一重态氧(1O 2)、超氧阴离子自由基(·O -2)以及羟自由基(·OH )等活性氧的测定方法。
侧重介绍活性氧的化学反应法、捕捉法和直接测定法的基本原理和最新的进展情况,并比较了这几种方法的各自特点。
关键词 活性氧,化学发光,自由基,评述 2001211208收稿;2002205205接受本文系中国科学院“百人计划”和国家杰出青年科学基金资助项目(N o.20125514)1 活性氧氧是生命运动过程中不可缺少的一种气体,人们一旦处于缺氧或者供氧不足的环境中,就会感到憋气的痛苦甚至死亡。
所以,自从1770年代初英国人Joseph Priestley 发现氧以来,氧一直被人们认为是一种对人体百益而无一害的气体。
可是,科学技术迅速发展起来的今天,我们知道,不管是空气中的氧还是水中的溶解氧都具有较高的氧化性,与一般的金属铁一样,处于空气中的人体各部位都在不断地受到氧的腐蚀而“生锈”,当然这种腐蚀与铁不同,它体现在人体的细胞水平上。
特别是人体各种器官随着年龄的增大不断地老化更是这种腐蚀“生锈”的直观表现。
1969年McC ord 与Fridovich [1]发现,在生化反应过程中O 2获得一个电子还原生成超氧自由基(O -2),进而经过红血球的分离精制后获得O -2的清除灭活酶,并命名为超氧化物歧化酶(superoxide dismultase ,S OD )。
这一发现激发了大批的科学研究者致力于O -2的生成过程、反应活性、毒性、生理和病理等等各方面的研究,去探索解明S OD 在生理学上的意义。
同时由O -2衍生出来的过氧化氢(H 2O 2)、羟自由基(·OH )、激发态氧(一重态氧或称单线态氧,1O 2)也受到了人们的重视。
精子细胞氧化应激活性氧(ROS)高质荧光检测试剂盒产品说
精子细胞氧化应激活性氧（ROS）高质荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途精子细胞氧化应激活性氧（ROS）高质荧光检测试剂是一种旨在使用透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测精子细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。
可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
其中精子细胞（spermatozoa）对于活性氧较为敏感：低浓度活性氧可以调节正常精子功能、精子获能、顶体反应、精卵融合等；高浓度活性氧则影响精子细胞的质量和功能，因为精子细胞质膜含有大量不饱和脂肪酸，胞浆含有少量的祛除活性氧的相关酶蛋白，由此活性氧容易造成精子质膜的流动性和DNA完整性受到损害，精子运动能力降低，不能参与授精活动，最终导致特发性不育症（idiopathic infertility）。
光反应性活性氧(ROS)测定试验方法
附件5光反应性活性氧(ROS)测定试验方法ReactiveOxygenSpecies(ROS)AssayforPhotoreactivity1范围本方法规定了化妆品用化学原料光反应性活性氧(RoS)测定试验的基本要求和方法。
本方法适用于预测化妆品用化学原料的潜在光毒性。
2试验目的预测化妆品用化学原料是否具有潜在光毒性。
3定义下列术语和定义适用于本方法。
3.1光反应性Photoreactivity化学物质由于吸收光子而与另一个分子发生反应的性质。
3.2光毒性Phototoxicity皮肤一次接触化学物质后，继而暴露于紫外线照射下所引发的一种皮肤毒性反应，或者全身应用化学物质后，暴露于紫外线照射下发生的类似反应。
本方法所述光毒性包括光刺激性、光过敏性和光遗传毒性。
3.3辐照度Irradiance照射到某一表面的紫外线或可见光的强度，单位为瓦每平方米(W∕m2)或亳瓦每平方厘米(m∖V∕cm2)o 3.4光照剂量Doseoflight照射到某一表面的紫外线或可见光的量[=强度X时间(秒)],单位为焦耳每平方米(J∕m2)或焦耳每平方厘米(J∕cm2)。
3.5活性氧种类ReactiveOxygenSpecies,ROS活性氧种类，包括单线态氧和超氧阴离子。
3.6单线态氧SingIetOxygen,SO由光辐照化学物质通过11型光化学反应产生的一种自由基。
3.7超氧阴离子SuperoxideAnion,SA由光辐照化学物质通过I型光化学反应产生的一种自由基。
4试验原理一些具有光反应性的化学物质暴露于紫外线时，吸收某一波长光子，诱导发色团激发，激发能量转移到氧分子上，发生光化学反应，产生活性氧（包括单线态氧SO和超氧阴离子SA）,活性氧是光毒性反应中的重要中间物质。
单线态氧和咪哇反应生成的过氧化物中间体对N,N-二甲基-4-亚硝基苯胺（RNo）具有漂白作用，使其在440nm下的吸光度降低。
超氧阴离子与氯化硝基四氮嘎蓝（NBT）反应生成NBT+,其在56Onm波长下具有光吸收。
dhe与ros反应的原理
dhe与ros反应的原理DHE与ROS反应的原理DHE（二氧化氮氢）与ROS（活性氧化物种）是一种重要的化学反应体系，在许多生物学和化学过程中起着关键作用。
这种反应一方面可以产生有益的化合物，另一方面也可能导致有害的副产物。
本文将详细介绍DHE与ROS反应的原理及其在生物体内的作用。
让我们来了解一下DHE和ROS的概念。
DHE是一种含有氮和氢的化合物，具有较高的反应活性。
ROS则是一类高度活性的氧化物种，包括超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（·OH）等。
这些ROS在细胞内参与多种生化反应过程，如细胞信号传导、抗菌和免疫等。
DHE与ROS反应的原理是通过氧化还原反应来实现的。
DHE在存在ROS的条件下，会被氧化成为相应的氮氧化物。
这一反应过程中，ROS接受了DHE的电子，从而被还原为较稳定的化合物。
这样，DHE与ROS之间的电子转移就完成了，从而实现了氧化还原反应。
这种DHE与ROS反应在细胞内具有多种重要的生物学功能。
首先，这种反应可以帮助细胞清除过量的ROS。
细胞内的ROS水平过高会导致细胞损伤和氧化应激，而DHE可以作为一种抗氧化剂，与ROS 发生反应并将其还原，从而减少ROS的浓度。
DHE与ROS反应还参与了一些细胞信号传导过程。
通过与ROS反应，DHE可以改变细胞内的氧化还原状态，从而调节细胞内的信号传导通路。
这种信号传导可以影响细胞的增殖、凋亡和分化等重要生物学过程。
需要注意的是，尽管DHE与ROS反应在细胞内具有一定的生物学功能，但过量的DHE或ROS都可能对细胞造成损伤。
因此，细胞需要维持适当的DHE和ROS水平，以保持正常的生物学功能。
研究人员对DHE与ROS反应的机制和调控进行了深入研究，以更好地理解其在生物体内的作用。
DHE与ROS反应是一种重要的化学反应体系，在细胞内起着关键作用。
它不仅可以帮助细胞清除过量的ROS，还参与了细胞的信号传导过程。
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产品号 BB-4104 BB-4105 BB-4106 BB-4107 BB-4108 BB-4112 BB-4123 BB-4137 BB-4132
细胞仪检测； ● 背景低，灵敏度高； ● 线性范围宽，使用方便。
试剂盒以外自备试剂和仪器 ● 培养基 ● 移液器及吸头 ● 离心机 ● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪， 激发波长535nm，发射波长610 nm。
使用方法：
使用注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液 体洒落。 ● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 ● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标 记情况是否正常。 ● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。 ● 对于药物作用时间较短(2 小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时 间较长(6 小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞，后标记探针。 ● 阳性对照诱导剂可以按照 1:1000 的比例使用。例如标记好探针的细胞共 1 毫升，可以加入 1 微升 的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后 20-30 分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于 不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后 30 分钟内观察不到活性氧 的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活 性氧阳性对照诱导剂的浓度。 ● DHE 在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。 ● 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察 ROS 的变化。
测的试剂盒。DHE 可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的 ROS 氧化，形成氧化乙 啶；氧化乙啶可掺入染色体 DNA 中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以 判断细胞 ROS 含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型 ROS 氧化，用流 式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中 ROS 经典检测 方法。
产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧
化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 贝博 DHE 活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检
流式细胞仪分析： 1、 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。 用 0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。 2、 采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个 亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
DHE-ROS 活性氧检测试剂盒
产品组成：
产品编号 规格
DHE 荧光探针 活性氧阳性对照诱导剂
BB-47051 200-1000T
1ml 1ml
储存条件： -20℃避光保存。
有效期： 六个月。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
DHE 探针标记： 1、 DHE 溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，100-1000 倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液体或灌 流液中加入 DHE 探针溶液至所需浓度。 2、 依据细胞 ROS 含量的不同，DHE 终浓度可选择在 100-1000 倍稀释的范围，孵育 时间可选择 10-90 分钟，在 37℃或室温进行避光孵育。 3、 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
在激发波长 535nm，发射波长 610 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、 荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内活性氧水平。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。本试剂 盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。
产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分nnexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 Annexin V-EGFP/PI 凋亡试剂盒 MTT 细胞增殖及毒性检测试剂盒 CCK-8 细胞增殖毒性检测试剂盒 WST-1 细胞增殖毒性检测试剂盒 MTS 细胞增殖与毒性检测试剂盒 Hoechst33342/PI 双染试剂盒 DAPI 染色试剂盒 细胞存活率检测试剂盒