血琼脂培养基配制标准操作规程
营养琼脂配制标准操作规程
营养琼脂配制标准操作规程
1.目的
规范营养琼脂培养基配制的操作规程。
2．原理
培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。
3．用途
供细菌培养、菌株纯化及传种使用。
4．配方
营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml
5.操作步骤
将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121℃灭菌15分钟，冷藏备用。
6.储存条件
2～8℃冰箱
7.有效期
实验室自行规定，确保培养基质量。
8.质量控制
8.1 质控频度每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-17。
表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验<100块抽检5%，>100块
随机取10块，35℃培养24～
49h
无细菌生长
生长试验金黄色葡萄球菌
ATCC25923，35℃培养24～
49h
菌落浅黄色
铜绿假单胞菌ATCC27853 35℃培养24～48h 菌落无
色或浅绿色
直径>2.7mm
平行试验平行试验做质控时取新旧批号的
培养基同时做
9．注意事项
倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。
参考文献
[1] 谢正旸主编。
现代微生物培养基和试剂手册。
福州：福建科学技术出版社，1994
[2] 王钦升，周正明，高屹主编。
实用医学培养基手册。
北京：人民军医出版社，1999
编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员
批准人：。
微生物常用培养基配制方法
微生物常用培养基配制方法常用培养基的配制方法可以根据其成分的类型来进行分类。
以下是一些常见的微生物常用培养基的配制方法。
1.琼脂培养基琼脂培养基是一种含有琼脂作为凝胶剂的液体培养基。
其配制方法如下：1）称取所需的琼脂粉量，加入适量的蒸馏水并充分搅拌溶解。
2）将溶解好的琼脂液装入培养瓶中，用胶栓封口，与蒸馏水瓶一同放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
3）取出蒸汽灭菌后的琼脂液，冷却至温度不会杀死微生物，快速倒入培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
2.液体培养基液体培养基是由各种有机和无机物质组成的溶液，可以用于微生物的培养和增殖。
液体培养基的配制方法如下：1）称取所需的各种营养成分如氨基酸、矿质盐等，分别加入适量的蒸馏水中。
2）将搅拌棒或磁力搅拌器放入培养瓶中，加热至微生物能够生长的温度。
3）将配制好的营养液煮沸2-3分钟，以杀死其中的微生物，同时带入一些空气中的微生物。
4）冷却至微生物能够生长的温度，迅速校准pH值。
5）将培养液分装入无菌试管或瓶中，用胶帽封口。
6）将分装好的培养液放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
7）取出蒸汽灭菌后的液体培养基，可以用于菌株接种。
3.固体培养基固体培养基是通过在液体培养基中添加琼脂来使其凝固。
配制方法如下：1）首先按照液体培养基的配制方法制备好液体培养基。
2）在液体培养基凝固之前，将琼脂粉加入培养基中并均匀搅拌溶解。
3）将溶解好的琼脂培养基充分混合，并倒入无菌培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
这里只列举了常见的琼脂、液体和固体培养基的配制方法，实际上在微生物研究中还有许多其他类型的培养基，如选择性培养基、富集培养基和不同用途的专用培养基等。
每种培养基的配制方法都有所不同，需要根据具体的要求和目的进行调整和改进。
血琼脂平板培养基
血琼脂平板培养基 使用说明书
【产品名称】
血琼脂平板培养基
【规格、型号和包装】
见下表：
组成 型号 规格 包装 血琼脂、一次性塑料培养皿 P0901 9cm 20个/盒
血琼脂、一次性塑料培养皿 P0701 7cm 20个/盒
特殊型号，按客户要求规定。
【预期用途】
本品供普通细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】
动物血是微生物生长繁殖的良好营养物质，在45-55℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子，促使细菌生长繁殖。
【主要组成成份】
每1000mL琼脂含：
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
心胰酶消化物 3.0g
玉米淀粉 1.0g
琼脂 13.0g～15.0g
肉胃酶消化物 5.0g
酵母浸出粉 5.0g 氯化钠 5.0g
蒸馏水 1000mL
羊血或马血 50mL～70mL
【储存条件及有效期】
2℃～8℃保存，切勿冻藏。
在储存条件下，自生产之日起有效期60天。
【样本要求】
按照《全国临床检验操作规程》要求处理。
【检验方法】
1. 将培养基复温至常温25℃；
2. 将标本划线接种于培养基琼脂面上；
3. 置培养箱，37℃温箱培养18小时至48小时；
4. 观察菌落形态。
【检验结果的解释】
普通细菌培养后，菌落形态典型。
【检验方法的局限性】
本产品仅适用于普通细菌培养和保存菌种。
【产品性能指标】
培养基接种质控菌株，生长情况应符合下表要求：。
血琼脂平板说明书
血琼脂基础培养基使用说明书【产品名称】通用名称：血琼脂基础培养基英文名称：Blood Agar Base Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适应有些细菌的特殊营养要求。
【主要组成成份】血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌菌落白色，有时带黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环；葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用；链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓性链球菌产生β-溶血环，不溶血性链球菌没有溶血作用；脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带兰灰色，不溶血；肺炎球菌菌落圆形，扁平，透明或半透明，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环；产气荚膜梭菌菌落灰白色，圆形，多数菌株有双层溶血环。
常见培养基的配制操作方法和注意事项
常见培养基的配制操作方法和注意事项一、培养基的配制方法：1.准备所需材料：培养基主要由基础成分和添加剂组成，根据不同需求，可以选择不同的成分配制培养基。
常见的基础成分包括碳源、氮源、矿物质盐和特定生长因子等，添加剂包括琼脂、酵母浸泡液等。
2.称量和溶解：根据配方比例，准确称量各个成分并分别溶解在适量的蒸馏水中，可以加温以加快溶解速度。
3.调整pH值：通常需要调整培养基的pH值，使用盐酸或氢氧化钠等酸碱调节剂，逐滴加入直至达到指定的pH值，一般为7.0-7.44.加入琼脂：在溶解各个成分的培养基溶液冷却至约50℃时，加入适量的琼脂，并充分搅拌溶解。
最后通过高温高压灭菌，使培养基凝固。
二、培养基配制的注意事项：1.材料和器皿的消毒：操作前需预先进行灭菌处理，如使用高温高压灭菌器、自闭式消毒法或紫外线照射等方法，以确保培养基的无菌性。
2.避免污染：在操作过程中应尽量避免培养基的污染，如使用干净的器皿和工具，并注意操作环境卫生。
3.精确称量：根据配方比例准确称量各个成分，尤其是微量元素等特定剂量的添加剂。
4.pH值调节：在调整培养基的pH值时，应逐滴添加酸碱调节剂，并反复检测和调整，以确保达到设定的pH值。
5.良好的溶解和混合：搅拌培养基溶液时应充分混合，以确保各个成分均匀分布。
6.温度控制：培养基配制过程中需要注意温度控制，避免溶液过热或过冷，影响琼脂的溶解或培养基的凝固。
7.灭菌处理：配制好的培养基需要通过高温高压灭菌或过滤灭菌进行处理，以保证培养基的无菌性。
8.存储条件：灭菌后的培养基应放置在低温、干燥和避光的环境中保存，并注意严格控制培养基的有效期。
总结：培养基的配制方法包括准备材料、称量和溶解、调整pH值、加入琼脂和灭菌处理等步骤。
在操作过程中需要注意材料和器皿的消毒、避免污染、精确称量、pH值调节、良好的溶解和混合、温度控制、灭菌处理和存储条件等方面的注意事项。
通过严格控制操作环境和工艺要求，可以确保培养基的质量和无菌性。
血液琼脂基础
血液琼脂基础
血液琼脂基础（Blood agar）是一种常用的细菌培养基，也称为血寒
琼脂基础。
它是由牛血和琼脂组成的。
血液琼脂基础的制备方法是将琼脂、胰蛋白胨、牛血和其他必要的营
养物质加入到烧瓶中，在高温下进行加热和混合。
然后将混合溶液装
入培养皿中，在固化前加入适量的抗生素，以防止未知微生物的生长。
制备好的基础培养皿上会形成一层红色透明的琼脂，这是由牛血中的
红细胞和琼脂组成的。
血液琼脂基础可以用于细菌的定性和定量实验。
在实验室中，常用血
液琼脂基础来检测细菌的溶血酶、血红蛋白酶等酶的活性。
此外，血
液琼脂基础还可用于感染性疾病的诊断，如细菌性咽炎和肺炎。
对于
细菌性咽炎，可在接种血液琼脂基础培养皿后，观察细菌在培养皿上
的生长情况，并利用生长情况判断细菌类型。
而对于肺炎，可向患者
的痰液样本中添加血液琼脂基础进行培养，检测有无致病性细菌的存在。
需要注意的是，血液琼脂基础的保存条件比较苛刻。
制备好的基础培
养皿在常温下只能保存24小时，保存时间太久会影响培养效果。
为了获得稳定的培养效果，应在冷藏条件下保存，即将盘子置于4摄氏度
的冰箱中。
此外，在使用前，需将基础培养皿放置于室温环境下15-30分钟，以保证琼脂的温度与环境温度相差不大，避免对细菌生长产生不利影响。
总之，血液琼脂基础是一种非常重要的细菌培养基，可广泛应用于细菌学研究和感染性疾病的诊断。
在实验室中使用时，应按照制备方法和保存条件进行操作，以获得令人满意的实验结果。
血琼脂平板培养基
血琼脂平板培养基 使用说明书
【产品名称】
血琼脂平板培养基
【规格、型号和包装】
见下表：
组成 型号 规格 包装 血琼脂、一次性塑料培养皿 P0901 9cm 20个/盒
血琼脂、一次性塑料培养皿 P0701 7cm 20个/盒
特殊型号，按客户要求规定。
【预期用途】
本品供普通细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】
动物血是微生物生长繁殖的良好营养物质，在45-55℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子，促使细菌生长繁殖。
【主要组成成份】
每1000mL琼脂含：
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
心胰酶消化物 3.0g
玉米淀粉 1.0g
琼脂 13.0g～15.0g
肉胃酶消化物 5.0g
酵母浸出粉 5.0g 氯化钠 5.0g
蒸馏水 1000mL
羊血或马血 50mL～70mL
【储存条件及有效期】
2℃～8℃保存，切勿冻藏。
在储存条件下，自生产之日起有效期60天。
【样本要求】
按照《全国临床检验操作规程》要求处理。
【检验方法】
1. 将培养基复温至常温25℃；
2. 将标本划线接种于培养基琼脂面上；
3. 置培养箱，37℃温箱培养18小时至48小时；
4. 观察菌落形态。
【检验结果的解释】
普通细菌培养后，菌落形态典型。
【检验方法的局限性】
本产品仅适用于普通细菌培养和保存菌种。
【产品性能指标】
培养基接种质控菌株，生长情况应符合下表要求：。
培 养 基 配 制
培养基配制1)血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。
英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。
2)巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。
因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。
若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。
3)庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL绵羊血12.5mL庆大霉素0.5mL附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg4)杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL兔血（马血）12.5mL杆菌肽lmL附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。
2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。
杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)5)万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂 250mL兔血（马血） 12.5mL万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支）①一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL②1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL6)高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）蛋白胨10g 牛肉浸膏1g氯化钠7g 琼脂15g水 1000mL 甘露醇10g0.2%酚红25mL煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。
7)吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。
琼脂配置
流感嗜血杆菌琼脂珠悬液(流感嗜血杆菌Agarbeads)的制备
方法参照文献，从新鲜平板挑取菌落，接种于1000mlsBHI液体培养基中，于37℃悬摇状态(200rpm)下培养18~24小时，离心收集细菌(4000rpmx10min)，于sBHI中重悬，浓缩菌液，调整至细菌浓度2~6xl09CFU/ml。
细菌浓缩液加热至45℃，取浓缩菌液2ml与2ml45℃溶化的4%w/v(H20)纯化琼脂等量混合,45℃水浴中彻底混匀。
5ml注射器(预热至45℃)吸取混合物,通过23g针头将3ml迅速注入27ml4℃(冰浴)快速搅拌(磁力搅拌器)着的sBHI中，形成由琼脂包裹细菌的流感嗜血杆菌琼脂珠悬液。
悬浮液包含细菌浓度为
1~3x108CFU/ml的不定形琼脂珠。
吸取100μl于0.lml皮试针注射器(预先吸入100μl空气)中，37℃保存备用。
以上均严格无菌操作。
sBHI琼脂培养基：按文献方法配置sBHI（supplemented Brain Heart Infusion)液体培养基。
BHI琼脂干粉+dH2O配成浓度37g/L液体，调节pH值7.6一7.8，灭菌，冷却至室温后4℃保存备用。
临用时加入Hemin和NAD终浓度为2mg/100ml。
Hemin贮存液：1mg/ml(Hemin50mg，三乙醇胺，2ml,dH2O48ml)，0.2μm孔径滤膜过滤除菌分装，4℃储存备用(保质期半年)。
NAD贮存液：5mg/ml(NAD50mg，dH2O 10ml)，过滤除菌分装，-20℃保存备用(保质期半年)。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
琼脂培养基的配制步骤
琼脂培养基的配制步骤
琼脂培养基是一种基础培养基，可用于菌落计数、微生物鉴定等实验。
下面是琼脂培养基的配制步骤：
（1）准备琼脂：将琼脂片（或琼脂粉）加入去离子水中，用锅煮沸，搅拌使琼脂完全溶解，再用自然冷却至50℃左右。
（2）添加培养基成分：将适量牛肉精粉、酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖等加入琼脂中，充分搅拌混合。
（3）调节pH值：使用氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值至7.0，再用酚红指示剂检测pH值，调节至理想值。
（4）加入去离子水：将琼脂培养基加入适量去离子水中，使总成分达到预设量，再充分搅拌混合。
（5）灭菌：将配制好的琼脂培养基装入试管或烧瓶，放入高压灭菌锅中进行高温、高压灭菌。
琼脂培养基的配制需要掌握以下技巧：
1. 使用高质量的琼脂：琼脂的质量对实验结果有很大影响，应选用纯度高、溶解快、凝固均匀的琼脂片或琼脂粉。
2. 注意搅拌均匀：配制时要充分搅拌混合，防止成分不均匀，影响实验结果。
3. 严格控制pH值：pH值对培养基的影响很大，应根据实验要求控制pH值至理想值。
4. 要用去离子水：去离子水可以减少微生物培养基中的有害物质含量，为微生物的生长提供更好的环境。
总之，琼脂培养基的配制需要细心、小心，严格控制每个步骤，保证琼脂培养基的质量和稳定性，以获得满意的实验结果。
培 养 基 配 制
1 pH7.6肉汤琼脂
100mL
2 10%葡萄糖肉液
2mL
3 1%亚碲酸钾溶液 4.5mL
4 0.5%胱氨酸水溶液 1mL
5 脱纤维绵羊血
5～10mL
先将肉浸汤琼脂溶化后，待冷至500C左右，无菌加入已灭菌的葡萄糖，亚碲酸钾
和胱氨酸溶液、血液混匀后倾注平板。
9) 气管分泌物标本运送培养基（Transportation medium）
TSB大豆培养基 3g
葡萄糖
0.5g
脱脂奶粉
2g
甘油
10mL
蒸馏水
100mL
先将1、2项加入温水中煮溶后，再加脱脂奶粉，摇匀，再煮沸，最后滴加甘油，每
管1.0-1.5mL分装进塑料小管。
10)
大便转送培养基
①甘油盐水保存液：
无水磷酸氢二钾
3.1g
无水磷酸二氢钾
1g
氯化钠
4.2g
甘油
300mL
0.1%酚红溶液
1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL
2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL
肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸
汽灭菌器内灭菌制成斜面。
灭菌方法：
第一天：800C1小时
第二天：850C1小时，于370C过夜
第三天：900C1小时，于370C过夜
8) 亚碲酸钾琼脂：（分离白喉棒状杆菌用）
15)
葡萄糖酸盐利用试验试剂（班氏试剂）
①CuSO4.5H2O
2.5g（先用少量蒸馏水溶解）
②枸橼酸钠
10.6g
③无水Na2CO3
6.3g
②+③用少量蒸馏水溶解，再加入①，最后定容至250mL。
血琼脂培养基配制标准操作规程
血琼脂培养基配制标准操作规程1．目的规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。
2．原理羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。
在 45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。
若将NaCl 浓度提高到 0.85%，可使血平皿在35℃培养 18～ 24 小时后色泽仍然新鲜。
3．用途供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。
4．配方特殊蛋白胨23g、淀粉 1g，氯化钠 5g、琼脂 10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～ 10%， pH7.1～ 7.5。
5.操作步骤将上述成分混合，溶于1000ml 蒸馏水中，加热溶化，校正 pH， 121℃高压灭菌15 分钟。
冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。
血琼脂层厚4mm。
6.储存条件2～8℃冰箱。
7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。
8.质量控制8.1质控频度每次新配制时做质控8.2质控方法及结果见表5-18.表 5-18配制血琼脂培养基质量控制方法及结果试验方法结果无菌试<100 块抽检5%， >100 块随机取10 无细菌生长验块， 35℃培养，观察有无细菌生长化脓性链球菌ATCC19615 ，35℃，培生长试养 18～24 小时生长良好，β溶血验肺炎链球菌ATCC6305 ， 35℃，培养生长良好，a溶血18～ 24 小时生长良好，β溶血金黄色葡萄球菌ATCC25923 ，生长良好，35℃，培养18～24 小时平行试大肠埃希菌ATCC25922 ，35℃，培养验18～ 24 小时做质控时，取新旧批号的培养基同时做9.注意事项倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若温度过低，琼脂易凝固。
参考文献[1] 周庭银编著 .临床微生物学诊断与图解.第二版 .上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编 .实用医学培养基手册 .北京：人民军医出版社， 1999（周庭银）编写人：AAA 、BBB操作人：本室操作人员批准人：。
简述普通琼脂培养基的制备过程
简述普通琼脂培养基的制备过程一、前言普通琼脂培养基是微生物学实验室中常用的一种培养基，用于微生物的分离、纯化和鉴定等。
本文将详细介绍普通琼脂培养基的制备过程，包括材料准备、制备步骤、消毒方法等。
二、材料准备1. 琼脂：琼脂是从海洋植物中提取出来的胶状物质，常用于制备培养基。
选用优质琼脂能够保证培养基透明度好，凝固时间短。
2. 蒸馏水：用于制备琼脂溶液和培养基。
3. 细菌营养素肉汤或其他需要添加的营养成分：根据不同的需求选择添加不同的营养成分。
4. 带有刻度的烧杯或量筒：用于称量和混合各种材料。
5. 调pH试纸或pH计：调节琼脂溶液和培养基的pH值。
6. 培养皿或试管：装载制备好的琼脂培养基。
三、制备步骤1. 称量琼脂：将需要使用的琼脂称量到烧杯或量筒中，按照所需制备的琼脂溶液体积计算。
2. 加入蒸馏水：将称好的琼脂加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀。
3. 加热溶解：将混合好的琼脂溶液加热至完全溶解，最好使用微波炉或水浴加热。
4. 加入营养成分：根据需要，在溶解好的琼脂溶液中加入细菌营养素肉汤或其他需要添加的营养成分，搅拌均匀。
5. 调节pH值：根据所需pH值，在培养基中加入适量的碱性或酸性物质调节pH值。
调节时应注意不要过度，否则会影响培养基质量。
6. 过滤消毒：用0.22μm孔径滤器过滤消毒培养基，以去除微生物和其他杂质。
也可以在制备好的培养基中添加抗生素等杀菌剂进行消毒。
四、消毒方法1. 热消毒法：将制备好的琼脂培养基装入培养皿或试管中，用高压灭菌器进行高温高压消毒。
一般消毒时间为15-20分钟，温度和压力根据不同的需求进行调节。
2. 化学消毒法：将制备好的琼脂培养基加入适量的抗生素或其他杀菌剂，搅拌均匀后进行消毒。
一般消毒时间为30分钟左右。
五、总结普通琼脂培养基是微生物学实验室中常用的一种培养基，其制备过程需要严格控制各种材料的质量和比例，并对培养基进行严格的消毒处理。
只有这样才能保证制备出质量优良、透明度好、凝固时间短、无污染的琼脂培养基，为微生物学实验提供可靠保障。
培养基配制使用操作规程0
目的：建立培养基配制使用操作规程。
适用范围：本操作规程适用于的配制使用。
职责：1.该文件归口质量保障部管理。
2.QC主管负责该文件的培训与具体实施。
3.QC检验员负责该文件的正确执行。
程序：1.仪器与试剂：1.1扭力天平、消毒锅、电冰箱、1000ml三角瓶、1000ml量筒、玻璃棒、棉塞、牛皮纸、线绳、培养皿、100ml三角瓶、200ml三角瓶、500ml三角瓶、微波炉。
1.2纯化水、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、麦康凯琼脂培养基、MUG培养基、营养肉汤培养基、75%酒精。
2.操作方法营养琼脂培养基2.1.1称取营养琼脂32克，于1000ml三角瓶内，加入1000ml纯化水，加热溶解后，分装。
2.1.2置消毒锅内，于121℃高压灭菌15分钟，取出放置至室温后，放入冰箱，贴签备用（冰箱温度控制在4~6℃）。
2.1.3使用时从冰箱取出，放置室温后，置微波炉中加热，使融，全部融化后取出，放置约45℃时使用。
2.1.4使用时，用75%乙醇擦瓶子外围，打开牛皮纸包扎外壳，在火焰附近慢慢旋下棉塞，左手拿培养皿，右手拿三角瓶，慢慢倾倒至培养皿中，每皿注入约15ml完毕后，将棉塞在火焰上方烧烤数秒，立即塞入瓶口，包上牛皮纸外层，用线绳扎好，留下次使用。
（此瓶培养基只允许使用两次，且每次首先倾注一个空白平皿作为对照培养）。
玫瑰红钠琼脂培养基2.2.1称取玫瑰红钠琼脂30.5克，置1000ml三角瓶内，加入1000ml纯化水，加热溶解后、分装。
2.2.2置消毒锅内，于121℃高压灭菌15分钟，取出放置至室温后，放入冰箱，备用（冰箱温度控制在1~6℃）。
2.2.3使用前从冰箱取出，放置室温后，置微波炉中加热，使融，全部融化后取出，放置约45℃时使用。
2.2.4使用时，用75%乙醇棉球擦瓶子外围，打开牛皮纸包扎外壳，在火焰附近慢慢旋下棉塞，左手拿培养皿，右手拿三角瓶，慢慢倾倒至培养皿中，每皿注入约15ml，完毕后，将棉塞在火焰上方烧烤数秒，立即塞入瓶口，包上牛皮纸外层，用线绳扎好，留下次使用。
血琼脂平板说明书
血琼脂平板说明书血琼脂基础培养基使用说明书【产品名称】通用名称：血琼脂基础培养基英文名称：Blood Agar Base Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适应有些细菌的特殊营养要求。
【主要组成成份】血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌菌落白色，有时带黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环；葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用；链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓性链球菌产生β-溶血环，不溶血性链球菌没有溶血作用；脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带兰灰色，不溶血；肺炎球菌菌落圆形，扁平，透明或半透明，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环；产气荚膜梭菌菌落灰白色，圆形，多数菌株有双层溶血环。
血液琼脂基础
血液琼脂基础一、血液琼脂的定义和作用1.1 什么是血液琼脂血液琼脂是一种生物化学实验常用的琼脂糖基质，在实验室中用于分离和鉴定血液成分。
它是由琼脂糖、血清和其他辅助成分组成的半固态培养基。
1.2 血液琼脂的作用血液琼脂可以用于血培养、微生物培养和抗生素敏感试验等实验，有助于判断感染类型和选择适当的治疗方法。
它提供了一个适宜的环境，促进细菌、真菌等微生物的生长和繁殖，并帮助研究人员观察和分析微生物对不同治疗方法的反应。
二、血液琼脂的制备方法2.1 器材准备•医用琼脂糖•血清•枸橼酸二钠•包埋容器•恒温培养箱•恒温水浴锅2.2 制备步骤1.将适量的医用琼脂糖加入适量的双蒸水中，加热搅拌溶解。
2.加入适量的血清，并继续加热搅拌溶解。
3.加入适量的枸橼酸二钠，调整pH值。
4.将溶液倒入包埋容器中，冷却凝固。
5.将凝固的琼脂切割成适当大小的块状，放入恒温水浴锅中融化。
6.将融化的琼脂注入培养皿或琼脂平板中，使其平铺。
7.将培养皿或琼脂平板放入恒温培养箱中，保持适当温度进行后续实验。
三、血液琼脂的应用领域3.1 血培养血液琼脂在血培养中起到了重要作用。
在血液培养时，可以将病人的血液样本接种到含有琼脂基质的平板上，培养后观察细菌、真菌等微生物的生长情况，并通过颜色、形态等特征判断感染类型。
3.2 微生物培养血液琼脂也用于微生物培养。
通过在琼脂基质上接种微生物样本，可以促进微生物的生长和繁殖，帮助研究人员观察和分析微生物的形态、生长速度等特征，从而更好地了解和研究微生物。
3.3 抗生素敏感试验在抗生素敏感试验中，可以利用血液琼脂培养基，将已知浓度的抗生素加入琼脂中，通过观察菌落的生长状况，判断细菌对抗生素的敏感性，从而确定有效的治疗方案。
四、血液琼脂的优缺点4.1 优点•血液琼脂富含营养物质，有利于微生物的生长和繁殖。
•血液琼脂在细菌鉴定和药敏试验中具有较高的灵敏度和特异性。
4.2 缺点•制备血液琼脂较为复杂，需要一定的实验技术。
血平板
一）血平板适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。
1）原料普通琼脂培养基100ml 脱纤维血液5—10ml（2）制法①以无菌操作采取绵羊、牛、马或兔血置于灭菌并盛有玻璃珠的三角瓶内，边加血边不停地摇动玻璃珠直至血纤维分离为止。
②普通琼脂培养基加热溶解后，待冷至约55—60度时，以无菌操作按量加入血液，轻轻摇动均匀，不使产生泡沫，随即分装于灭菌的平皿或试管中，制成血液琼脂平板或血液琼脂斜面。
③用途：供某些病原菌的分离培养用；观察细菌的溶血现象，作鉴别用；常规移植继代和保存菌种。
取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
（四）麦康凯平板具中等强度选择性，抑菌力略强，有少数革兰阴性菌不生长。
在麦康凯平板上能否生长，是非发酵菌鉴定的一个依据。
6.麦康凯培养基（1）原料琼脂 1.5—2g 胆盐0.5g蛋白胨2g 1％中性红溶液0.5ml氯化钠0.5g 蒸馏水100ml纯乳糖1g（2）制法①将琼脂加于50ml蒸馏水中，加热溶解作为甲液。
②另将蛋白胨、乳糖、氯化钠、胆盐置于50ml蒸馏水中，在水浴中加热溶解，作为乙液。
③将甲、乙两液混合矫正PH至7.4，然后用脱脂棉过滤。
④分装于三角瓶中，每瓶100ml，高压蒸气灭菌15min。
⑤待冷至65度时每100ml甲、乙液中加入1％中性红溶液0.5ml。
⑥摇匀后即可将其倾入无菌平皿内，制成平板待用。
⑦用途：分离沙门氏菌及志贺氏菌属细菌时用。
备注：此培养基可利用乳糖的发酵来鉴别肠道致病性革兰氏阴性细菌，此原理同S.S琼脂平板，但其对大肠杆菌的抑制作用没有S.S琼脂培养基强。
（五）SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。
因选择性过强，可影响检出率，所以，使用时最好加一种弱选择平板以配对互补。
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血琼脂培养基配制标准操作规程
1．目的
规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。
2．原理
羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。
在45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。
若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35℃培养18～24小时后色泽仍然新鲜。
3．用途
供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。
4．配方
特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～10%，pH7.1～7.5。
5.操作步骤
将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟。
冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。
血琼脂层厚4mm。
6.储存条件
2～8℃冰箱。
7.有效期
实验室自行规定，确保培养基质量。
8. 质量控制
8.1 质控频度每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-18.
表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验<100块抽检5%，>100块随机取10
块，35℃培养，观察有无细菌生长
化脓性链球菌ATCC19615，35℃，培
无细菌生长
生长试验
平行试
验
养18～24小时
肺炎链球菌ATCC6305，35℃，培养
18～24小时
金黄色葡萄球菌ATCC25923，
35℃，培养18～24小时
大肠埃希菌ATCC25922，35℃，培养
18～24小时
做质控时，取新旧批号的培养基同时
做
生长良好，β溶血
生长良好，a溶血
生长良好，β溶血
生长良好，
9.注意事项
倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若
温度过低，琼脂易凝固。
参考文献
[1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：
上海科学技术出版社，2007
[2] 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999
（周庭银）
编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：。