实验1_细菌的培养方法
幼儿园细菌培育实验教案
幼儿园细菌培育实验教案
1.实验目的
本实验旨在让幼儿们通过观察细菌的生长过程，了解细菌的形态、特征和习性，增强幼儿园儿童的科学素养，培养其科学探究能力。
2.实验材料
•活菌片：酸奶、酸菜、牛奶等
•培养皿：透明塑料培养皿
•洗手液
•消毒液
•消毒棉球
3.实验步骤
3.1 实验前准备
将培养皿用消毒液擦拭干净，用消毒棉球擦拭双手。
3.2 取样
将酸奶、酸菜等活菌片取出，取少许放到培养皿里。
3.3 培养
将培养皿放置在温暖通风处，观察细菌生长过程。
3.4 结果观察
经过一段时间的培养，观察细菌的生长过程，其中包括形态、颜色和数量的变化。
4.注意事项
•在取样和培养过程中应保持手部和实验环境的清洁卫生。
•实验过程中不宜直接观察活菌片，以免对身体健康造成危害。
•实验后应将使用过的培养皿和活菌片做好消毒处理。
5.实验结果
经过一段时间的培养，孩子们可以观察到细菌在培养皿中的生长过程，了解细
菌的形态、特征、习性等，并从中学习到科学的知识，提高他们的科学素养。
6.实验拓展
•尝试不同的活菌片，观察不同菌种的生长过程。
•尝试调整培养环境的温度、湿度等因素，观察其对细菌生长的影响。
•尝试对细菌进行观察和分类，了解其生物学特征和分类方法。
7.实验总结
通过本实验，孩子们对生物方面的知识有了更深入的了解，激发了他们对科学的兴趣和好奇心，培养了他们的科学素养和探究能力，对他们未来的学习和发展将起到积极的促进作用。
培养细菌的方法
培养细菌的方法
培养细菌是微生物学实验中的重要步骤，也是许多生物学研究的基础工作。
正确的培养方法能够保证细菌的生长和繁殖，为后续实验提供可靠的数据。
下面将介绍一些常用的培养细菌的方法。
首先，准备培养基。
培养基是细菌生长所需的营养物质和生长条件的组合。
常见的培养基有营养琼脂培养基、LB培养基、大肠杆菌选择性培养基等。
根据需要选择合适的培养基，并按照配方将其溶解于适量的蒸馏水中，再进行高温高压灭菌处理，确保培养基的无菌。
其次，接种细菌。
在进行培养前，需要将所需的细菌接种到培养基中。
通常的方法是取一小部分细菌悬液，用无菌吸管或移液器滴加到培养基表面，然后用无菌的平板扩散器均匀涂抹，使细菌均匀分布在培养基表面。
然后，进行培养。
将接种好的培养基放入培养皿或培养瓶中，然后放入恒温培养箱或恒温培养箱中，根据细菌的生长条件进行相应的温度和湿度控制。
一般来说，大多数细菌在37摄氏度下生长较好，但也有一些特殊的细菌需要在其他温度下培养。
最后，观察和记录。
在培养一定时间后，需要观察培养基上的细菌生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小等特征。
同时，要记录培养的时间、温度、湿度等条件，以及观察到的细菌生长情况，这些数据将有助于后续的实验分析和结果验证。
总之，培养细菌是微生物学实验中的重要环节，正确的培养方法能够保证细菌的生长和繁殖，为后续实验提供可靠的数据。
通过正确准备培养基、接种细菌、进行培养和观察记录等步骤，可以有效地进行细菌培养工作。
希望以上方法能够对您在实验中的细菌培养工作有所帮助。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
实验一大肠杆菌的培养和分离
操作时右手无名指和小指 夹住封口膜，另外三指持 三角瓶，左手拿培养皿并 打开上盖的一边，在酒精 灯火焰旁操作。
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（三）大肠杆菌的接种
将斜面上培养的大肠杆菌菌种用接种环接种到灭菌后的LB液 体培养基中，将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。
注意事项: 1.在火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌，冷却后方能取菌； 3.接种时右手拿着接种环，右手 无名指和小指夹住斜面的棉塞和 三角瓶封口膜； 4.取菌后封口膜和棉塞复原.
LB（Luria-Bertani）液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取液5g/L，
氯化钠10g/L。
（可用于大肠杆菌的扩大培养）
配制50mL的LB培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠 0.5g，加50mL水溶解。
LB（Luria-Bertani）固体培养基：50ml LB（Luria-Bertani）液 体培养基中再加入1g琼脂制得。（可用于大肠杆菌的划线分离） 固体培养基可根据需求制成平面或斜面。
培养基：一般 121℃灭菌15min 有葡萄糖：500g/cm2（90℃以上）灭菌30min 有尿素等不能加热的物质：G6玻璃砂漏斗（玻璃砂漏斗用
后需用1mol/L的HCl浸泡，抽滤去酸）
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
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大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
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• 实验器材
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（四）大肠杆菌的扩大培养
三角瓶在37℃，每分钟200转的摇床上振荡培养12h。
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（五）大肠杆菌的划线分离
1、操作步骤 （1）灼烧接种环； （2）接种环冷却后，从在摇床上培养了12h的菌液中蘸取菌液； （3）在近火焰处，用带菌液接种环在固体培养基上划线。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
2-5动物微生物--细菌的人工培养(实验一)
1、3：有动力 2：无动力
£ ¨Õ Æ ¬ £ ©
（2）在琼脂斜面上长成菌台。
a丝状
b刺毛状 c念珠状 d扩展状
e树状 f假根状
2、在液体培养基中的生长情况
（1）表面生长：液体清晰，细菌生长在 液面上形成菌膜。 （2）混浊生长：液体均匀混浊或有少量 沉淀。 （3）沉淀生长：液体清晰，细菌生长在 管底，形成沉淀。
三. 细菌在液体培养基中的生长情况
（1）在平板上形成肉眼可见的细菌集团， 称为菌落，观察菌落的大小、形状、边缘、 表面、颜色、溶血等情况。
Colony morphology
¹ ÌÅ à Ñ øÏ ù íµ ± æ Ï ¸Î ú ¾ úÆ ä Ï ¸ ¾ ú ¸» ° û µ Ä çÃ × Ó Ï Ô ¢¾ ¾ µ Í ¼ ¬Â
实验一
细菌的人工培养
一、实验目的
1、掌握平板划线、斜面、液体和半固体 培养基等各种接种方法。 2、熟悉接种细菌用具、接种细菌的环境 要求和无菌操作要领。
3、熟悉细菌在各种培养基的生长现象。
二、实验原理
1、细菌在适宜的生长环境下，如营养、 酸碱度、温度和氧等条件下进行生长繁殖。 2、细菌的分离培养是根据细菌在固体 培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个 细胞繁殖而成的集合体。因此可通过调取单 菌落而获得一种纯培养。
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
3、在半固体培养基中的生长情况 （1）有鞭毛的细菌，由于能运动，在半 固体培养基内沿穿刺线弥漫生长，原来的 穿刺线不清。 （2）无鞭毛的细菌，因不能运动，接种 后仍沿穿刺线生长，穿刺线与周围界限清 晰。
细菌在半固体培养上的培养特征
abd 沿穿刺线生长
cef运动生长
三. 细菌在半固体培养基中的生长情况
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
培养细菌真菌的一般方法
培养细菌真菌的一般方法
培养细菌真菌是微生物学实验中的重要内容，正确的培养方法可以保证实验的
准确性和可靠性。
下面将介绍一般的培养方法，希望对大家有所帮助。
首先，准备培养基。
培养基是培养细菌真菌的基础，不同的微生物需要不同的
培养基。
通常情况下，培养基由营养物质、水和琼脂组成。
在制备培养基的过程中，需要严格控制材料的质量和比例，以确保培养基的质量。
其次，接种培养基。
接种是将微生物悬浮液或培养基中的微生物接种到新的培
养基上的过程。
在接种过程中，需要注意无菌操作，避免外界的污染。
接种后，需要将培养皿或试管放入恒温培养箱中进行培养。
然后，控制培养条件。
不同的微生物对培养条件有不同的要求，包括温度、湿度、氧气含量等。
在培养的过程中，需要根据微生物的特性，合理地控制培养条件，以促进微生物的生长和繁殖。
最后，观察和记录。
在培养的过程中，需要不断观察微生物的生长情况，并及
时记录。
观察可以通过肉眼观察、显微镜观察等方式进行，记录要详细准确，包括生长速度、形态特征等。
总之，培养细菌真菌是微生物学实验中的重要内容，正确的培养方法可以保证
实验的准确性和可靠性。
希望大家在进行培养实验时，能够严格按照一般的培养方法进行操作，以取得理想的实验结果。
实验1-大肠杆菌的培养与分离
高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌器：1Kg/cm2， 121℃温度下维持15min 。
应用此法灭菌，一定要充分 排除灭菌器内原有的冷空气。 用于普通培养基、生理盐水、 耐热药品、手术敷料等。
手提式高压蒸汽灭菌器
（五）大肠杆菌分离后保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成 后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法
1.在培养后如何判断是否有杂菌污染?
（1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。 是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、 芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
（三）大肠杆菌的扩大培养
将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体 培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。
注意事项: 1.火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌,冷却后方能取菌; 3.取菌后封口膜和棉塞复原.
液体培养基） 培养皿 接种环 酒精棉 酒精灯 镊子、火柴、记号笔
二、大肠杆菌的培养和分离实验操作
（一）培养基的配制与灭菌
取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养 基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上 封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。
LB液体培养基——细菌的扩大培养 LB固体培养基——细菌的划线分离 封口膜：既通气 又不使菌进入
（四）大肠杆菌的划线分离
1、划线分离法
注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划 线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h
细菌的培养实验
细菌的培养实验细菌的培养实验是微生物学中的重要实验之一，它帮助我们了解细菌生长的条件以及它们对环境的适应能力。
在本实验中，我们将展示一种常用的培养细菌的方法——琼脂培养法。
实验材料和设备：1. 琼脂培养基2. 细菌液体培养物3. 灭菌的平板、试管、培养皿等4. 灭菌环、移液管、移液枪5. 实验室安全设备，如手套、防护眼镜实验步骤：1. 准备琼脂培养基：将适量的琼脂粉溶解在适量的蒸馏水中，加热煮沸使之完全溶解。
2. 蒸馏水的消毒处理：将蒸馏水倒入试管中，用自动高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
3. 准备试管：取3支无菌试管，用高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
4. 准备移液枪和平板：将移液枪头部进行高温高压灭菌处理，将平板放入高温高压灭菌器中进行无菌处理。
5. 接种细菌：将适量的细菌液体培养物取出并将其移液到无菌试管中，然后将试管倾斜，用灭菌环将液体均匀涂抹在平板上。
6. 培养细菌：将已涂抹细菌的平板放入恒温培养箱中，设定适合细菌生长的温度和时间，让细菌进行培养。
7. 观察结果：在培养时间结束后，取出培养好的平板，观察是否有细菌生长，并记录下细菌的数量和形态特征。
讨论和分析：在实验过程中，我们利用琼脂培养基提供了细菌生长所需的营养物质和适宜的环境条件。
而细菌的液体培养物则作为实验前期的来源，通过适量的接种和平板涂抹，将细菌均匀分布在平板上。
培养箱提供了适宜的温度和湿度条件，促使细菌的生长和繁殖。
实验结果的观察和记录是实验的重要一环，在观察时需要注意细菌的数量、颜色、形状和其他特征。
通过这些观察，我们可以了解到不同细菌对于不同培养条件的反应情况，比如某些细菌在一定条件下会形成菌落，而在其他条件下则可能无法生长。
通过这个实验，我们可以探索细菌生长的规律和影响因素。
并且，细菌的培养实验在医学、食品工业等领域具有广泛应用，它为我们研究和应对细菌感染提供了重要的手段。
培养微生物的方法步骤
培养微生物的方法步骤微生物培养所培养的微生物通常是病菌、细菌、放线菌、真菌等，属于生物培养的一种。
微生物培养步骤：1.配置不同浓度的营养液稀释液:取营养液1ml溶于9ml无菌水中,振荡5min配成10%的溶液.2.将容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰用吸管从此溶液中吸取1ml加入到装有9ml无菌水的试管中.以此类推制成1%,0.1%,0.01%等不同浓度的稀释液.3.将试管口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,左手拿试管,右手托培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰).将溶液倒入培养皿中,在各培养皿上标上浓度.4.将有细菌生长的样品容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,用接种环挑取菌落上的少量菌体加入10%的营养液中.把接种环放在酒精灯上灼烧灭菌,再次取样加入盛1%的营养液的培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰)中.重复这个操作,将各浓度的营养液接上种.5.轻轻摇匀接上种的培养皿,置于恒温箱内37摄氏度保存,3天后就有菌落出现.微生物培养的基本条件：1、影响微生物生长的因素微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到外界许多因素的影响。
影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下。
1) 营养物浓度细菌的生长率与营养物的浓度有关:μ=μmax C/(K+C) ，营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。
K值是细菌生长的很基本的特性常数。
它的数值很小，表明细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在自然界中，它们到处生长。
然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。
这是因为除了生长需要能量以外，细菌还需要能量来维持它的生存。
这种能量称为维持能。
另一方面，随着营养物浓度的增加，生长率愈接近最大值。
2)温度在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。
在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。
微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，代时最短。
超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。
细菌的培养方法
细菌的培养方法
细菌的培养是微生物学实验中非常重要的一环，正确的培养方法可以保证实验结果的准确性和可重复性。
下面将介绍几种常见的细菌培养方法。
首先，我们需要准备培养基。
培养基是供细菌生长和繁殖的营养物质，一般由碳源、氮源、磷源、微量元素和水组成。
常见的培养基有营养琼脂、LB琼脂、大肠杆菌选择性琼脂等。
在制备培养基时，需要按照配方将各种原料溶解于水中，然后加热灭菌，最后倒入培养皿中凝固成琼脂。
其次，我们需要进行细菌的接种。
接种是将细菌悬液均匀涂布在培养基表面的过程。
在接种前，需要使用无菌技术将培养皿打开，用酒精灯消毒接种环，然后取一定量的细菌悬液在琼脂表面均匀涂布。
接种后，需要立即将培养皿倒置放置，避免细菌在琼脂表面过度生长。
接下来是培养条件的控制。
细菌的生长需要适宜的温度、湿度和氧气条件。
一般来说，常见的培养温度为37摄氏度，但也有一些特殊菌株需要在低温或高温下培养。
在培养过程中，需要保持培养皿的湿润，避免琼脂干燥。
另外，一些厌氧菌需要在无氧条件下培养，因此需要使用密封培养瓶或培养皿。
最后是细菌的观察和分离。
在培养一定时间后，我们可以观察培养皿上的细菌生长情况，包括菌落的形态、颜色和大小。
如果需要分离不同的细菌菌株，可以使用无菌技术在培养皿上进行单菌落的分离，然后进行进一步的培养和鉴定。
细菌的培养方法虽然看似简单，但在实际操作中需要严格控制各项条件，才能获得理想的结果。
希望以上介绍的方法能对大家有所帮助，也希望大家在实验操作中能够严格遵守操作规程，保证实验的准确性和安全性。
试验1大肠杆菌的培养与分离
.实验1：大肠杆菌的培养和分离一、教学要求二、基本内容1．培养基的种类和化学成份培养基的种类有很多划分标准，按物理性质分：固体培养基和液体培养基（加入琼脂多少）。
液体培养基用于扩大培养和工业生产，固体培养基用于菌种分离，鉴定，计数（菌落数量）。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
按照微生物的同化作用类型是自养还是异养，碳源不同，自养微生物为无机碳源，如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐，异养微生物为有机碳源，如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。
2．常见微生物类群原核生物（如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等）、原生生物（草履虫、变形虫等）、真菌（酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。
细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。
以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。
3．无菌技术对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
灭菌方法：。
灼烧灭菌法①接种环、接种针、试管口等使用..②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱。
③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
4．培养基的配制原则目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。
pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
实验1-大肠杆菌的培养和分离
Step5：菌种的斜面保存
斜面培养基
⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养 基上，37℃培养24 h后，置于4℃冰箱中保存。
试管斜面培养基的制作
方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌 后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。
平板划线分离法
①灼烧接种环
外焰
先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。
（2）获得纯净微生物培养物的关键是 防止被杂菌污染 ，为 此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培 养器皿和培养基一般采用高压蒸汽灭菌 法灭菌，接种环采用 灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上 进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和 消毒外，还必须 保证操作过程在酒精 以防止空气中的杂 灯火焰旁进行 菌污染。 （3）大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种 后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12 h。菌种的分离 一般在固体培养基上采用划线分离 法，并将培养皿以 倒置 状 态放置于适宜温度的恒温箱中，培养12～24 h 后， 将单菌落用接 ，接种于固体斜面培养基上，37℃培养 种环取出 24 h后，得到的纯化菌种在 4℃ 条件下保存。
枪头
棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋
不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。
酒精灯和酒精棉球
灭菌：杀死所有微生物。 消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
超净工作台
防止杂菌污染
酒精灯火焰附近旁进行
灼烧灭菌 ①打开紫外灯和过滤风，灭菌30 min。 ②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。
超净台
②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃） 倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待 凝固后形成平面。
实验1：大肠杆菌的培养和分离
04 实验结果与分析
大肠杆菌的培养结果
培养基上生长情况
大肠杆菌在培养基上生长良好，菌落 形态呈圆形、湿润、表面光滑，颜色 为乳白色。
生化反应
大肠杆菌能够发酵乳糖产酸，在生化 反应中表现出特定的特征性变化。
菌落计数
通过菌落计数，我们得到了大肠杆菌 的菌落数量，菌落数量在适宜的条件 下随着培养时间的延长而增加。
详细描述
将接种后的培养皿放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。在培养过程中，要定期观察大肠杆 菌的生长情况，记录生长曲线，以便后续分析。培养过程中要保持培养皿的清洁，防止杂菌污染。
大肠杆菌的分离
总结词
分离是通过一定的技术手段将目标微生物从混合菌群中单独 获取的过程。
详细描述
在大肠杆菌培养完成后，采用涂布法或划线法将菌落分离， 获得单菌落。分离过程中要保证无菌操作，避免交叉污染。 分离得到的单菌落可用于后续的鉴定和实验研究。
了解大肠杆菌的生物学特性
了解大肠杆菌的形态、染色、生化反 应等生物学特性，能够通过实验结果 判断所分离的菌株是否为大肠杆菌。
了解大肠杆菌的致病性，包括其产生 的毒素、侵袭力、抵抗力等方面的特 性，为后续实验和研究提供基础。
掌握微生物实验的基本操作
掌握微生物实验的基本操作，包括无菌操作、显微镜使用、细菌计数、菌种保存 等，能够独立完成微生物实验。
条件致病菌
在特定条件下，大肠杆菌可引 起肠道外感染，如败血症、新
生儿脑膜炎等。
抗原结构
大肠杆菌具有O抗原、H抗原 和K抗原，可用于血清学分型
。
大肠杆菌的培养基
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基础培养基
如肉汤培养基、营养琼脂 培养基等，提供大肠杆菌 生长所需的基本营养成分。
细菌培养的常用方法
细菌培养的常用方法细菌培养是在实验室中培养和繁殖细菌的一种常用方法。
通过细菌培养，科研人员能够获取大量的细菌菌株，用于实验研究、药物研发和一些工业生产等领域。
本文将介绍细菌培养的常用方法及其步骤。
首先，细菌培养需要准备培养基。
培养基通常包含了有机氮源、有机碳源、矿盐和生长因子等成分。
这些成分能够提供细菌所需的营养物质，促进其生长和繁殖。
根据不同菌株的需求，培养基的配方会有所调整。
在准备好培养基后，接下来需要进行灭菌处理。
灭菌的目的是杀死培养基中的其他微生物，确保培养的细菌为单一纯种。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、压力灭菌和化学灭菌等。
高温灭菌一般在121摄氏度下进行15-20分钟，可有效杀死大多数常见的细菌和真菌。
当培养基完成灭菌后，可以开始接种细菌。
接种方式主要有平板法、液体培养法和固体培养法。
平板法是将培养基倒在平板上，待其凝固后，用接种环将细菌接种在培养基表面。
液体培养法是将培养基倒入培养瓶中，通过搅拌或震动方式将细菌均匀分散在培养基中。
固体培养法是将培养基加入试管或培养皿中，待其凝固后，将细菌接种在培养基表面。
接种完成后，需将培养基置于恰当的培养环境中，以促进细菌的生长。
培养环境通常包括温度、湿度、光照和氧气等因素。
不同的菌株对这些环境要求各不相同，因此在培养细菌前需要了解其生物学特性。
细菌培养的最后一步是培养基的保存与维护。
培养基的保存方式包括冷冻保存和冷冻干燥保存等。
冷冻保存是将培养基和细菌储存在低温下，常见的储存温度为-80摄氏度。
冷冻干燥保存是将培养基冷冻后，通过真空脱水将水分去除，以延长培养基的保存时间。
除了上述常用的细菌培养方法，还存在一些特殊的培养技术，如微生物筛选技术和纯化技术等。
微生物筛选技术是利用高通量筛选系统，对微生物进行快速筛选和筛选结果分析。
纯化技术是对细菌进行纯化和鉴定，以获得纯种菌株。
细菌培养的常用方法不仅在科学研究中起着重要的作用，也在医学、食品工业和环境监测等领域有着广泛的应用。
实验1_细菌的培养方法
实验1_细菌的培养方法实验原理：细菌的培养是微生物实验室中最基本的实验之一。
细菌的培养一般用于检测食品、水、空气等样品中的微生物污染，同时也可以用于研究细菌的形态、生长、代谢以及对不同环境因素的响应等。
在进行细菌培养的过程中，需要注意无菌操作，以免造成交叉污染。
细菌培养的基本条件包括生长温度、生长时间、培养基成分、pH值等。
光照条件和氧气浓度也会影响不同细菌的生长。
一般情况下，常用的细菌培养基包括富养基和贫养基，分别用于不同种类的细菌的培养。
实验材料：1. 常见的两种培养基：营养琼脂液和LB培养基2. 培养皿：琼脂培养皿、LB平板（含琼脂）、枯草芽孢液培养皿3. 细菌菌株：彩虹菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌实验步骤：1. 实验前洗手，穿好实验服，进行无菌操作前进行消毒处理。
2. 取一根消毒好的骨针，在火炉上消过毒后，捅入细菌液中，将细菌涂在琼脂平板上，压平，记住顶的顺序和位置，避免重叠。
3. 将琼脂平板放入恒温箱中，通常37℃下培养。
4. 24小时后，观察菌落生长情况。
5. 对得到的细菌菌落进行形态学观察。
6. 将枯草芽孢杆菌转种到含有枯草芽孢液的培养皿中，培养在恒温箱中24小时。
7. 对得到的芽孢杆菌孢子进行形态学观察。
实验结果：1. 彩虹菌、大肠杆菌在琼脂平板上生长并形成菌落。
2. 根据不同细菌的形态和特点进行观察和鉴定，验证其真实性。
3. 枯草芽孢杆菌在含有枯草芽孢液的培养皿中孢子形成并呈现草堆状。
实验小结：1. 细菌培养是微生物实验室中非常基本的实验，对于细菌的形态、生长、代谢等都有很大的意义。
2. 细菌的培养必须要做好无菌操作，以免发生交叉污染。
3. 常用的培养基有富养基和贫养基，通常在37℃下培养24小时。
4. 在观察细菌的生长情况时，需要仔细观察菌落的生长状态和形状，结合细菌的形态学和生理生化特征进行判断和鉴定。
细菌的培养实验报告原理
细菌的培养实验报告原理
基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基：
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：
主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
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细菌的人工培养
细菌和其它生物一样，大多数属异养菌，必须从 周围环境中摄取营养，进行新陈代谢及生长繁殖等 生命活动。
人为地提供细菌生长繁殖所需的营养物质（适宜 的培养基）和创造适合细菌生长繁殖的有利条件如 温度、湿度、气体等，能使细菌在体外迅速生长繁 殖。
⑵ 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）
教学目标
➢ 了解： 培养基的类型与制备方法；细菌菌落的观察 常用的细菌接种方法和各种细菌的培养方法
➢ 掌握： 1. 细菌的液体、半固体、固体接种 2. 空气中细菌的检查方法——沉降法 3. 呼吸道细菌的检查法——咳碟法 4. 随身物品的细菌检查方法
实验室规则
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
二、适宜的温度
嗜冷菌（10-20℃） 嗜温菌（20-40℃）：绝大多数病原菌 嗜热菌（50-60℃）
三、适宜的酸碱度（pH）
• 嗜中性菌（pH 6.0-8.0） • 嗜酸性菌（pH < 5.5） • 嗜碱性菌（pH > 8.5）
多数病原菌最适酸碱度为pH 7.2-7.6 – 霍乱弧菌耐碱(pH 8.4-9.2) – 结核分枝杆菌耐酸(pH 6.5-6.8)
6. 如果发生实验室不慎，吸入菌液、划破手指、培养物破 损传染物外溢，应及时报告，及时处理。
7. 实验过程中应注意节约实验材料、爱护仪器，损坏器材 要及时报告、登记、并作相应的赔偿。实验室内物品， 未经老师许可，严禁带出室外。
8. 每次实验之后，所用物品放回原处。需要培养或消毒处理 的物品及时送到指定地点，用过的涂菌载玻片放入小桶 内，不得乱丢乱放。
细菌生长繁殖的条件：
1．充足的营养物质 2．适宜的温度 3．合适的酸碱度（pH） 4．必要的气体环境
一、细菌生长繁殖所需营养
1．水 营养的吸收与代谢均需有水才能进行。 2．碳源 病原菌主要从糖类获得碳及能量。 3．氮源 其主要功能是作为菌体成分的原料。 4．无机盐
常用元素如磷、硫、钾、钠、镁、钙、铁等 5．生长因子
细菌的分离接种方法
1. 琼脂平板划线分离接种法（固体培养基） 划线法
2. 斜面培养基接种法（蛇形划线法） 3. 半固体培养基接种法（穿刺法） 4. 液体培养基接种法（乳磨法）
接种时要注意无菌操作，避免污染，也要防止细菌外 溢污染环境。
固体平板培养基的划线接种
三线法
划线接种手法
平板划线接种的结果——菌落观察
2）营养培养基
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、酵母浸膏等。
3）鉴别培养基
在培养基中加入一定底物和指示剂，而不同种类的细 菌由于分解代谢及合成代谢能力的不同，会产生不同的特 征性培养结果，从而将不同细菌区分开来的培养基。
4）选择培养基
在培养基中加入某些特殊的营养物质或化学物质，使之 能抑制一些细菌生长，而有利于另一些细菌生长，从而将 后者从混杂的细菌群体中分离出来的培养基。
某些细菌生长所必需而又不能自身合成的有机 化合物。
培养基的制备
（一）培养基（culture medium）
由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使 用的混合营养物制品。
1、培养基的类型及应用
（1）按用途划分 1）基础培养基
含多数细菌生长所需要的最基本营养，能满足一般 细菌生长繁殖的营养需要，如肉汤（含有水、牛肉 膏、蛋白胨、氯化钠等原料）。
微生物学实验的对象多为病原微生物，如有不慎就 会发生实验室感染。
1. 穿白大褂，尽量少带物件进实验室。 2. 严格按老师及教材要求进行实验，以获得正确结果。 3. 书、笔记本、笔等文具放入实验台抽屉里。 4. 严禁在实验室喝水，吃东西，用嘴咬笔或标签，不
要用手抚摸头、脸等部位，以免发生感染。
5. 实验室不得高声喧哗，保持安静，守秩序，不要随便走 动，以免影响他人实验和安全。
某些细菌（脑膜炎双球菌、淋球双球菌、布氏杆菌 等少数细菌）的生长，需在孵育时加入5-10% CO2
烛缸法 二氧化碳孵箱
操作内容
1. 细菌的接种法：液体、半固体、固体培养基 2. 空气中细菌的检查（沉降法，血平板） 3. 呼吸道细菌的检查（咳碟培养，血平板） 4. 随身物品细菌检查（普通平板）
操作一 细菌的接种法
微生物学实验一
细菌的培养方法
（综合性实验）
实验内容
1. 实验室规则 2．录相：细菌标本的采集和细菌的接种方法 3．操作：
⑴ 细菌的接种法 （液体、半固体、固体 1套/3人） ⑵ 空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人） ⑶ 呼吸道细菌的检查 （咳碟培养 血平板 1块/3人） ⑷ 随身物品的细菌检查 （普通平板 1块/3人） 4. 材料： ⑴ 大肠杆菌斜面培养物 （1支/6人）
四、适宜的气体环境
氧和二氧化碳
1、按细菌对氧的需求可分为四种类型： 专性需氧菌（obligate aerobe） 微需氧菌（microaerophilic bacterium） 兼性厌氧菌（facultative anaerobe） 专性厌氧菌（obligate anaerobe）
示教
2、细菌的二氧化碳培养法
1．固体平板培养结果观察 单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、
繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定 形态结构的细菌集团，称为菌落（colony）。
SS琼脂培养基（Salmonella-Shigella agar）
大肠埃希菌
沙门菌
志贺菌
5）厌氧培养基
用于培养厌氧性细菌的培养基，此时需要在培养 基中加入还原剂降低培养基的氧化还原势，厌氧 菌才能生长发育。
疱肉培养基 ——不饱和脂肪酸和谷胱甘肽
（2）根据物理状态分
➢ 液体培养基：增菌 ➢ 固体培养基（琼脂浓度为1.5％）：分离培养 ➢ 半固体培养基（琼脂浓度为0.5%）：动力检查
细菌的分离接种是人工分离培养细菌的重要步 骤，是微生物学的基本技术之一，其目的是从含多 种细菌的患者标本中分离出单一病原菌，从而可以 进行感染性疾病的病原学诊断。
同时，在细菌学的研究，生物制品如疫苗、类 毒素、抗毒素和免疫血清等的制备，基因工程及工 农业生产等方面，人工培养分离细菌，都有着极为 重要的意义。