高效液相色谱仪 液相色谱仪检定规程

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高效液相色谱法检验操作规程

高效液相色谱法检验操作规程

高效液相色谱法检验操作规程一、范围:本标准规定了使用高效液相色谱法的检验方法和操作要求;适用于本公司检品采用高效液相色谱法的质量检测。

二、引用标准:中华人民共和国药典(2000年版二部附录)三、仪器的组成和一般要求:1、仪器的组成:高压输液泵;色谱柱;检测器;积分仪;打印机。

2、对仪器的一般要求:所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。

常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学健合硅胶,后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基硅烷键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用。

离子交换填充剂用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。

除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时,所用流动相应符合紫外分光光度法(药典2000年版附录IV A)项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外,其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变,以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2.1 紫外分光光度法项下对溶剂的要求:用1cm石英吸收池盛溶剂,以空气为空白(即空白光路中不置任何物质),测定其吸收度。

溶剂和吸收池所吸收度,在220~240nm范围内不得超过0.40,在241~250nm范围内不得超过0.20,在251~300nm范围内不得超过0.10,在300nm以上时不得超过0.05。

四、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求,或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。

1、色谱柱的理论板数(n)在先定的条件下,注入供试品溶液或品种项下规定的内标物质溶液,记录色谱图,量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R(以分钟或长度计,下同,但应取相同单位)和半峰高宽(W h/2),按n=5.54(t R/W h/2)2计算色谱柱的理论板数。

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程1 前言本规程参照国际法法制计量组织(OIML)技术工作导则第二部分:OIML国际建议和国际文件起草与表述规则、JJG1002-84国家计量检定规程编写规则和GB3100-93国际单位制及其应用编写的。

2 范围适用于新安装、使用中和修理后的具有紫外-可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪(以下简称仪器)的检定。

2.1 原理本仪器用于分离和测定有机混合物中的化学成分。

样品以溶液状态进入色谱柱后,在流动相的推动下,逐步被分离成单个的组分。

然后依次通过色谱检测器进行检测。

根据各组分的保留时间和响应峰值而进行组分的定性和定量分析。

2(2 构成图1 元素分析仪构成方框图3 计量单位参见GB3100-93国际单位制及其应用中的有关条文。

4 计量要求其计量特性和指标应符合表1中的规定。

5 技术要求5(1外观要求5(1(1仪器应有下列标志:仪器名称、型号、制造厂名、出厂仪器系列编号、产品合格证书及操作使用说明书,仪器外表完好,面板字迹清晰。

5(1(2 仪器整机部件:调节旋纽、按键、开关及指示灯应能正常工作,电缆线插件应接触良好。

5(2 安装条件5(2(1 仪器应平稳地安装在牢固的操作台上,电缆接插件紧密配合,接地良好。

5(2(2 高压气瓶与仪器连接应使用专用管道和接头。

编特性项目紫外可见光检测器荧光检测器折光率检测器号1 泵流量设定值误差 Ss??(2,5)%2 ,泵流量稳定性误差 S??(1,2)% R3 柱恒温箱温度 ?T<?2? ;T?1? C-4-4-74 ,基线噪声??5×10AU ??5×10AU ??5×10AIU-3-3-65 ,基线漂移??5×10AU/h ??5×10AU/h ??5×10AU/h-8-6 灵敏度 ?10g/ml ?104g/ml-8-10-67 ,最小检测量?5×10g/ml ?5×10g/ml ?5×10g/ml38 线性范围 ?109 ,定性重复性 RSD?1.5%10 ,定量重复性 RSD?3%,带星号的项目为必须鉴定的项目5(3 检定环境5(3(1室内环境:应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,室内排风良好,且不应放置与测定无关的其他杂物。

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程一、通用技术要求1.1仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌,国产仪器应有制造计量器具许可证MC 标志。

1.2仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密,各开关、旋钮、按键等功能正常,指示灯灵敏,显示器清晰。

二、计量性能要求1.1输液系统1.1.1输液管路接口紧密牢固,在规定的压力范围内无泄漏。

1.1.2流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr应符合表1的要求。

1.1.3梯度误差Gc:不超过±3%。

1.2柱温箱1.2.1柱箱温度设定值误差△T s:不超过±2℃。

1.2.2柱温稳定性Tc:不超过1℃。

1.3检测器液相色谱仪检测器的主要技术指标见表2。

表1流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr的要求表2液相色谱仪检测器的主要技术1.4整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示。

1.4.1定性测量重复性(6次测量)RSD6:不超过1.5%。

1.4.2定量测量重复性(6次测量)RSD6: 不超过3.0%。

三、检定方法1、通用技术要求的检查按第1.1、1.2条的要求,目视、手动检查。

2、输液系统的检定a)泵耐压检定将仪器各部分连接好,以100%甲醇为流动相,流量为1mL/min,按说明书启动仪器,压力平稳后保持10 min,用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱,堵住泵出口端(压力传感器以下),使压力达到最大允许值的90%,保持5 min无泄漏。

b)泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差Sr的检定按表1的要求设定流量,启动仪器,压力稳定后,在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,收集表1规定时间流出的流动相,在分析天平上称重,按式(1)、式(2计算)S s和S r。

S s=(F-F s)/F s×100% (1)mSr=(F max-F min)/ Fm×100% (2)3、基线噪声和基线漂移的检定选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0Ml/min,紫外检测器的波长选在254nm,检测灵敏度调到最灵敏档,记录纸速调至5—10mm/min 。

MC00906D高效液相色谱仪检定规程

MC00906D高效液相色谱仪检定规程

标准操作程序STANDARD OPERA TING PROCEDURE目的:建立高效液相色谱仪检定规程,确保检验数据的准确性。

范围:本规程适用于配有紫外-可见光检测器、二级管阵列检测器、荧光检测器、示差折光率检测器和蒸发光散射检测器的液相色谱仪的首次检定、后续检定和使用中检查。

责任者:计量主管、QC主任、化验员。

程序:1、为了证明仪器在日常使用过程中,仪器本身或使用环境的变化(有意的和无意的)没有影响仪器的整体性能,确保分析数据的可靠性。

应对HPLC进行定期检定。

2、本检定规程参照国家技术监督局JJG705-2014“液相色谱仪检定规程”以及USP<1058>“分析仪器确认”制订。

3、检定项目与要求3.1计量器具控制包括:首次检定、后续检定和使用中检验。

3.1.检定条件3.1.1.环境条件3.1.1.1.检定室应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,排风良好。

3.1.1.2.仪器应平稳地放在工作台上,周围无强烈机械震动和电磁干扰源,仪器接地良好。

3.1.1.3.电源电压为(220±22)V,频率为(50±0.5)HZ。

3.1.2.检定设备3.1.2.1. 秒表:分度值不大于0.1s。

3.1.2.2. 分析天平: 最大称量不小于100g,最小分度值不大于1mg。

3.1.2.3. 数字温度计: 测量范围为0–100℃,最小分度不大于0.1℃。

3.1.2.4. 注射器:10µL和50µL各一支。

以上计量器具需经计量检定合格。

3.1.2.5. 10ml注射器一支。

3.1.2.6. 游标卡尺:15cm/0.02mm。

3.1.2.7. 容量瓶:50ml,10个。

3.1.3. 标准物质1x10-4g/ml,1x10-7g/mL的萘/甲醇溶液紫外波长标准溶液。

3.1.4. 其他要求3.1.4.1. 检定用试剂:HPLC用甲醇、纯水,分析纯的丙酮和异丙醇等。

3.1.4.2. 其他玻璃器皿等4、检定程序4.1. 仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌,国产仪器应有制造计量器具许可证标志。

高效液相色谱仪校准规程

高效液相色谱仪校准规程

高效液相色谱仪校准规程发布时间:2016/4/23 14:38:32浏览次数:1162 (来源:东莞市世通仪器检测服务有限公司)高效液相色谱仪校准规程1.适用范围适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的校准。

2.职责检验员:严格按照校准规程进行周期校准。

QC主管:监督检查校准规程执行情况。

3.校准项目和技术要求3.1.输液系统3.1.1.泵流量设定值误差:Ss<±2%;流量稳定性误差:<±2%3.1.2.定性测量重复性误差(5次定量管进样):RSD≤1.5%3.1.3.定量测量重复性误差(5次定量管进样):RSD≤1.5%3.2.紫外检测器性能3.2.1.可调波长紫外—可见光检测器波长示值误差:<±2nm;重复性误差:<±1nm3.2.2.基线漂移:≤5×10-3(AU/h);基线噪声:≤5×10-4(AU)3.2.3.最小校准浓度(静态):4×10-8g/ml(萘的甲醇溶液)4.校准条件4.1.环境温度为10~30℃,8小时内温度波动不超过±3℃,相对湿度低于65%。

4.2.电源电压:220±22V,电源频率:50±0.5Hz。

4.3.校准设备4.3.1.秒表:分度值小于0.1s。

4.3.2.分析天平:最大称量200g,最小分度值0.1mg。

4.3.3.容量瓶4.3.4.微量注射器4.3.5.标准物质和试剂5.校准方法5.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R的校准。

将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为液动相,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集10~25分钟,称重,按下式计算Ss和S R。

Ss=(Fm—Fs)/Fs×100%S R=(Fmax—Fmin)/F×100%式中Ss为流量设定值误差(%);Fm=(W2—W1)ρt·t为流量实测值;W2:容量瓶+流动相的重量(g);W1:容量瓶的重量(g);Fs:流量设定值(ml/min);ρt:实验温度下流动相的密度(g/cm3);t:收集流动相的时间(min);S R:流量稳定性误差(%);Fmax:同一组测量中流量最大值(ml/min);Fmin:同一组测量中流量最小值(ml/min);F:同一组测量中的算术平均值(ml/min)。

高效液相色谱仪检定操作规程

高效液相色谱仪检定操作规程

目的:本规程规定了高效液相色谱仪检定操作规程责任:由工程部制订、审核,质量保证部批准并颁发,工程部计量室执行。

范围:本规程适用于带有紫外检测器的高效液相色谱仪。

定义:无相关定义。

内容:1.检定项目及技术要求2. 检定条件2.1环境条件:仪器应放置在平稳的工作台上,室内温度15-30℃,相对湿度20%~85%RH范围内。

2.2 检定设备:秒表:分度值小于0.1秒分析天平:最大称量不小于100g,最小分度不大于1mg.数显测温仪:测量范围0~100℃,最小分度不大于0.1℃。

标准物质:萘/甲醇溶液、紫外溶液标准物质3. 检定方法3.1泵流量设定值误差、流量稳定性误差的检定将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联好,以甲醇为流动相,设定流量,待流速稳定后,在流动相排口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确收集相应时间,计算泵流量设宴定值误差S S和流量稳定性误差,结果按下式式中:F m—F m= (W2-W1)/(ρt·t),为流量测定值(ml/min)—流量设定值误差(%)SSF S —流量设定值(ml/min)W1 —容量瓶重量(g)W2 —容量瓶+流动相的重量(g)ρ—实验温度下流动相的密度(g/cm3)tt —收集流动相的时间(min)S R —流量稳定性误差(%)F max—同一组测量中流量最大值(ml/min)F min—同一组测量中流量最小值(ml/min)F—同一组测量值的算术平均值(ml/min)m3.2柱温箱温度控制系统的检定柱温箱温度的设定值误差ΔT与控温稳定性误差T C选择日常使用的单一温度进行检定,待指示温度稳定后,每隔10分钟记录一次,共计7次,求出算术平均值,设定值与平均值之差为ΔT,7次测量中最大与最小值之差为控温稳定性误差T C。

3.3检测器性能的检定检测波长为254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,待基线稳定后,记录基线30-40分钟,计算基线漂移和噪声波长为254nm,在相同波长下注入10~20uL 1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液,记录色谱图,由色谱峰高和基线噪声峰-峰高,按下式计算最小检测浓度C L(按20uL进样量计算)。

高效液相色谱仪检定规程

高效液相色谱仪检定规程

高效液相色谱仪检定规程JJG 024--19961前言本规程参照国际法法制计量组织(OIML )技术工作导则第二部分:OIML国际建议和国际文件起草与表述规则、JJG1002-84国家计量检定规程编写规则和GB3100-93国际单位制及其应用编写的。

2范围适用于新安装、使用中和修理后的具有紫外-可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪(以下简称仪器)的检定。

2.1原理本仪器用于分离和测定有机混合物中的化学成分。

样品以溶液状态进入色谱柱后,在流动相的推动下,逐步被分离成单个的组分。

然后依次通过色谱检测器进行检测。

根据各组分的保留时间和响应峰值而进行组分的定性和定量分析。

2. 2构成输液做一进样罪充分离薇一-检器疏器打F卩绘图机——记求仪或色诸埼图1元素分析仪构成方框图3计量单位参见GB3100-93国际单位制及其应用中的有关条文。

4计量要求其计量特性和指标应符合表1中的规定。

5技术要求5. 1外观要求5. 1.1仪器应有下列标志:仪器名称、型号、制造厂名、出厂仪器系列编号、产品合格证书及操作使用说明书,仪器外表完好,面板字迹清晰。

5. 1 . 2仪器整机部件:调节旋纽、按键、开关及指示灯应能正常工作,电缆线插件应接触良好。

5. 2安装条件5. 2 . 1仪器应平稳地安装在牢固的操作台上,电缆接插件紧密配合,接地良好。

5. 2 . 2高压气瓶与仪器连接应使用专用管道和接头。

*带星号的项目为必须鉴定的项目5. 3检定环境5. 3. 1室内环境:应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,室内排风良好,且不应放置与测定无关的其他杂物。

5. 3. 2室内温度:10 C ~30C(温度波动应不大于出C /操作期间;使用折射率检测器时应不大于2C)。

5. 3. 3室内相对湿度: < 85%5. 3. 4 电源:电压(220 ±2)V;频率:(50 ±).5)Hz。

5. 4检定设备和试剂5. 4. 1分析天平:最大称量100g,最小分刻度O.lmg,或其它微量自动电子天平。

高效液相色谱仪校验规程完整

高效液相色谱仪校验规程完整

标准文件1、目的Objective:建立高效液相色谱仪内部校验规程,确保校验工作规范、顺利进行。

2、范围Scope :本规程适用于本公司使用的高效液相色谱仪(紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器)的校验。

3、职责Responsibilities:3.1 培训职责:本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。

3.2 QC:负责制定本规程,并对本规程的实施负责。

3.3 QA:负责监督和检查本规程的实施。

4、定义Definition:无。

5、程序Procedures:5.1 依据国家计量校验规程JJG 705-2002液相色谱仪,安捷伦液相说明书,岛津液相说明书。

5.2 备件及材料5.2.1水:HPLC级水。

5.2.2化学试剂:乙腈(HPLC)、丙酮(分析纯)。

5.2.3咖啡因标准品。

5.2.4咖啡因标样。

0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml 咖啡因水溶液。

5.2.5色谱柱:4.6mm×250mm,C18,5µm。

5.2.6 容量瓶:10ml。

5.2.7玻璃注射器。

5.2.8 限流阻尼管。

5.2.9 分析天平。

5.2.10 秒表。

5.2.11 热电偶5.3 校验项目及技术指标5.3.1泵性能的测试5.3.2柱温箱温度稳定性测试*备注:如药典专论规定的特定柱温,不在以上温度范围之内,则对分析该品种的仪器增加该温度点校验,校验项目和可接受指标相同。

5.3.3 检测器性能测试5.3.4进样器性能测试5.3.5梯度组成的测试*注:*表示该项目的内部校验取决于仪器的配置,有该配置则为必检项目。

5.4 校验方法5.4.1校验通则5.4.1.1 HPLC的内部校验由仪器所属部门经培训的使用者按本规程进行校验,其校验项目依仪器配置和使用范围而定。

5.4.1.2 政府部门每一年对HPLC进行校验,每六个月内部对HPLC进行一次校验;仪器配置的关键部件大修或更换后,可参考本规程对该部件相关的项目进行校验,以对仪器的性能进行确认。

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定一、简介液相色谱仪是一类利用混合物在固定相和流动相间分配比的差异,对混合物进行分离、分析的仪器。

可用于分离分析占有机物总数近80%的高沸点、热不稳定、高分子化合物,其中高效液相色谱仪更具有高速、高效、高选择性、高灵敏度等优点,现已被广泛应用于实验室、化学化工、生物、医药学、环境、食品等领域。

JJG705-2014液相色谱仪检定规程(以下简称新规程)由国家质量监督检验检疫总局于2014年2月14日颁布,并于同年8月14日正式实施,用以替代JJG705-2002液相色谱仪检定规程。

(一)工作原理液相色谱仪由输液系统(包括输液泵、流动相储器和梯度仪)、进样系统、分离系统(包括色谱柱和柱恒温器等)、检测系统和数据处理系统等组成。

流动相被高压泵打入系统中,混合样品溶液由进样系统注入,跟随流动相流入色谱柱。

由于混合样品中不同组分在固定相和流动相间的吸附与分配系数不同而产生不同的运动速度,经多次吸附-解析过程逐步分离,由流动相带入检测器中,并转换成电信号输送至记录仪,以色谱图形式输出,进行定性或定量分析。

(二)检定方法新规程在后续检定中主要考察仪器以下几项技术指标。

1泵流量稳定性SR将仪器各部分连接好,流动相用100%甲醇,通过工作站或仪器操作面板设置检定流量(如表1所示,选择高、中、低三档流量逐一测定),启动仪器,待压力稳定后,在流动相出口处用容量瓶(空瓶质量为W1)收集流出液,并同时用秒表计时t。

在经检定合格的分析天平上称重,质量为W2,按式(2)、(3)计算实际所测流量值Fm,重复三次,得三次实测流量平均值,按式(1)计算SR。

SR为三档流量中最大值。

其中ρt为经温度校正后的甲醇密度,T为测定流速时温度。

表1泵流量设定值和收集时间流量设定值(mL/min)收集时间(t/min)0.2~0.5 10~200.6~1.0 5~10>1.0 52基线噪声和漂移选用100%甲醇为流动相,流速定为1.0mL/min,C18色谱柱,开启仪器,基线稳定后记录30min,读取瞬时最大基线峰-峰高值,再乘以检测器衰减倍数得到基线噪声(Nd),30min内基线偏离起始点的最大值为基线漂移,均用仪器自身物理量表示。

【精品文档】液相色谱仪(UV)检定操作规程

【精品文档】液相色谱仪(UV)检定操作规程

10min,计算基线噪声。
记录基线 60min,计算基线漂移。
3.4.3. 结果计算:
Nd=KB 式中:
Nd--检测器基线噪声; K--衰减倍数;
B--测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度,AU
基线漂移用 1h 内基线偏离原点的值(AU/h)表示。
3.4.4. 结果判断: 基线漂移≤5×10-3(Au/h)
1.3. 仪器操作及环境条件:应符合相应仪器的操作及维护规程(SOP)。
2. 检定项目和技术要求
2.1. 泵流量设定值误差应 Ss≤±2%;流量稳定性误差应 SR≤±2%。 2.2. 柱温箱温度设定值误差 ΔTs 应不超过±2.0℃;柱温箱温度稳定性应不超过 1.0℃。
2.3. 波长示值误差应<±2nm; 波长重复性应优于 1nm。
3.1.3. 结果计算 按下列公式计算 SS 和 SR: Fm=(W2-W1)/(P.t) SS=(Fm-FS)/FS×100%
SR=(Fmax-F min)/F×100% W2 为容量瓶+流动相的重量(g) W1 为容量瓶的重量 P 为实验条件下的流动相密度(g/cm3) t 为收集流动相的时间(min)P Fm 流量实测值(m l/m in) FS 流量设定值 Fmin 同一组测量中流量最小值 Fmax 同一组测量中流量最大值 F 为同一组测量中流量的算术平均值
2.4. 定性测量重复性误差(5 次定量环进样)应 RSD≤1.5%。
2.5. 定量测量重复性误差(5 次定量环进样)应 RSD≤1.5%。
2.6. 基线漂移应≤5×10-3(Au/h),基线噪声应≤5×10-4Au。
2.7. 最小检测浓度应不超过 4×10-8g/ml(萘的甲醇溶液)。
2.8. 梯度误差 Gc 应不超过±3%(无梯度装置不进行此项检定)。

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程(关于液相色谱仪的检定都在这了)液相色谱仪是一类利用混合物在固定相和流动相间分配比的差异,对混合物进行分离、分析的仪器。

可用于分离分析占有机物总数近80%的高沸点、热不稳定、高分子化合物,其中高效液相色谱仪更具有高速、高效、高选择性、高灵敏度等优点,现已被广泛应用于实验室、化学化工、生物、医药学、环境、食品等领域。

JJG705-2014液相色谱仪检定规程(以下简称新规程)由国家质量监督检验检疫总局于2014年2月14日颁布,并于同年8月14日正式实施,用以替代JJG705-2002液相色谱仪检定规程。

工作原理液相色谱仪由输液系统(包括输液泵、流动相储器和梯度仪)、进样系统、分离系统(包括色谱柱和柱恒温器等)、检测系统和数据处理系统等组成。

流动相被高压泵打入系统中,混合样品溶液由进样系统注入,跟随流动相流入色谱柱。

由于混合样品中不同组分在固定相和流动相间的吸附与分配系数不同而产生不同的运动速度,经多次吸附-解析过程逐步分离,由流动相带入检测器中,并转换成电信号输送至记录仪,以色谱图形式输出,进行定性或定量分析。

检定方法新规程在后续检定中主要考察仪器以下几项技术指标。

泵流量稳定性SR将仪器各部分连接好,流动相用100%甲醇,通过工作站或仪器操作面板设置检定流量(如表1所示,选择高、中、低三档流量逐一测定),启动仪器,待压力稳定后,在流动相出口处用容量瓶(空瓶质量为W1)收集流出液,并同时用秒表计时t。

在经检定合格的分析天平上称重,质量为W2,按式(2)、(3)计算实际所测流量值Fm,重复三次,得三次实测流量平均值,按式(1)计算SR。

SR为三档流量中最大值。

基线噪声和漂移选用100%甲醇为流动相,流速定为1.0m L/min,C18色谱柱,开启仪器,基线稳定后记录30min,读取瞬时最大基线峰-峰高值,再乘以检测器衰减倍数得到基线噪声(Nd),30min内基线偏离起始点的最大值为基线漂移,均用仪器自身物理量表示。

高效液相色谱仪 液相色谱仪检定规程

高效液相色谱仪 液相色谱仪检定规程

高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛。

此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。

操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。

今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。

一、使用试管的问题1、试管的洁净问题。

高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法,如果因使用不洁净的试管,便会影响试验结果的准确性。

例如,在用甲醇作溶剂来溶解样品时,所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的,因此,在每次进样时,都有一个保留时间固定的干扰峰存在,后经证实,此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生,换用玻璃试管后,干扰峰消除。

2、塑料试管的溶解问题。

近年来,一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便,但是,在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象,在利用此种试管提取样品时,有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象,这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号,从而干扰样品的测定。

这时,可用相同的实验条件先行试验一下,看看不含被抽提物时,提取液在检测器上能否产生干扰信号,如确有干扰信号存在,就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。

3、被测样品在试管壁上的吸附问题。

这个问题也应引起注意,否则也会影响测试结果的准确性,在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中,有些被测药物如阿米替林,丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上,因此,操作中宜采用聚丙烯管,为防止提取中吸附现象的发生,可采用0. 5%的已二胺已烷液做为提取剂,可有效地防止吸附。

二、操作进样阀的问题目前,在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀,其内部的六通阀结构使进样操作非常方便,但是,如果使用不当,也会带来问题。

例如,在高效液相色谱法的试验过程中,有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题,这主要是由于操作方法不当所引起,要想解决此类问题,需从以下几个方面入手。

液相色谱仪检定规程JJG705—2014解读

液相色谱仪检定规程JJG705—2014解读

He H a i h o n g , He V a j u a n
( C h e mi c a l Me t r o l o g y&An a l y t d e a l S c i e n c e D i v i s i o n , Na t i o n a l I n s i t t u t e o f Me t r o l o g y, Be i j i n g 1 0 0 0 2 9 , C h i n a )
比并说 明更改的缘 由, 对新规程进行详 细解读 , 重点介绍新规程变化 内容 , 最后介 绍增加 蒸发 光散射检 测器的缘 由及
指 标 。 新 规程 使 检 定 方 法更 合 理 , 提 高 了检 定效 率 , 满 足 了市 场 发展 的 需要 。
关键 词 液相 色谱 仪 ; 检 定规 程 ; 指标 ; 检 测 器
液 相 色 谱 仪检 定 规 程 J J G 7 0 5 — 2 0 1 4解 读 冉
何海红 , 何 雅 娟
( 中 国计 量 科 学研 究 院 化 学与 分 析研 究 所 , 北京 1 0 0 0 2 9 ' J
摘要
将 液相 色谱仪检 定规 程 J J G 7 0 5 - 2 0 1 4与 J J G 7 0 5 — 2 0 0 2在检定方 法、 检定条件、 技术指标 三个方面进 行对
中 图分 类 号 : 06 5 2
文献标识码 : A
文章 编 号 : 1 0 0 8 - - 6 1 4 5 ( 2 0  ̄ 4 ) 0 6 - 0 0 8 8 - 0 3
I n t e r p r e t a t i o n o f Ve r i i f c a t i o n Re g u l a t i o n o f Li q u i d Ch r o ma t o g r a p h J J G 7 0 5 - 2 0 1 4

高效液相色谱仪检验操作规程

高效液相色谱仪检验操作规程

⾼效液相⾊谱仪检验操作规程⽂件内容:1、⽬的 (2)2、范围 (2)3、职责 (2)4、正⽂ (2)5、相关⽂件与记录 (5)6、参考⽂献 (5)7、变更记载及原因 (5)发放范围:质保处、质控处⽂件复审:编审批过程:1、⽬的:建⽴⾼效液相⾊谱仪检验操作规程,以保证其检验⼯作完成。

2、范围:LC-20AT⾼效液相⾊谱仪。

3、职责:3.1化验员:负责按本操作规程使⽤该设备进⾏检验。

3.2化验设备员:按时维护设备,保证设备时刻处于完好状态。

3.3质控处处长:负责本规程的审核,及设备按时校验的⼯作。

4、正⽂:4.1泵流量准确度、流量稳定性检验4.1.1⽤纯⽔清洗各溶剂管路,以⽔为流动相,设定流量为0.5ml/min,启动泵。

4.1.2待压⼒稳定后,在流动相出⼝处⽤事先清洗称重的50ml容量瓶收集流动相,同时⽤秒表计时。

4.1.3收集10min后,称重。

同法重复三次。

4.1.4流速分别调⾄1.0ml/min和2.0ml/min,按2-3步骤操作。

4.1.5计算Ss=(Fm-Fs )/Fs*100%S R=(Fmax-Fmin)/Fm*100%Fi=( w2- w1)/(ρ*t)其中式中:Fi=( w2- w1)/(ρ*t)—,流量实测值,mL/minW2—容量瓶+流动相的质量,gW1—容量瓶的质量,gρ—实验室温度下流动相的密度,g/cm3t—收集流动相所⽤的时间,minFm—同⼀组测量的算数平均值,mL/minFs—流量设定值,mL/minFmin—同⼀组测量中流量最⼩值,mL/minFmax—同⼀组测量中流量最⼤值,mL/min标准:Ss≤±2.0% Sc≤±2.0%4.2柱温箱温度设定值误差△T s和控温稳定性T c的检定4.2.1将数字温度计探头固定在柱温箱内,选择25℃和45℃进⾏检定。

4.2.2按仪器SOP操作,通电升温,待温度稳定后,记下温度计读数并开始计时,以后每隔10min记录⼀次读数,共计7次,求出平均值。

高效液相色谱检查法规范操作规程

高效液相色谱检查法规范操作规程

高效液相色谱检查法标准操作规程、一、目的:建立高效液相色谱检查法标准操作规程,使其操作规范化。

二、依据:中国药典2010版二部附录28。

三、适用范围:适用于高效液相色谱检查法标准操作。

四、责任者:质量部检验人员。

五、正文:1.简述高效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液,作为流动相,用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高,分析速度快的特点。

高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定,特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有:硅胶,用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,其中最常用的是十八烷基硅烷(又称ODS)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱;离子交换填料,用于离子交换色谱;具一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。

高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。

检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器,其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱,可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

2高效液相色谱仪的使用要求2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程(JJG705-90)”的规定作定期检定,应符合规定。

2.2仪器各部件应能正常工作,管路为无死体积连结,流路中无堵塞或漏液,在设定的检测器灵敏度条件下,色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

3.操作前的准备3.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相,必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查,应符合要求;水应为新鲜制备的高纯水,可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。

高效液相色谱仪校验规程完整

高效液相色谱仪校验规程完整

⾼效液相⾊谱仪校验规程完整标准⽂件1、⽬的Objective:建⽴⾼效液相⾊谱仪内部校验规程,确保校验⼯作规范、顺利进⾏。

2、范围Scope :本规程适⽤于本公司使⽤的⾼效液相⾊谱仪(紫外-可见光检测器/⼆极管阵列检测器)的校验。

3、职责Responsibilities:3.1 培训职责:本⽂件起草⼈或审核⼈或批准⼈负责对质量管理部全体⼈员培训。

3.2 QC:负责制定本规程,并对本规程的实施负责。

3.3 QA:负责监督和检查本规程的实施。

4、定义Definition:⽆。

5、程序Procedures:5.1 依据国家计量校验规程JJG 705-2002液相⾊谱仪,安捷伦液相说明书,岛津液相说明书。

5.2 备件及材料5.2.1⽔:HPLC级⽔。

5.2.2化学试剂:⼄腈(HPLC)、丙酮(分析纯)。

5.2.3咖啡因标准品。

5.2.4咖啡因标样。

0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml 咖啡因⽔溶液。

5.2.5⾊谱柱:4.6mm×250mm,C18,5µm。

5.2.6 容量瓶:10ml。

5.2.7玻璃注射器。

5.2.8 限流阻尼管。

5.2.9 分析天平。

5.2.10 秒表。

5.2.11 热电偶5.3 校验项⽬及技术指标5.3.1泵性能的测试5.3.2柱温箱温度稳定性测试*备注:如药典专论规定的特定柱温,不在以上温度范围之内,则对分析该品种的仪器增加该温度点校验,校验项⽬和可接受指标相同。

5.3.3 检测器性能测试5.3.4进样器性能测试5.3.5梯度组成的测试*注:*表⽰该项⽬的内部校验取决于仪器的配置,有该配置则为必检项⽬。

5.4 校验⽅法 5.4.1校验通则5.4.1.1 HPLC 的内部校验由仪器所属部门经培训的使⽤者按本规程进⾏校验,其校验项⽬依仪器配置和使⽤范围⽽定。

高效液相色谱仪检定规程

高效液相色谱仪检定规程

文件制修订记录1.0适用范围适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的检定。

2.0职责检验员:严格按照检定规程进行周期检定。

QC主管:监督检查检定规程执行情况。

3.0检定项目和技术要求3.1.输液系统3.1.1.泵流量设定值误差:Ss<±2%;流量稳定性误差:<±2%3.1.2.定性测量重复性误差(5次定量管进样):RSD≤1.5%3.1.3.定量测量重复性误差(5次定量管进样):RSD≤1.5%3.2.紫外检测器性能3.2.1.可调波长紫外—可见光检测器波长示值误差:<±2nm;重复性误差:<±1nm3.2.2.基线漂移:≤5×10-3(AU/h);基线噪声:≤5×10-4(AU)3.2.3.最小检定浓度(静态):4×10-8g/ml(萘的甲醇溶液)4.0检定条件4.1.环境温度为10~30℃,8小时内温度波动不超过±3℃,相对湿度低于65%。

4.2.电源电压:220±22V,电源频率:50±0.5Hz。

4.3.检定设备4.3.1.秒表:分度值小于0.1s。

4.3.2.分析天平:最大称量200g,最小分度值0.1mg。

4.3.3.容量瓶4.3.4.微量注射器4.3.5.标准物质和试剂5.0检定方法5.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R的检定。

将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为液动相,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集10~25分钟,称重,按下式计算Ss和S R。

Ss=(Fm—Fs)/Fs×100%S R=(Fmax—Fmin)/F×100%式中Ss为流量设定值误差(%);Fm=(W2—W1)ρt·t为流量实测值;W2:容量瓶+流动相的重量(g);W1:容量瓶的重量(g);Fs:流量设定值(ml/min);ρt:实验温度下流动相的密度(g/cm3);t:收集流动相的时间(min);S R:流量稳定性误差(%);Fmax:同一组测量中流量最大值(ml/min);Fmin:同一组测量中流量最小值(ml/min);F:同一组测量中的算术平均值(ml/min)。

高效液相色谱检验操作规程

高效液相色谱检验操作规程

高效液相色谱检验操作规程一、目的:制订详尽的工作程序,规范检验操作,保证检验数据的准确性。

二、范围:本标准适用于样品高效液相色谱的测定。

三、职责:1. 检验员:严格按操作规程操作,认真、及时、准确地填写检验记录;2. 化验室负责人:监督检查检验员执行本操作规程。

四、内容:简述:高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品,由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离,并依次进入检测器,由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1. 对仪器的一般要求和色谱条件:所用的仪器为高效液相色谱仪。

仪器应定期检定并符合有关规定。

2. 色谱柱:2.1 反相色谱系统使用非极性添充剂,常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶,以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等)也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂,常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱使用离子交换填充剂;分子排阻色谱使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂;对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

2.2 填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充,直接影响供试品的保留行为和分离效果。

分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm(1nm=10?)以下的填料,分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

2.3 除另有规定外,普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10μm之间,粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。

2.4 使用微径柱时,输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配;如有必要,色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定的结果产生争议时,应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

2.5 以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60℃。

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程

液相色谱仪检定规程液相色谱仪检定规程一、定义液相色谱仪检定是指对液相色谱仪具有准确度和可靠性认证要求时实施的检定,为保证液相色谱仪的准确性和可靠性提供了可靠的保障。

二、检定范围1.检定液相色谱仪的基本性能,包括稳定性、精度、线性、探测限、数据处理能力、后处理能力、低检出限性等方面。

2.检定液相色谱仪壳体及检测系列维护项目,包括壳体清洁及调节、数据处理系统检查、后处理系统检查、检测系统调零等。

三、检定步骤1.添加校准品:选择符合性能要求的校准品,将合适的校准品添加到样品中,调节液相色谱仪设置。

2.空流检定:根据试剂的稳定性,查看液相色谱仪的时间、峰面积及峰保持等参数确保空流的准确性。

3.浓度及精度检定:该项检定前需计算出校准曲线上各个校准品浓度的理论值,查看液相色谱仪测定出来的浓度矩阵与理论值的誤差,以确认检出精度。

4.曲线线性检定:查看曲线线性度,比较上下文具分析仪采集系统测定结果。

四、检定记录1.液相色谱仪及试剂性能:记录液相色谱仪及检测试剂的原始性能参数,以便保证检定具有可靠性。

2.测试记录:详细记录校准品浓度和液相色谱仪测得的结果,及曲线线性度检定结果。

3.其它记录:详细的记录液相色谱仪检测状态、使用参数、报警阈值、后处理设置等。

五、维护要求1.配置标准配置:严格按照液相色谱仪厂家及其标准配置,以确保液相色谱仪的正确性和可靠性。

2.液相色谱仪的定期清洁:根据使用状况定期清洁液相色谱仪,以重现液相色谱仪实验室的洁净度。

3.液相色谱仪的定期维护:定期检查液相色谱仪的各项参数,确保液相色谱仪的可靠性及准确性。

六、安全考虑1.一定要使用安全装备:无论在实验室还是工厂,使用液相色谱仪时都必须使用安全装备以防止意外发生。

2.注意试验环境:使用液相色谱仪时应避免高温、湿度及其它物质对液相色谱仪运行的影响。

3.关注安装工艺:在安装液相色谱仪时建议使用专业的工艺,以确保液相色谱仪的正确安装及操作。

高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程

高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程

高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程高效液相色谱仪(HPLC)是一种常用的分析仪器,广泛应用于生化、医药、环保等领域。

为确保HPLC的准确度和稳定性,需要经常进行校准和保养。

本文将针对HPLC的校准和保养过程中的安全操作规程进行介绍。

一、HPLC校准HPLC校准是确保HPLC测试值准确度和精度的必要步骤。

在进行校准之前,应做好以下准备工作:1.准备好标准溶液:根据需要的物质准备好标准溶液。

例如,若需要校准氨基酸分析,应准备标准氨基酸溶液;2.准备好HPLC系统:按照操作手册的步骤进行,启动HPLC系统并等待稳定;3.准备好校准参数:参数包括流速、检测器波长、温度等。

在进行HPLC校准时,需要遵守以下安全操作规程:1.告知其他人员:在进行校准之前,需要告知实验室其他人员,以免发生意外伤害;2.戴手套和防护眼镜:在校准时需要戴手套和防护眼镜,以免校准液体溅入眼睛或皮肤;3.清洁工作台:要确保操作台面干净,并进行消毒,以免污染标准溶液;4.注意标准品的浓度:标准品的浓度应选择合适的范围,以免操作过程中出现误差;5.记录参数:在校准过程中应记录参数,以便查验和复查。

二、HPLC保养HPLC作为一台动力学仪器,需要经常进行维护和保养,才能保持稳定性和准确度。

下面介绍HPLC保养时的安全操作规程:1.清洗样品针头:样品针头是HPLC中易出现问题的部件之一,需要经常清洗和更换。

在清洗时需要戴手套和防护眼镜,在清洗时,用溶液清洗样品针头,并用水冲洗干净;2.更换柱:在使用一段时间后,柱子会产生变形和酸化,需要及时更换。

在更换时,应先停止运行HPLC,并关闭系统。

在更换柱子时,需要戴手套和防护眼镜,同时将管路清洗干净;3.保养检测器:检测器是HPLC的核心部件之一,需要经常维护和更换。

在保养检测器时,应戴手套和防护眼镜,关闭HPLC并将检测器拆卸,清洗并更换检测器洗涤液。

在以上操作完成后,还需要注意以下几点安全操作规程:1.打开机箱前需要断电,以免触电或引发电火灾;2.感应器需要定期校准,以保持准确度;3.定期检查管路是否有泄漏,以保证检测结果的准确性;4.植物油润滑泵需要使用专门的润滑油。

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高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛。

此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。

操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。

今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。

一、使用试管的问题
1、试管的洁净问题。

高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法,如果因使用不洁净的试管,便会影响试验结果的准确性。

例如,在用甲醇作溶剂来溶解样品时,所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的,因此,在每次进样时,都有一个保留时间固定的干扰峰存在,后经证实,此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生,换用玻璃试管后,干扰峰消除。

2、塑料试管的溶解问题。

近年来,一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便,但是,在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象,在利用此种试管提取样品时,有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象,这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号,从而干扰样品的测定。

这时,可用相同的实验条件先行试验一下,看看不含被抽提物时,提取液在检测器上能否产生干扰信号,如确有干扰信号存在,就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。

3、被测样品在试管壁上的吸附问题。

这个问题也应引起注意,否则也会影响测试结果的准确性,在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TD
M)中,有些被测药物如阿米替林,丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上,因此,操作中宜采用聚丙烯管,为防止提取中吸附现象的发生,可采用0. 5%的已二胺已烷液做为提取剂,可有效地防止吸附。

二、操作进样阀的问题
目前,在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀,其内部的六通阀结构使进样操作非常方便,但是,如果使用不当,也会带来问题。

例如,在高效液相色谱法的试验过程中,有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题,这主要是由于操作方法不当所引起,要想解决此类问题,需从以下几个方面入手。

1、进样量的控制。

用进样阀来进样时,阀内的样品环是定量的,(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul),由于进样时,注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。

因此,要想使样品环中充满样品溶液,从而使用进样阀来准确地定量,则必须使进样量大于样品环体积的2倍。

如果用注射器来控制进样量,则最大只能注射样品环体积1/2的量,这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。

2、进样阀的清洁问题。

如果样品环中有上次进样时样品的残留,必然会污染下次注射进的样品,为防止这种现象的发生,应按下列步骤操作:a.进样阀有2个位置,INJECT和LOAD。

首先在LOAD位置时,以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次,每次用量大约40ul;b.然后将进样阀板手扳至
INJECT位置时,再以流动相清洗几次,每次用量还是40ul;c.最后,再将样品注射到进样阀里。

按照上述的步骤操作,可以避免由进样阀引起的污染,从而使干扰峰消除并提高分析结果的准确性。

3、进样阀溢流管的堵塞。

有时,进样阀的溢流管会发生堵塞现象,向进样阀内注射样品时,注射针推不动。

此故障是由于溢流管的堵塞所致。

堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液,而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。

此时,可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡,端口处盐的结晶就能被溶解掉,故障排除。

如能在每次进样完成之后,用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出,则可避免此故障的发生。

三、流动相(MOBLLE PHASE)的问题
甲醇和乙腈在高效液相色谱分析法中常常被用来配制流动相。

高效液相色谱法中常用的试剂最好是高等级的专用试剂,如色谱纯试剂。

在要求不太严格时,优级纯甚至分析纯的试剂也能用。

高效液相色谱分析法中常用的是紫外检测器,因此,从降低基线噪音和提高分析灵敏度上来考虑,应该使用紫外吸收小且杂质含量少的色谱纯试剂。

1、流动相的过滤。

配制好的流动相在使用前一定要先用0.5um孔径的微孔滤膜来过滤。

这是因为溶液中含有很多肉眼难以发现的微小颗粒,如果不把它们滤除掉,就会堵塞泵口、柱头上的过滤器,这样就堵塞了流动相的正常通道,使色谱柱的阻力增加,柱压升高,柱效下降。

碰到这种情况时,
要换用经过滤的流动相,并将堵塞的滤器拆下来浸泡在20%的硝酸水溶液中以超声波清洗机清洗20分钟,以除去滤片上的堵塞物。

2、流动相的脱气。

流动相在使用前必须脱气,以尽可能的除去溶解在流动相中的气体,否则,这些气体会使柱填料的性能降低,还能够对检测器的信号产生很大的干扰。

脱气有多种方法,如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。

真空脱气法和氮气流脱气法是目前最常用的脱气法。

水和甲醇混合后会产生大量的气泡,如果不脱气就使用,气泡就会进入色谱柱和检测器,并将影响分析工作的正常进行。

四、色谱柱的使用和保养
色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件,被测物质能否被很好的分离和测定,色谱柱的性能起着决定性的作用。

因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养,以延长色谱柱的使用寿命。

1、使用预柱和保护柱。

预柱(pre-column)安装于泵和进样器之间,它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡,并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。

保护柱(guard column)可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱,保护柱应与色谱柱的填料相同。

预柱和保护柱可以经常更换,而不需要经常更换色谱柱,这就延长了色谱柱的使用寿命。

2、防止气体进入色谱柱。

有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的,否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。

因此,为了防止气泡进入色谱柱,一定要使用经过脱气的流动相,并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。

a.拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝,观察是否有溶剂渗出;
b.如有溶剂渗出,即可将色谱柱接到管路上,以避免气泡的进入;
c.如无溶剂渗出时,表明色谱柱的此端已经进去空气了,此时,可将色谱柱的出口端接到进样阀上,以流动相来反方向冲洗色谱柱,以便将柱内的空气排除。

最好以0.2ml/min的小流量来冲色谱柱,如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低;
d.如果流出的溶剂里不含有气泡,说明柱内的气体已经被排出了,再将色谱柱以正确的方向接好,这样气泡就进不到色谱柱里面了。

3、色谱柱的清洗。

为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中,在每次的样品分析工作完成之后,都应及时地清洗色谱柱。

首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱,以分析工作中常用的反相色谱分析法为例,因其先流出的物质是极性大的物质,此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来,洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。

如果流动相是缓冲溶液,则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱,以冲掉柱内的盐,然后再用合适的溶剂来冲洗。

凝胶滤过色谱法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相,用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。

如果是连续操作,可以将缓冲溶液置于柱内过夜,但最好是维持小流速(<0.5ml/min)以防止缓冲盐的析出,如果流动相中含有卤化物,即使是停一夜,也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净,以防止它们对柱体的腐蚀。

4、色谱柱的存放。

如果色谱柱暂时不用,存放时要注意以下几点:
a.几天之内的短期放置,应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗),再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。

b.如果色谱柱长期不用,仅用上述方法来处理就不行了,这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱则可用正已烷或庚烷,而凝胶柱则不能用水了,因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低,此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱,再将色谱柱封严。

色谱柱长期放置时,一定要将色谱柱的两端封严,以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象,因这可导致柱效的严重降低。

c.色谱柱应贮存在室温下,如果放置于0℃以下的环境里,柱内就会结冰,这也将导致柱效的降低。

五、色谱峰的双峰问题
长期使用后的色谱柱,如果有杂质进入,就会使色谱柱入口处的固定相“板结”并在流动相所产生的高压作用下,形成柱头的塌陷,被分析的样品组分的正常色谱峰就变成了双峰,这时可按下述方法来修复色谱柱。

首先将柱头的紧固螺母旋下,这时就会发现柱头内的固定相已被压缩进去了,严重时可缩进10mm以上。

在这种情况下,我们可用针尖将流动相表层板结变黄的部分抠掉,并以相同的固定相将此塌陷区填平、压实,再将色谱柱的紧固螺丝上紧,修复工作即告结束。

用经过修复后的色谱柱再做样品时,色谱峰就恢复正常了。

以上从几个方面简介了色谱仪的正确使用及故障排除方法。

在日常工作中,如果能对这些事项认真对待,做到有问题及时解决,则会大大延长仪器的正常使用期限,并使仪器的性能得到最大限度的发挥。

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