抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读李晓军2
临床医学实验室管理之检验中的质量控制
的质量管理
2．重视外部质量控制，忽视内部质量管理 3．重视生化检验结果的重复性，忽视结果与患者临床信 息的符合性 4. 不同生化检测体系的比对
四、免疫领域的质控应用分析
1
依据免疫学基本 原理（抗原抗体 反应），结合各 种敏感的标记、
2
一部分为检测免疫 活性细胞、抗原、 抗体、补体、细胞 因子、细胞粘附分
（6）红白细胞区分计数 （7）人工镜检标本的制备：使用离心制片法对体液标本进行制
备、染色能够保证最佳的细胞收集率以及形态学完整性。
（8）恶性肿瘤细胞的确认：当怀疑细胞学标本中存在肿瘤细胞， 应该在报告发放前由实验室有资质的人员（最好是由检验医师 或病理医师）进行确认。 （9）形态学人员的定期考核和评价 2.仪器法检测 室内质控：每检测日至少2个不同的配套质控物的检测
2. 确定质控规则
生化检验常用室内质量控制方法包括Levey-Jennings质控图、 Westgard多规则质控方法等。
3. 何时重建质控图
当出现下列情况时需重建质控图，对质控图的均值、标准差进行 修改：
（二 ）临床生物化学检验全面质量管理面临的问题 1．重视检测分析阶段的质量控制，忽视检验前、后过程
分装后的质控血清稳定时间在2-8℃时不少于24小时，-20℃时不少于30 天，不稳定成分(如胆红素、碱性磷酸酶) 在复溶后前4h的变异应小于2%。
复溶后的质控品的瓶间变异应不变，但对一些不稳定的成分(如胆红素、
血糖和酶类等)，瓶间变异的CV值不能超过未复溶质控品CV值的1.5倍。
1. 靶值和质控限的确定
选择水平的原则：覆盖
临床决定值—控制最重要的检测结果 可报告范围—控制最宽的范围 最大人群—控制最多的患者人群
不同方法检测抗核抗体结果对照分析
和Ｓ Ｓ Ａ／ Ｒ ｏ ５ ２阳性 的 Ｅ ＮＡ 标 本 ＡＮＡ 阴 性 ， 有 １ ． ９ ３ 单纯 针 对 Ｓ Ｓ Ａ／ Ｒ ｏ ５ ２阳 性 的 Ｅ Ｎ Ａ 标 本 ＡＮＡ 为 阴 性 ， 有
０ ． ０ ６ ｄ ｓ — ＡＮＡ 阳性的 Ｅ ＮＡ标本 Ａ ＮＡ 阴性 ， 有 ３ ． ８ ７ 单纯 Ｓ Ｍ 抗 体 阳性的 Ｅ ＮＡ标 本 Ａ ＮＡ为 阴性 ； 有 １ １ ． ８ ７ ％ ＡＮＡ阳性标本 Ｅ ＮＡ表现为阴性 。结论 ： Ａ ＮＡ与 Ｅ ＮＡ有较好的一致性 ， 但两 者检测结果并 不完全 一致 ， 不 同的 自 身免疫性疾病患者血清所含 自身抗体有差异 ， 因此 Ａ ＮＡ作为 自身免疫病 的筛 查实验欠 妥， Ａ ＮＡ和 Ｅ ＮＡ同时检测， 有助于 自身免疫性疾病 的诊断和鉴别诊断 ， 避免 出现漏诊 和误诊 。 关键词 抗核抗体 抗 Ｅ ＮＡ抗体
１ ９ ９ ７ ： ５ ８ ２ — ５ ８ ４．
［ ２ ］ 常才 ， 主编． 经 阴道超声 诊断学（ Ｍ］ ． 北京 ： 科学 出版社 ， １ ９ ９ ９ ：
６ ７ － ７ ３ ．
角妊娠首先要与输卵管间质部妊娠鉴别 ， 问质部妊娠是受 精
卵种植在输卵管间质部 ， 并 在此发 育， 属 异位妊娠 ， 常于 孕 ２ 个月左右发生破裂 ， 由于问质部 血供 丰富 ， 故 破 裂 后 往 往 在
增 厚 或 较 杂 乱 回声 等 改 变 。 （ ４ ） 彩色多普勒 显示孕囊或包块 周 边 有 较 丰 富 的血 流 信 号 ［ 。临床 特 点 是 有 早 孕 诊 断 依 据 ， 但人流时不见绒毛组织 ， 超 声 检 查 时 应 仔 细 多 切 面探 查 。 宫
抗核抗体荧光滴度判读参考标准的建立
抗核抗体荧光滴度判读参考标准的建立刘绍伟;姜慧英;田喜凤【摘要】目的建立一套简单实用的人工判读抗核抗体荧光滴度结果的参考标准.方法选择卫生部室间质评质控品:均质型1∶1000,颗粒型1∶320.通过3.2倍稀释获得:均质型1∶320、均质型1∶100、颗粒型1∶100样本.随机用四个批次的试剂分别对样本进行测定,运用EUROIMMUN全自动判读仪读取并记录每个样本滴度的灰度值和图像.按照实验室室内质控的建立方法,计算灰度值的均值,该灰度值对应图像作为参考标准图像,并对该图像进行临床验证.结果计算所得各核型不同滴度的灰度值均值,得到相应图像作为参考标准图像.临床验证,参考标准图像前后人工判读的准确性有所提高(P＜0.05),一致性有所提高(P＜0.05).结论通过参考标准的建立能够提高人工判读结果的准确性和一致性,有利于标准化的建立.%Objective To establish a standard of manually interpretation reference for antinuclear antibodies.Methods Choose health department official interstitial evaluation as quality control:homogeneous type 1 ∶ 1000,particle type 1 ∶ 320.By conducting 3.2 times of dilution,we have:homogeneous type 1 ∶ 320,homogeneous type 1 ∶ 100,particle type 1∶ 100.Random chosen four batches of reagents for the determination of samples,using EUROIMMUN automatic reading meter to read and record each sample drops of degreeof grey value and image.According to the laboratory building method of indoor quality control,calculate the average grey value,using the corresponding image grey value as a reference image,and then clinical validates the image.Results By compute the karyotype of different average grey value of the drop degree,we got the corresponding image as areference standard.Before and after clinical validation,reference standard image interpretation accuracy improved (P ＜ 0.05),so did the consistency (P ＜ 0.05).Conclusion The establishment of the reference standard can improve the accuracy and consistency of manual interpretation of results,which is conducive to the establishment ofstandard.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2017(024)003【总页数】5页(P345-348,355)【关键词】抗核抗体;荧光滴度;参考标准图像;方法建立【作者】刘绍伟;姜慧英;田喜凤【作者单位】华北理工大学基础医学院病原生物学学科,河北唐山063000;北京京煤集团总医院检验科,北京102300;北京京煤集团总医院检验科,北京102300;华北理工大学基础医学院病原生物学学科,河北唐山063000【正文语种】中文抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）检测可用于多种自身免疫病的诊断及鉴别诊断，病情评估，预后判断及机制研究［1］，其临床价值越来越被临床所重视［2-4］。
抗核抗体及抗核抗体谱的实验检测方法及结果分析
抗核抗体及抗核抗体谱的实验检测方法及结果分析朱凤丹;尹秀杉【摘要】Objective :To explore the value and results that using indirect immunofluorescence and immunoblottingto detect ANA andANAs .Methods :Analysis the 2 317 cases were grouped by age ,sex and the results of ANA and AN‐As .Results:In this 2 317 cases ,the positive of ANA and/or ANAs were 914 cases (39 .4% ) ,women accounted for77.7% ,males accounted for 22 .3% ,36 years and over age group ,women accounted for 50 .1% ,accounting for 16 .1%of men;ANA positive 740 cases (31 .9% ) ,ANAs tested positive for 723 cases (31 .2% ) ,ANA and ANAs were posi‐tive in 549 cases ,ANA (+ ) and ANAs (+ ) in line with the rate of 74 .2% ,ANA (-) and ANAs (-) compliance rate of 89 .0% ,the overall compliance rate of 84 .2% .Conclusion:Combined detection of ANA and ANAs ,not only can reduce the false‐negative and false‐positive rate ,but also provide the basis for more effective laboratory diagnosis and differential diagnosis of autoimmune disease .%目的：探讨分析实验室采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测ANA和ANAs的结果及价值。
【李晓军】风湿病自身抗体检测进展
ANA
多种风湿病
抗核抗体新概念（FANA）
传统定义：指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称 狭义定义
现代定义：指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对 ANA的理解已不再局限于核成分 广义定义 靶抗原分布： 细胞核
细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期
确立各自的cut-off值，使判断标准兼顾到诊断敏感性和诊 断特异性的平衡。应该参加当地或国家的室间质量评价 （external quality assessment，EQA）计划。目前，
国际上已有抗核抗体的标准参考品
• 结果解释应密切结合其他临床指标
ANA常见核型与疾病关系
Diagnostic Pathology 2009, 4:1
系统性红斑狼疮(SLE) 干燥综合征( pSS) 系统性硬化症(SSc)
银屑病关节炎
反应性关节炎
多发性肌炎(PM) 皮肌炎(DM)
混合性结缔组织病 (MCTD) 血管炎
遗传背景 感染因素
病 激素失调
因
环境因素 物理化学药物
常见风湿病
• 类风湿关节炎（RA）
• 系统性红斑狼疮（SLE）
• 抗磷脂抗体综合征（APS） • 干燥综合征（SS）
风湿病的诊断
• 临床表现：病史、症状、体征 • 实验室检查 • 影像学检查
主要实验室检查
1.免疫学指标： IgG，IgA，IgM，IgE， C3，C4，CH50，CIC。 2.自身抗体
3. HLA：HLA B-27对AS（81.8%）；
DR4/DR1对RA（49-79%）
常见自身抗体检测
自身抗体（autoantibody）
• CIEP的敏感性和特异性＞DID • 某些带负电荷较少的抗原如Scl-70，在CIEP中的移动方
探讨临床免疫检验的质量控制方法和结果
探讨临床免疫检验的质量控制方法和结果临床免疫检验是临床医学领域中非常重要的一部分，它通过检测人体的免疫功能状态，为临床诊断和治疗提供重要的依据。
由于实验室操作人员、试剂、设备等不同因素的影响，免疫检验结果可能会存在一定的误差。
如何保证免疫检验的质量是非常重要的。
本文将探讨临床免疫检验的质量控制方法和结果。
一、质量控制方法1. 内部质量控制内部质量控制是指实验室自行制定的质量控制程序，用于监测实验室本身的分析质量。
内部质量控制的主要内容包括建立样本稳定性、分析系统稳定性、标准曲线、质控样本的选择和管理等方面。
在免疫检验中，我们可以通过每天运行质控品来监测分析系统的稳定性。
质控品应具备与临床样本相似的性质，并且要包括高、中、低三个水平。
而样本稳定性则是通过分析临床样本的重复性和准确度来监测的。
建立标准曲线也是非常重要的一环，它直接影响到免疫检验结果的准确性。
2. 外部质量控制外部质量控制是指由独立于实验室之外的质量控制组织，对实验室的分析系统质量进行监管和评价。
这种外部质量控制通常是通过参加国家或地区授权的质量评估机构组织的外部质量评价活动来实施的。
对于免疫检验而言，参加外部质量评价便是其中一种有效的方法。
通过与其他实验室进行比对，可以及时发现自身实验室的不足之处，并进行改进。
外部质量评价还可以为患者提供更加可信赖的检验结果。
3. 定期维护和校准除了内外部质量控制之外，定期维护和校准分析系统也是至关重要的。
定期的维护可以保证分析系统的稳定性和准确性，而校准的目的则是使分析系统的测量值能够与真实值相符。
二、质量控制结果通过上述的质量控制方法，可以有效地保证临床免疫检验的质量。
质量控制的结果将直接影响到实验室的检测结果以及患者的临床诊断和治疗。
下面将详细介绍质量控制结果的影响。
1. 准确性质量控制的结果直接影响到免疫检验的准确性。
如果内部质量控制出现异常，往往说明实验室的分析系统存在一定的问题，此时需要对设备进行调试和维护，以保证分析结果的准确性。
ANA荧光片模型判读与讲解更
抗核抗体（ANA）荧光片判读与讲解北区FAE 李建彬2012年11月14日ANA筛查：基质组合检测ANA：“金标准”标准基质：HEp-2细胞+灵长类肝ANA读片要点HEp-2细胞:选取多个视野判断HEp-2细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看ANA 筛查：基质组合 灵长类肝-猴肝Hep-2细胞-人喉癌上皮细胞ANA筛查：基质组合细胞分裂周期根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：ANA核均质型：DNA、组蛋白和核小体等核膜型：板层素、gp210等核颗粒型核仁型：Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等核浆点型：着丝点、核点等胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B细胞核细胞浆Ku细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型抗核抗体谱的分类模板片示例抗核抗体（ANA）核均质型●HEp-2：间期细胞核呈均匀荧光，分裂期细胞浓缩染色体荧光增强●肝片：肝细胞核阳性，呈均匀荧光。
荧光强度与HEp-2基本一致●靶抗原：dsDNA、核小体、组蛋白核粗颗粒型●肝片：肝细胞核呈颗粒样荧光。
核仁阴性；荧光强度与HEp-2基本一致●HEp-2：间期细胞核呈颗粒样荧光，核仁阴性；分裂期细胞浓缩染色体阴性，染色体周围呈颗粒样荧光●靶抗原：nRNP 、Sm核细颗粒型●肝片：肝细胞核呈颗粒样荧光。
部分核仁阴性；荧光强度明显弱于HEp-2●HEp-2：间期细胞核呈细颗粒样荧光，部分核仁阴性；分裂期细胞浓缩染色体阴性，染色体周围呈颗粒样荧光●靶抗原：SS-A 、SS-B抗Ku 抗体●肝片：（灵长类）肝细胞核呈现网状荧光●HEp-2：间期细胞核呈现细颗粒样荧光；分裂期细胞浓缩染色体阴性●靶抗原：Ku蛋白细胞周期蛋白I 型（PCNA ）●肝片：荧光模型不典型●HEp-2：半数间期细胞核呈现亮的、细颗粒样荧光，核仁阴性；另半数间期细胞荧光模型相同，但强度弱10倍以上；分裂期细胞浓缩染色体阴性，周围有较弱的颗粒荧光●靶抗原：DNA 聚合酶δ的辅助蛋白细胞周期蛋白II 型●肝片：荧光模型不典型●HEp-2：部分间期细胞核阳性，部分间期细胞核阴性；分裂期细胞核均阳性，呈颗粒样荧光，浓缩染色体为阴性●靶抗原：cyclin蛋白着丝点型●肝片：肝细胞核内可观察到10-20个荧光点；荧光强度明显弱于与HEp-2细胞●HEp-2：间期细胞核内出现大小数目相同、均匀分布的点状荧光；分裂期细胞浓缩染色体处出现浓缩点状荧光●靶抗原：着丝点蛋白核点型●肝片：肝细胞核内出现大小、数目不均一的点状荧光；荧光强度与HEp-2基本一致●HEp-2：间期细胞核内出现大小、数目、强度不均的点状荧光；分裂期细胞浓缩染色体阴性。
如何看抗体检测结果及检测应用
抗体滴度越高，表示抗体浓度越大， 对病原体的免疫力越强。
阴性结果分析
抗体阴性
表示被检测者体内未检测到针对 特定病原体的抗体，可能意味着 被检测者从未感染过该病原体或
未接种过相关疫苗。
免疫空白
对于某些病原体，人群中存在一定 比例的免疫空白人群，即使接种过 疫苗也可能无法产生抗体。
假阴性
由于检测方法、试剂质量等因素， 可能导致实际存在抗体但被误判为 阴性的情况。
抗体检测还可以用于研究生物标 志物的功能和调控机制，为疾病 的预防和治疗提供新的思路和方
法。
06
抗体检测实验室操作规范及注意事项
实验室安全要求
实验室环境安全
确保实验室环境整洁、通 风良好，定期进行消毒和 清洁工作。
个人防护措施
实验人员需穿戴防护服、 手套、口罩等个人防护用 品，避免直接接触样本和 试剂。
THANKS
感谢观看
废弃物处理
严格按照实验室废弃物处 理规定，对使用过的样本 、试剂、耗材等进行分类 、标记和处理。
样本采集、保存和运输规范
样本采集
根据检测要求选择合适的采样部 位和方法，确保样本采集的准确
性和代表性。
样本保存
样本采集后需及时妥善处理，按 照规定的保存条件和时限进行保
存，避免样本变质或失效。
样本运输
在运输过程中需保持样本的完整 性和稳定性，避免样本泄漏、污
IgE抗体
IgE抗体与过敏反应密切相关，参与I型超敏反应的发生。 IgE抗体的检测对于过敏性疾病的诊断和治疗具有重要意 义。
02
抗体检测结果解读
阳性结果分析
抗体阳性
表示被检测者体内存在针对特定病原 体的抗体，可能意味着被检测者曾经 感染过该病原体或接种过相关疫苗。
抗核抗体(ANA)报告解读及核型判读PPT课件
ANA的临床意义
ANA阳性
常见于系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病、干燥综合征、 硬皮病、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。在这些疾病中 ，ANA的滴度往往与疾病活动性相关。
ANA阴性
正常人血清中ANA一般为阴性。但是需要注意的是，ANA阴 性并不能完全排除自身免疫性疾病的可能，因为一些自身免 疫性疾病患者的ANA可能为阴性。因此，需要结合其他临床 表现和实验室检查结果进行综合判断。
表示抗体在血清中的浓度，通常以1:40、1:80、1:160等比例呈现。滴度越高 ，抗体浓度越大，提示自身免疫性疾病的可能性增加。
核型
指ANA与细胞核内不同成分结合形成的特定荧光染色模式。常见核型包括均质 型、斑点型、核膜型、着丝点型等。不同核型与特定疾病相关联。
ANA与疾病关联性的解读
ANA阳性与多种自身免疫性疾病相关，如系统性红斑狼疮（SLE）、混 合性结缔组织病（MCTD）、干燥综合征（SS）等。
ANA核型的变化与疾病活动性
某些ANA核型的变化也与疾病活动性密切相关。例如，在SLE患者中，随着病情的好转 ，均质型ANA可能转变为斑点型或核仁型。因此，观察ANA核型的变化有助于评估疾
病的活动性。
在治疗选择和预后评估中的价值
指导治疗选择
ANA检测和核型判读可以为临床医生提 供治疗选择的依据。例如，对于ANA阳 性且滴度较高的患者，可能需要采用更 积极的治疗措施，如使用免疫抑制剂等 。
ANA核型的特异性
不同ANA核型与不同自身免疫性疾病的关联程度不同，如均质型ANA与SLE密切相关，而斑点型ANA则与混合性 结缔组织病（MCTD）等相关。因此，ANA核型的判读有助于自身免疫性疾病的精确诊断。
在疾病活动性评估中的价值
自身抗体检测的质量保证
抗核抗体（ANA）间接免疫荧光 （IF）检测标准化的关键点
多价和IgG特异的标记结合物：IF-ANA试验中这两种标记 物均可用到。SLE患者96%产生IgG类ANA，使用IgG特异 的标记结合物，不能检测与类风关、药物、年龄相关的 的标记结合物 能检 与类 关 药物 年龄相关的 IgM类ANA（通常无诊断意义），然而有4%的SLE患者产 生较大量的IgM ANA。 ANA 荧光标记物的参考制剂： The International Union of Immunological Societies (IUIS) 标准化委员会和WHO已 建立了两个WHO/IUIS 国际标准标记物制剂. FITC标记的 羊抗人 Ig (480010) and标记的羊抗人IgM (anti-u chain) 可从the WHO Immunology Unit (Geneva, Switzerland)得 到。其可用来检测商品或个别制备的标记物的特异性和检 测性能。 测性能
抗核抗体（ANA）间接免疫荧光 （IF）检测标准化的关键点
SS-A/Ro 抗原：使用小鼠或大鼠组织作为基质 时， SS-A/Ro 抗原量极少，测不到。人类上 SS A/Ro 皮样细胞系如Hep-2 或KB 细胞作为基质用丙 酮固定后，该抗原可检测到。使用这种基质， 酮固定后 该抗原可检测到 使用这种基质 一些所谓“ANA阴性”的SLE患者可出现阳性 结果。 结果 Anticentromere 抗体 ：测定这种抗体，须采 用组织培养细胞系。 用组织培养细胞系 类风关相关的核抗原 类风关相关的核抗原（RANA）：只存在于含 只存在于含 EB病毒基因组的细胞内。
理想的试剂
试剂的标准化
抗核抗体（ANA）间接免疫荧光 （IF）检测标准化的关键点
基质和固定剂：基质最常用Hep-2细胞。固定剂： 丙酮 使用乙醇或甲醇固定，或固定前洗基质， 丙酮（使用乙醇或甲醇固定，或固定前洗基质， 可溶解SS-A/Ro抗原及nRNP抗原，致假阴性结果） 参考区间：大多数细胞中DNA、组蛋白、Sm、 nuclear RNP和SS B/La含量高 但在特定组织中 RNP和SS-B/La含量高，但在特定组织中， SS-A/Ro, PCNA, RANA和Ku 抗原含量低。基质 中抗原含量的差异，影响测定的特异性和敏感性。 中抗原含量的差异 影响测定的特异性和敏感性 因此，每个实验室都应有其自己的参考区间。
抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读李晓军共54页
21、静念园林好，人间良可辞。 22、步步寻往迹，有处特依依。 23、望云惭高鸟，临木愧游鱼。 24、结庐在人境，而无车马喧；问君 何能尔 ？心远 地自偏 。 25、人生归有道，衣食固其端。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的
抗核抗体(ANA)实验室检测策略(20110524) [兼容模式]
![抗核抗体(ANA)实验室检测策略(20110524) [兼容模式]](https://img.taocdn.com/s3/m/e3e69abbd1f34693daef3e1c.png)
EUROIMMUN
欧蒙研究：各风湿病ANA阳性率在不同滴度水平的分布
EUROIMMUN
欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案
起始稀释度： 报告结果 1:100 1:1,000
EUROIMMUN EUROIMMUN
推荐一个标本平行作两个稀释度 1:100和1:1000 (1)
原因1: 高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖
着丝点
核点
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
HEp-2 细胞 灵长类肝
着丝点和核点
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
HEp-2细胞
Sm/RNP 相似的颗粒型 – 很难区分
SS-A/SS-B
Ku
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
灵长类肝
Sm/RNP 区分荧光模型 – 容易区分
SS-A/SS-B
EUROIMMUN
ANA结果报告举例
1:100
1:1000
结果报告
核均质型：1:10:100 着丝点：1:1000
EUROIMMUN
ANA检测的注意事项（1）
ANA的滴度结果非常重要 - 所用检测系统的起始稀释度（正常参考范围）只是一个统计值，如果以 此为临界值，部分正常人也可出现阳性（5-10%），在年龄大于60岁的老年 人中，阳性率更高，但滴度较低。 - ANA滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性就越大。
AMA (鼠肾) 抗表皮基底膜抗体 (喉舌) 抗Yo抗体 (猴小脑) pANCA (人中性粒细胞)
1:100
1:10
1:10
1:1
1:1000
1:100
1:100
EUROIMMUN
欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程
抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。
2.适用范围检验科免疫组工作人员。
3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。
5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。
6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。
可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。
在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。
因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。
[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。
抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读
ANA检测的选择原则
临床医生选择ANA检测的目的： 1）在有典型症状患者中作出CTD的诊断 2）在症状不确定患者中排除CTD的诊断 3）明确CTD的类别 4）判断病情活动度
为临床医生提供更多的选择和诊断指标 另一方面也带来一定的困惑?
如何根据患者病情挑选具有诊断价值的最佳自身抗体组合? 如何选择合理的检测方法，并对结果作出正确的判断?
将为患者得到及时准确的诊断和治疗发挥至关重要的 作用!
免疫检验工作者的目的: 广泛向临床医生宣传有关ANA项目及其检测技术的价 值及其限制，
抗非组蛋白抗体
抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G）
抗核仁抗体 抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体，
肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin…)
抗核抗体谱的分类和命名
1. 以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等；
1)体液免疫：由自身抗体介导→Ⅱ、Ⅲ过敏反应导致的组 织损伤
2)细胞免疫：自身反应性T细胞介导的细胞毒作用 3)二者共同参与：抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用 （ADCC） 4)……
自身免疫病的系统受累
AID的类型：
1）器官特异性AID 2）系统性AID（非器官特异性）
AID主要特征：
1）相关的临床症状 2）ESR增高, 血清Ig↑, 自身抗体、 CIC阳性, 血清补体(C3、C4)活 性降低 3）有病变且病变处存在有与自 身抗原分布相关的免疫活性细胞 或抗体 4）将相关抗原给动物注射时能 重复出类似人的疾病，当被动输 入淋巴细 胞或抗体时可将疾病从 患病动物转移给正常动物
两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价
两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价张晶;虞伟;张宇;夏海萍;李晓军;顾宁【摘要】目的对比研究两种不同粒径量子点(QDs)标记抗体在抗核抗体(ANA)检测中的成像效果,评价其在临床样本检测中的应用价值.方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655和QD605标记第二抗体(二抗),用间接免疫荧光分析(IIFA)检测114例自身免疫病患者和30例健康对照者血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗为对照.单特异性ANA用免疫印迹法(IBT)确认.比较和评价各法应用效果.结果经对114例患者血清研究发现,两种QD标记二抗均可见与FITC标记二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,但ANA滴度略显不同,对核颗粒型与胞浆颗粒型ANA测定灵敏度以QD655为最高,QD605次之,FITC标记二抗相对较弱.而对核均质型、核仁型与核着丝点型ANA测定灵敏度高低依次为FITC、QD655和QD605标记二抗.相关分析结果显示,两种QD与FITC标记物检测ANA滴度结果均呈高度正相关,r值分别为0.834、0.832(P均＜0.01).两种QD标记二抗对核颗粒型、胞浆颗粒型荧光模式与FITC标记二抗检测结果阳性符合率均为100％；而核均质型与核仁型检测,阳性结果符合率为80.6％～ 84.4％.30例用FITC标记二抗检测ANA阴性血清中,两种QD标记二抗检测均见1例ANA阳性.两种QD与FITC标记物检测ANA总符合率均超过90.0％,有高度的一致性(Kappa值均＞0.75).结论 QD655和QD605标记二抗用于ANA检测总体结果稳定、灵敏、可行；QDs粒径越大其标记二抗测定ANA灵敏度越高,但对某些低滴度免疫荧光核型(包括核均质型、核仁型与核着丝点型)ANA有漏检可能.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(030)004【总页数】4页(P249-252)【关键词】量子点;抗核抗体;间接免疫荧光分析;异硫氰酸荧光素【作者】张晶;虞伟;张宇;夏海萍;李晓军;顾宁【作者单位】南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,南京210002;南京师范大学生命科学学院,南京210046;南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,南京210002;东南大学江苏省生物材料与器件重点实验室,南京210096;南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,南京210002;南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,南京210002;东南大学江苏省生物材料与器件重点实验室,南京210096【正文语种】中文【中图分类】R446.6抗核抗体(ANA)是针对真核细胞100余种核浆成分的自身抗体总称，可见于多种结缔组织病患者［1］。
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3. 以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体 抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；
4. 以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗RNP、 抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。
常规临床诊断ANA种类:数十种 新自身抗体和检测方法:陆续被引进临床实验室
抗核抗体检测的质量要求及结果 的合理判读
李晓军 南京军区南京总医院 全军临床检验医学研究所
自身免疫性疾病
自身免疫病(Autoimmune diseases,AID)
主要病理基础：
----血清中存在有一种或多种针对自身组织成份的抗体标志 物及自身反应淋巴细胞
致病机制：
----自身抗体和自身反应淋巴细胞在AID的发病过程中起重 要作用
患病率↓： PPV↓ ，NPV↑ 理想的ANA试验： 高PPV：大部分阳性结果者是CTD患者 高NPV：大部分阴性结果者不患CTD
抗非组蛋白抗体
抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G）
抗核仁抗体 抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体，
肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin…)
抗核抗体谱的分类和命名
1. 以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等；
宣传ANA选择的适应征及有效性，从而对检测结果作 出科学合理的判读。
保证检测结果的可靠性和准确性
让临床医生了解各种测定方法的特性 包括方法的精确度、灵敏度、特异性、阳 性预测值和阴性预测值、似然比等，关系 到医生如何准确地选择这些检测项目服务 于患者，并合理地利用资源。
敏感性（sensitivity） 特异性（specificity）
为临床医生提供更多的选择和诊断指标 另一方面也带来一定的困惑?
如何根据患者病情挑选具有诊断价值的最佳自身抗体组合? 如何选择合理的检测方法，并对结果作出正确的判断?
将为患者得到及时准确的诊断和治疗发挥至关重要的 作用!
免疫检验工作者的目的: 广泛向临床医生宣传有关ANA项目及其检测技术的价 值及其限制，
抗核抗体:针对真核细胞（HEp-2、肝细胞）各种核 成分靶抗原的自身抗体的总称。
抗核抗体（ANA）
ANAs
抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ）
抗组蛋白抗体（histones: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B） 抗ENA（抗: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , .…）
而临床医生关心的是，ANA阳性者中有 多少是CTD患者；ANA阴性者中有多少不是 CTD患者。PPV和NPV即回答这一问题
阳性预测值（PPV） 阴性预测值（NPV）
PPV：试验结果阳性者中真正患病的概率 NPV：试验结果阴性者中未患病的概率
PPV和NPV是临床试验中对试验有用性的正确评价指标 PPV和NPV受人群患病率的影响：
自身抗体的特性
自身免疫性疾病的重要标志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 与疾病的活动性相关 参与免疫病理性损伤
常检测的自身抗体
抗核抗体（ANA） 抗可提取性核抗原抗体（A-ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 类风湿因子（RF） 抗角蛋白抗体（AKA） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）
抗核抗体（ANA）
自身免疫病的“病谱”
器官特异性
非器官特异性
桥本甲状腺炎 扩张性心肌炎
自身免疫性溶血性贫血 系统性红斑狼疮
原发性粘液水肿 恶性贫血
特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征
甲状腺机能亢进 自身免疫性胃炎
特发性粒细胞减少症
类风湿关节炎
Addisino病 1型糖尿病 重症肌无力
自身免疫性肝炎 原发性胆汁性肝硬化 原发性硬化性胆管炎
病 6. 病程一般较长，多迁延为慢性 7. 病损局部可发现淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞等浸润 8. 免疫抑制剂治疗可取得一定疗效
自身免疫病主要实验检查
自身抗体 免疫球蛋白 补体 淋巴细胞 细胞因子
自身抗体与临床疾病的关系
天然自身抗体：维持机体内环境稳定 靶抗原：肌动蛋白、肌球蛋白、角蛋白、DNA、胶 原、Ig、细胞因子等，多为IgM型、低滴度； 病理性自身抗体：在免疫风湿病的发病过程中起重 要作用 1）诊断、鉴别诊断：抗dsDNA、抗Sm抗体与 SLE；抗CCP与RA；AoAb与、女性不育、流产有 关者 2）疾病监测、预后判定：ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱdsDNA为SLE疾病 活动标志
绝经过早（少数病例） 男性不育（少数病例） 交感性眼炎
硬皮病 多发性肌炎/皮肌炎 混合性结缔组织病
多发性硬化症 溃疡性结肠炎
晶状体源性葡萄膜炎 系统性血管炎
脱髓鞘疾病
克罗恩病
抗磷脂综合征
寻常型天疱疮 自身免疫性肾小球肾炎
药物性狼疮
类天疱疮
肺肾出血综合征
自身免疫病共同特征
1. 病因不明 2. 女性居多，发病率随年龄增加而增加 3. 有遗传倾向 4. 患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋巴细胞 5. 疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一种以上自身免疫
敏感性: 某检验项目对某病具有鉴别、确认的能力 患者阳性结果的百分比
特异性: 某检验项目排除无某病的能力 非患者阴性结果的百分比
敏感性和特异性取决于所选用的cut-off值 某法敏感性越高，特异性就越低，反之亦然 应优选能获得最佳敏感性和特异性组合的cut-off值
敏感性和特异性并不能告诉医生阳性结 果的个体是否患某种疾病，阴性结果的个体 是否不患某种疾病
1)体液免疫：由自身抗体介导→Ⅱ、Ⅲ过敏反应导致的组 织损伤
2)细胞免疫：自身反应性T细胞介导的细胞毒作用 3)二者共同参与：抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用 （ADCC） 4)……
自身免疫病的系统受累
AID的类型：
1）器官特异性AID 2）系统性AID（非器官特异性）
AID主要特征：
1）相关的临床症状 2）ESR增高, 血清Ig↑, 自身抗体、 CIC阳性, 血清补体(C3、C4)活 性降低 3）有病变且病变处存在有与自 身抗原分布相关的免疫活性细胞 或抗体 4）将相关抗原给动物注射时能 重复出类似人的疾病，当被动输 入淋巴细 胞或抗体时可将疾病从 患病动物转移给正常动物