谷丙转氨酶--医学生-生化学习

谷丙转氨酶
其它原因引起的肝脏损害，如心功能不全时， 肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死， 可使ALT、AST明显升高，某些化学药物如 异菸肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷 剂等可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的 升高。
连续监测法测定ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH+ LD 乳酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算
赖氏法测定AST
门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L谷氨酸
草酰乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸，反应60 分钟。
α-丙酮酸+2，4二硝基苯肼在碱性条件下2， 4二硝基苯腙（红棕色，波长505nm)
赖氏法测定AST
本法为终点法，难以保证酶促反应在30-60 分钟内产物生成量与时间成正比。也存在底 物和2，4二硝基苯肼用量不足的可能。标本 AST活性高时，草酰乙酸对AST有反馈抑制， 也使AST活性逐渐下降，测定结果偏低。
赖氏法测定AST
重复性差，血清中含有多种酶对AST测定产 生负干扰现象
AST作用生成的产物草酰乙酸不可逆地转变 为丙酮酸而成为ALT的底物，而影响AST的 测定。
产物旁路效应，生成的草酰乙酸可被血清内 源性苹果酸脱氢酶催化而消耗，草酰乙酸自 发转变的丙酮酸可被血清中的LDH催化。
连续监测法测定AST
连续监测法测定AST的误差可来自内源性和 外源性，内源性干扰主要来源于血清中高浓 度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）。外 源性干扰来自于试剂中污染的GLDH和AST。 内源性丙酮酸的干扰通过加入高活性的LDH 在温育期间将其迅速转变为乳酸而消除。血 清中的GLDH能催化α-酮戊二酸 和NH3生成 谷氨酸，同时使NADH氧化为NAD+，可使 结果假性增高。
准确性好 由于测定上限在酶促反应的线性 范围内，偏差小。
精确性好 测定条件较赖氏法易于控制，CV 值比赖氏法小。
操作简便 标本测定中不需要标准对照，测 定结果计算方便。
门冬氨酸氨基转移酶
AST在心肌细胞内含量较多，心肌梗死病人 发病时，血清中AST活性增高，在发病后612h之内显著增高，在16-48h达到高峰， 约在3-5d恢复正常。血清中的AST也可来 源于肝细胞，各种肝病病人也可引起AST的 增高，有时可达1200卡门单位，中毒性肝 炎病人还可更高。肌炎、胸膜炎、肾炎及肺 炎等也可引起AST的轻度增高。
ALT测定中存在二个副反应 血清中存在的α-酮酸（如丙酮酸）能消耗
NADH。 血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH）增高时，在
有氨存在条件下，亦能消耗NADH。 上述副反应都能消耗NADH，使测定结果偏
高。但在双试剂法，因温育期长，能有效消 除干扰反应。
赖氏法测定ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L谷氨酸
出酶的活力。 Βιβλιοθήκη BaiduALT双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二
酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光 度的下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率， 本计算ALT的活性浓度。
连续监测法测定ALT
α-丙酮酸+2，4二硝基苯肼在碱性条件下2， 4二硝基苯腙（红棕色，波长505nm)
赖氏法测定ALT评价
重复性差
由于限制底物α-酮戊二酸 的用量，如一般采用 2.0mmol/L的浓度下，反应速度只有最大速度的 65%，使产物的生成量与酶的活性之间不能呈现 良好的线性关系。
2，4二硝基苯肼在碱性条件下也能显色，为了降 低试剂空白的吸光度不得不使用低浓度的2，4二 硝基苯肼（1.0mmol/L），这种水平2，4二硝基 苯肼仅能与反应体系中的两种酮酸的一半反应。低 浓度的2，4二硝基苯肼使标准曲线呈非线性。
赖氏法测定ALT评价
产物旁路效应，即ALT催化生成的产物丙酮 酸，在乳酸脱氢酶催化下被消耗掉，从而影 响测定结果。
准确性差
由于线性范围狭窄，测定温度为37℃时标准 曲线只能延长到150卡门单位，但临床病人 多见200单位以上。尽管采用标本稀释后再 测定，但偏差大。影响因素较多，误差较大。
连续监测法评价
谷丙转氨酶
重症肝炎或亚急性肝坏死时，再度上升的 ALT在症状恶化的同时，酶活性反而降低， 表明肝细胞增生不良，预后不佳。因此， ALT可以观察病情的发展，并作预后判断。
慢性活动性肝炎或脂肪肝，ALT轻度增高 （100-200IU/L），或属正常范围，且 AST大于ALT。肝硬化、肝癌时，ALT有轻 度或中度增高，提示可能并发肝细胞坏死， 预后严重。
谷丙转氨酶
谷丙转氨酶
ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细 胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释 放入血，致血中该酶活性浓度增加。
肝细胞损伤的灵敏指标，急性病毒性肝炎ALT 阳性率为80%-100%。肝炎恢复期，ALT转 入正常。但如果在100IU左右波动或再度上 升，为慢性活动性肝炎。
连续监测法测定AST
L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨 酸
草酰乙酸+NADH+ MOH L-苹果酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算
出酶的活力。
在AST双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二 酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光 度的下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率， 本计算ALT的活性浓度。