革兰氏染色法各种染液的配制

革兰氏染色法各种染液的配制

实验室诊断2009-06-20 08:18

革兰氏染色法是细菌学中最常用的一种鉴别染色法。

细菌经结晶紫染色，并用碘液媒染后，用95％酒精脱色，最后用番红液复染，倘若细菌经结晶紫、碘液染色后不被酒精脱色，仍保持紫兰颜色，则为革兰氏染色阳性；如果细菌被酒精脱色，则可被番红液复染成红色，乃为革兰氏染色阴性。此染色法将细菌分为两大类，可以帮助鉴别细菌及治疗时选择适当的抗菌药物。

目的要求

掌握细菌涂片制作及革兰氏染色法的操作技术。

材料

1．葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。

2．结晶紫染色液。

3．革兰氏碘液。

4．95％酒精。

5．番红染液。

6．载玻片。

方法

一、涂片标本的制备（见实验一）

二、革兰氏染色法

1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。

2．媒染：滴加革兰氏碘液，作用1—3分钟，水洗。

3．脱色：滴加95％酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。

4．复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。

结果：视野中可以察见两种细菌：

葡萄球菌：紫色、球形、葡萄状排列。

大肠杆菌：红色、杆状、散在排列。

【附】革兰氏染色法各种染液的配制

一、结晶紫（Ｃｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔ）染液

结晶紫 2.0g

草酸铵0.8g

95％酒精20ml

蒸馏水80ml

先将结晶紫溶于酒精，草酸铵溶于蒸馏水中，然后将两液混合，静置４８小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。

二、革兰氏碘液

碘 1.0g

碘化钾 2.0g

蒸馏水300ml

先将碘与碘化钾混合，加水少许，略加摇动，待碘完全溶解后再加蒸馏水至定量。

三、脱色剂：95％酒精

四、复染剂：番红（沙黄ＳａｆｒａｍｉｎｅＯ）染液

沙黄（ＳａｆｒａｍｉｎｅＯ）０．２５ｇ

９５％乙醇１０ｍｌ

蒸馏水适量

将沙黄溶解于９５％乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ