【CN109694853A】一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法【专利】
抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用
抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用摘要：抗腫瘤单抗疗法是目前治疗HER2阳性乳腺癌的首选方法之一。
抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCC）是抗体药物的主要机制之一，通过激活免疫细胞来杀伤肿瘤细胞。
本研究旨在建立一种基于报告基因的方法，用于检测抗HER2单抗的ADCC活性，并在体外和体内模型中评估其生物学活性。
首先，我们选择了几种具有不同HER2表达水平的乳腺癌细胞株作为实验模型，包括HER2正常表达的细胞株（例如SK-BR-3），HER2低表达的细胞株和HER2过表达的细胞株。
然后，我们构建了一个基于报告基因的系统，其中包含一个报告基因（例如荧光素酶）和一个信号轨迹的启动子（例如NF-κB）。
该启动子被激活后，报告基因的表达水平可被测量。
在体外实验中，我们首先对单抗样品进行了质检，确保其纯度和活性。
然后，我们将单抗与不同HER2表达水平的乳腺癌细胞混合，并接种到细胞培养板中。
细胞吞噬作用的活性可以通过测量报告基因的表达水平来评估。
我们发现，抗HER2单抗可诱导免疫细胞对HER2过表达细胞的ADCC活性，而对HER2低表达或正常表达细胞的作用较小。
为了验证该方法在体内的应用价值，我们采用小鼠模型进行了进一步实验。
我们注射了HER2过表达的乳腺癌细胞到小鼠体内，然后给予抗HER2单抗治疗。
在治疗后，我们收集了小鼠的血样，并检测其中的抗体与细胞间的相互作用。
结果显示，抗HER2单抗能够诱导小鼠体内免疫细胞对肿瘤细胞的ADCC活性，从而抑制肿瘤的生长。
综上所述，我们成功地建立了一种基于报告基因的方法，用于检测抗HER2单抗的ADCC活性。
该方法可以在体外和体内对抗体的生物学活性进行评估，并为抗HER2单抗的临床应用提供了重要的参考依据。
这一方法的建立为进一步研究和开发抗体药物提供了新的途径。
关键词：抗体依赖性细胞吞噬作用，HER2阳性乳腺癌，报告基因，荧光素酶，NF-κB，体外实验，体内实验总之，我们成功地建立了一种基于报告基因的方法来评估抗HER2单抗的ADCC活性。
一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒[发明专利]
![一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/178cdbfe227916888586d738.png)
专利名称：一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：蔡林涛,盛宗海,胡德红,龚萍,张鹏飞,高笃阳
申请号：CN201210279149.9
申请日：20120807
公开号：CN102798724A
公开日：
20121128
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其检测试剂盒。
本发明所提供的试剂盒包括(1)抗体稀释缓冲液，(2)孵育缓冲液，(3)联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液，(4)无镉量子点的水溶液。
所述的抗体稀释缓冲液为磷酸与NaCl混合配置的磷酸-NaCl缓冲液；所述的孵育缓冲液为所述的抗体稀释缓冲液与胎牛血清混合。
实验证明，本发明的检测乳腺癌HER2基因表达量的方法操作简单，灵敏度高，精确度好。
申请人：深圳先进技术研究院
地址：518055 广东省深圳市南山区西丽大学城学苑大道1068号
国籍：CN
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her2过表达标准
her2过表达标准关于HER2过表达标准的文章（1500-2000字）引言：HER2基因是一种与乳腺癌发生相关的重要基因，在许多乳腺癌患者中都会出现过表达的情况。
HER2过表达会导致肿瘤的恶性程度增加，并且预示着患者的预后可能较差。
因此，准确判断HER2过表达的标准对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从HER2过表达的定义、检测方法、相关标准和治疗策略等方面逐步解析。
一、HER2过表达的定义：HER2基因位于人体第17号染色体上，是一种编码成蛋白质的基因。
HER2（人体表皮生长因子受体2）是一种细胞膜上的受体蛋白质，参与调控乳腺细胞的生长和分化。
当HER2基因发生异常，出现拷贝数扩增或突变等情况时，会导致HER2过表达。
HER2过表达的乳腺癌细胞具有更强的增殖能力和侵袭能力，从而增加患者的复发风险和死亡率。
二、HER2过表达的检测方法：目前常用的HER2过表达检测方法主要有免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）两种。
1. 免疫组化（IHC）：免疫组化是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2蛋白在肿瘤细胞膜上的表达情况。
根据IHC的染色结果，HER2过表达通常被分为0-3级。
IHC 0级表示无HER2表达，IHC 1+级表示低表达，IHC 2+级表示中等表达，IHC 3+级表示强烈表达。
2. 原位杂交（ISH）：原位杂交是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2基因的扩增情况。
常用的ISH方法包括荧光原位杂交（FISH）和辣根过氧化物酶原位杂交（CISH）。
FISH技术利用荧光标记的探针与HER2基因发生结合，形成特定的荧光信号，从而判断HER2基因是否扩增。
CISH技术则使用酶标标记的DNA探针，通过染色反应形成可见的颜色信号，评估HER2基因扩增的情况。
三、HER2过表达的相关标准：根据乳腺癌患者HER2表达情况的不同，可将HER2分为HER2阴性（-）、HER2低表达（+）、HER2中度表达（2+）和HER2强烈表达（3+）四个等级。
乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗的相关性研究
乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗的相关性研究乳腺癌Her2 基因通过抑制凋亡、上调血管内皮生长因子（VEGF）而增加肿瘤细胞的侵袭力，原癌基因Her2过表达见于20% ～30%乳腺癌，Her2过表达与乳腺癌患者预后不良密切相关，Her2分子作为乳腺癌重要的分子生物学标记物之一，是乳腺癌基因治疗的重要靶位点，对乳腺癌的治疗和预后都有极其重要的价值。
本文就目前乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗方面的相关性研究进展作一综述。
标签：Her2基因过表达；乳腺癌；治疗；相关性1 一般资料世界卫生组织癌症研究所最新统计显示，全球每年乳腺癌患者有120万左右，其中新发病例54万，每年因乳腺癌病亡的病例大约50万。
2009年，国内乳腺癌发病率大约为0.02%，居各类癌症之首，每年因乳腺癌死亡人数大约为5万人。
应学翔等人研究结果发现[1]，Her2在很多上皮源性肿瘤领域过表达，且与肿瘤转移、发生及降低放化疗敏感性等具有密切关联性，同时也是非常有发展前途的一种基因治疗靶位[2]。
本文就目前乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗方面的相关性研究进展作一综述。
2 Her2基因分子结构、功能及相关检测2.1 结构染色体17q21中，Her2是具有185KD编码分子量的一种跨膜糖蛋白，该基因分子主要由胞外结构域、跨膜区以及胞内酪氨酸激酶结构域三部分共同组成，同时也极具PTK（蛋白酪氨酸激酶）活性的一种跨膜蛋白，该基因分子是表皮生长因子受体中的重要环节[3-4]。
2.2 功能从根本上说，生长因子受体本身属于一种原癌基因，并由Her3、Her2以及Her1共同组成，该受体在肿瘤出现与发展过程中发挥着极为重要的作用。
如今还没有发现直接结合Her2的相关配体，结合其他受体变为异二聚体后，可以充分发挥其信号转移功能，与没有Her2的二聚体相比，具有更强的信号功能[5]。
此外，Her2本身所具有的异二聚体让表皮生长因子受体（EGFR）在细胞膜中出现过表达，加速了细胞的增殖，导致肿瘤形成和生长加快。
Her 2 基因与乳腺癌
引言概述：乳腺癌作为一种常见的恶性肿瘤，对女性健康造成了巨大的威胁。
在癌症研究领域，Her2基因逐渐引起了人们的关注，该基因的异常表达与乳腺癌的发生和发展密切相关。
本文将结合最近的研究成果，对Her2基因与乳腺癌的关系进行深入探讨，并从分子水平、临床应用等方面进行详细阐述。
正文内容：一、Her2基因的功能和调控机制1.Her2基因的结构和编码蛋白2.Her2基因在细胞生长和分化中的作用3.Her2基因的调控机制：转录水平和翻译后修饰二、Her2基因与乳腺癌的关系1.Her2基因的异常表达在乳腺癌中的高发率2.Her2基因异常表达与乳腺癌的分子亚型3.Her2基因异常表达与乳腺癌的生物学行为4.Her2基因异常表达与乳腺癌的临床预后5.Her2基因异常表达在乳腺癌治疗中的作用三、Her2基因检测方法和进展1.免疫组化检测法及其局限性2.基因表达检测法的发展与应用3.荧光原位杂交技术的优势和应用前景4.微阵列技术在Her2基因检测中的应用5.下一代测序技术在Her2基因检测中的前景四、Her2基因与靶向治疗1.Her2阳性乳腺癌的靶向治疗药物2.Her2阳性乳腺癌的治疗策略3.Her2阳性乳腺癌预防与治疗的新进展4.增强Her2靶向治疗效果的新策略5.Her2阳性乳腺癌治疗中的副作用和安全性问题五、Her2基因在乳腺癌研究中的前景1.Her2基因与乳腺癌干细胞的关系2.Her2基因在乳腺癌预测和早期诊断中的应用3.Her2基因与乳腺癌转移的关系4.Her2基因与乳腺癌免疫治疗的关联5.未来研究方向和挑战总结：Her2基因在乳腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用。
通过深入了解Her2基因的功能和调控机制，我们可以更好地理解乳腺癌的分子机制。
同时，Her2基因的检测方法和靶向治疗的进展为乳腺癌患者的个体化治疗提供了依据。
随着研究的深入，Her2基因在乳腺癌研究中的应用前景将更为广阔，这将为乳腺癌患者的诊断和治疗带来更多的希望。
乳腺癌HER2neu基因荧光原位杂交诊断体系的建立及应用的开题报告
乳腺癌HER2neu基因荧光原位杂交诊断体系的建立及应用的开题报告一、研究背景乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，且其发生率不断增加。
HER2/neu基因在乳腺癌乃至其他肿瘤中起着重要作用，是影响恶性肿瘤生长、进展及预后的重要遗传因素之一。
HER2/neu基因的放大或突变可导致其蛋白表达增加，从而导致肿瘤恶化。
因此，针对HER2/neu基因进行诊断和治疗，成为乳腺癌治疗的重要手段。
目前，荧光原位杂交(FISH)是诊断HER2/neu基因的最可靠、最准确的方法之一。
FISH技术可以快速、直观地检测HER2/neu基因有无异常。
因此，建立一种HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，对于乳腺癌的诊断和治疗都具有重要的临床意义。
二、研究内容本研究拟建立一种HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，并对其在乳腺癌诊断中的应用进行探究。
主要研究内容包括以下几个方面：1. 建立HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系。
该体系的建立需要考虑多个因素，比如荧光标记、探针合成、FISH实验条件等。
在初步实验基础上，逐步优化体系，并验证其可靠性和准确性。
2. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系在乳腺癌检测中的应用进行探究。
该研究将从临床样本出发，应用HER2/neu基因荧光原位杂交诊断技术，对乳腺癌患者进行检测。
同时，结合其他临床资料，分析其诊断效果及与其他诊断方法的比较，以确定该技术的临床应用价值。
3. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断致癌机制的研究。
该研究将通过基因测序和表达分析等方法，深入探究HER2/neu基因荧光原位杂交诊断对人类乳腺癌的诱导效应，以及相关的分子机制。
三、研究意义1. 建立HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系，有助于更准确、更快速地诊断乳腺癌，并能为临床治疗提供准确的分子靶向治疗指导。
2. 对HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系在乳腺癌检测中的应用进行探究，能够确定该技术的临床应用价值，并为后续实现该技术的临床推广提供科学依据。
【CN109988820A】一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910317012.X(22)申请日 2019.04.19(71)申请人 奥明（杭州）基因科技有限公司地址 310018 浙江省杭州市江干区杭州经济技术开发区白杨街道6号大街452号2幢A1711-A1712号房(72)发明人 童云广 王瓯晨 徐鹭芹 (74)专利代理机构 杭州知见专利代理有限公司33295代理人 赵越剑(51)Int.Cl.C12Q 1/6806(2018.01)C12Q 1/6886(2018.01)C40B 50/06(2006.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒，包括(1)样品采集与提取；(2)末端修复/磷酸化/加A；(3)添加含标签的接头序列；(4)捕获前扩增；(5)目的基因杂交捕获；(6)富集；(7)捕获后扩增。
本发明基于二代数字分子标识符(DMI )和双链双标签双重纠错(DSDC)技术，可有效降低深度测序PCR扩增或测序中发生的错误，提高检测灵敏度，同时针对反应体系和杂交洗涤液进行了优化，能对目标基因进行有效富集，降低样本量的要求。
可用于乳腺癌的靶向治疗、临床试验以及疗效评估涉及基因检测的技术领域。
权利要求书3页 说明书14页序列表6页 附图2页CN 109988820 A 2019.07.09C N 109988820A权 利 要 求 书1/3页CN 109988820 A1.一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品采集与提取：收集外周血，分离血浆，并提取游离核酸DNA；(2)末端修复/磷酸化/加A：对提取到的游离核酸DNA进行末端修复、磷酸化及加A；(3)添加含标签的接头序列：将步骤(2)处理后的游离核酸DNA与含标签的接头序列混合，PCR反应，纯化后得标签-靶标DNA；(4)捕获前扩增：对标签-靶标DNA进行PCR扩增，然后进行纯化，获得基因组DNA文库；(5)目的基因杂交捕获：使用Hyb Block将基因组DNA文库进行杂交前的封闭，然后使用捕获探针与基因组DNA文库进行杂交捕获；(6)富集：对步骤(5)捕获到的靶序列采用磁珠富集法进行富集；(7)捕获后扩增：对步骤(6)富集后的靶序列进行PCR扩增，纯化后获得目的基因文库。
HER-2过表达与乳腺癌治疗的研究进展
HER-2过表达与乳腺癌治疗的研究进展
王合兵;窦拉加;张成武
【期刊名称】《肿瘤学杂志》
【年(卷),期】2008(14)2
【摘要】人类表皮生长因子受体-2(HER-2)是一种与乳腺癌发生、发展密切相关的癌基因。
HER-2过表达可能预测对内分泌治疗和细胞毒性化疗药物敏感性。
Herceptin是针对HER-2的分子靶向药物,其肿瘤治疗作用受到广泛关注,HER-2过表达乳腺癌病人在肿瘤发展的各个病期中表现为预后差。
全文是根据使用曲妥珠单抗来治疗转移性乳腺癌或作为术后辅助治疗情况下获得的数据来说明HER-2阳性表达在乳腺癌治疗中的作用,或者作为独立的预后因子,或作为预测抗癌治疗反应的一项标志物。
【总页数】3页(P151-153)
【关键词】乳腺肿瘤;HER-2/neu;曲妥珠单抗;Herceptin
【作者】王合兵;窦拉加;张成武
【作者单位】青海大学附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R737.9
【相关文献】
1.Herceptin治疗HER-2过表达性乳腺癌研究进展 [J], 柴雅明;糜漫天;郎海滨
2.曲妥珠单抗1治疗HER-2过表达乳腺癌的研究进展 [J], 陈贤玉（综述）;王昆
华（审校）;
3.曲妥珠单抗1治疗HER-2过表达乳腺癌的研究进展 [J], 陈贤玉(综述);王昆华(审校)
4.TCH新辅助化疗方案治疗HER-2阳性乳腺癌的疗效及对患者ER、PR、HER-2及Ki67表达的影响 [J], 杨文强;刘敏;唐铁雷;王磊
5.乳腺癌HER-2过表达与辅助内分泌治疗的研究进展 [J], 秦少波;牛剀;张蕊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【CN109781988A】采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151700.3(22)申请日 2019.02.28(71)申请人 贵州省人民医院地址 550002 贵州省贵阳市南明区中山东路83号(72)发明人 侯净 魏娜 朱海振 戴民 陈欢 陆婧 (74)专利代理机构 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) 11670代理人 潘卫锋(51)Int.Cl.G01N 33/577(2006.01)G01N 33/574(2006.01)(54)发明名称采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法(57)摘要本发明公开了采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法，所述方法包括以下步骤：S1：采集乳腺癌患者的外周血，并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离，得到乳腺癌循环肿瘤细胞；S2：对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验，检验其是否存在；S3：对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增；S4：将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片；S5：检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。
本发明方法操作简单，检测准确度高，可以避免假阴性等情况，提高对乳腺癌的排查准确度。
权利要求书2页 说明书8页CN 109781988 A 2019.05.21C N 109781988A权 利 要 求 书1/2页CN 109781988 A1.一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1：采集乳腺癌患者的外周血，并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离，得到乳腺癌循环肿瘤细胞；S2：对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验，检验其是否存在；S3：若存在，对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增；若不存在，重复步骤S1～S2；S4：将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片；S5：检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。
乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗的相关性研究
从根 本 上 说 ，生 长 因子 受 体 本 身 属 于一 种 原 癌 基 因， 并 由 周期 结果发 现 ，通 过 ｓ ｉ Ｒ Ｎ Ａ Ｈ ｅ ｒ ２处理 后 的 Ｍ Ｃ Ｆ 一 ７ ／ Ｈ ｅ ｒ ２与 Ｓ Ｋ Ｂ ｒ 一 ３ Ｈ ｅ ｒ ３ 、Ｈ ｅ ｒ ２以及 Ｈ ｅ ｒ ｌ 共 同组 成 ，该受 体在 肿 瘤 出现 与 发展 过程 肿瘤 细胞 系， 阻碍其 生长 ，同时细 胞在 Ｇ Ｉ ／ Ｓ 期 积聚 ，通过 Ｓ ｉ Ｒ Ｎ Ａ
２ Ｈ ｅ ｒ ２ 基 因分子结构 、功 能及相 关检测
２ ． １ 结 构
升等研 究结果 显示 ｕ ，拉 帕替丁 与卡培他 滨联用 对乳腺 癌进 行治
３ ． １ ． ３ Ｈ ｅ ｒ ２的 Ｒ Ｎ Ａ干涉
染色 体 １ ７ ｑ ２ １中，Ｈ ｅ ｒ ２ 是 具有 １ ８ ５ Ｋ Ｄ 编 码分 子量 的一种 跨膜 疗，其效 果要 比单独应 用卡陪他 滨治疗 效果好 。
糖 蛋 白，该基 因分 子主要 由胞外 结构域 、跨膜 区 以及胞 内酪 氨酸
激 酶结构域 三部 分共 同组成 ，同时也极具 Ｐ Ｔ Ｋ（ 蛋 白酪氨 酸激酶 ）
环节 。
余海 浪 等人 进 行 体外 实验 结 果 显示 “ ，将 ｓ ｉ Ｒ Ｎ Ａ导入 Ｈ ｅ ｒ ２
活 性 的一种跨 膜 蛋 白，该基 因分 子是表 皮生 长 因子受体 中的重要 阳性 的肿瘤 细 胞系 ，在 很 大程 度 上减 少 了细 胞 表面 的 Ｈ ｅ ｒ ２ 基因 蛋 白表达 ，而且 细胞 呈现 多生物 学 效应 ， 比如 凋亡 与生 长抑 制 。 在 Ｓ ｉ Ｒ Ｎ Ａ 将Ｈ ｅ ｒ ２ 沉默 时 ，就会 上调肿 瘤细胞 抗原表 达 ，分 析细胞
晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法[发明专利]
![晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/40c7e592a417866fb94a8ed7.png)
专利名称：晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法
专利类型：发明专利
发明人：高杰,庞恺,李胜,孙萍,王振丹
申请号：CN201610058657.2
申请日：20160128
公开号：CN105606824A
公开日：
20160525
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞Her-2基因的检测方法：利用膜过滤装置分离获取晚期乳腺癌患者外周血中的CTC；利用细胞免疫荧光技术鉴定晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞；运用细胞蜡块技术制作薄层切片；进而通过免疫组织化学技术检测晚期乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞的Her-2表达情况。
本发明借助于ISET技术分离富集CTCs，依靠细胞免疫荧光技术鉴定CTCs，克服了单纯ISET技术鉴定CTCs存在的困难和单纯免疫学检测技术存在的假阴性。
同时，设备要求不高，方法易掌握，并能实时监测。
通过该技术方法，不用取材乳腺癌组织即可检测到晚期乳腺癌患者Her-2表达情况。
申请人：山东省药物研究院
地址：250062 山东省济南市经十路18877号
国籍：CN
代理机构：济南诚智商标专利事务所有限公司
代理人：黎明
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预测乳腺癌HER2免疫组化2+样本HER2基因扩增状态的方法[发明专利]
![预测乳腺癌HER2免疫组化2+样本HER2基因扩增状态的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/28bfb112f61fb7360a4c6565.png)
专利名称：预测乳腺癌HER2免疫组化2+样本HER2基因扩增状态的方法
专利类型：发明专利
发明人：王宽松,粟诗童,杨芝春,郭伟,周训检,戚嘉琳,胡祯敏,唐萍,周建华
申请号：CN201911113143.2
申请日：20191114
公开号：CN110982899A
公开日：
20200410
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种预测乳腺癌HER2免疫组化2+样本中HER2基因扩增状态的方法，包括步骤：对乳腺癌HER2免疫组化2+样本进行SOX10免疫组化检测，SOX10免疫组化检测结果为阳性的样本判定为HER2基因无扩增或HER2基因无扩增概率大于基因扩增概率。
本发明在一定程度上避免了对所有HER2免疫组化2+样本进行FISH检测的盲目性，缩小了HER2‑FISH检测的临床指针范围，显著节约了医疗成本。
申请人：中南大学湘雅医院
地址：410000 湖南省长沙市湘雅路87号
国籍：CN
代理机构：长沙朕扬知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：何湘玲
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一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用[发明专利]
![一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/efb84314700abb68a882fba6.png)
专利名称：一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用
专利类型：发明专利
发明人：张菁,张顺,宋小慧
申请号：CN201611065900.X
申请日：20161128
公开号：CN106591438A
公开日：
20170426
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用。
所述核酸组合包括两对Her2基因引物和两对内参引物。
本发明通过使用两对引物和两对内参使用数字PCR方法对Her2基因进行检测，能够对Her2基因进行绝对定量，借助软件完全自动化的进行结果判读，分析速度快。
使用两对引物有利于提高检测结果的准确性，特别是对于血液这种本身DNA含量较低的样品。
同时使用两对内参引物，减少了假阴性和假阳性的可能。
申请人：华东医药(杭州)基因科技有限公司
地址：310000 浙江省杭州市滨江区滨安路688号6幢402室
国籍：CN
代理机构：杭州天勤知识产权代理有限公司
代理人：沈自军
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【CN109954053A】一种具有治疗乳腺癌食疗组合物及其制备方法【专利】
(21)申请号 201910326908 .4
(22)申请日 2019 .04 .23
(71)申请人 辽宁抗风竤生物医药科技有限责任 公司
地址 110054 辽宁省沈阳市和平区南京北 街24甲2号
(72)发明人 张瑞君
(74)专利代理机构 沈阳智龙专利事务所(普通 合伙) 21115
萝卜 与雌性红萝卜 缨子置于高温炉中在800~1000℃下保温1~5h； 步骤四的充分搅拌均匀的搅拌速率是50~800r/min，搅拌时间是1h~5h。
步骤一：选材：雌性红萝卜 选用由沈阳绿星大白菜研究所出品的“雄性不育系”三系杂 交雌性红萝卜 ；雌性红萝卜 缨子采用沈阳绿星大白菜研究所出品的“雄性不育系”三系杂交 雌性红萝卜 缨子；
步骤二：制成混合粉末颗粒：将雌性红萝卜 和雌性红萝卜 缨子进行混合冷冻，得到雌性 红萝卜 和雌性红萝卜 缨子混合的粉末颗粒；
中的昆 布和葡萄籽晾干粉碎后过300~1000目筛 ；黄豆和核桃仁采 用文火炒制 ，到黄豆和核 桃仁酥脆，炒制后粉碎过300~1000目筛；绿茶和花椒与加水量的质量比为1：（2~4）先武火后 文火煮至呈褐色溶液。
10 .根据权利要求6所述的具有治疗乳腺癌食疗组合物的制备方法，其特征在于：步骤
四的雌性红萝卜 与雌性红萝卜 缨子草木灰的具体制备方法是：选用清洗、晾干后的雌性红
步骤三 ：物料处理 ：将昆 布和葡萄籽晾 干粉碎 ；绿茶 和花椒一起 加水煮制水呈褐色 ，去 除煮后的花椒和绿茶，得到褐色溶液；将黄豆和核桃仁炒制，粉碎；
步骤四 ：物料混合 ：边搅拌边将炒制后的黄豆和核桃仁粉末加入粘稠状液体中 ，并将粉 碎后的昆布以及葡萄籽加入进去，继续搅拌，加入雌性红萝卜 与雌性红萝卜 缨子草木灰，再 将雌性红萝卜 和雌性红萝卜 缨子混合粉末颗粒缓慢加入，充分搅拌均匀，得到面团状食疗 组合物；
Her2过表达与乳腺癌治疗的相关性研究进展
Her2过表达与乳腺癌治疗的相关性研究进展
刘尧;刘文超;陶玉荣
【期刊名称】《现代肿瘤医学》
【年(卷),期】2010(018)001
【摘要】乳腺癌Her2 基因通过抑制凋亡、上调血管内皮生长因子(VEGF)而增加肿瘤细胞的侵袭力,原癌基因Her2过表达见于20%-30%乳腺癌,Her2过表达与乳腺癌患者预后不良密切相关,Her2分子作为乳腺癌重要的分子生物学标记物之一,是乳腺癌基因治疗的重要靶位点,对乳腺癌的治疗和预后都有极其重要的价值.本文就目前乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗方面的相关性研究进展作一综述.【总页数】3页(P182-184)
【作者】刘尧;刘文超;陶玉荣
【作者单位】第四军医大学西京医院肿瘤中心,细胞生物学国家重点学科,陕西,西安,710032;宝鸡市中心医院肿瘤中心,陕西,宝鸡,721008;第四军医大学西京医院肿瘤中心,细胞生物学国家重点学科,陕西,西安,710032;第四军医大学西京医院肿瘤中心,细胞生物学国家重点学科,陕西,西安,710032
【正文语种】中文
【中图分类】R736.3
【相关文献】
1.乳腺癌HER2基因表达阳性者17号染色体倍体性与HER2蛋白表达及临床预后因素的相关性分析 [J], 陈红;许建平;马小干;程应东;杨桦;孙建国;陈正堂
2.HER2/neu和基于HER2/neu乳腺癌治疗的研究进展 [J], 安静;符兆英
3.乳腺癌Her2基因过表达与乳腺癌治疗的相关性研究 [J], 谢新美;李锋
4.HER2阳性乳腺癌治疗的研究进展 [J], 李国政
5.HER2阳性乳腺癌治疗及耐药性研究进展 [J], 彭江云; 姚伟城; 王永强; 邓伟溪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151712.6
(22)申请日 2019.02.28
(71)申请人 贵州省人民医院
地址 550002 贵州省贵阳市南明区中山东
路83号
(72)发明人 侯净 倪青 魏娜 贾琦 刘欣
胡诗航
(74)专利代理机构 北京栈桥知识产权代理事务
所(普通合伙) 11670
代理人 潘卫锋
(51)Int.Cl.
C12N 5/09(2010.01)
C12N 15/85(2006.01)
(54)发明名称
一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构
建方法
(57)摘要
本发明公开了一种HER2基因过表达的乳腺
癌细胞系的构建方法，包括以下步骤：S1：对乳腺
癌细胞进行培养；S2：通过对乳腺癌细胞PCR扩
增，建立表达系统；S3：对乳腺癌细胞系进行构
建，S4：进行细胞观察和荧光强度对比。
本发明通
过实时荧光定量PCR检测HER2基因在mRNA中的表
达情况，以证明细胞系构建成功。
本发明构建的
乳腺癌细胞系可以稳定表达HER2基因，具有整合
效率高，假阳性率低等优点，为进一步研究HER2
基因乳腺癌发生、发展、治疗及后续耐药过程中
提供基本且有力的研究工具。
权利要求书2页 说明书7页CN 109694853 A 2019.04.30
C N 109694853
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109694853 A
1.一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将新鲜的乳腺癌细胞在含有10％FBS的液体培养基中，在温度为30-35℃条件下培养1-2h,然后用FBS充分洗涤后，置于转动频率为50-80r/min、温度为20℃的恒温摇床上进行悬浮细胞培养，对培养后的细胞通过灭菌处理，再100目过滤，进行转接培养3-5次，再在水浴温度为30℃、通气量为5-10m3/h的条件下震荡处理2-4h，得到乳腺癌细胞；
S2：提取乳腺癌细胞的总mRNA，将总mRNA进行稀释后放入到反应离心管，在温度为60-75℃的条件下，加入反转录缓冲液，然后温度按照1.5℃/min的降温速率下降至20-30℃，向其加入反转录酶、DNA聚合酶，期间不断用磁力棒搅拌处理，处理30-45min，得到cDNA，再对得到的cDNA通过上下引物分别进行PCR扩增，通过切酶SnaBI剪切，进行琼脂凝胶电泳，通过pBS-T Mini Kit中片段连接的方法，分别克隆到pBS-T载体中，通过电泳结果筛选及其琼脂糖凝胶电泳，获得质粒；
S3：所述质粒作为模板，pGenesil-1载体，构建出相应的pGenesil-ETV1A、pGenesil-ETV1B、pGenesil-ETV1C、pGenesil-NC重组siRNA表达载体；在200μlPCR管中配制如下连接体系：pGenesil-1/HindⅢ/BamHⅠ载体大片段1μl；双链片段DNA5ul；T4DNAligase1ul；10×T4DNAligasebuffer1ul；ddH2O2μl。
以上体系配制好后放入金属浴，16℃反应4小时，将连接产物全部加入到100μlDH5α感受态中，冰浴15min，加入500μlLB液体培养基，在温度为30℃，70rpm条件下，振荡培养1h，然后在35℃热激90s后立即冰浴100s，取150μl培养物涂布于LB/ Kan平板上37℃倒置培养10小时；
S4：对培养后培养物进行转染Marc-145细胞，通过消化，振荡过滤将Marc-145细胞重选，调节细胞悬浮液密度，培养3-6h，然后将培养后的Marc-145细胞放入到四孔板中培养，待细胞密度为60-70％时，向四孔中分别加入转染试剂离心搅拌，观察细胞病变，培养4代后，加入含有乳腺癌细胞的新鲜培养基培养3-5h，洗涤，观察细胞状态及荧光强度。
2.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中液体培养液为硝酸铵15-20g/L、黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L。
3.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中液体培养液为黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L、硝酸铵15-20g。
4.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中PCR反应体系及反应条件：通过无菌超纯水稀释至10μM/L；取已经稀释好的两条互补的mRNA靶点序列片段各1.5μl，10×T4buffer1μl，加水至总体积20μl，放于200μl的PCR管中，RT产物8.7uL，4×PCR缓冲液3uL，15mM的氯化钾3uL，PCR引物溶液1.5uL，DNA聚合酶0.5uL混匀后加入到87孔样品板上进行PCR反应，反应条件：85℃，8min；90℃，25min，60℃，30秒钟，65℃，2min，循环30次；70℃1min；4℃直至收取PCR产物。
5.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中所得的质粒通过阳性克隆筛选，进行阳性克隆筛选时，先平均取得质粒，均匀涂布到含去去甲基金霉素培养基平板上，培养6h，然后抽提质粒，将培养物在温度为20-30℃的条件下，滤膜过滤，通过EcoRI进行单酶切鉴定，被EcoRI切开的可能是阳性克隆。
6.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤S4中从-70℃中取出质粒细胞，冰上放置4min，待质粒细胞解冻后，加入9μL连接产物，轻柔混匀内容物，冰中放置10min；然后将之放到预加温到30℃的水浴锅中，静置70s；快
2。