HE染色程序及相关溶液配制

HE 染色程序

1.取材与固定：一般取立方米，基本不用再次修形。置于4%甲

醛溶液中，至少固定24小时。室温保存即可。

2．水洗：视组织块大小而定。一般与固定时间相等或至少水洗24小时。

3.脱水：70%酒精(过夜或2h) T80%酒精(过夜或1h) -90% 酒精（1h）- 95% 酒精1（ 1h）- 95% 酒精（1h）n- 100% 酒精I

(1h) -100%酒精n (1h)，梯度酒精脱水

注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100%的酒精，注意观察组

织块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。如果水脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。

4、透明：二甲苯1( 10min)7二甲苯n (10min)。

5、浸蜡：58C (—般用新蜡)

6、包埋：叠好的蜡槽，一般深1cm宽1cm长7cm放4个组

织块为宜。注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。包埋时用来夹

取组织块的镊子，要同时放在蜡箱里预热。先向蜡槽内倒蜡，然后

用预热的镊子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。

包埋后，就不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。

7、常规切片，一般组织3-5 微米，神经组织切7 微米。展片温度为52 摄氏度。捞片时刻直接从95%的酒精中取载玻片直接捞片，

不必擦干载玻片上的酒精。捞好片后，置于37度温箱恒温干燥过夜。

& 切片脱蜡：二甲苯1( 5min)7二甲苯n (8min),

9、水化：100%酒精(1min)790%酒精(1min) f 80%酒精(1min) T 70%酒精(1min)

脱水：70%酒精(10s ) T80%酒精(20s ) T90%酒精(30s ) T95%酒精(1min)T 100%酒精(2min) f 100%酒精(2min)

17、二甲苯透明：二甲苯1( 5min)T 二甲苯n (5min)

18、中型树胶封片，镜检。

相关液体

1、 4%甲醛固定液： 40%的甲醛溶液 10ml + 90ml 蒸馏水，摇匀即可。

2、处理载玻片用的盐酸酒精： 95%酒精 100ml + 36-38%盐酸 1 ml 摇 匀即可。

3、分化用 1%盐酸酒精：注： 1%盐酸酒精配制： 75%酒精 99ml+36-38%HCL 1ml 即可。

4、二甲苯：无需配制，用商品化得即可。

5、各个浓度的酒精，均用 100%的酒精或 95%酒精按比例稀释配制即 可。

10、 水洗 2-5min

11、 苏木素染色 15-20min

12、 水洗至灰黄色

13、 分化：1%盐酸酒精分化30s 至桃粉色,

14、 水洗返蓝： 2-3h

15、 伊红染色： 15min

16、

6、苏木素的配制：

铵明矾（硫酸铝按） 55 克加蒸馏水至 600ml

A B 、C 液，将A 与B 混合过夜，用滤纸过滤后，加入C 液, 在温暖有阳光处照射 1-2 个月，使染料成熟，方可使用。

7、1%伊红的配制（水溶性的）：1克伊红（曙红B ）力口 100ml 蒸馏水 即可，需放置于阳光下成熟一段时间。一般500ml 染液中加入5-6滴 醋酸，可以增强其着色力。

HE 染色原理；苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质 内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基 质中的成分着红色 。

所有化学试剂买“分析纯”级别的。

甲醛：买回来的都是 40%浓度的，回来自己配成 4%的。

二甲苯：买回来的直接用就行，无需配制。

无水乙醇：

95%乙醇： 此两种浓度的酒精， 用来配制 90%， 80%， 70%浓度的酒精。

苏木素：还有叫苏木精的。 如果买粉末的话， 就按上边给的配方配制， 这样就需要 铵明矾（硫酸铝按）常规药品，都好买。也有商品化的， 买现成的染液，直接就是液体的。

伊红，又有叫曙红B,（千万别买错了，还有叫曙红 Y 的，这个不能

A 液：

B 液： 苏木素 6 克加 100%酒精 50ml 混匀

C 液： 甘油 150ml 加甲醇 150ml

分别配制

用于HE染色）。粉末状的，按上面的配方自己配。也有现成的商品化的染液，就是价格略贵一些。

蜡：有国产的，国产的比较便宜。有进口的。进口的比较贵，60-100

元/kg价格不等。我们实验室以前买过进口的“徕卡”品牌的蜡，60

元/kg。现在什么价格不知道了。新蜡，都会有气泡的，买蜡的时候, 熔点要56-58 C。