实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察
实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察
1
2
实验原理
线粒体的超活染色 线粒体的超活染色
about Janus green B
线粒体的专一性活体染色剂
Janus green B
染色原理 线粒体
蓝绿色（氧化状态）
细胞色素氧化酶
细胞质中
Janus green B
无色（还原状态）
实验原理
细胞壁 线粒体 细胞核
液泡
细胞质
洋葱鳞茎内表皮细胞
实验原理
实验步骤
线粒体的超活染色 注意事项 液泡系的超活染色
在载玻片上加一滴 请将载玻片置于水池上 在载玻片上加一滴 的搁架上再滴加染液 Janus green B 中性红 取一小片洋葱鳞茎 内表皮细胞 置于Janus green B 中20min
洋葱鳞茎内表皮细胞 取一小片洋葱鳞茎 应尽量撕取得薄一些
内表皮细胞 置于中性红 中15min
应使洋葱内表皮 完全浸在染液中 盖上盖玻片后，将
吸去染液,加一滴 吸去染液,加一滴 多余的Ringer液吸去 Ringer液,盖上盖玻片 Ringer液,盖上盖玻片
显微镜下观察
采用显微互动进行观 察，请先在显微镜上 调节好后，再打开电脑
显微镜下观察
实验目的
实验目的
1 观察植物活细 胞内线粒体、液泡 系的形态、发育和 分布
2 了解细胞和细胞 器的超活染色技术
实验原理
实验原理
活体染色技术 线粒体及其超活染色 液泡系及其超活染色
实验原理
概念
利用某些无毒 或毒性很小的 染料来显示细 胞内某些天然 结构，而不影 响细胞的生命 活动或产生任 何物理、化学 变化以致引起 细胞的死亡。
细胞壁 线粒体 细胞核 液泡 细胞质
实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察
液，室温染色5-10min，吸去染液加一滴Ringer溶液，盖上盖玻片进行观察。注意
此时应该轻压盖片使根尖尽量压扁利于观察。
五、实验结果与作业：
对人口腔上细胞的线粒体活性染色结果绘图
注意：
对黄豆根尖液泡系的染色进行观察时，注意分别对根尖的不同区域进行观察， 并对其中的细胞的液泡进行比较。在根尖生长点附近的细胞形状较小排列紧密， 其中的液泡被染成红色，数量不只一个且较小；在伸长区的细胞形状逐渐变为长 方形，形状较大排列较为规则，其中的液泡也逐渐变少变大，并且颜色也变浅。 至成熟区后细胞中只可见一个很大的液泡。 液泡系（vacuolar system）： 在细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡，除线粒体和质体以外都属于液泡 系。液泡的来源是多方面的，它们与质膜、内质网、高尔基体有密切关系。在 电子显微镜下可明确地看到在细胞内有内质网、高尔基体、核膜等的囊状结构， 它们互相吻合，在细胞内构成复杂的网状结构，是内膜所包围的小泡和液泡的 统称
线粒体的形态, 大小,数目与分布
形态：线状，颗粒状 大小：长1.5m-3 m; 直径0.5-1.0 m。 胰脏外分泌细胞中有长达10~20μm的巨线粒体。 数目：几百到几千（与细胞种类，细胞生理功能和生理 状态有关）。 肝细胞约1700个线粒体，占细胞体积的20%； 许多哺乳动物成熟的红细胞无线粒体。 分布：不均匀（与细胞能量需求有关）
四、实验方法：
1、人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察 将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B 溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并 搅动几下。染色处理10-15min后盖上盖玻片进行观察。 2、植物细胞液泡系的超活染色与观察: 取豆芽的根尖0.5cm左右的长度进行纵切，尽量切的很薄，滴加中性红染
细胞生物学实验指导
新鲜菠菜。
三、 试剂：
0.35 mol/L氯化钠，0.01％吖啶橙（acridine orange）。
实验方法：
1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，称30 g于 150 ml 0.35 mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3-5 min。
3. 分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验（步骤同上）。
实验结果：
将观察到现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。
不同低渗溶液下的溶血现象
试管编号 是否溶血 时间 结果分析
1. 10 ml 氯化钠 + 1 ml 稀释羊血
2. 10 ml 氯化铵 + 1 ml 稀释羊血
3. 10 ml 醋酸铵 + 1 ml 稀释羊血
实验结果：
描述并记录实验结果。
实验二 叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
实验目的：
（一）原理
气孔复合体由一对保卫细胞（有的有副卫细胞）组成，组成气孔的保卫细胞对光、温度、湿度、CO2等环境因子以及一些植物激素非常敏感。保卫细胞接收信号后，经过胞内信号转导，保卫细胞渗透势变化引起保卫细胞吸水或失水，使气孔开放或关闭，而K+是调节保卫细胞渗透势的重要物质，因此气孔的运动伴随着K+的迁移，如在光下，K+大量进入保卫细胞，渗透势下降，细胞吸水，气孔张开，反之，气孔关闭。
实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察
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2Hale Waihona Puke 实验原理线粒体的超活染色 线粒体的超活染色
about Janus green B
线粒体的专一性活体染色剂
Janus green B
染色原理 线粒体
蓝绿色（氧化状态）
细胞色素氧化酶
细胞质中
Janus green B
无色（还原状态）
实验原理
细胞壁 线粒体 细胞核
液泡
细胞质
洋葱鳞茎内表皮细胞
实验原理
液泡系 在电子显微镜下可明确地看 到在细胞内有很多囊状结构，它 们互相吻合，在细胞内构成复杂 的网状结构。如果从立体的角度 来看，这些囊状结构形成一个内 腔连接起来的膜系，并能与外部 的细胞质基质区别开来。
实验原理
液泡系的超活染色
中性红 一种弱碱性pH指示剂，变色范围在 pH6.4-8.0之间（红—橙） 中性红 染色原理 液泡系 （多呈酸性） 发生解离
细胞壁 线粒体 细胞核 液泡 细胞质
红色
实验步骤
实验步骤
洋葱鳞茎内表皮细胞 线粒体的超活染色 在载玻片上加一滴Janus green B 取一小片洋葱鳞茎内表皮细胞 注意事项
请将载玻片置于水池上 的搁架上再滴加染液 洋葱鳞茎内表皮细胞应尽 量撕取得薄一些
置于Janus green B中20min 应使洋葱内表皮完全浸在染液中 吸去染液,加一滴 Ringer液,盖上 盖玻片 显微镜下观察
盖上盖玻片后，将多余的 Ringer液吸去
实验步骤
洋葱鳞茎内表皮细胞 液泡系的超活染色 在载玻片上加一滴中性红 取一小片洋葱鳞茎内表皮细胞 置于中性红中15min 吸去染液,加一滴 Ringer液,盖上 盖玻片 显微镜下观察
实验结果及分析
实验3-线粒体和液泡系的
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性 染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有 阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料 都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒 性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使 用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶 解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B 和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料， 对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中 性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻 片→镊子轻轻下压盖玻片→观察
五．实验结果
在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中 散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小 泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内， 液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在 成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大 液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核 挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
三、实验用品
（一）器材 显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻 片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。
（二）试剂
1、Ringer 溶液 生理盐水、缓冲液 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml 2、1/3000中性红Ringer溶液 棕色瓶备用。 3．1/5000詹姆斯绿B Ringer溶液 最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
五、实验结果 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行 观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中分布着一些被染 成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即线粒体。
线粒体和液泡系的活细胞染色
【作 作
业】
一、绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 绘图：人口腔上皮和小鼠肝细胞的超活染色结果。 线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？ 二、线粒体和液泡系活体染色的原理是什么？
Experiment 10
线粒体和液泡系的活 细胞染色
【实验目的 实验目的】 实验目的
1．掌握细胞超活染色制作光镜标本的方法 ． 2. 了解线粒体和液泡系的基本形态、数量和分布 了解线粒体和毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构 而不影响细胞生命活动的一种染色方法。活染技术可用于研究生活状态下的细 胞形态结构及生理和病理变化。活体染色包括体内活染和体外活染两类。体外 活染又称为超活染色，是从活的动植物体分离出组织小块或部分细胞，以染液 浸染，使得染料选择性结合在细胞的特定结构上而显色。 詹纳斯绿 B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料毒 性小，是活体染色最重要的染料，对于线粒体和液泡系各具专一性。 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿 B 是线垃体的专一性活体染色剂，这是因为线粒体内的细胞色素氧化酶系可使染 料保持氧化状态呈蓝绿色，而在线粒体周围的细胞质中染料被还原为无色的色 基。 细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括 高尔基复合体、溶酶体、微体、吞噬泡等。中性红是液泡系专一的活体染色剂， 可将活细胞中液泡系染成红色，中性红染色可能与液泡中的某些蛋白有关。
【实验内容】 实验内容】
一、口腔上皮细胞线粒体的超活染色 1. 在洁净的载玻片上滴2-3d詹纳斯绿B和中性红混和染液。 2. 用消毒牙签在口腔颊部刮取口腔黏膜上皮，在染液中搅匀，染色15min。 3. 盖上盖玻片后镜检。可见细胞质中散在的被染成亮绿色的短杆状或颗粒状 线粒体。 二、小鼠肝细胞的超活染色 1. 小鼠颈椎脱臼处死，迅速打开腹腔，剪取肝脏边缘较薄的组织，置于含 Ringer液的平皿中，挤压去除组织中的血液，洗涤2-3次后吸去Ringer氏液。 2. 平皿内加詹纳斯绿B和中性红混和染液，注意让组织块上表面微露在染液 外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，使线粒体着色。 3. 染色25-30min，可见组织块边缘染成蓝色。将组织块用Ringer氏液洗涤1 次后转移至载玻片上，用镊子将组织块拉碎，使部分细胞或细胞群从组织块 脱离分散。 4. 去除稍大的组织块，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，盖上盖玻片， 镜检。可见肝细胞中含量丰富的线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
线粒体的超活染色与观察
线粒体的超活染⾊与观察【实验⽬的】掌握动物细胞活体染⾊的原理与相关的技术。
【实验原理】活体染⾊就是指对⽣活有机体的细胞或组织能着⾊但⼜⽆毒害的⼀种染⾊⽅法。
它的⽬的就是显⽰⽣活细胞内的某些结构,⽽不影响细胞的⽣命活动与产⽣任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可⽤来研究⽣活状态下的细胞形态结构与⽣理、病理状态。
根据所⽤染⾊剂的性质与染⾊⽅法的不同,通常把活体染⾊分为体内活染与体外活染两类。
体内活染就是以胶体状的染料溶液注⼊动、植物体内,染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构⾥,达到易于识别的⽬的。
体外活染⼜称超活染⾊,它就是由活的动、植物分离出部分细胞或组织⼩块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上⽽显⾊。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位,主要就是染料的“电化学”特性起重要作⽤。
碱性染料的胶粒表⾯带阳离⼦,酸性染料的胶粒表⾯带阴离⼦,⽽被染的部分本⾝也就是具有阴离⼦或阳离⼦的,这样,它们彼此之间就发⽣了吸引作⽤。
但不就是任何染料皆可以作为活体染⾊剂之⽤,应选择那些对细胞⽆毒性或毒性极⼩的染料,⽽且总就是要配成稀淡的溶液来使⽤。
⼀般就是以碱性染料最为适⽤,可能因为它们具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Januｓgｒeｅn Ｂ)与中性红(neutrａl ｒed)两种碱性染料就是活体染⾊剂中最重要的染料,对于线粒体与液泡系的染⾊各有专⼀性。
线粒体就是细胞进⾏呼吸作⽤的场所,其形态与数量随不同物种、不同组织器官与不同的⽣理状态⽽发⽣变化。
詹纳斯绿B就是毒性较⼩的碱性染料,可专⼀性地对线粒体进⾏超活染⾊,这就是由于线粒体内的细胞⾊素氧化酶系的作⽤,使染料始终保持氧化状态(即有⾊状态),呈蓝绿⾊;⽽线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为⽆⾊的⾊基(即⽆⾊状态)。
【实验⽤品】1、材料:⼩⽩⿏肝脏、睾丸２、试剂:Ringer溶液:NaCl 0、８5g + ＫCl0.2５ｇ+ CaCl2 0、0３g+ 蒸馏⽔100ｍl;１%、1／50０0詹纳斯绿B溶液:称取５0mg詹纳斯绿B溶于５ml Ｒingeｒ溶液中,30－４0℃加热,使之溶解,⽤滤纸过滤后,即为1％原液。
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告
线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。
实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。
2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。
3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。
实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。
其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。
而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。
实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。
该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。
实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。
同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。
液泡系和线粒体的活体染色
液泡系和线粒体的活体染色
实验目的 掌握动、植物细胞活体染色的原理 和相关的技术。
液泡系和线粒体的活体染色
1.仪器、用具 2.材料 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎、牛蛙、黄豆根 尖 3.试剂 Ringer溶液、1%和1/3000中性红溶液、 1%和1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液
液泡系和线粒体的活体染色
液泡系和线粒体的活体染色
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十 分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂， 只将液泡染成红色。在细胞处于生活状态时， 细胞质和细胞核不被中性红染色。 线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细 胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿Ｂ对线粒体 具有专一性的染色，是毒性最小的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ染色是由于线粒体中的细胞色素氧 化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈 现蓝绿色，而周围的细胞质被还原成无色的色 基。
液泡系和线粒体的活体染色
洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮。 1/3000中性红溶液染色5-10mm。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，镜检。
液泡系和线粒体的活体染色
作业
实验报告，观察
牛蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染 色观察 解剖牛蛙，剪取胸骨剑突软骨最薄的 部分。 取材料一小块，放入载玻片中央，用 1/3000中性红染液中，染色5-10mm。 吸去染液，滴加Ringer液。 盖片，油镜下观察。
液泡系和线粒体的活体染色
黄豆根尖细胞液泡系的活体染色 将黄豆根尖切一薄的纵切面。 1/3000中性红溶液染色5-10mm。 吸去染液， 加Ringer液。 盖片，并用镊子轻轻地下压盖玻片， 使根尖压扁。 高倍镜下镜检。
詹纳斯绿b染色是由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用使染料始终保持氧化状态呈现蓝绿色而周围的细胞质被还原成无色的色实验目的掌握动植物细胞活体染色的原理和相关的技术
高中生物 实验八、线粒体和液泡系的超活染色与观察
（二）液泡系的超活染色与观察
1、小麦或黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色与观察
1) 实验前，将小麦或黄豆种子培养在培养皿内潮湿的滤 纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。
2) 取初生的小麦或黄豆幼苗根尖（约1—2cm长）,置于载 波片上,滴一滴Ringer液，用镊子或刀片小心将根尖 压成一薄片，吸去Ringer液，在材料上滴一滴1/3000 中性红染液，染色5—10分钟。
玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2. 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1/3000中性红
3. 材料：人口腔上皮细胞、小白鼠肝细胞、洋葱 鳞茎内表皮细胞、小麦或黄豆幼根根尖。
四、实验方法
（一）线粒体的超活染色与观察
1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两
滴1/5000詹纳斯绿B染液。 2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上
皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10——15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可 再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出 的染液，置显微镜下观察。
3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或 油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中， 分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构， 即是线粒体。
2、洋葱表皮细胞液泡系的活体染色与观察：
1）撕取洋葱鳞茎内表皮
2）置于加有一滴1/3000的中性红染液的载玻片中，染色 5—10分钟
3）用吸水纸吸去染液，换上Ringer液，盖上盖玻片
4）显微镜下观察，可见被染成砖红色的中央大液泡。
六、注意事项：
1、在对口腔上皮细胞进行染色时不可使染液干燥， 可适当补加染液。
液泡系和线粒体的活体染色及观察20页PPT
液泡系和线粒体的活体染色及观察
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
线粒体和液泡系的超活染色与观察(共7张PPT)
观察动、植(物2活) 细实胞验内线者粒用体、牙液泡签系宽的形头态在、数自量与己分口布；腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的
人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
人口腔粘膜上皮细粘胞液线粒状体物的光放镜观入察载。 玻片的染液滴中，染色10~l5min(注意不可使染液干燥，
线粒体和液泡系的超活 染色与观察
第1页，共7页。
实验目的
1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分 布；
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
第2页，共7页。
实验原理
1. 活体染色
体内活染 体外活染
2. 詹纳斯绿B 3. 中性红
第3页，共7页。
实验用品
1. 材料：人口腔上皮细胞，黄豆幼根根尖。 23.. 器试材剂：：➢➢➢显R11微//in镜35g00、e00r恒溶00 液中温詹性水纳红浴斯溶锅绿液、B剪溶刀液、镊子、双面刀 观学(黄 学人材(学人((人线(材((1人人线观1人人人学 人学(13133111//53))))))))察习豆习口料习口口粒料口口粒察口口口习口习00取 在 实 吸 在 取 实 取00动 一 根一 腔 ： 一 腔 腔 体 ： 腔 腔 体 动 腔 腔 腔 一腔 一清低验去低清验清00、些尖 些粘人些粘粘和人粘粘和、粘粘粘些 粘些詹中洁倍前染倍洁前洁植细细 细膜口细膜膜液口膜膜液植膜膜膜细 膜细纳性载镜，液镜载，载物胞胞 胞上腔胞上上泡腔上上泡物上上上胞 上胞斯红玻下把，下玻把玻活器液 器皮上器皮皮系上皮皮系活皮皮皮器 皮器绿溶片，黄滴，片黄片细的泡 的细皮的细细的皮细细的细细细细的 细的液B放选豆一选放豆放溶胞超系 超胞细超胞胞超细胞胞超胞胞胞胞超 胞超在择培滴择在培在液内活的 活线胞活线线活胞线线活内线线线活 线活平养平养3R33线染超染粒，染粒粒染，粒粒染线粒粒粒染粒染777in展在展在℃℃℃粒色活 色体黄色体体色黄体体色粒体体体色 体色g的培的培e恒恒恒体技染 技的豆技的的与豆的的与体的的的技 的技r液口养口养温温温、术色 术光幼术光光观幼超超观、超光光术 光术，腔皿腔皿水水水液。与 。镜根。镜镜察根活活察液活镜镜。 镜。盖上内上内浴浴浴泡观 观根观观根染染泡染观观观上皮潮皮潮锅锅锅系察 察尖察察尖色色系色察察察盖细湿细湿的的的的。。。。。与与的与。。。玻胞的胞的金金金形观观形观片，滤，滤属属属态察察态察，换纸换纸板板板、、并高上高上上上上数数用倍，倍，，，，量量镊镜使镜使滴滴滴与与子或其或其222分分滴滴滴轻油发油发布布111轻镜芽镜芽///；；555地进，进，000000下行胚行胚000詹詹詹压观根观根纳纳纳盖察伸察伸斯斯斯玻。长。长绿绿绿片到到BBB，11染染染cc使mm液液液以以根。。。上上尖。。压扁，利于观察。
线粒体和液泡系的超活染色与观察_百替生物
线粒体和液泡系的超活染色与观察_百替生物实验一、线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜下线粒体和液泡系基本形态结构。
二、实验用品（一）材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片；蟾蜍一只，软骨细胞电镜照片。
（二）器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml注射器、吸管。
（三）试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)；l／3000中性红染液、Ringer氏液(两栖类用)。
三、实验内容（一）兔肝细胞线粒体的活体染色1.原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B 是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
2.方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer 氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
3.结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察1.原理在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。
实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察
五．实验结果
4. 在小麦或黄豆根尖细胞制片中，可见细 胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色 的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后， 由生长点向延长区观察，在一些已分化长 大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一 个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部 分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞 壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持 它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死 亡。
七．实验作业
1．绘制口腔上皮细胞线粒体形态示意 图。 2．绘制蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡形 态示意图。 3.清谈谈实验中有哪些注意事项?
八．思考题
1．高等动物和高等植物细胞中的线粒体形态、数 量和分布上有何不同？ 2．用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什 么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？ 3．小麦或黄豆根尖经中性红超活染色后，为什么 看到生长点的细胞中液泡小而多，而且染色深， 延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？植物细胞 液泡系的形态演进有何规律性？ 4．高等动物和高等植物细胞中的液泡系（高尔基 体）分布上有何不同？ 5．谈谈徒手切片、撕片、涂片技术的要点。
（三）材料
人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞 小麦或黄豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
五．实验结果
线粒体活体染色及观察
线粒体活体染色及观察小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察一、实验目的掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害的一种染色法。
它的目的是显示生活细胞内某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验用品1.材料：小白鼠肝脏2.试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。
3.器材：显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸四、实验步骤1.用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm2，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
2.滴加1/5000詹纳斯绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液，染色20-30分钟，以细胞块边缘被染成蓝绿色为准。
（注意：染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化）3.吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制悬液。
4.取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
五、实验结果在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。
如下页图所示：高倍镜下线粒体超活染色图六、分析与讨论1.在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，防止里面的线粒体不宜被染色，影响实验结果的观察。
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五．实验结果
4. 在小麦或黄豆根尖细胞制片中，可见细 胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色 的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后， 由生长点向延长区观察，在一些已分化长 大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一 个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部 分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞 壁处。
二、实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能着色但又无毒害的一种染色方法。 它的目的是显示生活细胞内的某些结构， 而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、 化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术 可用来研究生活状态下的细胞形态结构和 生理、病理状态。
二、实验原理
根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体 外活染两类。体内活染是以胶体状的染料 溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于 识别的目的。体外活染又称超活染色，它 是由活的动、植物分离出部分细胞或组织 小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定 在活细胞的某种结构上而显色。
四、实验步骤
⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞，将第一次刮下的粘液状物洗 去，将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中，染色10～15min（注意不可使染液干燥， 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 ⑶在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构，即线粒体。
2）小麦或黄豆根尖细胞液泡系的中性红染 色观察
⑴ 实验前，把小麦种子或黄豆培养在培养皿内潮湿的滤 纸上，使其发芽，胚根生长到1以上备用。 ⑵ 用双面刀片把小麦或黄豆幼苗根尖（约1~2cm长）小 心切一纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中， 染色5~10min。 ⑶ 吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子 轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 ⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见 细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡， 这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察， 在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增 大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色 的巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到 细胞一侧贴近细胞壁处。
实验九
液泡系和线粒体的活体染色及观察
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
学习并了解线粒体和液泡系超活染色的基本原 理、方法和注意事项； 学习如何观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系； 了解动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、 数量与分布； 学习并掌握线粒体和液泡系的超活染色技术。 了解植物细胞液泡系的发育过程。
二、实验原理
线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色。
黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
五．实验结果
1.在人口腔粘膜上皮细胞制片中，可见扁平状上 皮细胞的核周围胞质中分布着一些被染成蓝绿 色的颗粒状或短棒状的结构，即线粒体。 2. 在洋葱鳞茎内表皮细胞制片中，可见表皮细胞 中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至旁边， 在其周围有线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或 线条状。 3. 在蟾蜍胸骨剑突软骨细胞制片中，可见软骨细 胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞 核的上方胞质中，有许多被染成玫瑰红色大小 不一的泡状体。
三、实验用品
（一）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊 子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等。
（二）试剂
1、Ringer 溶液 氯化钠0.85g（变温动物用0.65g） ；氯化钾 0.25g ； 氯化钙 0.03g ；蒸馏水 100ml 2、10%、1/3000中性红溶液 称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热 （30~40度）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于 暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。 临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加 微热（30~40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原 液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工 作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分 氧化能力。
二、实验原理
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特 殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作 用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性燃料的胶 粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离 子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作 用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用， 应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染料，而且 总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料 最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷 脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯 绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两 种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线 粒体和液泡系的染色各有专一性。
2．液泡系的超活染色与观察
中性红为弱碱性.染料，对液泡系（即高 尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着 色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
1）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性 红染色与观察
软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等，因 而粗面内质网和高尔集体都发达，用中性红超 活染色后，可明显地显示出液泡系。 将蟾蜍处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块， 放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色 5~10min。 用吸管吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片 进行观察。 在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核 及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有 许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一 特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持 它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死 亡。
七．实验作业
1．绘制口腔上皮细胞线粒体形态示意 图。 2．绘制蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡形 态示意图。 3.清谈谈实验中有哪些注意事项?
八．思考题
1．高等动物和高等植物细胞中的线粒体形态、数 量和分布上有何不同？ 2．用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什 么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？ 3．小麦或黄豆根尖经中性红超活染色后，为什么 看到生长点的细胞中液泡小而多，而且染色深， 延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？植物细胞 液泡系的形态演进有何规律性？ 4．高等动物和高等植物细胞中的液泡系（高尔基 体）分布上有何不同？ 5．谈谈徒手切片、撕片、涂片技术的要点。
口腔颊部上皮细胞示线粒体
2）植物细胞线粒体的活体染色与观察 （洋葱鳞茎内表皮细胞）
⑴用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干 净的载波片上，然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表 皮一小块，置于染液中，染色10～15min。 ⑵吸去染液，加一滴Ringer 液，注意使洋葱内表 皮展平，盖上盖片，显微镜观察。 ⑶在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所 占据，细胞核被挤至旁边，在其周围有线粒体 被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。仔细观察 细胞质中线粒体的形态、数目和分布。
（三）材料
人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞 小麦或黄豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。