色谱法的特点
天然药物化学第二章,第三节,色谱分离
薄层色谱的操作技术流程
铺
板
点
样
展
开
计算比移值
显色与定位
二、吸附色谱法
（五）操作技术 1.薄层色谱法 步骤：制板→点样→展开→显色→Rf值计算
43
操作步骤
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂(我们有哪些吸咐剂）铺在玻璃板上制 成，不加粘合剂 要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性
5
植物色素分离图示
一、分离原理和基本概念：
色谱法： 是利用混合物中各成分在 流动相和固定相之间的 作用力和亲和力（吸附， 分配，离子交换、分子 筛）的不同，在两相中 作相对移动时，混合物 中各种成分随流动相运 动速度不同，从而达到 相互分离的方法。
7
8
色谱分离
慢 中等 快
淋洗液
Temporal course
适用范围
酸性成分：氨基酸、有机酸； 对酸稳定的中性成分 生物碱、甾体、强心苷
备注
不适用：醛、 酮、酯、内酯 类成分
中性成分：醛、酮、皂苷、萜 中性 6.5~7.5 类
★
27
常用吸附剂
2.硅胶（应用最多★） 吸附能力决定于硅羟基数，吸附活性取决于含水量。
OH Si O O Si O O O O O OH Si O Si O O Si O O O OH Si O Si O O Si O O O OH Si O Si O O O OH Si O Si O O O
炭。
二、吸附色谱法
（二）吸附剂（固定相） 选择合适的吸附剂是吸附色谱法成功的关键。★ 良好的吸附剂应具备： ①不与样品及流动相发生化学反应 ②不溶于流动相 ③具有较大的表面积和一定的吸附能力。 ④具有一定的细度，颗粒要均匀。
第十一章 色谱法
内标法
计算公式 ： mi
Ai f i ' ms As f s '
Ai f i ' mi ms As f s '
mi Ai f i 'ms Ai Ci % 100% 100% 常数 m总 As f s 'm总 As
Ai/As
Wi
内标法标准曲线
内标物的选择:
r21 =
t t
' R2 ' R1
=
V
V
' R2 ' R1
r21 同种固定液对难分离物质对的选择性度量 r21 越大，两组分分离越容易 在气相色谱中， r21的大小仅与固定相种类和 柱温有关。在液相色谱中， r21与固定相、流 动相及柱温有关。 r21是色谱定性的重要参数， 实验室之间可通用。
§2、色谱法基本理论
评价 ：简单，准确。
不适用于试样中组分不能全部出峰的情况。
§2、色谱法基本理论 适用条件： 用于测定试样中个别组分 具体方法：选用一定量的纯物质作内标, 固定内标物和样
品的取样量, 配制一系列具有相同浓度内标物和不同浓度待测 组份纯物质的一系列溶液进行测定, 以Wi(已知的待测组份含量) 对Ai/As (待测物质与内标物的峰面积之比)作图:
(2) 基线 只有流动相经过检测器时，所产生的信号， 反映实验条件的稳定情况。稳定时为直线。
tR 进 样 tM 空 气 峰 tR’
2. 关于保留值的术语 （1） 用时间表示的保留值 tR保留时间：进样柱后出现Cmax值时所需时间 tM死时间: 不与固定相作用的组分的保留时间
t R 调整保留时间:
改变柱温也可改变r21。
§2、色谱法基本理论 三、色谱定性定量方法 1. 定性分析
气相色谱法
2.进样系统
作用:试样引入色谱柱系统 进样样品状态:液,气,固态 进样设备:注射器,进样阀,裂解器 进样方法:手动,自动
进样方式
分流进样:样品在加热的气化室内气化,蒸气大部分经分馏管道 放空,只极小一部分被载气带入 色谱柱. 特点:适用于浓度较高的样品;沸程宽,浓度差异大,化学性质 各异的样品不适用. 无分流进样:进样时样品没有分流.适用于痕量分析;进样时间 长,会造成初始谱带的扩展.-冷肼 柱头进样:样品直接进入预处理柱或柱入口,进样部分温度很低, 防止溶剂在进样时针头气化,样品在冷的柱壁上形成液膜,组分 在液膜上实现气化.—编程操作,适用于不同样品的分析. 顶空进样:采用气态进样.免除大量样品基体对柱系统的影响. 适用于血中毒物,酒,饮料中挥发性香精,食品添加剂的残留溶 剂,植物的芳香成分,聚合物中的挥发组分等.
�
色谱柱选择:第一根柱子是非极性,较大内径(甲基硅氧烷) 第二根柱子是中等极性或极性 检测器:FID,ECD 应用:石油样品,环境样品,农残,中药挥发油
气相色谱联用技术——GC-MS
MS:利用电磁学原理将样品分子转换为带电荷的气态离子,并按 照核质比将其分离并记录下来,从而获得分子结构的方法. 质谱单元:真空部分,电离源,质量分析器,检测器 气质联用:接口单元—色谱仪柱出口压力为105Pa,质谱仪必须保 证在高真空度下运行.为了解决压力的不协调性—接口. 接口方式:开口分流法—通入保护气流(He),使色谱柱的末端 保持常压,而不会降低系统的分离效率.限阻管具有适当的阻力, 仅有一小部分被引入质谱(大部分被放空). 分子分离器:通过分馏技术,使进入质谱的气流获得 富集,以保证较高的灵敏度. 直接连接法:毛细管柱内径细,柱流量小,即使色谱 出来的所有气流全部流入质谱系统,真空系统仍可以维持较好的 状态.
色谱分析法概论
色
按流动相分
气相 （GC） ） 超临界 按固定相分 液相 （LC） ）
谱 法
液-液 液
液-固 固
21
2. 按操作形式分类: 柱色谱法、平面色谱法、 柱色谱法、平面色谱法、毛细管电泳 法等 3. 按色谱过程的分离机制分类: 分配色谱法、吸附色谱法、 分配色谱法、吸附色谱法、离子交换 色谱法、 空间排阻色谱法、 色谱法、 空间排阻色谱法、毛细管电泳 法等
32
塔板理论实际上是用色谱过程的分解动作 慢镜头）解释分离机制，如果塔板数少， （慢镜头）解释分离机制，如果塔板数少， 用二项式解释； 用正态分布解释。 用二项式解释；多，用正态分布解释。
二、二项式分布 B组分： KB=1=Cs/Cm 组分： 组分 若：Vm=Vs KB=ms/mm=1/1
33
质量分配和转移过程
I x = 100[ z + n
lg t ' R ( X ) − lg t ' R ( 2 ) lg t ' R ( 2 + n ) − lg t ' R ( 2 )
]
12
3. 定量参数
峰高（ ： 峰高（h)：组分在柱后出现浓度极大时的检 测信号，即色谱峰顶至基线的距离。 测信号，即色谱峰顶至基线的距离。 峰面积(A)：色谱曲线与基线间包围的面积。 峰面积 ：色谱曲线与基线间包围的面积。
22
二、分配色谱法
23
分离原理 利用被分离组分在固定相和流 动相中的溶解度差别而实现分离。 动相中的溶解度差别而实现分离。
Cs Xs Vs K＝ = Cm Xm Vm
•在HPLC中K与流动相的性质 (种类与极性 有关 在 种类与极性) 中 与流动相的性质 种类与极性 •在GC中K与固定相极性和柱温有关 与固定相极性和柱温有关 在 中 与固定
色谱分析原理及应用
k
MS
MS VS
VS
cs
VS
K
Mm
MS Vm
Vm
cm Vm
容量因子越大，保留时间越长。
式中β为相比。 填充柱相比：6～35； 毛细管柱的相比：50～1500
可由保留时间计算出容量因子，两者有以下关系：
k tR tM tR'
tM
tM
2020/4/10
• 第三节 色谱法基本理论
调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM
2020/4/10
（2）用体积表示的保留值
保留体积（VR）：VR = tR×F0 （ F0为色谱柱出口处的流动相流量， 单位：m L / min。）
死体积（VM）： VM = tM ×F0 调整保留体积（VR＇）： V R＇ = VR －VM
2020/4/10
即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。 （2）半峰宽(Y1/2)：
色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =2.354
（3）峰底宽(Wb)：
Wb=4
2020/4/10
二、容量因子与分配系数
分配系数K：组分在两相间的浓度比； 容量因子k：平衡时，组分在各相中总的质量比；
k =MS / Mm
MS为组分在固定相中的质量，Mm为组分在流动相中的质量。
分配系数 K
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
2020/4/10
分配系数 K的讨论
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢； 试样一定时，K主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配系数K不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础； 某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。
色谱法原理及应用
二、气路系统
1、气源
⑴高压钢瓶或气体发生器 ⑵气体净化装置
分子筛：置于马福炉内加热到400-600℃，活化4-6h。 硅 胶：当颜色变红时，就要重新活化。方法在烘箱中140℃左右加热2h即可。
2、气路控制系统
2019/12/13
3、电子气路控制
EPC是20世纪90年代初出现的新技术，首先由惠普公司，即现在的安捷 伦科技公司推出。 岛津公司：高级气流控制， 瓦里安公司：电子流量控制， PE公司：可编程气路控制。
2019/12/13
3.气相色谱法的特点
（1）分离效率高： 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2）灵敏度高： 可以检测出μ g/g(10-6)级甚至ng/g(10-9)级的物质量。
（3）分析速度快： 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
（4）应用范围广： 适用于沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。
2019/12/13
（2）碳数规律定性 同系物间，在一定温度下，调整保留值的对数与该分子
的碳数成线性关系，即
2019/12/13
4、影响保留值测定准确性的因素 1．死时间的影响及计算方法
2．载体吸附作用的影响 3．进样量的影响 4．载气纯度的影响 （1）载气中水分对保留值的影响 （2）载气中含氧量对保留值的影响 5．固定液纯度的影响
液相色谱：流动相为液体（也称为淋洗液）。 按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 离子色谱：液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂为固定相， 不同pH值的水溶液为流动相。
2019/12/13
其他色谱方法
薄层色谱和纸色谱： 比较简单的色谱方法
超临界色谱: 高效毛细管电泳: 九十年代快速发展、特别适合 生物试样分析分离的高效分析 仪器。
液相色谱特点及主要类型
01
02
03
硅胶色谱
硅胶作为固定相，具有高 稳定性、高分离效能和广 泛的应用范围。
活性炭色谱
活性炭作为固定相，具有 高吸附性能，常用于分离 大分子物质。
凝胶色谱
凝胶作为固定相，根据分 子大小进行分离，常用于 分离大分子物质。
按流动相类型分类
有机溶剂色谱
使用有机溶剂作为流动相，具有较高的分离效能和选择性。
该方法适用于分离具有较强疏水性的化合物，如脂肪酸、酯等。
有机溶剂流动相液相色谱具有较高的分离效能和灵敏度，但有机溶剂的使 用可能对实验操作人员和环境造成一定危害。
缓冲液流动相液相色谱
缓冲液流动相液相色谱使用 缓冲液作为流动相，以调节 pH值和改善待测组分在固定
相上的保留能力。
该方法适用于分离酸性和碱 性化合物，如氨基酸、蛋白
水溶性色谱
使用水或水溶液作为流动相，常用于分离水溶性物质。
离子交换色谱
使用离子交换剂作为固定相，根据离子的性质进行分离。
液相色谱的特点
CHAPTER
高分离效能
液相色谱法采用固定相和流动相的相 互作用，使不同组分在色谱柱中实现 高效分离。通过优化色谱条件，可以 实现复杂样品的高效、快速分离。
质等。
缓冲液流动相液相色谱具有 较高的分离效能和稳定性， 但缓冲液的选择和配制可能 较为繁琐。
谢谢
THANKS
通过选择合适的检测器，可以实现对目标化合物的灵敏、 准确和专属性的检测，提高分析方法的可靠性。
04 液相色谱的主要类型及特点
CHAPTER
硅胶基质液相色谱
硅胶基质液相色谱是一种常用的液相色谱类型，其分离原理主要基于硅胶表面的硅 醇基与待测组分之间的相互作用。
平面色谱法的特点
平面色谱法的特点平面色谱法(planar chromatography)是色谱法中的一种，主要包括薄层色谱法和纸色谱法。
在平面色谱法中，绽开后的谱带或区带的位置可通过适当的办法观看或检测，因其便利和容易、分别度好、敏捷度高、简单回收样品组分，故平面色谱法应用较广。
纸色谱法浮现于20世纪40年月，在以后的20年中，纸色谱法在微量分析，特殊在生化医药方面得到了广泛的应用。
1938年，Izmailov和Shraiber首先实现了在氧化铝颗粒薄层上对一种自然药物的分别，奠定了薄层色谱法的基础；随后Kirchner和Miller采纳硅胶为吸附剂，煅石膏为黏合剂涂布于玻璃板上制成硅胶薄层，胜利地分别了挥发油，从而进展了薄层色谱法；1960年以后，Stahl等人对薄层色谱法的标准化、规范化及扩大应用等方面的工作，推进了薄层色谱法的进展。
20世纪50年月初，我国已开头平面色谱法的理论和应用讨论工作，最初是纸色谱法应用较多，之后薄层色谱法的应用逐渐增多。
随着高效薄层材料、商品预涂板及其相关技术的进展，以及现代薄层扫描仪应用，薄层色谱法已经成为药物分析的重要办法之一。
薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)是将固定相匀称涂铺在玻璃、塑料或金属的惰性板上，成一薄层，然后用毛细管或适当的点样装置将样品以点状或条纹状置于薄层的起始线上，待溶剂挥散后，置于绽开槽中，当流淌相渗透至固定相和样品斑点位置时，色谱图便绽开。
样品在流淌相中受毛细管作用推进经过薄层，样品的组分通过吸附、分配、排阻或离子交换过程，或这些作用的结合而实现分别。
当流淌相移行达到一定距离或分别已达要求，将薄层板取出，干燥，检出或定量。
纸色谱法(paper chromatography，PC)用特别的纸作为载体，其他方面类似于TLC。
纸色谱法属分配色谱。
滤纸本身是惰性的，分别组分的过程中，只起载体的作用，真正固定相为与干滤纸结合的水分。
气相色谱法
大连催化剂厂
白色 硅藻土 担体
101 白色担体 101 酸洗 101 硅烷化白色担体 102 白色担体 高Байду номын сангаас子微球
上海试剂厂
由苯乙烯和二乙烯苯共聚而成 经酸碱处理，比表面积 0.02 m2 / g ,可在 较高温度下使用，适宜分析高沸点物质。 由四氟乙烯聚合而成，比表面积 10.5 m2 / g 适宜分析强极性物质和腐蚀性物质
气相色谱仪主要部件
液体进样器： 不同规格的专用注射器，填充柱色谱常用10μL；毛细管色谱常用1μL； 新型仪器带有全自动液体进样器，清洗、润冲、取样、进样、换样等过程 自动完成，一次可放置数十个试样。 汽化室： 将液体试样瞬间汽化的装置。无催化作用。 （3）色谱柱（分离柱） 色谱柱：色谱仪的核心部件。 柱材质：不锈钢管或玻璃管，内径3～6 mm。 柱填料：粒度为60～80目或80～100目的色谱固定相。 （4） 检测系统 通常由检测元件、放大器、显示记录三部分组成； 被色谱柱分离后的组分依次进入检测器，按其浓度或质量随时间的变 化，转化成相应电信号，经放大后记录和显示，给出色谱图。
气相色谱固定相
2. 气固色谱固定相的特点 （1）性能与制备和活化条件有很大关系。 （2）同一种固定相，不同厂家或不同活化条件，分离效 果差异较大。 （3）种类有限，能分离的对象不多。 （4）使用方便。 二、 气液色谱固定相 气液色谱固定相： [固定液+担体（支持体）] ——小 颗粒表面涂渍上一薄层固定液。 固定液特点： • 固定液在常温下不一定为液体，但在使用温度下一定呈 液体状态。 • 固定液的种类繁多，选择余地大，应用范围不断扩大。 担体：化学惰性的多孔性固体颗粒，具有较大的比表 面积。
（4） 固定液的最高最低使用温度 高于最高使用温度易分解，温度低 呈固体。 （5） 混合固定相 对于复杂的难分离组分通常采用特 殊固定液或将两种甚至两种以上配合使 用。 （6） 固定液的相对极性 规定：角鲨烷（异三十烷）的相对 极性为零，β,β'-氧二丙腈的相对极性为 100。
反相高效液相色谱法
反相高效液相色谱法
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）是使用非极性固定相和极性流动相的一种液相色谱体系。
RP-HPLC是最主要的液相色谱分离模式，适用于几乎所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。
其主要特点如下：
分离效果良好：反相液相色谱柱效高、分离能力强，能分离不同极性及强极性化合物，几乎适用于所有有机物的分离。
适用范围广：可广泛应用于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析，并且受到越来越多的关注。
分析条件可优化：分离度与分辨率相对较好，通常是在还原水平上分析DAR（药物相关物质），即在非变性还原条件下打开链间二硫键，然后根据待测物质的极性大小进行分离，具有更好的分离度与分辨率。
此外，RP-HPLC在反相条件下使固定相与流动相之间的分配系数成为分离的关键参数。
组分在色谱柱上的保留程度，取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数。
流动相为极性，固定相为非极性的液相色谱就是反相液相色谱。
profile 色谱法
profile 色谱法
色谱法是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。
色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。
色谱法起源于20世纪初，1950年代之后飞速发展，并发展出一个独立的三级学科——色谱学。
历史上曾经先后有两位化学家因为在色谱领域的突出贡献而获得诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。
色谱法有多种类型，包括气相色谱、液相色谱、凝胶色谱等。
其中，气相色谱法是一种常用的分离和分析方法，具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点。
液相色谱法则主要用于分离和纯化有机化合物，如氨基酸、蛋白质、多肽等。
在应用方面，色谱法被广泛应用于食品、医药、环保等领域。
例如，在食品工业中，可以通过色谱法分离和检测食品中的添加剂、农药残留等有害物质；在医药领域，可以通过色谱法分离和纯化药物成分；在环保领域，可以通过色谱法检测空气、水体中的污染物等。
总之，色谱法是一种非常有用的分离和分析方法，在各个领域都有广泛的应用。
气相色谱法特点及适用范围
气相色谱法特点及适用范围《气相色谱法特点》气相色谱法啊，那可是个厉害的家伙！它的特点之一就是分离能力超强。
就好比把一堆混在一起的豆子，红豆、绿豆、黄豆，轻轻松松地给分离开来。
比如说，在检测空气污染物的时候，能把各种成分分得清清楚楚，一点儿也不含糊。
还有呢，它的分析速度特别快。
就像百米冲刺一样，瞬间就能给出结果。
比如说检测食品中的农药残留，一会儿功夫就能知道有没有问题。
另外，它的灵敏度也很高。
哪怕是极其微量的物质，也能被它发现。
就好像在一堆沙子里找到一粒特别的小珍珠。
比如在药物检测中，哪怕药物成分含量极少，它也能准确检测出来。
而且啊，它的适用范围很广。
不管是气体、液体还是固体，它都能对付。
就像一个全能选手，什么场面都能应付自如。
比如在石油化工行业，无论是原油还是各种成品，它都能进行有效的分析。
气相色谱法就是个厉害的工具，在很多领域都大显身手！《气相色谱法特点》咱来说说气相色谱法的特点哈。
它呀，能把复杂的混合物分得明明白白的。
你就想想，一堆五颜六色的糖果混在一起，它能给你一个一个挑出来。
比如说，在检测化妆品中的成分时，就能把各种香料、防腐剂啥的分得清清楚楚。
它出结果还特别快，一点都不磨蹭。
就跟闪电似的，瞬间搞定。
比如说工厂里检测产品质量，很快就能知道合不合格。
它还特别灵敏，一点点的东西都逃不过它的“法眼”。
就好像你在草丛里找一只小蚂蚁，它都能帮你发现。
比如在环境监测中，哪怕空气中有一点点有害物质，它都能检测出来。
还有哦，它操作起来也不算太难，只要稍微学学，就能上手。
不像有些方法，复杂得让人头疼。
比如说在一些小型实验室里，技术员们都能轻松用它来做分析。
怎么样，气相色谱法是不是很牛？《气相色谱法特点》今天咱们来唠唠气相色谱法的特点。
这玩意儿可神奇啦！它能把那些乱七八糟的混合物分得可细致啦。
你就好比一堆不同颜色的花朵，它能把每种颜色的都给你挑出来。
比如说在检测水质的时候，能把水里的各种有机物和无机物分得清清楚楚。
色谱法(chromatography)概念、特点和分类
色谱法（chromatography）概念、特点和分类1903年，俄国科学家M.C.ЦВЕТ首创了一种绿叶中分离多种不同颜色色素成分的方法，命名为色谱法(chromatography)，由于翻译和习惯的原因，又常称为层析法。
近百年来，色谱法不断发展，形式多种多样。
50年代开始，相继出现了气相色谱、液相色谱、高效液相色谱、薄层色谱、通透色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱、金属螯合色谱等。
几乎每一种色谱法都已发展成为一门独立的生化技术，在生化领域内得到了广泛的应用。
色谱技术因操作较简便，设备不复杂，样品量可大可小，既可用于实验室的科学研究，又可用于工业化生产。
它与光电仪器、电子计算机结合，可组成各种各样的高效率、高灵敏度的自动化分离分析装置。
这充分显示色谱技术的强大生命力，它是近代生物化学发展的关键技术之一。
一、色谱法的概念和特点色谱法是利用混合物中各组分的理化性质的差异(吸附力、溶解度、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力等)，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相叫固定相(stationnary phase)，另一相流过此固定相叫作流动相(mobile phase)。
由于各组分受流动相作用产生的推力和受固定相作用产生的阻力的不同，使各组分产生不同的移动速度，使得结构上只有微小差异的各组分得到分离。
再配合相应的光学、电学、电化学和或其他相关检测手段，对各组分进行定性和定量分析。
色谱法是一种物理化学分离分析方法。
它既是一种极好的分离纯化的方法，也是一种进行精确定性、定量分析的方法。
在色谱分析中，通常是根据色谱峰的位置来进行定性分析，根据色谱峰的面积或高度进行定量分析的。
色谱法的特点是：1．具有极高的分辨效力：只要选择好适当的色谱法(色谱类型、色谱条件)，它就能很好地分离理化性质极为相近的混合物，如同系物、同分异构体，甚至同位素，这是经典的物理化学分离方法不可能达到的。
2．具有极高的分析效率：一般说来，对某一混合组分的分析，只需几十分钟，乃至几分钟就可完成一个分析周期。
亲和色谱法的特点
亲和色谱法的特点
亲和色谱法: 亲和色谱法是利用生物分子间具有专一性亲和力的生物分子对而设计的色谱技术。
如酶的活性中心能与专一的底物、抑制剂、辅助因子以及效应剂通过次级键可逆地结合。
其他如抗体与抗原、RNA与DNA、激素与其受体、外源凝集素与细胞膜等体系均有类似特性。
因此选择好亲和物就可将某一生物分子有选择性地与其他物质分离,所以又称生物选择性吸附法。
操作时一般先将亲和物(配基)以共价键结合于一种不溶性的聚合物(载体)上,填充在色谱柱内,常用载体有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等。
为减小空间障碍、提高吸附效率,有时需在配基与载体之间连入有一定长度的烃基,称为“手臂”,使配基可伸出,以有较大的活动余地。
制备好的这种固定相填充在色谱柱内,使被分离的蛋白质通过色谱柱,由于蛋白质分子上的活性中心与亲和物相结合而被滞留,其他蛋白质分子无阻滞地流出得到分离。
然后改变洗脱剂的pH值、离子强度等,即可使被分离的蛋白质分子释出,达到分离纯化的目的。
此法在制备高纯度生化制剂中得到较多应用。
气相色谱法有哪些特点？
一、气相色谱法有哪些特点？答：气相色谱是色谱中的一种，就是用气体做为流动相的色谱法，在分离分析方面，具有如下一些特点：１、高灵敏度：可检出１０-１０克的物质，可作超纯气体、高分子单体的痕迹量杂质分析和空气中微量毒物的分析。
２、高选择性：可有效地分离性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。
３、高效能：可把组分复杂的样品分离成单组分。
４、速度快：一般分析、只需几分钟即可完成，有利于指导和控制生产。
５、应用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。
６、所需试样量少：一般气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。
７、设备和操作比较简单仪器价格便宜。
二、气相色谱的分离原理为何？答：气相色谱是一种物理的分离方法。
利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。
三、何谓气相色谱？它分几类？答：凡是以气相作为流动相的色谱技术，通称为气相色谱。
一般可按以下几方面分类：１、按固定相聚集态分类：（１）气固色谱：固定相是固体吸附剂，（２）气液色谱：固定相是涂在担体表面的液体。
２、按过程物理化学原理分类：（１）吸附色谱：利用固体吸附表面对不同组分物理吸附性能的差异达到分离的色谱。
（２）分配色谱：利用不同的组分在两相中有不同的分配系数以达到分离的色谱。
（３）其它：利用离子交换原理的离子交换色谱：利用胶体的电动效应建立的电色谱；利用温度变化发展而来的热色谱等等。
３、按固定相类型分类：（１）柱色谱：固定相装于色谱柱内，填充柱、空心柱、毛细管柱均属此类。
（２）纸色谱：以滤纸为载体，（３）薄膜色谱：固定相为粉末压成的薄漠。
４、按动力学过程原理分类：可分为冲洗法，取代法及迎头法三种。
四、气相色谱法简单分析装置流程是什么？答：气相色谱法简单分析装置流程基本由四个部份组成：１、气源部分，２、进样装置，３、色谱柱，４、鉴定器和记录器.五、气相色谱法的一些常用术语及基本概念解释？答：１、相、固定相和流动相：一个体系中的某一均匀部分称为相；在色谱分离过程中，固定不动的一相称为固定相；通过或沿着固定相移动的流体称为流动相。
高效液相色谱法(HPLC)简介
高效液相色谱法分离过程
主要在于固定相的性质、形状及粒度，其次 差别： 是检测手段和输液设备。
经典液相色谱 固定相： 粒度：60~600μｍ（多孔） 柱长：10~200cm（d=10~50mm） n 约为 2~50/m
流动相：靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
缺点：
①粒度范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻 力大。 ②无检测设备，分析速度慢、效率低。 只能作为分离手段
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性的
Hale Waihona Puke 生化样品。高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数 1.定性参数 tR 、 t 0 、 t’ R t’R= tR- t0 2.柱效参数 σ、 W1/2 、W W=4 σ 或 w=1.699W1/2 n=（ tR / σ）2 H=L/n
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1.应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易 分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性 物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。 涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工产品 及环境污染物。约占全部有机物的80%。 2.方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境 （2）缺少通用检测器
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今近200 年。出版发行了25版药典。 75年（19版）将HPLC载入药典 20版-62项；21版-363项；22版-871项；23版-1188项； 24版-含量测定法：1386项 鉴别：519项 杂质检查：206项
如今：在评价世界各国药典水平时，HPLC法成为 反映各国药典先进性的重要指标之一。
色谱法的特点
色谱法的特点
色谱法是以给定组分为活动可调节模式的一种色彩研究方法，早在20世纪50年代末早期，它已经被用于完成人们对色彩的研究。
色谱法的最大优势在于可以从被测量物体的色彩中精确地测量出光谱数据，并把这些数据聚集到不同的颜色组里之中，如红，橙，黄等等，而且这些组分在每一种颜色中的含量都可以准确地测定出来，这样就可以使用色谱法精确地对物体的色彩进行分析与测量。
色谱法使人们在色彩表达中有了更多选择，使色彩更加准确，原来用传统色彩来实现的色彩可以轻松实现，原来一些很复杂的色彩组合也可以轻松地用色谱法实现，且轻松自如地可以调整到最佳的效果。
而且色谱法也可以自由组合不同种类的颜色，使自然色彩和社会色彩得到协调和结合，让人们通过测量色谱获得理想的色彩组合。
色谱法被普遍应用于室内外装修、电子数码产品、艺术作品、各个行业产品的色彩研究，色谱法可以使人们更加准确地了解色彩，也可以有效地科学的搭配各种色彩，人们也可以通过色谱技术智能化的实现多样的色彩组合，达到完美的色彩呈现。
总之，色谱法是一种非常实用及有效的色彩研究方法，它所运用的专业知识，可以大大帮助人们更好地控制及理解一件事物的颜色，从而确保我们最自然且最完美的色彩表达。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
Horvvath(1967)、Huber(1967)、Kirkland(1969)分别研制高效液相色谱仪， 他们的主要贡献主要是技术上的突破：
内 容
二、气相色谱分离过程
1.气相色谱分离过程
2.分配系数 K
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
◆ 色谱法是一种分离技术。 ◆ 试样混合物的分离过程也就是试样中各组 分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行 着的分配过程。 ◆ 其中的一相固定不动，称为固定相； ◆ 另一相是携带试样混合物流过此固定相的 流体（气体或液体），称为流动相。
第一章 色谱法概述
第二章 色谱法原理
第三章 色谱分离条件的优化选择
授
第四章 色谱定性和定量分析方法
课
第五章 气相色谱
内
第六章 高效液相色谱
容
第七章 平面液相色谱
第八章 超临界流体色谱
第九章 毛细管电泳
第十章 高效液相色谱实验技术
色谱分析与技术
观摩与训练：8学时
1. GC、GC-MS仪器观摩
2. HPLC仪器观摩
色谱分析与技术
课程总学时：36学时（讲课：26学时，观摩训练： 8学时，考试：2学时）
通过学习本课程及其实验内容，应掌握：
课 气相、高效液相色谱分析方法及日常维护； 程 定性定量方法运用； 介 色谱条件选择及色谱柱装填等技术； 绍 学会色谱工作站的使用；
了解裂解气相色谱、顶空气相色谱、超临界流体色 谱、高效毛细管电泳、毛细管电色谱及平面色谱等 内容。
俄国植物学家茨维 特在1906年使用的
色谱原型装置
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用 1.概述
的 实 验
Tsweet
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
1903年3月21日俄国植物学家茨维特（Michael Tswett， 1872-1919）在华沙自然科学学会生物学会议上发表了“一种 新型吸附现象及其在生化分析上的应用”研究论文，介绍了 一种应用吸附原理分离植物色素的新方法，并首先认识到这 种层析现象在分离分析方面有重大价值。1906年他在德国植 物学杂志发表文章，首次命名上述分离后色带为色谱图，称 此方法为色谱法（Chromatography）。1907年在德国生物学会 年会上，展示过带有色带的分离柱管和纯化过的植物色素溶 液，茨维特被世人公认为色谱创始人。
目
6. 液相色谱检测方法，云自厚，化工出版社，2005 7. 色谱定性与定量，汪正范，化工出版社，2005
8. 制备色谱方法及应用，袁黎明，化工出版社，2005
9. 色谱分析样品处理，王立，化工出版社，2005
10.色谱仪器维护与故障排除，吴方迪，化工出版社，2005
色谱分析与技术
讲课内容册》
1.色谱分析概论，傅若农，化工出版社，2005
2. 高效液相色谱方法及应用，于世林，化工出版社，2005
参 3. 气相色谱方法及应用，刘虎威，化工出版社，2005
考 4. 平面色谱方法及应用，何丽一，化工出版社，2005
书 5. 气相色谱检测方法，吴烈钧，化工出版社，2005
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
1952年，Martin 和James 发表第一篇气--液色谱论文，首次用气体作流动 相，配合微量酸碱滴定，发明了气相色谱，它给挥发性化合物的分离测定带 来了划时代的革命。Van Deeter、Giddings 等人对色谱理论的研究极大地促 使色谱技术的发展。
☆ 采用水分饱和的硅胶作固定相，以含有乙醇的氯仿作流动相，甲基橙作 显色剂（指示氨基酸的位置）分离Phe、Leu、Ile和Pro-Val-Met等三组氨基酸。 ☆ 首次提出分离过程的塔板理论，这是在色谱柱操作参数基础上模拟蒸馏 理论，以理论塔板来表示分离效率，定量地描述、评价分离过程； ☆ 在色谱过程中最早引入分配平衡取代吸附平衡，即采用分配色谱进行分 离。该方法是针对逆流液-液萃取难题而发明的。即将一种液体固定在适当 的载体上，使第二种液体流过前者而实现分离，这也是一个很重要的成就。 ☆ 提出了色谱法进一步发展最有远见的预言：一是“流动相可用气体来代 替，对分离更有好处”；二是“使用非常细颗粒的填料和柱两端施加较大的 压差，应能得到最小的理论塔板”。
定了 α-和 β-胡萝卜素的同分异构体，以及分别从植物叶片和 蛋黄中分离得到叶黄素，才使色谱法引起科学界的重视。 Kuhn 实验不仅证明了蛋黄叶黄素是氧化类胡萝卜素的混合物， 而且证实了色谱法可以用来进行制备分离。
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
获得1952年度的诺贝尔化学奖Martin和Synge的主要工作：
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用 1.概述
植物色素的分离 1、2、3、4
第一章 色谱法概述
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
茨维特工作的主要贡献： ◆（采用吸附色谱）成功分离了叶绿素a和叶绿素b ◆ 提出/发明了色谱法 1931年，Kuhn 采用柱色谱分离了类胡萝卜素，进一步确
1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现代色谱分析的建立。 1956年，荷兰的Van Deemter在总结前人工作的基础上提出速率理论， 推导出范第姆特方程。 1957年戈雷(Golay)发表“涂壁毛细管气-液分配色谱理论和实践”论文， 实现了毛细管气相色谱分离。 1979年弹性石英毛细管应用于气相色谱, 将毛细管气相色谱推上高潮。 1980s将固定液固载化是毛细管色谱技术的又一个重要发展，它大大提 高了色谱柱的稳定性, 延长了柱寿命, 并使液膜进一步增厚, 提高了色谱性能 (如可在高温下使用)。
观
3. 气相色谱分析条件选择与定性分析
摩
4. 气相色谱工作站
训
5. 高效液相色谱工作站、色谱分析条件选择定性
练
及定量分析
与
6. 薄层色谱分析
考
观摩训练方式：
试
与课堂教学穿插进行
考核方法：
考试：60％；观摩训练及平时成绩：40％
第一章 色谱法概述
一、色谱法的特点、分类和作用
1.概述
学
2.分类
习
3.特点