血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书
血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书
血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA）原理在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。
样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。
标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
标本运输：密封，室温运输。
标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
试剂6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST360操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。
8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各10μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
丙型肝炎病毒抗体测定SOP
丙型肝炎病毒抗体测定标准操作程序（）【目的】指导免疫项目丙型肝炎病毒抗体的测定。
【适用仪器】酶标仪36O、洗板机36W等。
【该变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【方法原理】法：用特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗抗体与包被抗原反应，再与酶标结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（）显色，在酶标仪上测定后根据值判定有无抗体的存在。
【标本要求】种类：血清、血浆。
【试剂】试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。
保存条件及有效期：28℃储存。
自生产日期起，有效期半年。
【质控品】试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。
【操作步骤】1．加生物素试剂：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照10微升。
除空白孔外，其余孔加入50微升生物素试剂。
2．加样：分别在相应孔中加入待测样本、阴性对照和阳性对照各50微升，空白孔除外。
3．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。
4．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
5．加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。
6．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
7．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
8．显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
9．终止：每孔加入终止液50微升，混匀。
10.用酶标仪读值，零置酶标仪450或双波长450630下测定值。
结果判定1．阴、阳性对照和被检样品的值减去空白对照值即为计算值。
2．试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.1，阳性对照孔值≥0.8。
3．临界值（值）的设定：值=0.12+阴性对照均值4．被检样品的值>=临界值应判为抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。
PCR定量丙肝RNA作业指导书
丙型肝炎病毒(H C V)核酸扩增(PCR)荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。
二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCV RNA，在逆转录酶作用下将RNA逆转录为HCV cDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用Taqman探针法检测扩增产物。
通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。
五、试剂：1. 来源：上海复星HCV核酸扩增荧光定量检测试剂盒〕。
2. 规格：32人份/盒。
3. 试剂盒组成：3.1 病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCV RNA。
裂解液 4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤液A 14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液1×2支含0.04% NaN3的灭菌双蒸水（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管3.2 核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：RT―PCR试剂PCR主反应液 250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液250ul×1支阴性对照含有0.05% NaN的HCV RNA阴性的混和人血清3强阳性对照 250ul×1支含有约2×106 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250ul×1支含有约2×104 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品1 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品2 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品3 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品4 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。
丙型肝炎病毒抗体操作规程
丙型肝炎病毒抗体操作规程【试剂盒组份】1.HCV抗原包被板48孔*1块2.酶结合物5ml*1瓶3.阳性对照0.5 ml*1管4.阴性对照0.5 ml*1管5.浓缩洗涤液：用前每瓶1：20稀释30 ml*1瓶6.显色剂A 3ml*1瓶7.显色剂B 3ml*1瓶8.终止液3ml*1瓶9.样品稀释液5ml*1瓶10.封口纸2片11.说明书1份【检测方法】1.每次试验设阴性，阳性对照各两孔，分别加入阴，阳性对照血清100μl，再设一孔空白对照，加样品稀释液100μl。
其余孔加入100μl样品稀释液，再加待测血清10μl。
充分混匀后，置37℃温育30分钟。
弃去孔内样品，扣干。
2.用洗涤液注滿每孔（至少300μl洗涤液/孔），勿溢出，静置5秒钟后扣干，重复5次。
3.每孔加酶结合物100μl（空白对照孔除外），置37℃温育20分钟，同上法洗反应板5次。
4.每孔加显色剂A液、B液各50μl,轻轻振荡后，37℃避光静置10分钟。
5.每孔加终止液50μl终止反应，以空白调零，在酶标仪中读取各孔OD450。
【结果判定】1.阳性对照平均值大于1.20，实验结果有效。
2.实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20，否则本次实验无效。
3.若阴性对照读数小于0.050时，按0.050计算。
4.临界值（Cut off value）=阴性对照平均值+0.1。
5.测试标本的计算值小于Cut off value则为HCV抗体阴性。
6.测试标本的计算值等于或大于Cut off value则为HCV抗体阳性。
【注意事项】1.从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡20分钟再进行测试。
2.若洗涤液不够可自行配制。
PH7.2 0.1MPBS-0.5℅Tween20。
用前10倍稀释成0.01MPBS-0.5℅Tween20。
3.本试剂盒中的样品稀释液采用变色技术，在加原始血清或血浆标本后由工黄绿色变为蓝绿色。
非原始血清或血浆（如稀释标本等）颜色变化不明显或变为其他颜色，为正常现象。
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
丙型肝炎病毒操作规程
丙型肝炎病毒操作规程
《丙型肝炎病毒操作规程》
一、引言
丙型肝炎病毒是一种引起慢性肝炎的病毒，其传播途径主要包括血液传播和性传播。
在进行丙型肝炎病毒的实验操作时，需要严格遵守相关的操作规程，以确保实验人员和周围环境的安全。
二、实验室安全措施
1. 实验室应配备相应的专业化安全设备，包括生物安全柜、防护眼镜、手套等，并应定期维护和检查；
2. 实验室工作人员应接受相关的防护培训，并定期进行健康检查；
3. 实验室应定期清洁消毒，确保无菌环境。
三、操作规程
1. 操作人员在进行丙型肝炎病毒实验操作前，应穿戴好防护服装和防护设备；
2. 实验操作前，应做好必要的实验准备工作，准备好所需的材料和试剂；
3. 实验操作时，应严格按照操作规程进行，不得随意更改实验步骤；
4. 实验操作结束后，应做好实验设备的清洁消毒工作，并及时处理好实验废物。
四、应急措施
1. 在实验操作中如发生意外情况，应立即停止操作，并及时向上级主管报告；
2. 意外情况发生后，应根据相关应急预案进行处理，确保实验人员和周围环境的安全。
五、结语
丙型肝炎病毒的实验操作需要严格遵守操作规程，以确保实验人员和周围环境的安全。
希望通过本规程的制定和执行，能够有效预防丙型肝炎病毒的传播，并为研究工作提供安全保障。
丙型肝炎病毒抗体IgG (抗-HCV·IgG)标准操作程序SOP文件
4、加酶：除空白对照孔外，每孔加入2滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴15分钟。
5、洗涤：同步骤3。
6、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻拍混匀后，置37℃水浴15分钟。
7，每孔加终止液50ul。
2、试剂用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、若浓缩洗涤出现结晶，可于37℃放置至溶解。洗涤要充分，各孔均须加满，防止孔口内游离酶不能洗净。
6、本试剂盒应视为为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作
临界值（C.O.）=0.140+阴性对照平均OD值；
样本OD值＞临界值,为抗-HCV·IgG阳性;否则为阴性。
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
酶联免疫吸附试验：阴性
[临床意义]:
（1）在输血后患肝炎有80－90%的病人是丙型肝炎，其中大部分为阳性。
（2）在乙型肝炎患者中，特别是经常使用血制品（血浆、全血）的病人可以引起丙肝病毒的合并感染，使疾病转为慢性化、肝硬化或者肝癌。所以对乙型肝炎的复发病人或是慢性肝炎病人要进行HCV－Ab的检测。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-15
丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCV·IgG)
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
丙型肝炎病毒抗体检测说明书
丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）【包装规格】条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。
【预期用途】本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。
丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。
HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。
【检验原理】本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。
检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。
然后，混合物再毛细效应下向上层析。
如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。
无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。
【主要组成成分】丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。
羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维；缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠；25ul吸管检测记录表各组份的包装数量如下：说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。
检验时另需准备样本收集容器和计时器。
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程1.检验目的用于体外定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒(HCV)抗体。
2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫层析技术，应用间接法原理定性检测人血清(浆)HCV抗体。
在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体(anti-IgGAb),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原(Core、NS3、NS4、NS5,源自大肠杆菌)和人IgG 抗体(丙种球蛋白)。
检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG 抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgGAb-HCVAb-HCVAg”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。
3.性能特征3.1用国家参考品测定，产品性能应符合以下要求。
3.1.1阴性参考品符合率：对20份阴性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阴性结果。
3.1.2阳性参考品符合率：对20份阳性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阳性结果。
3.1.3最低检出量：灵敏度1号1:8进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
灵敏度2号1:64进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
3.1.4精密性：用精密性参考品平行检测10次，均在15分钟内显示出清晰可辨的检测线，且显色深度无显著差别。
3.1.5稳定性：试剂盒置37℃20天，阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密性均应符合要求。
3.2乙肝、人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝、庚肝、戊肝、类风湿因子(RF)、红斑狼疮等各种类型的标本不会对测试产生干扰。
3.3胆红素(342.0μmol/L)、胆固醇(20.7mmol/L)、血红蛋白(5.0g/L)、甘油三酯(28.2mmol/L)),不影响检测结果。
丙型肝炎病毒抗体检测(酶联免疫法)
丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。
在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。
2、标本采集与处理?2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。
2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。
故在采血前至少应静坐５分钟。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。
2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。
本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。
2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8o c储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。
3、试剂与仪器：?3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.23.1.3包装：96T×13.1.3试剂配置：浓缩洗涤液 50ml×1瓶样品稀释液 12ml×1瓶HCV酶标板 8×12孔或12×8孔HCV酶标试剂 12 ml×1瓶 HCV阳性对照 0.2ml×1支 HCV阴性对照 0.2ml×1支底物液A、B液各6ml×1瓶终止液 6ml×1瓶自封袋 1个封版膜 2张说明书 1份3．2测定仪器：3.2.1酶标仪：上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：4．1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
丙肝病毒核酸扩增荧光检测作业指导书
丙肝病毒核酸扩增荧光检测作业指导书1．目的：保证HCV DNA检测结果准确、可靠。
2．适用范围：HCV DNA的TaqMan荧光定量检测，标本类型为血清。
3．负责人：谢秋华操作人：谢秋华胡锦辉何小雪4．原理：本试剂盒用一对丙型肝炎病毒特异引物和一条丙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以逆转录液，逆转录酶，PCR反应液，耐热DNA聚合酶（Taq酶），四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，先将RNA逆转录成cDNA，再用PCR体外扩增法检测丙型肝炎病毒cDNA。
5．性能参数：检出低值＜1×103基因拷贝/ml。
6．标本要求：（1）标本类型：血清。
（2）标本采集：见标本采集手册。
（3）标本储存和运输：室温放置不超过2小时，4-8℃不超过72小时，-20℃保存期6个月，应避免反复冻融，室温运输。
（4）标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。
7．容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管。
8．所需设备：ABI GeneAmp 5700、台式高速离心机、混匀器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外灯。
9．试剂：DNA提取液（500μl/管）2管；HCV-PCR反应液（未贴标签管）20管；阳性定量质控标准品（1×108基因拷贝/ml）（50μl/管）1管；阴性质控品（250μl/管）1管。
10．校准程序（计量学溯源性）：11．程序步骤:：11.1标本采集和运送用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml，注入无菌1.5ml 离心管,于室温静置2小时,转至4℃静置1小时。
8000rpm离心5分钟，吸取200ul血清(注意勿带入红细胞)转入另一无菌1.5ml离心管，即为血清标本。
标本可立即用于测试（48小时以内），也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。
标本运送应采用0℃冰壶。
11.2标本及对照标准品的处理向一新的经高压灭菌处理过的0.5ml离心管中加入10ul充分混匀的RNA提取液(RNA 提取液A易沉淀,取样前需用移液器反复吸打混匀后吸取)。
丙型肝炎病毒抗体操作步骤
丙型肝炎病毒抗体操作步骤1. 检验目的：检测人血清（或血浆）样品中的丙肝病毒抗体.2. 检验原理：在微孔条上预包被高纯度基因重组HCV结构区抗原,可与样品中抗HCV抗体反应,再加入HRP标记的兔抗人IgG抗体与之结合,然后用TMB底物作用显色,通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判断样品中HCV抗体的存在与否.3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。
3.1 HCV酶标板（96人份） 3.2 HCV阳性对照1管3.3 HCV阴性对照1管 3.4 HCV酶标试剂1瓶3.5 HCV样品稀释液1瓶 3.6 HCV浓缩洗涤液1瓶3.7 显色剂A 1瓶 3.8 显色剂B 1瓶3.9 终止液（2M H2SO4）1瓶 3.10 封口膜3张3.11 自封袋 3.12 说明书1份4. 试剂的贮存：直接使用，2~8℃贮存至失效期避免阳光直射。
5. 操作：5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18℃—25℃），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
5.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号,每板应设阴性对照1孔,阳性对照1孔,空白对照1孔(空白孔不加样品及酶标试剂,其余各步相同).5.4 稀释: 用加液器每孔加入100uL样品稀释液.5.5加样：分别用加样器在相应孔中加入阴性或阳性对照血清10uL待测血清样品10uL。
5.6 温育：置37℃温育60分钟，5.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。
5.8 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100uL；轻拍混匀。
5.9 温育：置37℃温育30分钟。
5.10 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。
5.11 显色：每孔加显色剂A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置30分钟。
5.11 终止：每孔加入终止液50uL轻轻振荡混匀5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长630nm测定各孔OD值(建议用双波长测定，用单波长测定时需用空白对照孔调零)并记录结果。
丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书1.目的采用 PCR 技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸的定性检测，适用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。
2.范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测。
3.职责3.1 操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3 实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光 PCR 技术，以丙型肝炎病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，进行一步法RT-PCR 扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值 (CT) 实现对未知样本的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5. 样本要求5.1适用标本类型：血清5.2标本采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2 ml，注入无菌的真空采血管中(未加抗凝剂) ，室温(22-25C)放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min ；吸取上层血清，转移至 1.5ml 灭菌离心管。
5.3标本保存和运送所采集的标本可立即用于测试或长期保存于-70C,也可保存于-20C待测，保存期为3个月，标本应避免反复冻融。
标本运送采用干冰(或者冰袋)保持低温，运输时间不应超过 4 天。
5.4拒收标本：拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1设备AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
6.2试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国7271-2013最低检出量：最低检出量为500 IU/ml试剂各组分见表1:表1试剂盒组分表7.操作步骤7.1试剂准备（试剂储存和准备区）7.1.1进入试剂准备区，打开通风设备，按照消毒清洁程序擦拭实验台面，并在检验流程记录表上做相应记录。
实验室检测丙型肝炎病毒抗体及结果报告指南
实验室检测丙型肝炎病毒抗体及结果报告指南检测丙型肝炎抗体试验于1990年在食品与药品管理局(FDA)首次注册，自那时起，新版的此类试验和其他FDA批准的抗一HCV试验已广泛运用于临床诊断和无症状病人的筛检。
CDC建议对于被认为具有HCV感染血清学证据的人，如其只是抗一HCV筛检阳性的话，应由更为特异的血清学试验(如重组免疫印迹试验[RIBA])或核酸试验证实。
然而。
对于抗一HCV的检测，大多数实验室只根据筛检的阳性结果报告为阳性，而不用更为特异的血清学和核酸试验对这些结果加以证实，除非送检医师要求。
实验室不开展旁证试验的原因很多，包括缺乏实验标准、对筛检和旁证试验的开展及结果解释缺乏理解、以及其高额费用。
在建议的抗-HCV检测程序中包括了使用筛检阳性是s/co比值(signal-to-cut-0ff)。
以减少需要旁证试验标本的数量和提供更可靠地反映受检者真实抗体状态的检测结果。
现有的抗一HCV筛检法：在美国使用的经FDA注册或批准的抗一HCV筛检试剂盒包括三种免疫法：二种酶免疫法(HCV EIA 2.0、HCV ELISA 3.0)和一种加强的化学发光免疫法(CLA)。
所有这些免疫法都使用HCV一编码重组抗原。
现有的旁证试验：旁证试验包括一种血清学抗一HCV试验和检测HCV RNA的核酸试验(NATs)。
在美国唯一经FDA注册的抗一HCV 的旁证试验是重组免疫印迹试验(RIBA)。
此方法既使用HCV一编码重组抗原，也使用合成肽。
因其是一种血清学试验，可用抗一HCV筛检试验中使用的同一血清和血浆标本进行此项试验。
FDA批准的用于HCV RNA定性检测的诊断性NATs。
运用逆转录酶链反应(TR一PCR)扩增技术，包括AMPLICOR丙肝病毒(HCV)试验(2.0版)和COBASAMPLICOR丙肝病毒试验(2.0版)。
运用这两种试验检测HCV RNA要求按适合NAT的方式收集、处理血清和血浆标本，并在具有专项设施的实验室进行。
丙肝抗体(Anti-HCV)实验操作规程(吉比爱)
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：本试剂盒应用间接法酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的HCV抗体。
用高纯度基因重组HCV 抗原包被酶标板，待检血清或血浆中的-HCV抗体可与包被抗原反应，再与酶标抗人lgG抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物。
加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据吸光值（A值）判定有无HCV抗体的存在。
4.1.2.检验方法：准备：本试剂盒在使用前应在室温（18~25℃）平衡30分钟；包被板平衡至室温后才可打开外包装铝箔袋，以防止板条吸收空气中水蒸气；将20倍浓缩洗涤液用纯化水20倍稀释后备用。
设定：将待测样品按序排列设定加样顺序。
每板试验设空白对照1孔（若用双波长检测，可不设空白对照孔），阴性对照3孔，阳性对照2孔。
加样：将所需数量的板条固定于板架。
在包被板孔中加入样品稀释液，每孔100ul。
除空白对照孔外，在相应孔中再加入HCV阴性、阳性对照和待检样品10ul。
温育第一次：贴上封口胶，置37℃温育60分钟。
洗涤：小心撕去封口胶。
手工洗操作：弃去各孔中液体、拍干。
每孔注满洗液，静置5-10秒后弃尽，洗涤5次，拍干；洗板机操作：没空加入350ul洗液，每次洗涤间隔5-10秒，洗涤5次，拍干。
加酶：除空白对照孔外，每孔加入HCV酶工作液100ul.温育第二次：贴上封口胶，置37℃温育30分钟。
洗涤同操作5.显色：每孔加入底物液A50ul,再加入底物液B50ul，轻拍混匀，置37℃避光显色30分钟。
测定：显色完毕后，每孔加入终止液50微升，轻拍混匀，立即在单波长450nm(须以空白对照孔调零)或双波长（主波长450nm，参考波长600-650nm）下测定各孔A值。
HBV、HCV检测规程
乙型肝炎病毒核酸定量检测1原理本试剂盒用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（TAQ酶）、核苷酸单体（DNTPS）等成分，用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA。
2 标本种类及收集要求2.1 标本采集2.1.1标本种类：血清或血浆。
2.1.2标本要求：血清——用一次性无菌采血针抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的干燥生化管，使用水平离心机，3000rpm离心10min;吸取上层血清，转移至1.5ML进口灭菌管。
血浆——用一次性无菌采血针抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA（乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5~10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，3000rpm离心10min;吸取上层血浆，转移至1.5ML 进口灭菌管2.2 标本储存：标本可立即用于测试，也可以保存与—20℃待测，保存期为6个月。
2.3标本运输：密封，室温运输。
2.4标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
3试剂3.1 试剂名称：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）3.2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司。
3.3 包装规格：20人份/盒3.4 试剂盒组成DNA浓缩液，DNA提取液，PCR反应管，HBV临界阳性质控品，HBV强阳性质控品，阴性质控品，HBV阳性定量参考品（1.0×104IU/ml、1.0×105 IU/ml、3.5试剂储存条件及有效期：-20℃避光保存，有效期6个月。
4 仪器设备4.1 仪器名称：生物安全柜(Ⅱ级)、高速冷冻离心机、荧光定量PCR仪、恒温金属浴。
4.2 仪器厂家：上海培清、美国NUAIR公司、美国eppendorf、美国ABI生物技术公司、广州达安基因有限公司。
4.3 仪器型号：ABI7300、DA7600。
5 操作步骤5.1 DNA提取：5.1.1 标本处理（血清和血浆标本处理相同）-取100ul血清加入等量DNA浓缩液，振荡器振荡混匀5sec；12，000rpm离心10min；去上清，沉淀中加入30ul DNA 提取液，振荡器剧烈振荡混匀5-10sec，瞬时离心数秒，100℃恒温处理10±1min；12，000rpm离心5min，备用。
丙型肝炎病毒实验室检测技术规范
《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》中国疾病预防控制中心二○一○年五月二十日前言丙型肝炎已呈全球性流行。
据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，估计约1.7亿人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。
我国病毒性肝炎的发病人数一直位于所有传染病的前列，而丙型肝炎报告发病率在病毒性肝炎中也呈现上升趋势。
丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，丙型肝炎病毒慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。
丙型肝炎给人类带来了如此巨大的危害，在目前还没有疫苗的情况下，早期发现、早期治疗至关重要。
然而，大众对于丙型肝炎认知的欠缺、患者缺乏明显症状、在高危人群中早期发现丙型肝炎患者的机制的缺乏，都使丙型肝炎防治面临巨大的挑战。
目前丙型肝炎病毒检测已经在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、出入境检验检疫机构等广泛开展，但是我国在丙型肝炎病毒实验室检测方面尚存在检测策略不明确、检测程序不标准、检测结果解释不规范等问题。
临床实验室检测中存在大量的假阳性、假阴性结果。
鉴于此，为加强全国丙型肝炎检测工作，提高实验室检测质量，急需制订关于丙型肝炎病毒实验室检测的技术规范。
受卫生部委托，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心于2008年10月25日在北京召开了首次《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》（以下简称《规范》）编写组工作会议。
卫生部及中国疾病预防控制中心的有关领导从全国丙型肝炎防控管理角度，为《规范》编写内容提出了几点要求：1．《规范》内容要考虑为公共卫生服务，要考虑到基层的具体情况。
《规范》制订的标准要有实用性及可操作性。
2．《规范》内容要有发展的眼光，要考虑经济发展和技术进步。
《规范》内容要有一定的前瞻性，要有较长的使用寿命。
3．《规范》内容要有大局观念，要考虑有利于各系统的发展。
《规范》编写要借鉴国外经验、立足国内具体情况。
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血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA）
原理
在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。
样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。
标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
标本运输：密封，室温运输。
标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
试剂
6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：KHB
7.3 仪器型号：ST360
操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。
8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各10μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
8.6 加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100μl，标好位置。
对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
8.7 温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
8.8 洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100μl，轻拍混匀。
8.10 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
8.11 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.12 显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处20分钟。
8.13 终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.14 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值＝0.05＋0.08×阳性对照孔OD值，阴性对照OD均值大于0.1时应重
新试验，小于0.05时以0.05计算。
三孔阳性对照OD 平均值大于阴性对照0.6以上，方可认为试剂盒有效；若一孔阳性对照OD值与三孔阳性对照OD平均值差异大于30%，该孔应舍弃，并用另两孔重新计算OD平均值。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为阳性
样品OD值S/C.O<1者为阴性
10. 质量控制：每次用含2NCU/ml HCV抗体的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内。
11. 参考范围：阴性
12. 临床意义：在血清中抗HCV抗体阳性表明有急性或慢性HCV感染。
13. 操作性能：灵敏度高。
14. 方法局限性
14.1 某些样本会出现非特异性交叉反应。
14.2 早期感染有可能漏检。
14.3 样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15. 注意事项
15.1 试剂的使用：整个检测工作中应严格防止交叉感染，操作时必须带手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
所有样品，洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
15.2 试剂的组分：本试剂盒中样品稀释液采用变色技术，在加原始血清或血浆标本后由黄绿色变为兰紫色。
非原始血清或血浆（如稀释标本等）颜色变化不明显或变为其他颜色为正常现象。
15.3 加样：
15.3.1 样品稀释液，待测标本，阴性对照和阳性对照均须用加样器加注，并经常核对其准确性。
15.3.2 阴阳对照无须稀释，直接用加样器加100ul 于各孔中。
15.3.3 阴阳对照应在所有待测标本加完后再加，以保。