无病毒苗木培育
植物组织培养第十章无病毒苗木培育
A、酶联免疫吸附法 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)
1997年Clark和Adams用微量血凝板建立了诊断植物病毒的ELISA技术。Casper首先用其测定了PLRV病毒。
原理：抗血清(antiserum)鉴定法：
抗血清即含有抗体的血清；血清反应即抗体与抗原的结合。由于血清反应的特异性，故可用于病毒的鉴定。
黄瓜花叶病毒（CMV） 郁金香 条斑病毒 （TuBV）
芋的花叶病 百合丛簇病（CTLV）
01
变色型：叶片的局部或全部颜色改变。如褪绿、变黄、变橙、变红、变紫、变蓝绿等。郁金香碎裂病毒感染郁金香，使其花色由单色发生斑驳或纵向条点。
02
坏死与变质：某些细胞组织死亡或组织质地变软或变硬或木栓化。
芋的枯萎病
方法：茎尖大小与脱毒率成反比，与成活率成正比。
01
02
3、生物学方法
3.1 茎尖组织培养脱毒法
食用百合的脱毒培养过程
3.2 愈伤组织培养脱毒法 愈伤组织中某些细胞不带病毒，可能是细胞的分裂速度快于病毒的复制速度，而似的少数细胞无病毒，这样通过这些细胞来再生植株，以获得无病毒苗。
01
02
3.3 珠心胚培养脱毒
TMV
TYMV
03
02
01
花叶型： 也称花叶病。是由于叶绿体结团或退化引起。造成叶片上形成暗绿(正常)、亮绿(结团)和黄色(退化)区域。
环斑型：在叶片、果实或茎的表面形成单线圆纹或同心纹的环、全环或半环，以用连续屈曲状的环。常常和花叶同时发生。
畸形生长型 ：各种反常的生长。
2.2 病毒对植物外观状态的影响
Hale Waihona Puke 作业与探究什么是植物无病毒培养？
苹果无病毒苗木的繁育技术
【２】李德智．苹果无病毒苗木繁育技术及品种
【Ｊ］．北京农业，２００６（６）：２４．
［３】孙运村，徐德坤，崔梅，等．苹果无毒苗
嫁接繁育技术【Ｊ１．山东农业科学，１９９６（５）：
２７
生产许可证、苗木质量检验合格证、病 虫检疫和病毒检验合格证。 河南农业２０１６年第１１期（中）
沿栽植的倾斜方向压倒在栽植沟内。第 １株苗压倒后，梢尖用第２株苗的根部
生产上一般用条播。 ３．砧木苗的大田管理 当幼苗长出四五片真叶时，进行断 根，并根据实际情况进行间苗、除草、施 肥浇水及病虫防治，待幼苗长至２５—３０ ｃｍ时开始打尖，以利增粗待嫁接。
于当年秋末土壤结冻前，把苗床上 的土扒开，露出母株和其上着生的砧苗，
将砧苗从基部剪下，剪口要尽量压低， 不超过１ ｃｍ，并略有倾斜。留下的砧苗
左右时，开始第１次培土，培土厚度１０ ｃｍ，新梢埋人土中的部分要把叶片摘掉。 以后随着新梢的增高进行培第２次和第
３次培土，每次培土间隔时间１０ ｄ左右， 培土的总厚度不能少于２５ （四）分株
ｃｍ。
Ｉｌｒｌ内不得种梨树，以减少苹果锈果 ２．选种层积和播种
病的传染概率。 要选择饱满、有光泽、种仁白色的 带毒率极低的海棠种，根据不同的种子， 进行不同天数的层积，然后进行播种，
栽培育种
ＺＡＩ ＰＥＩ ＹＵＺＨＯＮＧ
苹果无病毒苗木的繁育技术
张洪芳山东省滨州市无棣县信阳镇农业综合办公室２５１９００
摘要：果树病毒病及其类病毒病害均经嫁接传染，随繁殖材料远距离传播。而一旦感染病毒，终身则不得免除，加之目前没有能够有效防 止病毒痛的化学药荆和生物制品。因此，果树无病毒种苗的生产在病毒病防治上具有重要地位。基于此，详细介绍果树无病毒种苗的繁育技术。
果树无病毒苗木建园栽培技术
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２ 栽培技术措施
２１ 整 形修 剪 ５月 底 ６月 初定 梢 ， 留角度 ． 选 较好的 ７ １ ￣ ２个梢 ，其余 抹掉 。新 梢 长至 ４ ｅ ０ｍ
和 ０３ ０ ％磷 酸二氢 钾 。 ．％一 ． ４ 灌水 ３次 ， 分别 在 扣棚 前 ２ ０天左 右 、 花 谢 后和 硬核期 各灌 １ 水 。 次 ２４ 病 虫防 治 扣 棚 后 萌 芽 前喷 ３ ５波 美 度 ． —
形 整 枝 ； 其 余新 梢摘 心 ， 对 促发 ２次 梢 ， 背上 对
・
４ － ３
维普资讯
烟 果 ０－（ ０ 台 树２８１总１ ） ０ １
粉媒 介 ， 要进 行 人 工辅 助 授粉 。开 花期 每 日上 午 ８ ０ — １０ ：０ １ ：０用 毛笔 逐花 授 粉 ，以提 高 坐 果 率 。谢 花 后 ２ ０天 左 右结 合 疏 果 ， 除并 生 果 、 疏 小果 、 畸形 果 。疏 果 时 ， 般 长 果 枝 留 ３ ４个 一 —
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无 污染 、 无粉 尘 、 离煤 矿 、 泥厂 、 电厂等 工 远 水 发 矿 企 业及 交 通干 线 ５ ｉ 以 上 ，测定 土 壤 的 ｐ ｋ ｎ Ｈ
值 大 小 ， 土壤 中所 含 的 对人 体 有 害物 质 是 否 及
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根 据 当地 的地 理 、 自然气
直 立梢 ， 反 复摘心 ； 要 过多 、 密枝抹 掉 。 过 ８月初
果树无病毒栽培十要领
果树无病毒栽培十要领1、合理选择砧木。
砧木可分营养系砧木和实生砧木两类。
前者一般用作中间砧，不会有太大问题，后者常用于根砧。
有些育苗单位使用栽培品种的种子作为砧木种子，这种苗木虽健壮整齐，但根系发育差，易感病毒，在购苗时要予以注意。
2、慎重选择品种。
根据市场、气候、土壤条件等慎重选择，切忌太多太杂。
小杂果和大宗水果搭配，早中晚熟品种搭配，适当发展加工品种。
如苹果中的嗄拉、乔纳金、富士1号：葡萄中的红提、黑提等都是很好的品种。
另外，不要过分相信某些所谓从国外引进的无病毒新品种。
3、不要随便选择园地。
无病毒苗应专门成园，与普通园相距50-100米以上，更不要与普通苗混植。
无病毒苹果栽培时与梨园相距应在150米以上。
4，栽植密度不要太大。
栽植密度不要太大，以免过早郁闭。
例如苹果矮化中间砧无病毒苗木一般为3×4米，葡萄苗一般为2×3米。
5、进行适当的整形、修剪。
要选择合适的树形，如苹果采用自由纺锤形或细长纺锤形，葡萄采用篱架扇形。
修剪上要注意轻剪缓放，抑制营养生长，促进生殖生长，特别要注意生长季节的修剪。
6、加强肥水管理。
施足基肥，每亩施有机肥5000～10000千克，追肥要比普通树多两成，保证旱能浇、涝能排，达到高产优质目的。
7、采用生草覆盖或间作绿肥。
行间种植黑麦草或豆科绿肥如三叶草、苜蓿、紫云英等，在黑麦草营养生长旺盛期或绿肥开花前刈割铺于行间，可以增加土壤有机质含量。
8、注意病虫防治。
特别是传毒昆虫如蚜虫的防治尤为重要。
可在树下铺银灰反光膜，在树上悬挂银灰塑料条驱避，行间摆放黄色粘蚜板粘杀，树上发现蚜虫要及时喷药。
9、修剪工具要注意消毒。
无病毒园的修剪工具最好单独使用，否则修剪时一定要对工具用70％的酒精或水煮30分钟消毒。
10、不要滥用药剂。
无病毒苗木所结果实着色比一般苗木稍迟，对此情况不要滥用药剂促着色。
五招提高板栗坐果率何素玲板栗属雌雄异花同株。
雄花量大，消耗养分多，而雌花量少且大都在枝条的顶端，在生产上很容易造成结果部位外移，不利于立体结果和产量提高。
通过茎尖培养生产无病毒植株流程
通过茎尖培养生产无病毒植株流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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无病毒苗木繁育技术—无病毒苗木的保存繁殖(苗木繁育技术课件)
内容提纲
无病毒苗木繁育方法 无病毒苗木的鉴定 无病毒苗木的繁殖保存
无病毒苗木的繁殖保存
学习目标
知识目标： 知道无病毒苗木的繁殖程序； 知道无 病毒苗木的保存方法。
能力目标：根据给定园艺植物，能够制定无病毒苗 木繁殖计划。
素质目标：培养学生分析、总结能力；培无病毒苗木应种植在300目的防虫网内 2.要求土壤消毒，保持周围环境整洁 3.喷施农药防治虫害，保证无病毒苗木在与病毒
严密隔离的条件下栽培繁殖。 4.或通过组织培养进行离体保存。
复习思考题
1.无毒苗繁殖生产体系中包含哪几部分？ 各有何作用？
2.无毒苗繁殖时对技术有何要求？ 3.无病毒苗木如何进行保存？
无病毒苗木的繁殖保存
一一 ••无无病病毒毒苗苗木木的的繁繁殖殖 二二 ••无无病病毒毒苗苗木木的的保保存存
一、无病毒苗木的繁殖
主要采用无性繁殖方法，如 嫁接、扦插、压条、匍匐茎 繁殖和微型块茎(根)繁殖等方 法繁育无病毒苗木。
一、无病毒苗木的繁殖
在繁殖无病毒苗木时，对其繁殖技术有 如下要求： 1.建立无病毒母本园 2.完善繁育手续 3.规范繁育技术
无毒苗木培养
若干种动物DNA和RNA病毒是 有效的。 4、在植物中，放线菌-D酮和放 线菌也能抑制原生质体中病毒的 复制。
13.5通过愈伤组织培 养消除病毒
在用机械方法由受TMV侵染的烟草愈伤 组织分离出来的单个细胞中，只有40% 带有病毒。由受侵染的愈伤长一智中再 生出很多不含有TMV的植株，这一事实 也证明了愈伤组织中的某些细胞是不含 病毒的。 在一个受到TMV侵染的叶片中，暗绿色 的组织或者是不含病毒的，或者是病毒
的。在麝香石竹离体顶端分生组织培养 中，既需要生长素，也需细胞分裂素。 在各种不同的生长素中，应当避免使用 2，4—D，因为它通常能诱导外植体形 成愈伤组织。广泛使用的生长素是NAA IAA，其中NAA由于比较稳定，效果更 好。
4、GA3培养基有作者认为能抑制愈 伤组织的形成，有助于更好地生长 和分化。然而其他一些作者却发现， GA3并没有什么显著作用，在高浓 度时甚至有抑制效应。
植物间都要隔开一定的距离。取决 于病毒的性质和液汁中病毒的数量， 大概需要6—8d或是几周，知指示植 物即可表现症状。 检验植物中是否存在病毒的其他方 法，还有血清测验法和电镜观察法。
13.7 无毒原种的保存
为解决无毒植株有可能很快又被重 新感染，应将无毒原种种在田间的 隔离区内，这样就较少有重新感染 的机会。 另外一种更容易的方法是，把茎尖 得到的并已经过脱毒检验的植物通 过离体培养进行繁殖和保存。
植株是否还带着疑有的病原菌，并 在能杜绝任何再侵染可能性的条件 下，繁殖那些确已脱毒的植株。
13.11结束语
13.4.3.2 外植体大小
1、外植体越大，产生再生植株的机 会也越多。小的外植体可能不利于 茎的生根。但外植体大小与脱毒效 率呈负相关。外植体大小应小到足 以能根除病毒，大到足以能发育成 一个完整的植株。
金柚无病毒苗木繁育技术
K e x u e z h o n g z h i金柚无病毒苗木繁育技术作为广东省省级科技计划项目的重点内容，已经能够形成完善的金柚无病毒苗的繁育与操作，并且现在能够有效应用与日常生产与种植过程之中。
本文将针对金柚无病毒苗木繁育技术这一课题进行探究，从而提出相应的技术应用建议，希望能够为金柚无病毒苗木繁育技术的应用与推广起到一定的促进作用。
梅县被称为中国金柚之乡，其金柚的栽培技术也在不断发展，除了已经普遍推广的无公害栽培技术、测土配方施肥技术、水肥一体化技术、病虫绿色防控技术之外，还有金柚无病毒苗木繁育技术也具有较好的应用效果，比起传统的繁育技术种苗繁育的形式，梅县金柚无病毒苗木繁育技术不仅仅从根本上实现了脱毒管理，并且也能够实现增殖扩繁的种植效果，给种植户带来更多的经济效益。
所以下文将以梅县金柚无病毒苗木繁育技术的优势与发展现状进行分析，以此提出金柚无病毒苗木繁育技术在梅县的实际应用与具体表现。
一、梅县金柚无病毒苗木繁育技术的优势及发展现状因为梅县作为金柚种植历史悠久的农业大县，其金柚市场相对较为广阔，虽然目前的无公害栽培技术、测土配方施肥技术、水肥一体化技术、病虫绿色防控等技术已经能够实现推广与普及，但是在苗木供应市场上还存在着种苗质量参差不齐、供应市场秩序相对混乱的状况，所以针对这一问题，在明确梅县金柚的发展与生产要求的基础之上，引进梅县金柚无病毒苗木繁育技术，并且充分发挥梅县金柚无病毒苗木繁育技术的实际优势就显得十分迫切。
从经济效益上来看，金柚产业一直是梅县农村经济的支柱，如果在苗木质量环节处出现问题，就会造成较大的经济损失。
在梅县金柚无病毒苗木繁育技术应用中具有多个环节，通过成本核算，测评母树、检测脱毒、繁育推广等环节的成本并不高，但是在技术应用之后所获得的实际收益却是较大的。
所以梅县在发展金柚产业的过程之中，需要充分认识并且利用好梅县金柚无病毒苗木繁育技术的实际优势，从而为金柚产业的可持续发展与进步起到相应的促进作用。
植物无病毒苗的培育
05
植物无病毒苗培育的注意事项
注意病毒的变异性
病毒变异性的存在
植物病毒在自然界中常常会发生变异，这给无病毒苗的培育带来 挑战。
监测和预防变异
在无病毒苗的培育过程中，需要密切关注病毒的变异情况，采取 有效的措施预防和应对。
生抗病毒免疫。
应用
主要用于番茄、辣椒等蔬菜作 物。
生物工程法
原理
通过基因工程等技术手段，将植 物抗病毒基因导入植物体内，使 植物具有抗病毒的能力。
方法
根据病毒基因序列和植物基因组 信息，设计并合成抗病毒基因， 通过基因工程手段导入植物细胞 ，并通过筛选和鉴定获得抗病毒 植株。
应用
适用于多种果树、蔬菜和观赏植 物，具有广泛的应用前景。
01
水果是人们日常饮食中的重要组成部分，无病毒苗的培育对于提高水果产量和 品质具有重要作用。
02
无病毒苗可以提高水果的抗病性和抗逆性，减少病虫害的发生和危害，降低农 药使用量和环境污染。
03
通过无病毒苗的培育，可以提高水果的产量和品质，满足人们对高品质水果的 需求。
在花卉生产上的应用
花卉是人们日常生活中不可或缺的一部分，无病毒苗的培 育对于提高花卉品质和观赏价值具有重要作用。
培养出无病毒植株。
方法
将植物的茎尖剥离出来，在无菌 条件下进行组织培养，诱导出愈 伤组织和丛生芽，进而分化成完 整植株。
应用
适用于多种果树和园林植物。
微克芜菁法
原理
利用芜菁种子携带的病毒抗原 性，接种特定病毒并使其在芜 菁种子上建立稳定寄主关系。
方法
将感染病毒的芜菁种子进行处 理，使其表面抗原性消失，再 作为疫苗接种植物，使植物产
柑橘良种无病毒容器苗木繁育技术
绿色植保柑橘检疫性病害的肆虐，给柑橘产业和人民生活带来了巨大的灾难。
产业恢复需要大量健壮、安全、可靠的苗木，而无病毒苗木则是拯救这一灾难的基础。
但是现阶段需求量的迅速增长，加之育苗者和需苗者对无病毒苗木的概念和病害防控知识知之甚少。
为降低育苗者和苗木购买者的风险，减少政府对苗木市场整治的支出，笔者就柑橘良种无病毒苗木繁育的相关知识与技术进行介绍，以供从业人员参照执行。
1柑橘良种无病毒三级繁育体系柑橘良种无病毒三级繁育体系是无病毒苗木繁育的基础（图1）。
第一级为技术核心，将国内外优良品种资源无病毒化，并构建无病毒良种保存库、母本园和一级采穗圃；第二级为二级采穗圃，是扩繁的重要环节；第三级为各地良种苗木繁育苗圃。
这套体系功能齐全，分级设立，独立存在，保证了各个环节材料的安全，使繁育推广速度具有三级放大效应；其在病害检测效率、育苗质量、保障机制、推广模式等方面有革新性进步，是我国柑橘苗木繁育技术的典范；同时执行中华人民共和国国家标准《柑橘嫁接苗》、农业行业标准《柑橘无病毒苗木繁育规范》和《柑橘苗木脱毒技术规范》等标准和技术要求。
图1柑橘良种无病毒三级繁育体系示意图2柑橘无病毒容器苗木繁育技术2.1基本组成构件柑橘无病毒容器苗木繁育需要无病毒良种保存库、无病毒母本园（展示园）、砧木种子园、无病毒采穗圃、砧木苗繁殖圃和苗木繁育圃等几大功能区，简称为“一库两园三圃”。
具体要求和功能介绍如下。
2.1.1无病毒良种保存库田间优良母树或引进材料须经病害检测，无病的植株栽植在网室中隔离保存，每品种2~4株，有病的植株则进行病毒脱除后再进入良种库。
病害检测和脱毒对象包含柑橘黄龙病病原细菌（HLB）、裂皮病类病毒（CEV）、碎叶病毒（CTLV）、衰退病毒（CTV）引起的柚矮化病和甜橙茎陷点病的株系、温州蜜柑萎缩病（SDV）。
2.1.2无病毒母本园（展示园）用良种保存库的无病毒材料每个品种繁殖2~6株，根据不同品种，按株行距3米×4米或4米×5米定植在母本园内。
无病毒苗木繁育技术—无病毒苗木的鉴定(苗木繁育技术课件)
(3)优点：专一性高，结果准确，快速简便，一般几小
时甚至几分钟就可完成。
(4)方法 ①间接法 是用家兔球蛋白的山羊抗体与酶结合后
制成羊抗兔酶标记抗体，检测各种病毒。
②双抗体夹心法
是用酶特异性抗体检测抗原的方法。
一、脱毒效果的鉴定
3.电子显微镜法
(1)概念：利用电镜直接观察、检查出有无病毒存在。
(2)对指示植物的要求
①根据不同病毒，选择合适的指示植物 ②容易栽培 ③对要鉴别的病毒敏感，易接种，易感
染，症状显著。
一、脱毒效果的鉴定
1.指示植物检测
(3)鉴定方法 ①汁液涂抹法 ②嫁接接种法
一、脱毒效果的鉴定
1.指示植物检测
①汁液涂抹法
香石竹汁液涂抹脱毒鉴定法操作示意图
一、脱毒效果的鉴定
1.指示植物检测
二、农艺性状鉴定
无病毒苗木经过脱毒 和脱毒效果鉴定后， 还需进行田间农艺性 状鉴定，确证脱毒苗 仍保持原品种的特征 特性之后，才能作为 原种进行推广。
复习思考题
1.指示植株法鉴定脱毒效果时，常用的木本和草本 指示植物各有哪些？
2.简要说明酶联免疫吸附法的原理。 3.分子生物学检测包含哪些方法？
①汁液涂抹法
取被鉴定植物幼叶1－3g 研钵中研磨，过滤
滤液中加少量500－600目金刚砂
棉花球醮汁液涂抹叶面2－3次
指示植物15－25 ℃培养
一、脱毒效果的鉴定
1.指示植物检测
②嫁接接种法
草莓 指示 植物 小叶 嫁接 检测 法示 意图
一、脱毒效果的鉴定
1.指示植物检测
②嫁接接种法
将被鉴定植物的芽或幼叶嫁接在指示植物上， 4～6周后根据指示植物症状来判断是否脱毒。
苹果无病毒苗木繁育规程
苹果无病毒苗木繁育规程1、范围本标准规定了苹果无病毒苗木的繁育规程，适用于全国各苹果苗木产地及栽培区。
2、引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB 12943一91苹果无病毒母本树和苗木检疫规程 NY 329一19973、定义本标准采用下列定义。
3.1苹果无病毒原种苹果品种和砧木，经过脱毒处理、田间选拔、直接引进经检测后，确认不带已知病毒或指定病毒的原始植株。
3.2苹果无病毒苗木繁育体系经国家或省（市、区）主管部门核准，由不同单位组成的完成苹果无病毒苗木生产的各层次、各环节任务的组织整体。
4、繁育体系4.1苹果无病毒苗木的繁育，必须根据种苗法（在未制定种苗法前，根据农业部《果树种子苗木管理暂行办法》的规定）实施。
4.2在全国和各省（市、区）建立各级无病毒苗木繁育体系，确保无病毒苗木的质量合格。
4.3苹果无病毒苗木繁育体系包括无病毒原种保存圃、无病毒母本园及无病毒苗木繁殖圃等三部分。
4.4苹果无病毒原种保存圃。
4.4.1苹果无病毒原种保存圃承担无病毒原种的培育、保存的任务，负责进行主要苹果品种和砧木的脱毒、培育和从国内外引进无病毒原种，向无病毒母本园提供无病毒苹果品种、无性系砧木原种，协助母本园单位建立无病毒品种采穗圃、砧木采种园和无性系砧木压条圃。
4.4.2国家和省无病毒原种保存圃由农业部确认。
4.5苹果无病毒母本园。
4.5.1无病毒母本园包括无病毒苹果品种采穗圃、无病毒砧木采种园、无病毒无性系砧木压条圃。
4.5.2母本园承担单位由农业部和各省（市、区）主管部门核准认定。
4.5.3母本园的繁殖材料由原种保存单位提供，并接受病毒检测机构的定期病毒检测，一旦发现问题立即更换。
4.5.4母本园承担单位负责向育苗单位供应各种无病毒品种接穗、砧木种子和苗木。
4.6病毒苗木繁殖圃。
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料和农药施用量，降低生产成本，保护了环境
一、植物脱病毒的机理
病毒在植物体内的分布是不均匀的，在茎尖中呈梯度 分布。 在受侵染的植株中，顶端分生组织无毒和含毒量极低。 较老组织的 含毒量随着与茎尖距离的加大而增加。
分生组织含毒量低的原因可能是： 1）植物病毒自身不具有主动转移的能力，无论在病田植株间 还是在病组织内，病毒的移动都是被动的。在植物体内， 病毒可通过维管束组织系统长距离转移，转移速度较快， 而分生组织中不存在维管束。病毒也可通过胞间连丝在细 胞间移动，但速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 2）在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复 制。 3）在植物体内可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比 其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒的增殖。
（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚， 种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。 （三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖 （0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗 培养——移植。
苹果茎沟病毒
苹果花叶病毒 苹果锈果类病毒 葡萄扇叶病毒 葡萄茎痘病毒
弗吉尼亚小苹果
兰蓬王、红玉和 金冠 国光 沙地葡萄圣乔治
葡萄卷叶病毒
欧亚种葡萄
叶片下卷、叶脉间变红
葡萄茎沟病毒
葡萄栓皮病毒 葡萄金黄病毒 葡萄脉坏死病 葡萄脉斑驳病
Kober 5BB
LN33 Baco 22A 110R 河岸葡萄
仅在Kober5BB上会产生茎沟
铃薯Y病毒
马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒 斑纹花叶病毒 甘薯 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒
1.0～3.0
0.2～0.5 0.2～0.3 0.2以下 1.0～2.0 1.0～2.0 0.3～1.0
鸢尾
菊花
花叶病
各种病毒
0.2～0.5
0.2～1.0 0.2～0.8 0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0
康乃馨 各种病毒 大丽花 大蒜 甘蔗 草莓 花叶病 花叶病毒 花叶病 各种病毒
二、热处理脱毒
脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温 的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸 渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用： 甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空 气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间 适用：多数植物
三、抗血清鉴定法 •
（二）方法 1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法 3、环形接口法 4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测 定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。
四、分子生物学鉴定
1、双链RNA法 通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电 泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是否 带病毒。 2、互补DNA（c DNA）检测法
可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病
毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保
管得好可以保存利用5～10年。
一、无病毒苗的保存
（一）隔离保存 通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目，即网 眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆栽钵。栽培用的 土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，并及时喷施农 药防治虫害，以保证植物材料在与病毒严密隔离的条件 下栽培。• 一种更便宜的方法，是把由茎尖得到的并已 另 经过脱毒检验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。
第二节 脱毒苗鉴定 一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无 特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。 二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作 为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。 即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能 测出病毒的相对感染力。
节间肿大，部分叶片背面出现栓皮 植株矮化，叶片下卷、黄化
叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须 和嫩梢坏死
褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形 新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈 破碎状
柑橘碎叶病
腊斯克枳橙、特洛 亚枳橙、卡里佐枳 橙和厚皮来檬
三、抗血清鉴定法
特 • 异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完 成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。 （一）原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发 生高度专一性的血清学反应（免疫反应）
1971年日本人Mori获得了首例大蒜茎尖培养脱毒苗。 法国率先将脱毒蒜种应用与生产，并出口到澳大利亚等国。 我国于80年代初获得脱毒苗。1988年以来，山东省农业科 学院蔬菜研究所探明了侵染我国大蒜的主要病毒种类，提 出了一套脱毒蒜快繁技术，提高繁殖系数7-10倍，提出了 良繁体系，缩短了繁种周期，降低了生产成本，现在脱毒 蒜种已在我国大面积应用于生产。
也叫DNA分子杂交法
五、电镜检测法
运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有 无病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对 病毒种类进行鉴定。是较为先进的方法，但需一 定的设备和技术。
第三节
无病毒苗的保存和繁殖
通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴 定确系无特顶病毒者，既是无病毒原种。 无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有
部分病毒的木本指示植物及相应症状
病毒种类 木本指示植物 苏俄苹果 司派227或光辉 表现症状
苹果褪绿叶斑病 毒
苹果茎痘病毒
叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮 化，长势弱
叶片反卷，植株矮化，皮层坏死 植株矮小，接合部内有深褐色坏死 环纹，木质部产生深褐色纵向条沟 叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑 叶和茎干锈斑、坏死斑 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、 局部坏死、畸形；叶脉间出现星状 透明斑
（二）茎尖脱毒方法
1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶 芽与侧芽消毒接种 。
消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶
片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右， 用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最
后用无菌水冲洗材料4-5次。
酒精擦拭手
第一节 植物脱毒方法
一、茎尖培养脱毒
（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎 尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分 生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能 提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎 尖越大，脱毒效果差。
3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方 法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离 较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。
适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块
茎类病毒
三、其他组织培养脱毒方法
（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再 诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方 法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面 的原因： 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度 较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织发生了抗病毒突变。
第十章 无病毒苗木培育
目的与要求
了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其 操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌 握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定 方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒 苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物 鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。
徒长 水稻恶苗病
疮痂
卷叶 马铃薯卷叶病
指示植物法
几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状
病毒种类 指示植物 表现症状 马铃薯X病毒 千红日、曼陀罗、辣椒、 脉间花叶 （PVX） 心叶烟 马铃薯S病毒 苋色藜、千日红、曼陀 叶脉深陷，粗缩 （PVS） 罗、昆诺阿藜 随品种而异，有些轻微花 马铃薯Y病毒 野生马铃薯、洋酸菜、 叶或粗缩，敏感品种反应 （PVY） 曼陀罗 为坏死 马铃薯卷叶 叶尖呈浅黄色，有些品种 洋酸菜 病毒（PLRV） 呈紫色或红色
1952年Morel等培养大丽花茎尖获得第一株植物脱毒苗， 1955年又获得了马铃薯脱毒苗。20世纪70年代，几乎所有生 产马铃薯的国家都在生产中使用这一技术，到1975年，用该 技术生产脱毒种薯的马铃薯品种已达150个左右。 1974年中国科学院植物研究所等开展马铃薯茎尖培养脱 毒技术的研究及应用推广工作，80年代中期脱毒马铃薯进入 生产阶段，90年代中期脱毒马铃薯已经覆盖了我国的大部分 马铃薯产区，创造了可观的经济效益。
所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技 术。
无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检
测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。
应用植物脱毒技术意义 植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，生长势增强，
明显提高产量、改善品质，产量的提高幅度最高可达300%。
植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去除多种真菌、 细菌及线虫病害，使种性得以恢复，植株生长健壮，减少肥
1988年，山东省农业科学院植物研究所进行甘薯病毒 病调查毒源鉴定工作，明确了侵染甘薯的病毒种类，传毒 介体的传播途径，形成了茎尖培养、病毒检测、脱毒种薯 的快繁和推广应用的配套技术。 此外，芋头、大姜脱毒种在我国、日本、泰国等地已 投放市场。 多种蔬菜、果树、林木、药用植物的脱毒快繁技术研 究和应用也发展迅猛，有些已形成具一定规模的工厂化产 业
（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等
2、培养方式：一般采用半固体培养基。