实验4测定细菌生长曲线

怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？
实验4、测定细菌生长曲线
一、实验目的
1.了解细菌生长曲线的特征，认识微生物在一定条
件下生长繁殖的规律。
2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方
法。 3.学习液体培养基的配制及接种方法。
二、 实验内容
测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线
三、实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内，一定条件
下培养，细菌的生长繁殖具有一定的规律性。
以细菌活菌数的对数作纵坐标，培养时间作横坐 标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
细菌的生长曲线分为：迟缓期、对数期、稳定期和
衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
生长规律是很有帮助的。
• 测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落
计数法、称重法和比浊法等。
四、实验仪器、材料和用具 仪器：
摇床、分光光度计、取液器。
微生物材料
大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基
肉汤蛋白胨液体培养基
用具 玻璃比色皿，三角瓶，酒精灯，接种环。
五、准备步骤
准备菌种：将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤 蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养14-18h。
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另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。
的测定（注意应测定0h的光密度值）。
每台分光光度计固定在1个参比杯，每人只能在同 一台分光光度计上测量（注意波长调好后，不要动 波长旋钮）。
六、结果与讨论
1）绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。 （标出生长曲线中四个时期的位置和名称） 2）为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长 状况？ 3）生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中 4）接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什 么优越？
接种：分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有
100ml培养液的三角瓶中，放摇床37℃，200rmp振
荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌 接种于100ml培养液中，同样条件培养。
测定（OD）
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀， 以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD值）
• 比浊法：由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可 • 将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于 光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显）。
用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期，Ⅱ.指数期，Ⅲ.稳定期，Ⅳ.衰亡期