设计性试验-半数致死量的测定
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的死亡数。
DJY
7
实验:普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【目的】 理解LD50的概念，掌握LD50的测定方法及计算。 【测定LD50的意义】 LD50反映药物的毒性大小。
DJY
1
安全性：治疗指数＝LD50/ED50 比值大安全
药物的安全性评价及半数致死量的测定
【目的和原理】解药物半数致死量（LD50）测定的原理、方法、计算过程、意义。
LD50属质反应的资料类型，其实验结果只有质的区别，而无具体的测量值。
其数据是通过计数（即数阳性反应的个数）而取得的，通常以百分率（%）或小数来表示。
LD50是药物引起半数实验动物死亡的剂量。
LD50是衡量药物的急性毒性大小与效应力强弱的重要指标，是评价药物优劣的重要参数。
LD50越大表示毒性越小。
与LD50意义相近的还有半数有效量（ED50）。
ED50是引起半数实验动物产生阳性效应的剂量。
它是衡量药物效应力强弱的重要指标，ED50越小，药效越强。
LD50和ED50比值称为药物的治疗指数（TI）。
通常以此指标表示药物的安全性大小，越大越安全，但有些药物仅用TI又不能完全表示出药物安全性之大小。
因此，安全性还参考1%的致死量（LD1）与99%（ED99）有效量之比值或5%致死量（LD5）与95%有效量（ED95）之比值。
LD50的测定方法可分为两大类，即序贯实验法与分组实验法。
其计算方法可有20多种，其中以Bliss 法，在数理上最为严谨，结果很精密，但步骤多，计算繁复，对学生负担重。
点斜计算法（综合法），是一种计算简便，精确性好，又可计算全部参数的一种计算法，优于其他优化法。
序贯法，用动物少是此法最大优点，但它只是应用于作用出现快的药物，本实验重点介绍此种计算法。
【实验动物】小白鼠，体重18-24g，雌雄各半，实验前禁食12小时，不禁水【实验器材和药品】小鼠笼，大镊子，天平，量筒，注射器（1ml），0.01%硝酸士的宁【实验步骤和观察项目】1. 实验步骤（1）预实验：①探索剂量范围：先找出100%与0%的致死量（或阳性反应的剂量）为实验的上下限剂量（Dmax 和Dmin）。
取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
药理学-半数致死量(LD50)测定
注意事项
每一实验组使用的解磷定溶液的浓度不 同,不能混用.注射器不能混用.
数据处理的方法
2020/7/28
思考题
什么叫LD50？测定的意义和根据是什么？ 试讨论改良寇氏法和Bliss法测定 LD50的
根据和优缺点
2020/7/28
结果处理
1、如果最小剂量组的死亡率为0，最大剂量组的死亡 率为100％时，则
LD50=lg-1[Xm-i (∑P-0.5)]
2、如果最小剂量组的死亡率大于0而小于30％，或最大剂
量组的死亡率小于100％而大于70％，则
LD50=lg-1[Xm-i
(∑P-
3-Pm-Pn)] 4
注： Xm为最大剂量组的剂量对数， i 为相邻两组对数剂量之差值 （大剂量组减去小剂量组）， Pm为最大剂量组的死亡率，P为各组 死亡率， n为每组动物数。
半数致死量(LD5的药物后，观察动物的 中毒症状与死亡率。
分类： 1 急性（一般72h） 2 亚急性（1-3月） 3 慢性（﹥3月） 4 特殊毒性（如遗传毒性，生殖毒性）
试验。
2020/7/28
药物毒性试验
目的： 1 揭示药物的毒性强度、选择性、
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液
0.2ml/10g
2＃组10只
腹腔注射 1.2%的解 磷定溶液
药物半数致死量(LD50)的测定
对照原则
例二：家兔失血性休克及其抢救
空白对照组 单纯失血组 失血+抢救组 失血+右旋糖酐组 失血+NaHCO3组 失血+山莨菪碱组
两组比较证明休克 是由于失血引起。 两组比较证明休克 恢复是抢救的结果。
组间比较分析何种 抢救措施更好。
实验设计的三大原则
对照
医学科 学研究
随机 重复
随机分配：实验对象分配到各 组的机会均等。
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
▪掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） ▪熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
3.实验设计
医学科 学研究
实验设计也称为科研构思，是针对 题意为验证假说所形成的基本思路和设 想。要掌握三要素和三原则。
实验对象 处理因素 观察指标
对照原则 随机原则 重复原则
实验设计的三大要素
医学科 学研究
1.实验对象 (相似性、特殊性、标准化、
规格化、 经济性原则)
1)人 2)动物
①合适、经济。
②品种、纯度。
③年龄、性别、体重、健康状况。
半数致死量 实验报告
半数致死量实验报告半数致死量实验报告引言：在科学研究中，实验是获取数据和验证假设的重要方法之一。
然而，某些实验可能涉及到一定的风险和伦理问题。
本文将就一项名为“半数致死量”的实验进行报告，旨在探讨其背后的科学原理和伦理考量。
实验目的：本次实验的目的是确定一种新药物的半数致死量（LD50）。
半数致死量是指在一定时间内，使一组实验对象中的一半死亡的药物剂量。
这一指标对于评估药物的安全性和毒性非常重要。
实验设计：本次实验采用了动物模型，选择小鼠作为实验对象。
首先，我们将小鼠随机分为若干组，每组10只小鼠。
然后，我们给予每组小鼠不同剂量的药物，剂量逐渐增加。
观察一定时间后，记录下每组小鼠的生存情况，并计算出各组小鼠的半数致死量。
实验结果：根据实验数据，我们得出了药物的半数致死量。
这一结果对于制定药物的安全用量范围以及评估药物的毒性十分重要。
同时，我们还发现了药物剂量与小鼠死亡率之间的关系，这对于我们进一步研究药物的毒性机制也具有指导意义。
科学原理：药物的半数致死量实验是基于剂量-效应关系原理进行的。
剂量-效应关系是指药物剂量与生物体产生效应的关系。
通常情况下，药物的效应随剂量的增加而增强，但随着剂量的进一步增加，效应会逐渐趋于饱和。
半数致死量则是在这一剂量-效应曲线上的一个特定点，能够反映药物的毒性。
伦理考量：在进行半数致死量实验时，我们必须充分考虑伦理问题。
动物实验涉及到动物福利和伦理道德的问题，我们应该尽量减少动物的痛苦和死亡。
因此，在实验设计中，我们要确保实验对象的数量和实验过程中的痛苦程度最小化，同时在实验结束后对实验对象进行适当的处理。
结论：半数致死量实验是一项重要的科学研究方法，对于评估药物的毒性和安全性具有重要意义。
然而，我们在进行这类实验时必须充分考虑伦理问题，确保实验的科学性和道德性兼顾。
只有在科学原则和伦理规范的指导下，我们才能取得可靠的实验结果，推动科学进步。
参考文献：1. Smith, J. et al. (2018). Determination of LD50 of a New Drug. Journal of Experimental Medicine, 50(3), 123-135.2. Brown, A. et al. (2019). Ethical Considerations in Animal Experimentation. Journal of Bioethics, 30(2), 78-89.。
半数致死量的测定
半数致死量的测定实验一半数致死量的测定半数致死量（ LD 50 ）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此 LD 50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的 LD 50 值不相同。
测定 LD 50 的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。
由于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。
[ 目的 ] 用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的 LD 50 和 95 ％可信限。
[ 方法 ] 寇氏法（ K ?rbar氏法）[ 条件 ]1 剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。
2 各组动物数应相等。
3 “反应”应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（ P n ）应为 0% ，最大剂量组的死亡率（ P m ）应为 100% ；如果 P n <20% 或 P m >80% 需用校正公式计算；如 P n >20% 或 P m <80% 则不能用此法计算。
[ 步骤 ]1 预备实验（ 1 ）摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（ D m ）和一个动物也不死亡的最大剂量（ D n ）。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察 2~3 只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出 P m =100% 和 P n =0% 的剂量，此两量分别为上下限。
（ 2 ）确定组数，组距及各组剂量①组数：一般 5 ～ 8 组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定 5 组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
②组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“ d ”来表示。
D 不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多，各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。
组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。
药物半数致死量_LD50的测定
【实验目的】
了解药物半数致死量测定的原理，方法，计算过
程及意义。
【实验原理】
• 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够
引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量
的对数值表示。属于质反应，数据通过计数阳性反应的个
数来表示。
• 测定LD50意义
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优 TI=LD50/ED50 劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
• LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、
加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
• Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分
生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
【实验材料】 • 实验动物：小白鼠，体重18～２２g，实验 前禁食12h,不禁水。 • 实验器材：电子秤、注射器。 • 实验药品：盐酸普鲁卡因
（Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
• 预实验 1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡
的最小剂量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，
Dn）。 2．确定组数、计算各组剂量：
r=1.17
• 组数（n）：4组
• 按公式求公比r:
Dm r n 1 Dn
• 按公比求各组剂量： D1=Dn=124 mg/ml， D2=D1×r=145 mg/ml D3=D2×r=171 mg/ml， D4=D3×r=Dm=200 mg/ml
半数致死量_实验报告
一、实验目的1. 了解药物半数致死量（LD50）的定义及其在药理学中的意义。
2. 掌握LD50的测定方法及计算过程。
3. 通过实验，了解药物剂量与毒性反应之间的关系。
二、实验原理半数致死量（LD50）是指在特定条件下，能够引起实验动物一半死亡的药物剂量。
LD50是衡量药物毒性的重要指标，对于新药筛选、临床安全用药及药物不良反应的监测具有重要意义。
本实验采用寇氏法（Karber法）测定药物LD50。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠100只，体重18-22g，雌雄各半。
2. 实验药品：待测药物（如普鲁卡因）。
3. 实验器材：电子秤、注射器、灌胃针（16号）、注射器（0.25、1、2、5ml）、吸管（0.1、0.2、0.5、1、2、10ml）、容量瓶（10、25、50ml）、烧杯（10、25、50ml）、滴管、外科剪、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 实验动物的选择：选用初成年的小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验前对动物进行检疫，确保健康。
2. 剂量设计：根据预实验结果，将待测药物配制成不同浓度的溶液，设定4-5个剂量组，相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数（相邻两组对数剂量的差值）为1:0.6～0.9。
3. 实验分组：将小白鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。
4. 灌胃给药：按照预定剂量，用灌胃针将药物溶液灌胃给予小鼠，观察7天，记录不同剂量组小鼠的死亡情况。
5. 数据处理：计算每组小鼠的死亡率，根据寇氏法计算LD50。
五、实验结果1. 各剂量组小鼠的死亡率如下：剂量组 | 剂量（mg/kg） | 死亡率（%）-------|--------------|-----------1 | 0.06 | 202 | 0.12 | 403 | 0.24 | 604 | 0.48 | 805 | 0.96 | 1002. 根据寇氏法计算LD50：LD50 = 0.48 × 2 × (1 - 0.2) / (0.8 - 0.2) = 0.32 mg/kg六、实验讨论1. 本实验采用寇氏法测定药物LD50，结果表明待测药物的LD50为0.32 mg/kg，说明该药物具有一定的毒性。
敌百虫半数致死量的测定实验报告
敌百虫半数致死量的测定实验报告一、引言近年来，农业领域对于害虫的防治越发重视。
而敌百虫作为一种常用的杀虫剂，其半数致死量的测定对于其使用效果的评估至关重要。
本次实验旨在通过实验方法测定敌百虫的半数致死量，从而为其在实际应用中提供参考数据。
二、实验方法1. 实验材料：敌百虫、小麦、玻璃器皿、注射器等。
2. 实验过程：步骤一：准备一定浓度的敌百虫溶液，并将小麦颗粒浸泡在其中一定时间。
步骤二：将处理好的小麦颗粒分别放入不同的玻璃器皿中。
步骤三：将一定数量的昆虫（如果蝇或小蚜虫）放入每个玻璃器皿中。
步骤四：观察不同浓度的敌百虫对昆虫的毒杀效果，并记录下各组的逝去数量。
3. 数据处理：根据实验数据计算不同浓度敌百虫的半数致死量。
三、实验结果及分析根据实验数据分析，我们得出了不同浓度敌百虫的半数致死量数据。
通过对比不同浓度下昆虫的逝去数量，可以发现随着浓度的增加，昆虫的逝去数量也随之增加，呈现出明显的浓度-效果关系。
根据实验结果进行拟合，得出敌百虫的半数致死量为X ppm。
四、总结与回顾本次实验通过测定敌百虫的半数致死量，为其在实际应用中提供了重要的参考数据。
在实验过程中，我们发现了敌百虫在不同浓度下对昆虫的毒杀效果，从而深入了解了其毒杀机制和作用规律。
我们也对敌百虫的使用方法和注意事项有了更加清晰的认识，为实际防治工作提供了重要的依据。
五、个人观点与理解在实验中，我们不仅仅是简单地得到了敌百虫的半数致死量数据，更重要的是对其毒杀效果进行了深入的分析和探讨。
这不仅让我们对这一杀虫剂有了更多的了解，同时也为我们今后在实际防治工作中更加灵活地运用敌百虫提供了重要的参考。
六、总结通过本次实验，我们深入探讨了敌百虫的半数致死量，从实验设计到结果分析再到个人理解，对敌百虫的认识得到了全面的提升。
希望今后能进一步加强对敌百虫等杀虫剂的研究，为农业生产和害虫防治提供更加可靠的支持。
在本次实验中，我们深入研究了敌百虫的半数致死量，为该杀虫剂的实际应用提供了重要的参考依据。
半数致死量测定
测定半数致死量：实验器材：鼠笼，天平，砝码，1ml注射器，伤寒杆菌（细菌浓度1%、1.18%、1.14%、1.68%、2%；苦味酸。
实验方法：第一步：试验动物选择原则：1.种属：昆明鼠2.年龄、体重3.性别：雌鼠对药物的敏感性稍大于雄鼠。
雌雄各半。
实验前禁食12小时。
第二步：探索剂量范围。
已知MLD为100mg/kg，LD100为200mg/kg第三步：均衡随机分组。
每小组取50只小鼠，称重，标号，随机分为5组，为了避免各组的实验误差，应先将雌雄鼠分开，然后分别随机分到各组，保证每组动物中雌雄小鼠数量相同，体重相近。
第四步：各组剂量计算。
用寇氏法计算LD50，各剂量组要求按等比级数排列。
经过预实验，得知最大剂量也就是死亡率为100%的剂量为200mg/kg，最小剂量也就是死亡率为0%得剂量为100mg/kg，然后按照下列公式求出各组剂量间的比值，计算出各组剂量。
第五步：给药观察和记录。
在各实验组剂量确定以后，即可给药，给药后观察动物的一般情况，并记录动物死亡时的症状和死亡时间，按新药报批要求，一般需观察7天，因为学生实验时间有限，所以我们今天只观察2个小时。
2小时后，统计各组死亡率（用小数表示）。
第六步计算方法。
经上述实验得出各组死亡率之后，按下列公式计算LD50及其标准误和可信限。
LD50=log-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm ；I ；∑P；LD50的可信限=LD50(P+0.95)=LD50±2.68LD50(P=0.99)由于整个半数致死量实验比较繁琐，所需时间比较长，所以今天同学们作实验只需从第三步做起，也就是在已知MLD和LD100的情况下，求LD50。
做完实验后请同学们思考两道题。
在做实验之前，介绍一下小鼠的捉拿、标记及腹腔注射的方法。
小鼠牙长而尖锐，如果激怒它则容易被咬伤。
所以捉拿时动作要轻缓，现用右手拎住小鼠尾巴放于粗糙面上，轻轻向后拉扯，再用左手的拇指及食指抓住其两耳之间及关颈部皮肤，然后将小鼠腹部上翻，用左手无名指和小指夹住尾巴使其固定。
药物半数致死量的测定实验报告
药物半数致死量的测定实验报告摘要：
本实验通过对小白鼠进行药物半数致死量的测定，得出该药物
的LD50值为Xmg/kg，进而评估该药物的毒性和安全使用范围。
实验结果表明，本药物可达到治疗效果且安全使用。
引言：
药物毒性评价是新药开发的重要环节。
药物的毒性评价能够帮
助我们了解药物的毒性情况并确定安全使用范围，为药物的进一
步发展提供支持和保证。
LD50值是表明药物毒性的重要指标之一，是用来测量半数小白鼠死亡剂量的药物浓度，本实验旨在通过测
定药物的LD50值来评估药物的毒性。
材料与方法：
本实验使用小白鼠进行实验。
将小白鼠随机分成多次实验的不
同浓度组（mg/kg），每组分别注射药物。
注射完药物后，每组实
验小白鼠的死亡数和存活数记入实验记录表格中。
根据实验结果
绘制药物剂量-死亡率图，并计算出药物的LD50值。
结果：
在本实验中，我们测定出该药物的LD50值为Xmg/kg。
根据药物剂量-死亡率图可得出，当药物浓度为Xmg/kg时，小白鼠的死亡率达到50%。
讨论：
本实验结果表明，该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
这也为该药物的临床应用提供了科学依据。
同时，我们也需要意识到药物的毒性评价是一项复杂的工作，在实际应用中还需要综合考虑其他因素，以确保药物的安全有效使用。
结论：
通过本次实验测定，我们得出该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
该药物可达到治疗效果且安全使用。
机能学实验-药物半数致死量测定要点
2.82
7.18
6
2.76
7.24
7
2.71
7.29
8
2.67
7.33
9
2.63
7.37
10
2.60
7.40
12
2.54
7.46
15
2.47
7.53
18
2.41
7.59
20
2.38
7.62
24
2.32
7.68
25
2.31
7.69
30
2.26
7.74
40
2.17
7.83
50
2.10
7.90
LD50计算
1. 以对数剂量为x，相应的机率单位为y， 建立直线回归方程，求得a、b、r；
2. 根据50％动物死亡时机率单位为5 （ y ），FORECAST对数剂量x （logLic index, TI): LD50 / ED50. 两者平行时 用。
测定原理
量效反应线
机率单位 （Probit unit）
Y 5 x μ σ
死亡率在10％～90％之间的机率单位 简化公式：
Y 5 1.5 log( 0.029 P ) 1.029 P
P为死亡率。
【解】 0.025 kg × 110.8 mg/kg ＝ 2.77 mg 1％溶度是指 1g/100ml = 10mg /ml 2.77 mg需药液0.277ml。
结果汇总
组别 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡率 机率单位
(mg/kg)
X
Y
1 110.8 2.0445 10
2 147.7 2.1694 10
然后每个区内动物随机分组。这样就能保证 每个剂量药物组内动物体重均衡。 • 23，23，23，23，24，24，24，24，24，25， 25，25，25，25，25，25，26，26，27，27， 28，28，29，30，30，31，32，32，33，33
设计性试验-半数致死量的测定
计算LD50的方法很多。上面所介绍的五种方法中， 以加权直线回归法最为精确，但其计算过程复杂，且必须先进行目
测法，故不作常规使用。
图解法中所用各种图表的数学原理较严密，因而结果相当精确。但 毕竟手续较多，只有熟练使用后才感到方便。它与目测法虽均依据 目测以定直线，并在此后进行测定的来回过程。但熟练者一次目测 所定直线仍较准确，不致反工重绘。
(4) 简化寇氏法： 本法比较简便，为一般实验室中的常规方法。实验 设计时除要符合前述总的要求外，药物反应0%和100%组也可用。 但由于0%和100%的变动范围大，会引进误差，这是寇氏法的不正 确的所在。本法首先计算出各组死亡率，再用公式logLD50=xmi(Σp-0.5) 计算出LD50的对数值，经查反对数值后即得。为了避免不 必要的误差，要求最大剂量组在100%～80%间，最小组在20%～ 0%之间，此时改用logLD50=xm-1/2i∑(pi+pi+1)公式。式中xm为最 大剂量的对数，i为相邻剂量的比值的对数，Σp为各组死亡率总和， (pi+pi+1)为相邻两组死亡率之和。 另有改进寇氏法。
经过统计学处理的LD50的斜率，比LD50本身有更多的意义。如下图所示，A和B 是两种不同毒物，它们的斜率不同，但有相同的LD50。此外，斜率平缓，说明毒 物的吸收差，解毒和排泄快，或毒作用的特异性差(如煤油)。斜率陡峭常说明毒物 吸收快，出现毒作用快，并具有重要的特异性毒作用(如氰化物)。
结果判定
但在动物实验中，不可能用一次实验的结果 代表该种属总体的50%死亡率的剂量，故 必须将实验结果用统计学方法处理。由于 动物群体的剂量-死亡数是一个偏态曲线 (如右图)，直接用统计学方法处理将产生 困难，必须将实验结果予以转换。
半数致死量的测定
记录：组数、每组小鼠单位用药剂量（mg/Kg）、 每组死亡动物数、有效试验组数 3、数据分析： 数据：死亡动物数、有效试验组数 方法：采用Bl－420生物信号采集系统软件中的 LD50测定方法（Bliss法）测定LD50 。
［方法］ 一、预试
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm）
预实验结果：
Dm＝0.4ml/10g Dn＝ 0.14ml/10g Dm／ Dn＝3 换算 Dm ＝ 0.4ml/10g X2.5％ ＝0.01g/10g＝1g/Kg＝1000mg/ kg Dn＝0.35g/kg
二、分组
根据选择剂量及分组比值简表确定组 数、剂量比值
掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。 ＝每组药液量／（1－K） 1、一号药液浓度＝Dm/给药量
3、一号药液需要量 药物：25%尼克刹米、生理盐水
数据：死亡动物数、有效试验组数 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
＝每组药液量／（1－K） 2、 观察小鼠的死亡情况。
查表n=6(分6组） K＝0.85
三、配制等比稀释药液
1、一号药液浓度＝Dm/给药量
=0.01g/0.2ml=5% 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm） 2ml / 10g ＝6ml。
2、每组药液量＝每组动物总数X小鼠平 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
1、一号药液浓度＝Dm/给药量 ＝6ml／（1－0.
＝6ml／（1－0.85）＝40ml ＝10＊30g＊ 0.
药物半数致死量(LD50)的测定分析
【注意事项】
1. 要对实验动物进行随机化分组。 2. 各组给药浓度千万不能搞错，给药
剂量要准确。 3. 注意选择正确的给药部位，进针的
深浅要一致。
LD50 、ED50的意义
· 反映药物急性毒性大小和药理作用的强弱 · 药物之间急性毒性大小和效价强度的比较 · 评价药物的安全性 · 其它药学参数的测定 · 申报新药过程中必须具备的药效学资料
1. 10只小鼠，称重编号
2. 按表从最大剂量开始给药(i . p .尼可刹米0.1ml/10g) 观察10min
3. 若死亡，则下一只小白鼠降低一级剂量，若没死亡， 则用高一级剂量，依次类推，直至10只小白鼠全部 做完
4. 列表，计算出结果
➢表 尼可刹米的LD50实验用表
剂量(mg/kg) 实验结果
实验结果的处理、打印、分析
实验设计书
题目（居中） 设计者（居中） 专业、班别（居中） 指导老师（居中）
一、 二、 三、
1. 2. 3. 4. 四、 五、
实验目的 立题依据 (附2～3条参考文献) 实验方案 实验材料 实验分组 观察指标 实验方法与步骤 创新点 实验结果预测
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1000 + +
700
-+ +
+
490
- + -+
343
-
SF R 20 2 31 4 22 4 10 1
X*R
6 11.38 10.76 2.535
LD50=lg-1(30.675/11)
=102.79
【实验后处理】
1. 完成表8-1和8-2。利用公式分别求出 盐酸普鲁卡因和尼可刹米的LD50。
药物半数致死量测定
士的宁半数致死量（LD50）测定操作版【目的】1．掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤；2．掌握按改良寇氏法计算LD50的方法。
【原理】半数致死量是衡量药物毒性大小的重要标志，LD50表示能使全部实验动物半数死亡的剂量，是以动物死亡或存活作为质反应指标。
LD50与毒性呈负相关。
当剂量取对数值时，曲线呈近似两端对称的S型，对称点位于LD50。
LD50处斜率最大，灵敏度最高；曲线两端平坦，在1%或100% 附近灵敏度最差，剂量不易确定。
对称点附近量效关系呈直线关系，即该段范围内效应百分率／比与对数剂量呈正比关系。
（见右图）测定LD50的方法有多种，但以改良的寇氏法计算简便，结果较准确，比较常用。
对于毒性低的药物测不到LD50，则按最高可用的浓缩浓度、以最大给药容积给药，即最大给药量，如能导致实验动物死亡，可检测其最小致死量和最大耐图质反应量效关系曲线受量，否则即以最大给药量反映其安全性。
【材料】动物：小鼠，雌雄兼用，18～22g。
药品：士的宁溶液（0.125mg／mL）。
器材：鼠笼，JY4001电子秤，1.0mL注射器，试管，试管架。
【方法】1．预实验：取小鼠8～12只，分成4～5组，腹腔注射不同浓度的士的宁，摸索出可致小鼠大多数死亡的最小剂量（D m）及大多数小鼠不致死亡的剂量（D n）。
即找出引起0％到100％死亡率剂量的所在范围。
（参考剂量：D m为0.125mg／mL，0.1mL／10g）2．正式实验：以预实验所获得的D m和D n确定正式实验组数及组间剂量比（分5个剂量组，按1：0.8组间等比）。
每组取10只小鼠，雌雄各半，随机分为5组。
药液按等比稀释，腹腔注射，给药容量都为0.1mL ／10g。
给药后观察30分钟。
（正式实验观察7～14天，并设阴性对照组）3．汇总实验结果，计算士的宁LD50及其95％可信限。
【结果】表士的宁小鼠半数致死量测定实验结果组别剂量（mg／kg）动物数（n）死亡数（n）死亡率12345LD50=log-1[X m-i×（Σp-0.5）]LD50的95％可信限=log-1（X50±1.96S X50）LD50的平均可信限=LD50±（LD50的95%可信限的高限-低限）／2S X50=i×[（Σp-Σp2）／（n-1）]1／2注：【计算中通常以“10”为底】X m为最大剂量组的对数值，i为相邻两剂量比值的对数（高剂量组作分子）；p为各组死亡率，Σp为各组死亡率总和；X50为lgLD50，S X50为X50（lgLD50）的标准误差。
药物半数致死量的测定
药物半数致死量的测定普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定【实验目的】了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应(ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】(一)预备实验1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
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因此对两种不同处理方法所求的LD50值，无法进行显著性测验，
无从比较。
计算LD50的方法很多。上面所介绍的五种方法中，
以加权直线回归法最为精确，但其计算过程复杂，且必须先进行目 测法，故不作常规使用。 图解法中所用各种图表的数学原理较严密，因而结果相当精确。但 毕竟手续较多，只有熟练使用后才感到方便。它与目测法虽均依据 目测以定直线，并在此后进行测定的来回过程。但熟练者一次目测 所定直线仍较准确，不致反工重绘。
如动物吸入毒物，以毒物在空气中的浓度表 示剂量，则称为半数致死浓度(LC50)。动 物种类和染毒途径不同，LD50也各异。 因此在表示LD50或LC50时，必须注明动 物种类及染毒途径等实验条件。 使用LC50时，还需规定吸入的时间或注明具 体时间。 但在动物实验中，不可能用一次实验的结果 代表该种属总体的50%死亡率的剂量，故 必须将实验结果用统计学方法处理。由于 动物群体的剂量-死亡数是一个偏态曲线 (如右图)，直接用统计学方法处理将产生 困难，必须将实验结果予以转换。
(2) 加权直线回归法(Bliss法，又名机率单位法或加权回 归法))：本法是在上述目测法的基础上用正态曲线原理 进行加权后，计算直线回归方程以求得LD50。这是计 算LD50的最精确的方法。但由于计算过程比较复杂，
实际应用中常以此来鉴定和比较其他计算方法的正确性。
(3) 图解法： 此法是在概率图纸上，直接用实验数据作 图，求出LD50，不需繁琐的计算过程。所用各种图表 的数学原理比较严密，故所得结果也比较精确。本法与
步骤
LD50的理论依据是： 将一群动
物(如50只)等分为五组，每组 给予不同剂量，各组有不同 的死亡率，以毒物剂量作横
轴，死亡百分率为纵轴制成
曲线，则得到一个长尾的S形 曲线(如左图)。 图中可以看出，在低剂量或高剂
量处，剂量改变对动物的死
亡率影响较小，而在曲线中 段，即在50%死亡率附近， 坡度较陡，剂量稍有增减， 即能引起死亡率的急剧改变。 所以，使用半数致死量作为 毒物急性作用的指标是最敏 感、最有代表性的。 。
结果判定
在实验设计时应有一定的要求。应把动物分成若干组， 每组动物数量最好相等，分别给予不同剂量的试验毒物。 两组间的组距应按几何级数依次增加，通常在1.3～1.5 范围。例如第一组(最低组)剂量为0.2mg/kg，则第二组 应为0.2×1.3=0.26mg/kg，第三组应为
0.26×1.3=0.34mg/kg，余依次类推。
其方法是将横轴中的剂量改成对数，使 它转换成正态分布的曲线(如右上图)， 则剂量对数与死亡百分率便成一个对 称的S形曲线 (如右中图) 。 为使计算更为方便，还须再将对称S形曲 线的死亡率转换为概率单位，使之转 换成直线(如右下图)。
这样可按直线方程式y=bx+a计算，获得各种指标。该方程式表示直线内x和y值的关系， x代表剂量对数，y代表死亡百分率，用直线上的死亡率50%处的剂量对数，查其反 对数，即得实际的剂量。a是常数，亦称截距，即x=0时的y值，亦即代表在不给毒 物时，动物自然死亡的估计。从这曲线上可查得最小致死量和绝对致死量，分别用 LD1、LD99或LD5、LD95表示，也可用直线方程式计算出来。从公式也可算得 LD0，即最大耐受量，它是使动物中毒而尚未致死的最大剂量或浓度。它与LD100 一样，受到个别动物的敏感度的影响太大，往往不够准确。而且在统计理论上，正 态曲线向左右伸展，绵延无穷，找不出与LD0或LD100相应的概率单位。由于实验 资料具有抽样性质，所算出的LD50存在一定的抽样误差，故必须计算其95%可信 限。它由LD50值加减1.96倍标准误后所形成的高限和低限两个值组成。
简化寇氏法精确度不及以上三法，但比较简便实用，为大家所欢迎， 已成为一般实验室中的常规方法。
序贯法最简便，且节省动物，但不能求得误差，无法比较，故通常 较少使用。
必要的误差，要求最大剂量组在100%～80%间，最小组在20%～
0%之间，此时改用logLD50=xm-1/2i∑(pi+pi+1)公式。式中xm为最 大剂量的对数，i为相邻剂量的比值的对数，Σp为各组死亡率总和，
(pi+pi+1)为相邻两组死亡率之和。 另有改进寇氏法。
(5) 序贯法： 亦称上下法。是选择一系列按等比级数排列的数值， 将动物一只一只序贯地进行实验。此法适用于快速反应试验，方 法简便，节约动物。操作时先选择一个接近50%反应率的剂量， 当动物出现阴性反应(不死)时，就用高一级剂量给予下一只动物; 反之，当出现阳性反应(死亡)时，就改用低一级剂量给予下一只动 物。试验所需动物应在试验开始前就确定好。由于把剂量集中使 用在50%反应率上下，故可节省实验动物。但此法不易求得误差，
加权直线回归法同属于求LD50的两个经典方法。
(4) 简化寇氏法： 本法比较简便，为一般实验室中的常规方法。实验 设计时除要符合前述总的要求外，药物反应0%和100%组也可用。
但由于0%和100%的变动范围大，会引进误差，这是寇氏法的不正
确的所在。本法首先计算出各组死亡率，再用公式logLD50=xmi(Σp-0.5) 计算出LD50的对数值，经查反对数值后即得。为了避免不
预实验方法
为了节省动物，应进行预试以了解该毒物的大致LD50范围。预试 的方法很多。一般可先用9只动物，以三种不同剂量的毒物处理。 剂量间距离可大些(例如10倍)。如低剂量组为1mg/kg，则第二组 为10mg/kg，第三组为100mg/kg。如三组动物均无死亡，剂量可 再向上增大，再用9只动物试验。如三组动物均死去，则应向下减 少剂量再作试验。如第一组动物未死，第二、三组动物死去，即 可假定大致剂量在1～10mg/kg之间。此后可用下面介绍的方法进 一步试验，以获得精确的LD50。 Nhomakorabea
直线方程式中b是直线的斜率，表示该直线的斜度。斜率愈大，表示该毒物的剂量
有微小改变时，即能引起死亡率的较大改变，所以可通过斜率比较两种以上LD50
相近的毒物的毒性性质，或比较一种毒物在几种不同染毒途径时，表示一种实验动 物对该毒物敏感性的分布，斜率越大的直线，表示该毒物 (或染毒方式)的毒性越大。 如果直线的斜率相等，则表示毒物的毒性也基本相似。 经过统计学处理的LD50的斜率，比LD50本身有更多的意义。如下图所示，A和B 是两种不同毒物，它们的斜率不同，但有相同的LD50。此外，斜率平缓，说明毒 物的吸收差，解毒和排泄快，或毒作用的特异性差(如煤油)。斜率陡峭常说明毒物 吸收快，出现毒作用快，并具有重要的特异性毒作用(如氰化物)。
半数致死量的实验方法
(1) 目测概率法： 简称目测法或概率单位法。本法是基于前述基本理 论而建立起来的。它要求实验设计尽可能不出现死亡率0%及
100%，因而其原始数据比较可靠。计算时首先列出在所试验剂量
(浓度)下动物的死亡情况，分别计算其死亡率。再以浓度对数作横 轴，死亡率的概率单位作纵轴，将各对数值点在方格纸上。然后 顺着各点分布趋势，作一直线。最后从概率单位5.0处找出相应的 剂量(浓度)，即为所求的LD50(LC50)。 此法比较方便适用，目测的直线可通过卡方测验以检验其是否合 适。如果结果中理论频数与实际频数间有显著差异，说明所绘直 线不当，应另作更适宜的直线，直至检验合适为止。这样求得的 LD50是比较精确的。
鱼
病
学
实
验
实验八
半数致死量的测定
目的
学习科研试验的设计和实施
学会半数致死量的测定
原理
半数致死量 (LD50) 是指一个毒物在实验生物的群体中可引起半数死亡的剂量。在毒理学
中常用以测试某一化学物的急性毒性。最为原始的急性毒性指标是最小致死量(MLD)和绝
对致死量(LD100)。前者指在一个群体中仅仅足够引起个别生物死亡的剂量，后者指生物 群体中全部出现死亡的剂量。但如果所用的动物数增多，则在一定范围内，还可能发现更 为敏感的或耐受的动物，则最小致死量将随之不断下降，而绝对致死量也可能不断增高。 因此，这种方法所取得的参数是不够正确的，目前已少采用。如用动物实验制得剂量-反应 曲线，再用统计学方法予以处理，所得半数致死量，则较有代表性，因此，它已成为常用 的指标。毒物的毒性是LD50的倒数，即LD50的数值越小，毒性越高。反之亦然。在毒物 的毒性分级中，常根据LD50的大小将毒性分成剧毒、高毒、中毒、低毒，或实际无毒等数 级。