荧光偏振就大
荧光偏振技术介绍
62原理：当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续 4纳秒)保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。
如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。
如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强(发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关)。
如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高。
如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。
如图2.图2 荧光偏振检测原理任何物质都处于不断运动当中，液态环境中的荧光分子也不例外。
因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态例如旋转、翻转、相互结合、排斥、溶液的粘度、温度等这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。
对此进行分析比较，有可能揭开物质活动的内在规律，达到研究目的，“荧光偏振”。
近年来，以这种物理学现象为基础的技术在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。
因此，我们可以看到，以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，以及分子与所处环境——“小”至核酸和蛋白结构，“大”至整个细胞——的相互作用。
相对于传统研究方法，荧光偏振技术在溶液中进行，可最大程度的模拟真实生命环境；利用它，可以实时跟踪监测分子间结合/分离的变化，并解决一直以来困扰荧光技术使用者们对于荧光无法定量的烦恼。
最为重要的是，相对于一直被人们使用的放射性同位素研究方法，它更为安全可靠，不会在实验过程中对研究者造成威胁，也不会产生难以处理的具有放射性的废弃物。
此外，荧光偏振所需的样品量少，灵敏度高，重复性好，操作简便。
概述光由微小的波构成，光波可以在任何一个平面上均匀的振动。
当其通过某些平面时，有可能因受到平面的作用将光波的能量分成不均匀的光束，振动平面也就发生了变化，可能在某一个方向的振动强或弱于其他平面，这种光称为偏振光。
荧光偏振与荧光偏振免疫分析法
荧光偏振与荧光偏振免疫分析法【摘要】本文简单介绍了荧光偏振原理和荧光偏振免疫分析（FPIA）的原理，并就荧光偏振及FPIA在环境、食品安全、医疗卫生和蛋白质研究等方面的实际应用进行了简单介绍和举例。
【关键词】荧光偏振免疫分析应用从1852年，Stokes首次提出“荧光（fluorescence）”一词，人们对荧光现象的研究就不断深入，并发展出了荧光分析技术，荧光分析是指利用一些物质被电磁辐射激发后产生反映该物质特性的荧光而对该物质进行定性定量分析的方法。
随着相关理论和仪器的发展，荧光分析的手段和技术水平也不断发展，现在荧光分析以其高灵敏度、高选择性、低样品用量、方法简便等诸多优点，在化学、医药、环境、信息、生命科学等领域被人们广泛使用。
基于荧光偏振发展的荧光偏振免疫分析法是荧光分析中一个重要的组成部分。
一、荧光偏振原理荧光偏振的原理最初是1920年由Perrin建立的。
溶液中荧光分子受偏振光激发，如激发时分子保持静止，则发射的荧光仍有偏振性，且如分子分子旋转或翻转，发射荧光的偏振平面会不同于激发光偏振平面。
虽然实际测量常得消偏振的荧光，但荧光偏振技术有着重要应用[1]。
荧光偏振光强度P定义为：P=（I⊥-I∥）/（I⊥+I∥）其中，I⊥和I∥表示荧光子被激发后，发射光在垂直和水平方向上的强度。
对于荧光偏振仪器，检测到的荧光强度：P=（Ivv-G×Ivh）/（Ivv+G×Ivh）式中，下标分别代表起偏器和检偏器方向，v为垂直方向，h为水平方向，G 为校正因子，G=Ihv/Ihh。
荧光偏振光强度P与测定体系中各因素的关系可用Perrin方程表示:（1/P-1/3）=1/P0+（1/P0+1/3）（RT/V）(τ/η)其中，P0为极限荧光偏振光强度，R为气体常数，T为绝对温度，V为摩尔分子体积，τ为荧光寿命，η为溶液的粘度。
由上式知当溶液的温度和粘度都固定时，P值主要取决于荧光子的分子体积。
荧光偏振技术介绍
62原理：当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续 4纳秒)保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。
如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。
如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强(发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关)。
如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高。
如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。
如图2.图2 荧光偏振检测原理任何物质都处于不断运动当中，液态环境中的荧光分子也不例外。
因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态例如旋转、翻转、相互结合、排斥、溶液的粘度、温度等这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。
对此进行分析比较，有可能揭开物质活动的内在规律，达到研究目的，“荧光偏振”。
近年来，以这种物理学现象为基础的技术在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。
因此，我们可以看到，以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，以及分子与所处环境——“小”至核酸和蛋白结构，“大”至整个细胞——的相互作用。
相对于传统研究方法，荧光偏振技术在溶液中进行，可最大程度的模拟真实生命环境；利用它，可以实时跟踪监测分子间结合/分离的变化，并解决一直以来困扰荧光技术使用者们对于荧光无法定量的烦恼。
最为重要的是，相对于一直被人们使用的放射性同位素研究方法，它更为安全可靠，不会在实验过程中对研究者造成威胁，也不会产生难以处理的具有放射性的废弃物。
此外，荧光偏振所需的样品量少，灵敏度高，重复性好，操作简便。
概述光由微小的波构成，光波可以在任何一个平面上均匀的振动。
当其通过某些平面时，有可能因受到平面的作用将光波的能量分成不均匀的光束，振动平面也就发生了变化，可能在某一个方向的振动强或弱于其他平面，这种光称为偏振光。
荧光偏振分析方法
荧光偏振分析方法偏振荧光光谱是最常见的一种分析方法。
它是通过测量样品在不同偏振光激发下的荧光发射光谱来获得样品的偏振特性。
实验中，可以使用偏振片对入射光进行偏振，然后收集样品的荧光发射光，再通过偏振分析系统分析荧光光的偏振状态。
通过比较不同偏振光下的荧光发射强度和偏振度，可以得到样品的荧光偏振特性，并进一步推断样品的结构和性质。
荧光偏振成像是一种非常重要且有潜力的分析方法。
它可以提供样品内部的空间分辨荧光偏振特性信息。
在实验中，可以使用荧光显微镜和偏振成像系统对样品进行观察和分析。
通过在不同偏振方向下收集样品的荧光图像，可以获得样品的荧光偏振信息，并进一步研究样品的分子排列和组装状态。
荧光偏振分析方法在生物科学、材料科学和化学等领域具有广泛的应用。
在生物科学中，荧光偏振分析可以用于研究生物大分子（如蛋白质和核酸）的折叠和结构变化。
在材料科学中，它可以用来研究液晶材料和光电材料的结构和性质。
在化学中，它可以用来研究化学反应的动力学和机理。
尽管荧光偏振分析方法具有重要的研究价值，但在实际应用中仍面临一些挑战。
一方面，荧光偏振分析需要高度精密的仪器设备和复杂的数据处理方法，对实验条件和样品质量都有一定的要求。
另一方面，荧光偏振分析只能提供间接的结构和性质信息，需要通过与其他实验方法（如核磁共振和X射线衍射）相结合使用，以得到更全面和准确的结果。
综上所述，荧光偏振分析方法是一种重要的研究工具，可以提供样品的结构和性质信息。
它在生物科学、材料科学和化学等领域有广泛的应用前景。
虽然面临一些挑战，但随着技术的不断发展，荧光偏振分析方法将在科学研究和应用中发挥越来越重要的作用。
荧光偏振法
荧光偏振法荧光偏振法是一种用于研究生物大分子结构与功能的非常有用的技术手段。
荧光偏振法是利用荧光分子的特性来进行研究，荧光偏振法可以用于研究分子间的相互作用、分子内部结构的确定以及蛋白质的折叠状态等方面的问题。
以下是对荧光偏振法的详细介绍。
一、荧光偏振法的基本原理荧光偏振法是利用偏振光与荧光分子之间的相互作用来实现的。
荧光分子通常在能量激发后能够发出荧光，而荧光分子的发出方向与激发光的方向之间存在一定的关系。
因此，当将荧光分子暴露在偏振光的作用下时，在荧光发出时，会观察到特定的荧光偏振性质，这些性质可以用来研究分子结构、动力学和函数方面的问题。
荧光偏振法的基本原理可以通过极化法与偏振法来进行分析。
这些方法利用荧光分子的极化来探测荧光分子的偏振性质。
在极化法中，荧光分子处于热平衡状态下，因此，在具有不同极化方向的偏振光激发下，荧光分子发射的荧光强度也会发生变化。
在偏振法中，荧光分子产生的荧光偏振性质被用来研究分子的构象和方向性的问题。
二、荧光偏振法的优势荧光偏振法有很多的优势，包括以下几点：1. 荧光偏振法可以研究分子的结构和函数。
荧光偏振法可以通过测量荧光偏振性质来研究分子的结构和函数，这使得荧光偏振法成为了一个非常有用的技术手段。
2. 荧光偏振法具有高灵敏度和高分辨率。
荧光偏振法的灵敏度和分辨率都非常高，这使得荧光偏振法成为了一种非常重要的技术手段。
3. 荧光偏振法可以研究生物大分子的互作用。
荧光偏振法可以用来研究生物大分子的互作用，如蛋白质之间的相互作用、蛋白质-核酸相互作用等，这些研究对于研究生物大分子的结构和功能都非常重要。
三、荧光偏振法的应用荧光偏振法在生命科学研究中经常被使用。
荧光偏振法在蛋白质研究、膜研究、DNA/RNA研究、细胞动力学研究等方面都有广泛应用。
1. 荧光偏振法在蛋白质研究中的应用。
荧光偏振法可以用来研究蛋白质的结构和功能。
荧光标记的蛋白质可以用来研究其折叠状态、构象变化和互作用等方面的问题。
荧光偏振技术原理
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
3. 核酸分析
实时监测DNA双链的形成和解链s. 2003, 31: e70.
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
4. 水解酶催化反应
实时监测蛋白酶催化过程
核酸酶检测及药物筛选
荧光偏振技术原理
Chem. Commun. 2011, 47, 4763-4765.
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
T4 polynucleotide kinase activity and inhibition
荧光偏振技术原理
J. Mater. Chem. B, 2013, 1, 2018-2021.
汞离子检测荧光偏振探针检测限达到0.2 ppb ，比传统荧光偏振方法提高2个数量级，检测 时间只需20分钟，具有良好的特异性
AuNP Enhancement
AuNP-DNA System 0.2 ppb
Quantitative Analysis
荧光偏振技术原理
DNA-DNA System
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
聚乙烯纳米颗粒增强荧光偏振信号放大分析方法
荧光偏振技术原理
Chem. Asian J. 2014, 9, 2755-2760.
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
金纳米颗粒、硅纳米颗粒等虽然能有效增强荧光偏振值，但是 探针与纳米颗粒需要复杂的共价连接；
开发一种普适、简单的荧光偏振增强剂仍然是一个重要的任务。
荧光偏振技术原理
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
20世纪50年代Weber进一步拓展了荧光偏振理论并首次将荧光偏振用于生化 分析领域。
荧光偏振原理
荧光偏振原理
荧光偏振原理是指当荧光光线经过偏振器时，其偏振方向会发生改变的现象。
荧光偏振原理的解释基于光的电磁波性质和物质的吸收与发射特性。
在一般情况下，光是一个横波，它的电矢量振动方向垂直于光传播方向。
然而，光线在通过某些材料或反射、散射时会发生偏振现象，即电矢量振动发生特定方向上的约束。
此时，我们可以用偏振器测量或控制光的偏振状态，其中偏振器可以是线偏振器、圆偏振器或椭圆偏振器。
当荧光光线经过偏振器时，偏振器会选择光电矢量振动特定方向上的分量，使
得透过偏振器的光的偏振方向与偏振器的方向相同。
荧光光线经过样品后，会激发样品中的物质，使其发射出特定波长的荧光。
这些发射的荧光有不同的振动方向，当这些荧光再次经过偏振器时，原本与偏振器方向相同的振动方向的分量会被偏振器选择透过，而与偏振器方向垂直的振动方向的分量则会被偏振器屏蔽。
因此，透过偏振器的荧光光线会产生偏振，其振动方向与偏振器的方向相同。
荧光偏振原理在科学研究和实验技术中有广泛应用。
通过分析荧光偏振可帮助
研究者了解物质分子的取向、结构和相互作用等信息。
此外，荧光偏振原理还在显微镜技术、生物医学和材料科学等领域得到应用，为我们提供了重要的研究工具和实验手段。
总之，荧光偏振原理描述了荧光光线经过偏振器时其偏振方向会发生改变的现象。
了解和应用荧光偏振原理对于深入理解物质的光学特性以及实验研究具有重要意义。
荧光偏振分析方法
02
通过实时监测荧光标记信号分 子的偏振状态，可揭示信号传 导过程中的分子事件和调控机 制。
03
荧光偏振技术还可用于研究细 胞间信号传导和细胞通讯过程 ，为理解细胞行为和生理功能 提供新的视角。
04
荧光偏振在材料科
学中应用
高分子材料结构与性能关系研究
荧光偏振用于研究高分子 链构象
通过荧光偏振技术可以观察高分子链在不同 条件下的构象变化，进而理解其物理性质和 化学性质。
数据处理
对采集到的数据进行处理和分析， 包括数据清洗、归一化、统计分 析等步骤，以提取有用的信息并 得出结论。
结果展示
将处理后的数据以图表、图像等 形式展示出来，以便更直观地理 解和解释实验结果。
03
荧光偏振在生物医
学领域应用
药物筛选与评估
1
荧光偏振技术可用于高通量药物筛选，通过测量 荧光标记药物与靶标结合后的偏振变化，快速识 别潜在活性化合物。
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荧光偏振分析方法
目录
CONTENTS
• 荧光偏振原理及基本概念 • 荧光偏振实验技术与方法 • 荧光偏振在生物医学领域应用 • 荧光偏振在材料科学中应用 • 荧光偏振在环境监测领域应用 • 荧光偏振技术发展趋势与挑战
01
荧光偏振原理及基
本概念
荧光产生与发射过程
荧光物质吸收光能
荧光物质在受到特定波长的光照射时，会吸收光能并激发电子从 基态跃迁到激发态。
01
利用荧光偏振技术可以快速筛选具有特定功能的材料，如发光
材料、光电材料等。
荧光偏振用于功能材料性能优化
02
通过荧光偏振技术可以研究功能材料的性能与结构之间的关系，
荧光偏振技术原理
荧光偏振
（Fluorescence Polarization，FP）
1926年Perrin首次在研究论文中描述他所观察到的荧光偏振现象。
如果被激发的荧光物质处于静止状态，该物质仍将保持原有激发光的偏振性； 如果被激发的荧光物质处于运动状态，该物质发出的偏振光将区别于原有激发
光的偏振特性，也就是所谓的荧光去偏振现象。
MAP探针
Angew. Chem. Int. Ed. 2008, 47, 8386-8389.
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
汞离子检测荧光偏振探针检测限达到0.2 ppb ，比传统荧光偏振方法提高2个数量级，检测 时间只需20分钟，具有良好的特异性
AuNP hancement
AuNP-DNA System 0.2 ppb
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
多元检测方法
5. 小分子分析
Chem. Commun. 2012, 48, 10004–10006.
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
传统荧光偏振分析技术面临的挑战： 荧光偏振变化量较小，灵敏度较低
解决的方案
1 1 ( 1 1)(1 RT ) P 3 P0 3 V
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 常用的测试仪器及配件
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 国内外研究现状及发展动态分析
§1 传统荧光偏振技术及发展情况概述
1. 荧光偏振免疫分析
荧光偏振免疫分析法 (fluorescence polarization immunoassay，FPIA) 是一种定量免疫分析技术。
§2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用
纳米材料的生物功能化方法
非共价功能化途径
静电相互作用 π-π堆积作用 范德华力
荧光偏振度
荧光偏振度1. 引言荧光偏振度是描述荧光分子在吸收光后发出的荧光光子的偏振状态的一个参数。
荧光偏振度可以用来研究分子的结构、动力学和相互作用等信息。
本文将详细探讨荧光偏振度的定义、测量方法以及在不同领域的应用。
2. 荧光偏振度的定义荧光偏振度是指荧光光子的偏振状态相对于吸收光的偏振状态的度量。
偏振度的取值范围为-1到1，其中-1表示完全垂直偏振，1表示完全平行偏振，0表示无偏振。
3. 荧光偏振度的测量方法3.1 偏振荧光光谱法偏振荧光光谱法是最常用的测量荧光偏振度的方法之一。
该方法通过测量荧光光谱在不同偏振方向上的强度来计算荧光偏振度。
实验中通常使用偏振器和分光仪来控制和测量光的偏振状态。
3.2 偏振显微镜法偏振显微镜法是另一种常用的测量荧光偏振度的方法。
该方法利用偏振显微镜观察荧光样品在不同偏振方向下的荧光强度和偏振状态。
通过分析荧光图像的偏振特性，可以计算得到荧光偏振度。
3.3 其他测量方法除了偏振荧光光谱法和偏振显微镜法，还有一些其他的测量荧光偏振度的方法，例如荧光偏振光谱法、荧光偏振瞬态法等。
这些方法在不同的实验条件下可以提供更多的信息和更高的测量精度。
4. 荧光偏振度的应用4.1 分子结构研究荧光偏振度可以用来研究分子的结构信息。
不同的分子结构对荧光偏振度有着不同的影响，通过测量荧光偏振度可以推断分子的构型和取向。
这对于有机分子、生物分子等的研究具有重要意义。
4.2 动力学研究荧光偏振度还可以用来研究分子的动力学过程。
荧光偏振度随着时间的变化可以反映分子的运动和转动。
通过分析荧光偏振度的变化，可以研究分子的旋转、振动和扭曲等动力学过程。
4.3 分子相互作用研究荧光偏振度对分子之间的相互作用也具有很高的敏感性。
当分子与其他分子或溶剂发生相互作用时，荧光偏振度会发生变化。
这可以用来研究分子间的相互作用力、分子间的距离和分子结构的变化等。
4.4 其他应用领域除了分子结构、动力学和相互作用的研究，荧光偏振度在其他领域也有广泛的应用。
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1867年：Goppelsroder
AL 与桑色素的配合测定AL 的含量
1880：Liebeman
提出“荧光与化学结构关系”的经验法则 为荧光技术的开发应用拉开了序幕
二 荧光与荧光光谱
（一） 荧光的产生 （二）荧光光谱与吸收光谱
（一） 荧光的产生
1 分子的能量态
在光学分析中涉及的分子能量有： Eo=Ee+ Ev + Er
荧光衰减为原来激发时最大荧光强度的1/e所需要的时间
I=I0e-kt , =1/k 分子所处的环境 有无淬灭 有无能量转移 有无分子间相互作用
影响因素
5 荧光探剂
(1)具有环状共轭双键即π电子系统
(2)量子产率随环境变化，而且变化很大 (3) 能产生稳定荧光的小分子 藻胆蛋白phycobiliprotein 绿色荧光蛋白Green Fluorescent Protein (4) 与研究对象的特定基团共价结合或与蛋白质非共价 结合
2、矿物的发光机理
矿物的发光是矿物能量的一种转换过程，物体受激发吸收能量而跃迁至激发态 （非稳定态）在反回到基态的过程中，以光的形式放出能量。
一 荧光的发现
1575：N.Monardes
Lignum Nephriticum
1852：Stokes
分光计
植物抽提液、矿物、夜明珠、叶绿素、奎宁
借用萤石的（Fluospar）发光现象而推演，荧光 Fluorescence
Ee：价电子运动能, electron
Ev：原子在平衡位置附近的振动,vibration
Er：分子绕其重心的转动能, rotation 其中，Ee > Ev > Er
（一） 荧光的产生
2 分子的能级Energy Levels与跃迁Transition
（二）荧光光谱与吸收光谱
荧光分光光度术： 又称荧光光谱术，属于光谱技术中的一种发射光 谱术。其原理是电磁波和物质作用后，物质首先吸收 电磁波的能量，然后再重新发射电磁波。激发波段在 100-800nm之间，相当于紫外与可见光波段。
生物物理学的内容
膜与细胞生物物理学(Membrane and Cell Biophysics) 自由基与电磁生物物理学 生物物理仪器与技术( Biophysical Instrumentation and Techniques) 分子生物物理学（Molecular Biophysics) 理论生物物理学(Theoretical Biophysics) 感官与神经生物物理学( Sensory and Neural Biophysics)
(2) 环境因素及分子运动对荧光偏振度的影响
A .温度的影响： A：温度的影响 温度升高，P降低 B：溶液粘度 粘度升高，P升高 C ：分子的运动—转动 溶液粘度
旋转弛豫时间rotational relaxation time —
（二）荧光分光光度术中的参量
4 荧光寿命 （Fluorescence liftime --）
（3） 灯有寿命，要节约使用。
（4） 启动间隔一般要大于半小时，待灯冷却后，在重新启动。 启动后要预热 半小时。
（5） 不要用眼睛直视灯。
2 样品池
在可见可用玻璃池，但紫外区一定要用石英池。 （1）设置空白对照 。 （2）清洗问题，关键是即时冲洗。
自来水冲洗
SDS浸泡
双蒸水冲洗
浓硝酸处理
双蒸水冲洗
（5）荧光探针的应用分类
测定细胞活性的荧光探针：活细胞探针和死细胞探针 膜荧光探针：荧光基团标记的磷脂，阴离子膜探针，阳离子膜探针， 其它非极性和双亲性膜探针。 细胞器荧光探针：线粒体探针，溶酶体、酵母菌液泡和其它酸性细胞器的探针 Ca2＋， Mg2＋， Zn2＋ ，Na＋， K＋， Cl－等离子荧光探针 pH荧光探针: 近中性pH应用的探针，酸性，探针交联物 活性氧和一氧化氮探针 细胞骨架蛋白荧光探针 信号转导探针：蛋白激酶，蛋白磷酸酶和核苷酸结合蛋白探针 入胞作用、受体和离子通道探针pH 细胞形态和流体测量的荧光示踪剂
实践中常不选用强光源：
随着光强的增加，会同时导致散射光和热量的增多
强光源照射，容易使样品产生光化分解 强光源需要的稳压稳流装置复杂而昂贵 产生大量臭氧，损害健康
对于光源要注意以下几点:
（1）正负极不要接错。
（2） 拿灯时，不要碰窗口，以免手上的油污经紫外照射后，难以清除。 应及时用无水乙醇擦干净。
三 荧光光谱仪与主要参量 （一）荧光光谱仪
（二）荧光分光光度术中的参量
（一）荧光光谱仪
吸收光谱仪光路图
荧光光谱仪光路图
1 激发光源
在紫外-可见光区，可供荧光激发用的光源很多包括：钨灯，碘钨灯， 氢灯，氘灯，汞灯，氙灯等。主要根据光源稳定性和强度选择光源。
氢灯的能量分布
氘灯的能量分布
氙灯（红线）和带有玻璃外套的汞灯的能量分布
A 荧光强度的定义：在一定激发波长(λex)作用下，发射的 荧光强弱。
Ia=I0-I，I=I010-εcL
B
=发射光子数/吸收光子数
F = I0(1-10-εcL ) {当C很低时F= I0εcL ， {当C较大时F=I0
F=Ia
荧光强度与浓度的关系
（二）荧光分光光度术中的参量
3 荧光偏振( fluorescence polarization)
自然光
部分偏振光
偏振光
P=
I//-I
I//-I
A=
I//+I
I//+2I
荧光偏振度Fluorescence polarization --p 荧光各向异性Fluorescence anisotropy -- A
(1) 荧光偏振度的物理意义： A ：I//=I ，P=0，自然光，荧光分子运动很快， 取 向随机。（稀溶液） B：I//或I为0 ，P=±1 偏振光，荧光分子运动很 慢，取向有序。 C： I//I 0 ，0<P<1，生物大分子的荧光属于 这种情况。
（二）荧光分光光度术中的参量
ex—Maximum excitation wavelength em, max —Maximum emission wavelength
（二）荧光分光光度术中的参量
2 荧光强度（fluorescence intensity, F, I ）与 量子产率（quantum yield, ）
荧光分光光度术
Spectrophotofluorimetry
荧光分光光度术
一、荧光的发现 二、荧光与荧光光谱 三、荧光光谱仪及主要谱参量 四、荧光生色团的结构特点 五、影响荧光测量的因素 六、荧光技术在生物学、医学研究中的应用
夜明珠发光成因
1、矿物的发光性
矿物在外来的能量激发下，产生可见光的性质称为矿物的发光性。 外来的能量有日光、紫外线、X射线、阴极射线、加热、加压、摩擦等。 根据其发光的性质不同，分为荧光和磷光二类。