对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的制作技术
鉴别良、恶性腹腔积液的相关分子标志物研究进展
Ｋ ｎ ｏ ＿ 研究发现，Ｘ Ｉ ／ 一 能刺激内皮细胞 ｏｎ 等ｌ １ 胡 Ｃ Ｃ Ｉ ８ ８Ｌ
的分裂， 诱导胶原酶及内皮生长因子受体（Ｇ Ｒ 、 Ｅ Ｆ ）血管内皮
生长 因子（ Ｅ Ｆ 的表达 ， Ｖ Ｇ ） 抑制钙 黏附素的表 达。因此 ，Ｘ Ｃ— Ｃ ／ 一 可能 通过诱 导激 活胶 原酶 的活性 ， 而加 快基 膜 Ｉ Ｉ ８ ８Ｌ 从
腹腔积液中明显升高， 这说明 Ｃ Ｃ ＳＩ一 和卵巢癌有很大 Ｘ Ｌ／ ８ Ｌ
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临床 医药 实 践 杂 志 ２０ ０ ８年 ３月 第 １ 卷 第 ３ ７
・
１ ３・ ６
鉴 别 良 、 性 腹 腔 积 液 的 相 关 分 子 标 志 物 研 究 进 展 恶
武 丽芳 综述 ， 范钟 麟。 王学 红。 ， 审校
（． １ 青海 大 学 医 学 院 ２ ０ ０ ５级 研 究 生 ， 海 西 宁 青 ８ ０ ０ ；． 海 大 学 附属 医 院 ， 海 西 宁 １０ １２ 青 青 ８００） １０ １
和基质的降解， 直接促进癌细胞的浸润性生长和转移； 另一 方面通过促进血管形成和调节一些胃癌进展基因的表达， 从 而间接促进肿瘤的生长和转移。Ｓｈｔｓｒ ＿ ｃｕｙｅ 等＿ ｌ 研究发现 Ｃ Ｃ ／ 在人类腹腔积液中均可检测到， Ｘ Ｉ ｉ一 ８ ｉ８ 且在卵巢癌性
胞腹膜入侵中作用显著， 特别是 ＭＭＰ２ ＭＭＰ９ 一及 一 与恶性 肿瘤侵袭和转移的关系较为紧密Ｅ 。ＭＭＰ ２ ＭＭＰ９ 一和 一
腔积液 中表 达显 著高于肝硬化组 ， 而组织纤 溶酶原激活 因子 （ Ａ） 达则 在肝硬 化组 和恶性肿 瘤组 明显高于结 核病组 。 ｔ 表 Ｐ 由此 可见 ， 检测此类 标记 物是在腹 腔积 液 中的表达鉴 别 良、 恶性腹腔积液 的重要方法 。 １２ 基质金属蛋 白酶（ ． ＭＭＰ ） ｓ
ADA、LDH、CAl25联合检测在良恶性腹水鉴别诊断中的应用价值
ADA、LDH、CAl25联合检测在良恶性腹水鉴别诊断中的应用价值摘要】目的探讨检测患者腹水腺苷脱氢酶(ADA）乳酸脱氢酶(LDH）糖基抗原125(CAl25)对良恶性腹水的诊断价值。
方法回顾性分析我院2009～2011年住院诊断有腹水的患者，分成良性肿瘤组和恶性肿瘤组两组，分析两组患者腹水中ADA、LDH、CAl25的检测结果并进行统计学分析。
结果恶性组患者腹水标本中LDH、CAl25值较良性组明显升高(P<0.05)，ADA结果良性组高于恶性组(P<0.01)。
结论联合检测ADA、LDH、CAl25水平可以鉴定腹水的性质。
【关键词】腹水ADA LDH CAl25 恶性肿瘤腹水是一种常见的和多发的慢性继发性疾病，病因复杂，对良恶性腹水的鉴别诊断比较困难，目前除了对腹水进行常规、生化、脱落细胞学等检查外，还采用检测多种肿瘤标志物，以鉴定腹水的良恶性。
我们联合检测患者的腹水ADA、LDH、CAl25，以此来提高恶性腹水的阳性检出率。
现报道如下。
1 材料与方法1.1 临床资料60例腹水标本均来自我院住院腹腔积液患者，男28例，女32例，年龄27—78岁。
采用回顾性调查方法，根据腹腔积液标本中脱落细胞检测结果及病理学临床诊断，将上述患者分为2组：良性组30例，男18例，女12例，年龄25—68岁，其中肝硬化18例，结核性腹膜炎7例，肾源性腹水5例。
恶性肿瘤组30例，男10例，女20例，年龄38～78岁，其中宫颈癌2例、卵巢癌15例、肝癌5例、胃癌3例、胰腺癌2例、直肠癌3例。
1.2 方法常规方法穿刺抽取腹腔积液，经2000r∕min离心5min取上清液备用。
CAl25采用微粒酶化学发光检测法，ADA、LDH采用酶动力学速率法(谷氨酸脱氢酶法和乳酸→丙酮酸法)。
1.3 统计学处理数据用SPSSl7.0软件进行统计，采用方差分析对统计数据进行两样本均数t检验。
2 结果两组疾病腹水ADA、LDH、CAl25测定结果见表1。
联合检测肿瘤标志物对鉴别良恶性腹水的价值
ｌ ｅ ａｉ ａ ｔ ｓｉ ｓ ｅｅｈｇ ｅ ａ ｏｅｉ ｅ ｉ ｓｉ ｓ（ ０ ０ ） ｎ ｏａｌ ｉｅｅ ｃ ｅ ｌ ｉ ｍ ｇ ｎ ａｃ ｅ ｒ ｉ ｒ ｈ ｎｔ ｓ ｂ ｎｇ ａｃｔ Ｐ＜ ．５ ， ｏｎ ｔ ｅｄｆ ｒｎｅ ｖ ｓｎ ｌ ｎ ｔ ｗ ｈ ｔ ｈ ｎ ｎ ｅ ｂ ｆ
第３ ６卷 第 ５期 ２１ ０ １年 １ Ｏ月
贵 阳 医 学
院 学 报
Ｊ ＯＵＧＥ
Ｖ０ ． ６ Ｎｏ． １３ ５ ２ １ Ｏ ０１ ．１
联 合 检 测 肿 瘤 标 志物 对 鉴 别 良恶 性 腹 水 的价 值
Ｆ ＥＲ ， Ａ， ＣＥ ＣＡ１ ９， ９ ＣＡ１ ５， Ａ１ ３， ｎ Ａ ４ ｎ ａ ｃ ｔｓ ｏ １ ｐ ｔ ｎ ｓｗｉ ｌｉ ａ ｔａ ｃｔｓ ａ ｄ ９ ２ Ｃ ５ ａ ｄ Ｃ ２ ２ ｉ ｓ ｉ ｆ ａ ｉ ｔ ｔ ｍａ ｇ ｎ ｓ ｉ ｎ ４ ｅ ９ ｅ ｈ ｎ ｅ ｐ ｔ ｎ ｓｗｉ ｅ ｉ ｓ ｉ ｓｗｅ ｅ ｔｓｅ ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ ａｉ ｔ ｅ ｔ ｂ ｎ ｇ ａ ｃｔ ｒ ｅ ｔ ｄ ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ．Ｒｅ ｕ ｔ ｈ ｎ ｅ ｖ ｓｌ ｓ：ＡＦ Ｃ Ａ ， Ｐ， Ｅ ＣＡ１ ９， Ａ１ ３， ｎ Ａ ４ ９ Ｃ ５ ａｄ Ｃ ２ ２
［ 键词 ］腹水； 关 肿瘤标志物 ； 诊断， 鉴别； 放射免疫测定
［ 中图分类号］Ｒ３ ３ ［ ７ — 文献标识码 ］ ［ Ａ 文章编号］１ ０ ７７２１） － ９－ ０ － ０（ １０ ０ ７ ３ ０２ ０ ５４ ０
Ｄｉｇ ｓｉ ｌ ｅ ｏ ｍ ｂ ｎｅ ｓ ｉｅ ａ ｎｏ ｔｃ Ｖａ ｕ ｆＣｏ ｉ ｄ Ａ ｃｔｓ Ｔｕｍ ｏ ａ ｋ ｒ Ｄｅｅ ｔｏ ｎ ｒ Ｍ ｒ ｅ ｔｃ ｉ ｎ ｉ Ｄｉｔｎｃｉ ｎ ｏ ｎｉｎ ｎ Ｍ ａ ｉｎａ ｔＡｓ ｉｅ ｓｉ ｔｏ ｆＢｅ ｇ ａ ｄ ｌ ｇ ｎ ｃｔｓ
良恶性腹水鉴别诊断的研究进展
・６４４・第２７卷第６期２００９年１２月实验与检验医学ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＡＮＤＩＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＥＤｌＣＩＮＥＶ０１．２７Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００９良恶性腹水鉴别诊断的研究进展肖波综述，张蝇和审校（南昌大学第一附属医院消化内科江西省消化疾病研究重点实验室，江西南昌３３０００６）中图分类号Ｒ４４６．１９文献标识码Ｃ文章编号１６７４—１１２９（２００９）０６—０６４４—０３［ｊ正面两面蕊面蕊噩ｊ疆ｉ殛亟匦妇在正常情况下．人体的腹腔仅有少量起润滑作用的液体。
而在病理状态下。
如感染、恶性肿瘤、器官功能衰竭、变态反应性疾病及结缔组织病等．都可形成腹腔积液。
腹腔积液有良性和恶性之分．良性包括结核性和非结核性．恶性腹腔积液是肿瘤侵袭和转移的一个突出表现．在成人腹腔积液中３８％～５２％为恶性…。
部分腹腔积液良恶性的鉴别诊断一直是临床和实验诊断的难题．直接影响患者的治疗和预后评估。
近年来国内外学者一直在努力寻找腹腔积液良恶性的鉴别诊断方法．本文将就这一领域中的研究进展做一综述。
１细胞学检查１．１肿瘤细胞学检查良性与恶性腹腔积液鉴别诊断的最简单、首选的方法是脱落细胞学诊断．但在恶性积液闪受各种因素的影响．在积液中找癌细胞的阳性率较低．只有３０％左右［２１．近年来一些新的制片技术或辅助诊断手段的应用提高了细胞学诊断的阳性率．如膜式液基薄层细胞学技术１３ｌ、图像分析系统【４ｌ。
１．２核仁组成区嗜银染色核ｆ：组成区嗜银染色（ＡｇＮＯＲｌ通过显示细胞核内的嗜银蛋白而反映细胞转录活动状态．其数目反映了细胞的增殖活性及核仁结构和功能的变化。
研究表明旧。
直径＞２ｉｘｍ、粗大、不规则的ＡｇＮＯＲ颗粒增多，表明细胞处于增生状态．而圃形、较规则、直径为１－２１ｘｍ的ＡｇＮＯＲ颗粒提示细胞处于静止状态。
Ｐａｌａｏｒｏ等１６１对４５例腹腔积液分析结果显示．ＡｇＮＯＲ在恶性腹腔积液阳性率高达９０％．与良性有显著差异。
２生化检查２．１类肝素酶类肝素酶（Ｈｅｐａｒａｎａｓｅ）ｆｉｔ浸润的癌细胞合成及释放．通过降解细胞外基质中的硫酸类肝素而促进癌细胞转移。
胸腹水常规细胞形态学检查对胸腹水细胞良恶性诊断的价值分析（论文）
世界最新医学信息文摘 2013年第13卷第1期 271 胸腹水常规细胞形态学检查对胸腹水细胞良恶性诊断的价值分析吕承旻（广西贵港市第二人民医院 检验科，广西 贵港 ５３７１３２）摘要：目的探讨胸腹水常规细胞形态学检查对胸腹水细胞良、恶性诊断的价值。
方法对273例胸腹水患者标本的常规细胞形态学检查结果进行分析。
标本首先进行颜色、透明度、Rivalta试验及细胞计数常规检查，对于计数时见到的体积较大细胞的67例胸腹水，离心涂片后，瑞氏染色进行细胞形态学检查。
结果67例胸腹水中，46例检出恶性细胞，后经病理、临床和其他方法证实50例胸腹水为恶性肿瘤性积液，诊断符合率为92%。
结论胸腹水常规细胞形态学检查对良、恶性积液的鉴别诊断有很高的特异性和良好的灵敏度，适合普遍推广应用。
关键词：胸腹水；细胞形态学；恶性肿瘤中图分类号：R329.2+4 文献标识码：B DOI:10.3969/j.issn.1671-3141.2013.01.1810 引言胸腹水检查是临床检验的一项常规检查，对判断胸腹水的性质有重要的辅助作用。
传统的胸腹水常规细胞学检查为直接进行显微镜细胞计数并分类，主要用于渗出液和漏出液的鉴别，对于恶性细胞的检查阳性率极低，甚至易漏检［１，２］。
取沉渣推片染色进行细胞学分析，可提高阳性检出率，为临床诊断提供重要依据。
本文对６７例胸腹水患者标本进行离心，取沉淀物涂片染色镜检，现将检验结果报告如下：1 资料与方法1.1 一般资料２００９年１月至２０１０年６月我院不明原因的胸腹水住院患者２７３例，其中男性１５１例，女１２２例，年龄３７～８４岁，胸水１１３例，腹水１６０例。
1.2 方法采集标本后取约１００～２００ｍｌ立即送检，首先进行标本的颜色、透明度、Ｒｉｖａｌｔａ试验、细胞计数和有核细胞计数检验。
对有核细胞计数时见到体积较大细胞（体积为白细胞的２～ ４倍）的标本，取５～１０ｍｌ置于普通试管中，以１５００ｒ／ ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃去上清液，留取约０．１ｍｌ沉渣，用推片法制作３张涂片，置常温下自然干燥。
血清_腹水AFP_CEA_CA125含量与良恶性腹水的相关性_翟洁卿
于 恶性腹水 的 诊断 [ 3] 。 本研 究 的结 果 显 示血 清 、腹水 中 ＡＦＰ, ＣＥＡ及 ＣＡ125含量与腹 水的 良恶性 密切 相关 , 恶性 腹水 中肿瘤 标志物浓度 显著高于良性腹水 , 与之前 的报道 基本一 致 [ 4] , 但诊 断 的敏感性 、特异性报道各异 。
腹水是临床常见 病症 , 肝硬化 、腹膜结核 、腹膜转移癌和腹膜 原发肿瘤是引起 腹水的 最常见病 因 [ 1, 2] 。 我科于 2000 ～ 2006年
疫 分析仪进行放射免疫分析 。 ＡＦＰ、ＣＥＡ和 ＣＡ125试剂盒由上海 放 射免疫分析技术研究所 、中国原子能研究院和天津新 传生物技
测定了 126 例 良 、恶 性 肝 病 患 者 的 血 清 和腹 水 中 的 甲 胎 蛋 白 (ＡＦＰ)、癌胚抗原 (ＣＥＡ)和糖类抗原 125(ＣＡ125)水平 , 以探讨其 与腹水良 、恶性的相关性 。 现报道如下 。 1 资料与方法 1.1 一般资料 研究对 象为 2000年 1月至 2006年 12月 在我 科住院 病 人 , 其 中 恶性 肝 病腹 水 组 68 例 (男 性 46 例 , 女性 22 例 ), 年龄 37 ～ 62岁 。 所 有病例 均经 ＣＴ, ＥＣＦ, ＭＲ, ＵＳ等检 查确 定 , 并经手术和病理证实 。 患 者均于 人院后 、手术 前采血 和抽取
0.05), 腹水中 ＣＡ125水平高于血清 , 两者 差异显著 (Ｐ <0.05)。 恶性组中血 清 、腹 水 ＡＦＰ、ＣＡ125水 平两 者差 异非 常显 著 (Ｐ < 0.01), 而 ＣＥＡ水平无明显差异 (Ｐ >0.05)。 良 、恶性腹水患者 中 , 血清 、腹 水 ＡＦＰ、ＣＥＡ和 ＣＡ125测定结果见表 1。
流式细胞仪检测DNA对恶性腹水的诊断价值
２ｌ ８
ｉ 珊壤 Ｐｒ ｃｉａ ｅ ｉｎｅＪ ｎ ，０ ８， ．３， ａ ｔ ｌＭ ｄｄ ｕ ｅ ２ ０ Ｖ １ Ｎｏ． ｃ ３
・临床与检验 ・ Nhomakorabea流 式 细 胞 仪 检 测 Ｄ Ａ对 恶 性 腹 水 的诊 断价 值 Ｎ
陈伟训 金 珍 成 蔡 萌 芽 郑 荣浩 陈先 配 聂 茂伟
正常情况下动脉血压的急剧改变会启动体内心血管系统的代偿机制可分别刺激心肺的容量感受器及位于主动脉窦与颈动脉窦的压力感受器提高交感神经的兴奋性并降低副交感神经的兴奋性致效应器部位的去甲肾上腺素及肾上腺素水平提高引起静脉及小血管收缩心率加快心收缩力提高及肾脏水钠潴留同时亦可以激活
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用ｔ 检验 ， 而诊断分界点及诊断敏感性和特异性分
析采 用 Ｒ Ｃ曲线 。 Ｏ
２ 结 果
ｌ例 ， ｌ例 ， ２ 女 ４ 平均年龄 （７６ ± ．６ 岁 ， 中 胃 ５ ． ４３ ） 其 ９ 癌伴 腹膜 转移 ｌ 例 ， 肠癌 伴 腹 膜 转 移 ６例 ， ０ 结 肝癌 伴腹膜转移 ８ ， 例 小肠恶性淋巴瘤伴腹膜转移 ２ 例。
联合检测CEA、ADA对腹腔积液病因诊断价值
・ ・40联合检测CEA、ADA 对腹腔积液病因诊断价值的探讨刘艳辉，张蕴莉（辽宁医学院附属第一医院，辽宁 锦州 121001）摘要：目的 探讨腺苷脱氨酶(ADA)和癌胚抗原(CEA)检测对结核性与恶性腹腔积液的鉴别诊断价值。
方法 用氨试剂法和酶联免疫(ELISA)双层夹心测定法对92例腹腔积液的ADA 和CEA 进行检测分析。
结果 结核组与恶性组ADA 活性有显著差异(P<0.01)。
恶性组与结核组CEA 活性有显著差异(P<0.01)。
以ADA ≥40 U・L -1和CEA<10μg・L -1为阳性界值诊断结核性腹腔积液的灵敏度为89.6%,特异度为92.8%。
以CEA ≥10μg・L -1和ADA<40 U・L -1为阳性界值诊断恶性腹腔积液的灵敏度为62.4%,特异度为98.9%。
结论 血清ADA 和CEA 联合检测在结核性与恶性腹腔积液鉴别诊断上有重要的临床意义。
关键词：腹腔积液；腺苷脱氨酶(ADA)；癌胚抗原(CEA) 中图分类号：R 957.21 文献标识码：B 在临床上,腹腔积液病因确诊一直比较困难,缺乏相对快速、可靠、简单、价廉的方法, 少数患者甚至发生误诊而贻误治疗时机。
我们尝试联合检测多种腹腔积液的CEA 和ADA 水平。
初步评估单独或联合检测腹水CEA 和ADA 在鉴别腹腔积液性质中的临床价值。
1 资料与方法1.1一般资料所选病例均来源于辽宁医学院附属第一医院2010 年9月-2012 年1月收治的患者，结核性腹腔积液患者62例，其中，男45例，女17例；年龄23-58 岁，平均（43.2±7.7）岁。
恶性腹腔积液患者21例，其中，男 16例，女5例；年龄31-79岁，平均（51.5±12.3）岁，包括卵巢肿瘤、腹膜恶性间皮瘤、胃癌、肝癌、胰头癌、结肠癌等，多数肿瘤患者为晚期，经胃肠镜、腹腔探查等手段，通过病理活检确诊或通过影像学（CT 等）临床确诊。
良、恶性腹水的鉴别诊断的参考意见
良、恶性腹水的鉴别诊断的参考意见全国腹水学术讨论会制定良性和恶性腹水的诊疗和预后不同，对两者进行鉴别极为重要。
恶性腹水多为渗出液，血性腹水高度提示为恶性腹水。
但其他原因也可引起，如乳糜腹水约半数由肿瘤所致。
腹水中找到癌细胞对诊断恶性腹水有决定意义，但阳性率仅40%—75%，且可出现假阳性。
腹水生化检查对鉴别良、恶性腹水有参考价值。
根据各单位的条件。
可选用以下检查：1、比重：恶性腹水的比重常>1.018。
但无法与感染性腹水鉴别。
且约有40%的癌性腹水比重<1.016。
2、蛋白定量：恶性腹水中蛋白含量常在30g/L以上。
腹水/血清白蛋白的比值>0.5，但感染性腹水中蛋白含量也可较高。
且少数肝硬化单纯性腹水蛋白含量可>30g/L。
因此，腹水蛋白含量对鉴别良性腹水的意义不大。
3、乳酸脱氢酶（LDH）：癌肿和感染引起的渗出性腹水中LDH3.34μmol/sL。
腹水/血清LDH 的比值>0.6；如LDH>8.35μmol/sL，腹水/血清LDH>1.0，则高度提示癌性腹水。
但若腹水为血性，则失去诊断意义。
腹水LDH同工酶分析也有一定价值，恶性腹水中以LDH3、4、5为主，而肝硬化腹水中以LDH2为主。
4、纤维连接蛋白（Fibronectin）：FN为一种高分子糖蛋白，存在于人体组织细胞外间隙中。
分为可溶性（血液中）和不溶性（组织中）两型。
FN在恶性腹水中浓度较高，而在肝硬化腹水中处于低水平。
恶性腹水中FN多超过75μg/L，而在自发性细菌性腹膜炎时低于此值，但结核性腹膜炎时腹水FN也升高，肝硬化失代偿期合并肝癌的腹水FN也可较低。
5、脂质：腹水脂质中，以胆固醇测定对鉴别良、恶性腹水最有价值。
腹水胆固醇>1.24mmol/L则肿瘤可能性大。
但某些自发性细菌性腹膜炎和结核性腹膜炎腹水胆固醇水平也可较高，应注意鉴别。
6、癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）：良性腹水中CEA<15μg/L，而在恶性腹水中大于此值。
一种乳腺癌筛查试剂盒的制作方法
一种乳腺癌筛查试剂盒的制作方法乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，而且发病率逐年上升。
早期发现乳腺癌对治疗和预后具有重要意义，因此乳腺癌筛查成为一项重要的公共卫生工作。
目前，乳腺癌筛查主要依靠临床乳房检查、乳腺X 光透视和乳腺超声等技术手段，但是早期诊断率仍然较低。
因此，开发一种简便、快速、准确的乳腺癌筛查试剂盒具有重要的临床意义。
乳腺癌筛查试剂盒的制作方法是一个需要经过多个步骤的复杂工艺过程，包括成分筛选、试剂盒原理确定、试剂盒生产工艺设计、试剂盒生产工艺实现等。
以下将从这四个方面具体介绍乳腺癌筛查试剂盒的制作方法。
一、成分筛选乳腺癌筛查试剂盒的成分一般包括样本采集器、标记物、检测试剂等。
选取合适的成分对于试剂盒的最终性能具有重要影响，因此成分筛选是制作试剂盒的关键步骤。
1.样本采集器：样本采集器是乳腺癌筛查试剂盒的核心组成部分，用于采集患者的乳腺组织样本。
常见的样本采集器包括针头、刮片等，需要根据临床需求和实际应用情况进行选择。
2.标记物：标记物是用来标记乳腺癌细胞特异性抗原的生物学分子，一般选择抗体、核酸或荧光素等。
标记物的选择需要具有较高的特异性和灵敏度，以确保试剂盒对乳腺癌细胞的检测准确性。
3.检测试剂：检测试剂是用于识别样本中标记物的化学试剂，一般包括酶标记试剂、荧光素试剂等。
检测试剂的选择需要满足试剂盒对标记物的灵敏度和特异性要求。
二、试剂盒原理确定确定试剂盒的检测原理是制作试剂盒的重要环节，它直接影响到试剂盒的检测准确性和灵敏度。
通常来说，乳腺癌筛查试剂盒的检测原理包括免疫学检测、核酸检测和荧光素检测等，其中免疫学检测是目前应用最广泛的一种。
1.免疫学检测：免疫学检测是通过特异性抗体与标记物相互作用，利用免疫学原理来实现对标记物的检测。
在确定试剂盒的免疫学检测原理时，需要选择合适的抗体和检测试剂，设计适当的免疫反应体系，并建立标准化的检测方法。
2.核酸检测：核酸检测是通过特异性核酸探针与目标核酸相互作用，利用核酸杂交等原理来实现对目标核酸的检测。
同步定量检测3种重要虾类病原的试剂盒的制作技术
本技术涉及一种同步定量检测3种重要虾类病原的试剂盒，所述试剂盒包括同步检测3种病原(WSSV、EHP和SHIV)的引物。
本技术基于定量PCR检测方法，不仅检测灵敏度比普通检测方法大幅提升，还可以实现同步评估3种病原的感染率与感染程度，适用于对对虾中3种病原隐性感染的早期监测，尤其适用于对取样量和带毒量双低的虾苗样品的批量检测。
权利要求书1.一种同步定量检测3种重要虾类病原的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如下引物：EHP上游：5'-GCAGAGTGTTGTTAAGGGTTTAAGT-3'；EHP下游：5'-GCTGTTTGTCTCCAACTGTATTTGA-3'；WSSV上游：5'-CGACAGACTACTAACTTCAGCCTAT-3'；WSSV下游：5'-AAGAGGATACCAGATGCTCGTT-3'；SHIV上游：5'-CAATCATGTTGTTGTATCCATCCTTCT-3'；SHIV下游：5'-GGTTTCATTCAACGTAAACGATCTCG-3'。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述3种重要虾类病原为白斑综合征病毒WSSV、虾虹彩病毒SHIV和虾肝肠胞虫EHP。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的组分为：2×TB GreenPremix Ex TaqⅡ10μL，上游引物0.6μL，下游引物0.6μL，DNA模板2μL，无DNA酶水6.8μL。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应程序为：95℃30s预变性；然后95℃5s，60℃20s，循环40次。
技术说明书一种同步定量检测3种重要虾类病原的试剂盒技术领域本技术属于虾类病原检测领域，特别涉及一种同步定量检测3种重要虾类病原的试剂盒。
背景技术引进品种凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)因为生长速度快、适应性强，其种苗培育和养殖产业在我国得到持续发展，成为我国重要水产养殖经济品种。
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图片简介:本技术介绍了对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，涉及医疗技术领域；对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，包括滑动盒、固定盒盖和保护箱，本技术通过将试剂插入四个曲形弹簧片之间，使试剂的底端与放置垫贴合，对试剂进行初步固定，然后将固定盒盖盖在滑动盒的顶部，并使固定环与固定凹槽的内壁贴合，然后通过转动凸块对连接盘进行转动，连接盘通过转动杆和矩形杆带动转动管进行转动，转动管可以通过与固定管螺纹连接上下进行运动，转动管带动伸缩板向下运动，伸缩板带动转动垫进行向下运动，第一支撑弹簧可以通过伸缩板对转动垫进行支撑，转动垫余试剂顶部贴合，即可对试剂进行固定。
技术要求1.对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，包括滑动盒(1)、固定盒盖(14)和保护箱(26)，所述固定盒盖(14)位于滑动盒(1)的顶部，所述保护箱(26)套设与滑动盒(1)的外表面，其特征在于，还包括：设置在滑动盒(1)下内壁的固定座(2)，所述固定座(2)的顶部开设有梯形槽(3)，所述固定座(2)的内壁底部固定嵌设有放置垫(4)，所述固定座(2)的外表面沿圆周方向等距固定连接有四个曲形弹簧片(5)，四个所述曲形弹簧片(5)相互靠近的一侧外壁均粘附有条形垫(6)，所述滑动盒(1)的顶部固定连接有固定环(13)；所述固定盒盖(14)的顶部开设有转动槽(15)，所述转动槽(15)的内部转动嵌设有连接盘(16)，所述连接盘(16)的顶部固定连接有转动凸块(17)，所述连接盘(16)的底部固定连接有转动杆(18)，且转动杆(18)的底端延伸至固定盒盖(14)的内部，并且转动杆(18)的底端固定连接有矩形杆(19)，所述矩形杆(19)的底端固定连接有限位块(21)，所述矩形杆(19)的外表面滑动套设有转动管(20)，且转动管(20)的外表面沿圆周方向刻设有外螺纹，所述转动管(20)的内部滑动嵌设有伸缩板(22)，所述伸缩板(22)的顶部固定连接有第一支撑弹簧(23)，且第一支撑弹簧(23)的顶端与转动管(20)的上内壁固定连接，所述伸缩板(22)的底部转动连接有转动垫(24)，所述固定盒盖(14)的下内壁固定连接有固定管(25)，且固定管(25)的内壁刻设有内螺纹，并且固定管(25)的内表面与转动管(20)的外表面螺纹连接，所述固定盒盖(14)的底部开设有固定凹槽(37)，且固定凹槽(37)套设于固定环(13)的外表面。
2.根据权利要求1所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述滑动盒(1)的底部靠近右侧固定连接有固定架(7)，所述固定架(7)的两侧外壁之间转动连接有滚轮(8)。
3.根据权利要求1所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述滑动盒(1)的外表面与固定盒盖(14)的外表面均粘附有密封条(9)，所述滑动盒(1)的一侧外壁固定连接有透明板(10)，所述透明板(10)靠近滑动盒(1)外壁的一侧外壁开设有卡片放置槽(11)，所述透明板(10)远离滑动盒(1)的一侧外壁固定连接有拉手(12)。
4.根据权利要求1所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述保护箱(26)的内部设置为空心，且保护箱(26)的两侧外壁均开设有滑动口，所述保护箱(26)的两侧外壁均开设有卡合槽(27)，且密封条(9)嵌设于卡合槽(27)的内部，所述保护箱(26)的下内壁开设有滑槽(36)。
5.根据权利要求1所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述保护箱(26)的内部固定嵌设有固定箱(34)，所述固定箱(34)的两侧外壁均开设有贯穿孔(35)。
6.根据权利要求1所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述保护箱(26)的顶部嵌设有固定筒(28)，所述固定筒(28)的内部滑动嵌设有滑动块(29)。
7.根据权利要求6所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述滑动块(29)的底部固定连接有滑动杆(30)，所述滑动杆(30)的底部固定连接有连接杆(32)。
8.根据权利要求7所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述滑动杆(30)的外表面套设有第二支撑弹簧(31)，且第二支撑弹簧(31)的底端与固定筒(28)的下内壁固定连接。
9.根据权利要求7所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述连接杆(32)的底端转动连接有转动卡齿杆(33)，且转动卡齿杆(33)的一端通过贯穿孔(35)延伸至固定箱(34)的外部，并且转动卡齿杆(33)通过贯穿孔(35)与固定箱(34)的一侧外壁转动连接。
10.根据权利要求9所述的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，所述固定盒盖(14)远离透明板(10)的一侧外壁开设有卡槽(38)，所述转动卡齿杆(33)的一端延伸至卡槽(38)的内部。
技术说明书对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒技术领域本技术涉及医疗技术领域，尤其涉及对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒。
背景技术诊断试剂是指采用免疫学、微生物学、分子生物学等原理或方法制备的、在体外用于对人类疾病的诊断、检测及流行病学调查等的诊断试剂，诊断试剂从一般用途来分，可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类，除用于诊断的如旧结核菌素、布氏菌素、锡克氏毒素等皮内用的体内诊断试剂等外，大部分为体外诊断制品，临床生化试剂主要有测定酶类、糖类、脂类、蛋白和非蛋白氮类、无机元素类、肝功能、临床化学控制血清等几大类产品，正常状态下，人体腹腔内有少量液体，对肠道蠕动起润滑作用，任何病理状态下导致腹腔内液体量增加，超过200ml时称为腹腔积液，腹腔积液仅是一种病征，产生腹腔积液的病因很多，比较常见的有心血管病、肝脏病、腹膜病、肾脏病、营养障碍病、恶性肿瘤腹腔转移、卵巢肿瘤、结缔组织疾病等现有临床对良、恶性腹水鉴别诊断可以采用试剂进行检测。
但是现在缺少对良、恶性联合检测的试剂盒，且现有的联合检测的试剂盒在对试剂进行搬运、运输的过程中对试剂的保护不够完备，在试剂盒遭受撞击和震动等情况时，对试剂的固定和保护程度不够，试剂容易破损，影响后续的使用，并且在使用时纸盒比较难打开，使用起来将试剂取出比较麻烦，非常不方便，且纸盒一般只能一次性使用，不能对不同大小的试剂瓶进行固定，比较浪费。
技术内容本技术的目的是为了解决现有技术中不能在运输或搬运过程产生振震动或撞击时对试剂起到良好的固定和保护，且在使用时不能对多种大小的试剂进行固定，取出试剂时比较不方便，从而导致试剂在运输或搬运的过程中容易破损泄漏，且在使用时取出试剂比较浪费时间，使用后的试剂盒不能重复使用，而提出的对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒。
为了实现上述目的，本技术采用了如下技术方案：对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，包括滑动盒、固定盒盖和保护箱，所述固定盒盖位于滑动盒的顶部，所述保护箱套设与滑动盒的外表面，还包括：设置在滑动盒下内壁的固定座，所述固定座的顶部开设有梯形槽，所述固定座的内壁底部固定嵌设有放置垫，所述固定座的外表面沿圆周方向等距固定连接有四个曲形弹簧片，四个所述曲形弹簧片相互靠近的一侧外壁均粘附有条形垫，所述滑动盒的顶部固定连接有固定环：所述固定盒盖的顶部开设有转动槽，所述转动槽的内部转动嵌设有连接盘，所述连接盘的顶部固定连接有转动凸块，所述连接盘的底部固定连接有转动杆，且转动杆的底端延伸至固定盒盖的内部，并且转动杆的底端固定连接有矩形杆，所述矩形杆的底端固定连接有限位块，所述矩形杆的外表面滑动套设有转动管，且转动管的外表面沿圆周方向刻设有外螺纹，所述转动管的内部滑动嵌设有伸缩板，所述伸缩板的顶部固定连接有第一支撑弹簧，且第一支撑弹簧的顶端与转动管的上内壁固定连接，所述伸缩板的底部转动连接有转动垫，所述固定盒盖的下内壁固定连接有固定管，且固定管的内壁刻设有内螺纹，并且固定管的内表面与转动管的外表面螺纹连接，所述固定盒盖的底部开设有固定凹槽，且固定凹槽套设于固定环的外表面。
优选的，所述滑动盒的底部靠近右侧固定连接有固定架，所述固定架的两侧外壁之间转动连接有滚轮。
优选的，所述滑动盒的外表面与固定盒盖的外表面均粘附有密封条，所述滑动盒的一侧外壁固定连接有透明板，所述透明板靠近滑动盒外壁的一侧外壁开设有卡片放置槽，所述透明板远离滑动盒的一侧外壁固定连接有拉手。
优选的，所述保护箱的内部设置为空心，且保护箱的两侧外壁均开设有滑动口，所述保护箱的两侧外壁均开设有卡合槽，且密封条嵌设于卡合槽的内部，所述保护箱的下内壁开设有滑槽。
优选的，所述保护箱的内部固定嵌设有固定箱，所述固定箱的两侧外壁均开设有贯穿孔。
优选的，所述保护箱的顶部嵌设有固定筒，所述固定筒的内部滑动嵌设有滑动块。
优选的，所述滑动块的底部固定连接有滑动杆，所述滑动杆的底部固定连接有连接杆。
优选的，所述滑动杆的外表面套设有第二支撑弹簧，且第二支撑弹簧的底端与固定筒的下内壁固定连接。
优选的，所述连接杆的底端转动连接有转动卡齿杆，且转动卡齿杆的一端通过贯穿孔延伸至固定箱的外部，并且转动卡齿杆通过贯穿孔与固定箱的一侧外壁转动连接。
优选的，所述固定盒盖远离透明板的一侧外壁开设有卡槽，所述转动卡齿杆的一端延伸至卡槽的内部。
与现有技术相比，本技术提供了对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒，具备以下有益效果：1、本技术通过将试剂插入四个曲形弹簧片之间，使试剂的底端与放置垫贴合，对试剂进行初步固定，然后将固定盒盖盖在滑动盒的顶部，并使固定环与固定凹槽的内壁贴合，然后通过转动凸块对连接盘进行转动，连接盘通过转动杆和矩形杆带动转动管进行转动，转动管可以通过与固定管螺纹连接上下进行运动，转动管带动伸缩板向下运动，伸缩板带动转动垫进行向下运动，第一支撑弹簧可以通过伸缩板对转动垫进行支撑，转动垫余试剂顶部贴合，即可对试剂进行固定，实现试剂盒可以对试剂即使在遭受撞击和震动的情况下，依然对试剂起到良好的保护和固定效果，减少破损率，不影响后续的使用。
2、本技术通过透明板根据需要观察卡片放置槽内的卡片，根据需要的试剂用手按动相对应的滑动块，滑动块在固定筒内向下运动，通过滑动杆和连接杆，向下按动转动卡齿杆，转动卡齿杆另一端抬起，与卡槽不再卡合，然后通过拉手向外拉动滑动盒，接着拿起固定盒盖，取出试剂即可，实现方便快捷取出试剂进行使用，且可以对不同大小的试剂固定来进行储存或运输的效果。
附图说明图1为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的滑动盒与曲形弹簧片的结构示意图；图2为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的固定盒盖与转动管的结构示意图；图3为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的固定盒盖与转动管的正剖图；图4为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的立体图；图5为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的保护箱的结构示意图；图6为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的固定筒与滑动杆的正剖图；图7为本技术对良、恶性腹水鉴别诊断的联合检测试剂盒的固定筒与滑动杆结构示意图。